qwertyuiopasdfghjklzxcvbn mqwertyuiopasdfghjklzxcv bnmqwertyuiopasdfghjklzx cvbnmqwertyuiopasdfghjkl BIOTECNOLOGIA zxcvbnmqwertyuiopasdfghj SEMINARIO: OBTENCION DE ACIDOS ORGANICOS Y ETANOL klzxcvbnmqwertyuiopasdfg hjklzxcvbnmqwertyuiopasd fghjklzxcvbnmqwertyuiopa sdfghjklzxcvbnmqwertyuio

pasdfghjklzxcvbnmqwertyu iopasdfghjklzxcvbnmqwert yuiopasdfghjklzxcvbnmqwe rtyuiopasdfghjklzxcvbnmq wertyuiopasdfghjklzxcvbn mqwertyuiopasdfghjklzxcv bnmqwertyuiopasdfghjklzx

18/07/2012 ALUMNA: ANCAJIMA RUIZ DANIELA MERCEDES PROFESOR: MICROBIOLOGO CESAR TORRES

SEMINARIO: OBTENCION DE ACIDOS ORGANICOS Y ETANOL ACIDOS ORGANICOS Los cidos orgnicos son ms dbiles que los inorgnicos, de gran utilidad ya que son los principales catalizadores de reacciones, algunos abundan en la naturaleza como el cido ctrico, presente en las naranjas y otros se obtienen por distintos procesos como el cido actico (vinagre) La razn por la cual estos cidos son ms dbiles es que contienen en su cadena carbonos. A los cidos orgnicos tambin se los denomina cidos carboxlicos y es comn encontrar la leyenda en alimentos. Conservar en lugar fresco y seco. Cuando esto no se cumple, algunos cambian y no tienen el mismo gusto o aroma. Por ejemplo si se deja la manteca fuera de la heladera, adquiere un sabor y olor caracterstico y se dice que est rancia. Esto se debe a la presencia de cidos orgnicos, generalmente degradados por microrganismos. Los cidos ms solubles en agua son los de cadena ms corta, poseen un sabor agrio. Los de cuatro a ocho tomos de carbono por molcula tienen olor desagradable, pero los de cadena carbonada larga son prcticamente inodoros debido a su poca volatilidad. En conclusin, su solubilidad disminuye a medida que aumenta la cadena carbonada. El punto de ebullicin de los cidos carboxlicos aumenta con el incremento de la masa molecular. Existe un grupo de cidos carboxlicos cuya importancia radica en que intervienen en la sntesis de las grasas y aceites vegetales y/o animales, de ah que se denominan cidos grasos. Tambin se los utiliza para conservar alimentos, en particular sus sales. En general retardan la descomposicin del alimento inhibiendo el crecimiento de bacterias, hongos u otros microrganismos. PRODUCCION DEL ACIDO CITRICO: Introduccin: El cido ctrico ha sido conocido como una sustancia natural de las plantas desde finales del siglo XIX, y desde entonces se sabe que era producida por hongos filamentosos. En 1923 se inici la primera fermentacin prctica para la produccin de este cido orgnico

utilizando microrganismos que crecan sobre la superficie de los cultivos. Actualmente ms del 99% de la produccin mundial de cido ctrico se produce microbiolgicamente. Cepas utilizadas: Muchas cepas excretan trazas de cido ctrico como producto del metabolismo primario. Como ejemplos estn Aspergillus niger, A. wentii, A. clavatus, Penicillium luteum, P. citrinum, Mucor piriformis, Paecelomyces divaricatum, Citromyces pfefferianus, Candida guillermondii, Saccharomycopsis lipolytica, Trichoderma viridae, Arthrobacter paraffineus y Corynebacterium sp. Sin embargo, para la produccin comercial slo se utilizan mutantes de A. niger. Comparado con las cepas de Penicillium, los aspergillus producen ms cido ctrico por unidad de tiempo. Adems la formacin de productos laterales no deseados, como cido oxlico, cido isoctrico y cido glucnico puede ser ms fcilmente suprimida en estos mutantes. Condiciones y controles de los procesos: El cido ctrico puede ser producido tanto en procesos de superficie como sumergidos. Los procesos en superficie pueden ser subdivididos a su vez de acuerdo con el estado del medio de cultivo que se utilice: slido o lquido. De procesos sumergidos se utilizan dos tipos: fermentadores agitados o fermentadores de elevacin por aire (air-lift).Varios factores afectan la eleccin del tipo de proceso: la existencia de capital de inversin, la abundancia de energa, el costo, el entrenamiento de la mano de obra, la existencia de tcnicas para la medida y la regulacin. El material utilizado como inculo para la produccin de cido ctrico es una suspensin de esporas, las cuales germinan en el medio de cultivo a 32C, y se forma micelio en forma de bolillas o pellets (para los sistemas sumergidos). Es necesario tener el cultivo de la cepa bien desarrollado en estra (agar Sabouroud o papa dextrosa), bien esporulado y de 10-20 das de edad. Procesos en superficie: Medio slido

Plantas de baja produccin, muy limitadas, unas 500 toneladas al ao. Se usa sustrato slido, como migas de pan o pulpa de almidn. El pH del medio se reduce hasta 4 o 5 antes de la esterilizacin. Despus se inocula con esporas, extendindolo sobre bandejas en capas de 3 a 5cm de grosor y se incuba a 28C. El proceso dura unas 90 h, al final de las cuales la solucin entera se extrae con agua caliente para aislar el cido ctrico.

Medio lquido

Es el mtodo ms antiguo de produccin. Actualmente se produce el 20% del total decido ctrico con este mtodo. Permanece en uso todava debido a la baja inversin que requiere para su funcionamiento, ya que la tecnologa es sencilla y el costo en energa para los sistemas de refrigerado es bajo. El mayor costo viene por la mano de obra, ms grande que en los reactores sumergidos, pero es mano de obra no especializada. En reactores sumergidos se requiere menos mano de obra, pero capacitada. En los sistemas modernos, el medio se esteriliza en continuo. La solucin nutritiva estril fluye automticamente por un sistema de distribucin sobre las bandejas. La inoculacin se hace en cmaras de inoculacin a 3040C, diseminando esporas secas o pulverizando una suspensin de esporas. La temperatura se mantiene constante mediante un sistema de corriente de aire. La ventilacin es muy importante tambin, para el flujo de gases. La velocidad de produccin de cido ctrico baja si la concentracin de CO2 pasa del 10%. Al cabo de 24 h de la inoculacin, las esporas germinan y forman una fina capa de micelio sobre la superficie de la solucin. Al cabo de 30 h empieza la idiofase. La fermentacin se detiene al cabo de 8 a 14 das. Si hay demasiado hierro se producir cido oxlico, producindose una sustancia amarillenta que dificulta el proceso de recuperacin. Durante la recuperacin se separa el micelio de los nutrientes por filtracin. En algunos casos se usan prensas para obtener ms ctrico a partir de las clulas. En los procesos en slidos se hace as. Procesos sumergidos: El 80% de la produccin mundial de cido ctrico se hace mediante procesos sumergidos. Aunque dura ms das que los otros mtodos presenta varias ventajas: menor inversin en la construccin y menor inversin total, es necesaria menos mano de obra. Tambin presenta algunas desventajas respecto de los mtodos anteriores: mayor costo de energa, la tecnologa de control es ms sofisticada, con lo que se requiere un personal ms especializado, la formacin de espuma tambin es un problema en la produccin de cido ctrico, pero se soluciona por la adicin de antiespumantes. En resumen, el rendimiento es mayor en la produccin sumergida. Existen 3 factores especialmente importantes para los procesos sumergidos: La calidad del material para construir el fermentador: El fermentador debe estar protegido de la accin de los cidos o bien ser de acero inoxidable, porque de no ser as, cuando se alcancen valores de pH de 1 2, se liberarn metales de las paredes del fermentador, que podrn inhibir la formacin de cido ctrico. La estructura del micelio: Si el micelio es largo y filamentoso, la produccin de cido ctrico en la idiofase desciende. Para conseguir una velocidad ptima de produccin el micelio debe estar formado por pellets slidos muy pequeos. La relacin Cu/Fe determina la estructura del micelio.

Suministro de O2: Aunque A. niger requiere poco oxgeno, es sensible a su ausencia. Por lo tanto, es necesaria la presencia de oxgeno a una concentracin solo del 2025% de su valor de saturacin. Rendimientos: En la trofofase, parte de la glucosa aadida se utiliza para la produccin de micelio y se convierte a travs de la respiracin en CO2. En la idiofase el resto de la glucosa se convierte en cidos orgnicos y existe una prdida mnima por la respiracin. El rendimiento terico es de 123 g de cido ctrico 1hidrato (o 112 g de cido ctrico anhidro) por cada 100 g de sacarosa. Sin embargo, tales rendimientos no se obtienen en la prctica debido a las prdidas durante la trofofase. Recuperacin del producto: Si se llega a formar cido oxlico como producto lateral debido a un bajo control de la fermentacin, se precipita como oxalato de calcio a pH bajo, dejando el cido ctrico en la solucin como citrato monoclcico. Se utilizan filtros rotatorios o centrfugos para separar el micelio y el precipitado de oxalato clcico del lquido. A pH 7,2 y 70-90C, precipita el cido ctrico, lo que permite a su vez que sea separado mediante filtros rotatorios y secado. Para algunos usos especiales, el cido ctrico es purificado por adicin de cido sulfrico para disolver el cido ctrico, formndose un precipitado de sulfato clcico. Las etapas subsiguientes de recuperacin incluyen el tratamiento con carbn activado, cambiadores de iones y la cristalizacin como cido ctrico o cido ctrico monohidratado. Por encima de 40C el cido ctrico cristaliza como cido anhidro y por debajo de 36,5Ccomo monohidrato. La pureza requerida del producto depende del uso para el que se prepare. Cuando se destina a la industria de los alimentos debe ser ms puro que el que se necesita para usos industriales. Usos: El cido ctrico se comercializa como cido ctrico monohidratado o como anhidro. La mayor parte se utiliza en las industrias de alimentos y bebidas. El sabor de los jugos de frutas, caramelos, helados y mermelada se aumenta o se preserva por adicin de este cido. La industria farmacolgica utiliza citrato de hierro y cido ctrico como preservativos de la sangre almacenada, en tabletas, pomadas y en preparaciones cosmticas. En la industria qumica se utiliza como agente antiespumante, reblanquecedor y para el tratamiento de textiles. Tambin se lo utiliza en los detergentes porque puede reemplazar a los polifosfatos. En la industria metalrgica los metales puros se producen como citratos metlicos.

PRODUCCIN DE CIDO GLUCNICO Introduccin: El cido glucnico es un producto de gran demanda por su diversidad de aplicaciones a nivel industrial; se emplea en pequeas cantidades para preparados antianmicos de gluconato ferroso, pero el uso principal de este cido es como agente de limpieza y moldeado en las industrias de metal, as como para la eliminacin de depsitos de calcio en instalaciones de tratamiento y elaboracin de cerveza. El gluconato sdico se utiliza como agente secuestrante en muchos detergentes. En la produccin de cido glucnico slo participa una enzima microbiana, la glucosaoxidasa, que se encuentra en A. niger. Este hongo crece en condiciones ptimas en el lquido de maceracin del maz pero cuando el crecimiento se ve limitado por el nitrgeno, las clulas en reposo transforman la glucosa restante en cido glucnico. Cepas utilizadas: Se utilizanA. niger , o la bacteria Acetobacter suboxydans, en procesos sumergidos. En estos procesos se generan cido glucnico, gluconatos sdico y clcico y glucosa oxidasa. Otros organismos que han sido optimizados para producir este cido, pero que no se han utilizado comercialmente, son los hongos Penicillium, Scopulariopsis, Gonatobotrys, Endomycopsis y Pullularia, y las bacterias Vibrio y Pseudomonas. Condiciones y controles de los procesos: La fermentacin, que se lleva a cabo a pH 4,5, requiere un medio de crecimiento en el quesean limitantes tanto el fosfato como el nitrgeno. Si se va a producir gluconato clcico no puede ser aadida mas de 13-15% de glucosa como sustrato debido a la baja solubilidad del gluconato clcico; concentraciones ms altas de sustrato permitiran concentraciones ms altas de gluconato que cristalizara espontneamente dificultando la purificacin. En la produccin de gluconato sdico, puede ser utilizada una concentracin de hasta 28-30% de glucosa, ya que la solubilidad es ms alta. En general, se siembra el reactor con esporos. En el inculo se trata de obtener una elevada masa microbiana y favorecer la sntesis de la glucosa oxidasa, enzima clave en la oxidacin de la glucosa. Para ello se trabaja con un medio con elevada concentracin de fuentes nitrogenadas y factores de crecimiento, siendo en general utilizados urea o sulfato de amonio yagua de hidrolizado de maz o su forma deshidratada. Se utiliza glucosa o el monohidrato de sta como fuente de carbono para inducir la glucosa oxidasa. Las fermentaciones se llevan a cabo durante 20 h a 28-30C con una alta velocidad de aireacin. Elevando la presin en el sistema puede ser aumentada la solubilidad del oxigeno y por tanto los rendimientos de cido glucnico. Los rendimientos comerciales actualmente son del 90-95%

Recuperacin de los productos: Gluconato de calcio El efluente del medio de cultivo se decolora con carbn activado, se concentra evaporando el 15-20% del agua y se deja cristalizar a temperaturas cercanas a 0C. La sal se filtra y se lavan los cristales con agua fra. Se puede obtener de esta manera un producto con un adecuado grado de pureza. Si se requiere una sal de alto grado de pureza se recristaliza en agua o agua-alcohol. Gluconato de sodio La forma comercial de esta sal se puede preparar concentrando el efluente del cultivo a4045% de slidos, ajustando el pH a 7,5 con NaOH y luego secando en tambor rotatorio. Un producto de mejor calidad se puede obtener decolorando con carbn activado el concentrado caliente luego de la evaporacin y luego recristalizando el producto resultante del secado por tambor rotatorio. Acido glucnico: La solucin al 50% de cido glucnico que se encuentra en el mercado se obtiene concentrando por evaporacin la solucin del cido (que puede haber sido obtenido tratando con H2S04 una solucin concentrada de gluconato de calcio previamente purificado). Las lactonas se obtienen por precipitacin de soluciones saturadas a diferentes temperaturas, como ya se indic. Rendimientos: El rendimiento terico en la produccin de cido glucnico a partir de glucosa, asumiendo que no hay formacin de C02, es de 109 g de cido/100 g de azcar. En la prctica se obtienen rendimientos superiores al 90% de este mximo. Usos El cido glucnico no se comercializa en forma cristalina sino que se ofrece en solucionesal 50%. La lactona es comercializada en forma cristalina.Tanto el cido, como sus lactonas, se utilizan fundamentalmente como acidulantes paraalimentos. La lactona es usada universalmente como un cido latente en polvos para h ornear, sustancias leudantes para panificacin y mezclas para preparar tortas. La sal sdica del cido glucnico es el derivado con mayor importancia comercial. Debido a sus excelentes propiedades como agente complejante se lo utiliza en soluciones lavadoras de material de vidrio, soluciones alcalinas de NaOH, particularmente en el caso de botellas retornables. Los carbonatos de metales di y trivalentes son fcilmente removidos por estas soluciones. Tambin se utiliza el gluconato de sodio en cementos mezclas donde modifican las propiedades de fraguado e incrementan la dureza y resistencia al agua del cemento. El gluconato de calcio es ampliamente usado para el tratamiento de enfermedades que

producen dficit de calcio o para suplir este metal durante el embarazo. El gluconato ferroso es utilizado para suministrar este metal en casos de anemia PRODUCCIN DE CIDO ACTICO Introduccin: La produccin de cido actico a partir de lquidos alcohlicos ha sido conocida desde hace tanto tiempo como la produccin de vino (unos 10.000 aos). Los romanos y los griegos, que utilizaban el vinagre diluido como bebida refrescante, producan vinagre dejando el vino abierto al aire. Los primeros vinagres fabricados industrialmente eran producidos en vasijas planas abiertas. Eran procesos lentos en los que flotaba una pelcula de bacterias sobre la superficie del vino. En el siglo XIX se modificaron los procesos en superficie hacia mtodos ms rpidos. Uno de stos, el proceso del generador de goteo se utiliza todava en la actualidad debido al mejor sabor en los productos que se obtienen. Cepas utilizadas: Aunque el cido actico es producido por muchas bacterias fermentativas, slo miembros de un grupo especial, las bacterias del cido actico, se utilizan en la produccin comercial. Estas bacterias se dividen en dos gneros, Gluconobacter y Acetobacter , el primer grupo oxida etanol solamente a cido actico, y el segundo, las superoxidantes, son capaces de oxidar el etanol primero a cido actico y luego adicionalmente a CO2y H2O.Los miembros del gnero Acetobacter son bacterias Gram negativas y cido tolerantes. Las cepas utilizadas comercialmente pertenecen a las especies Acetobacter aceti (como se ve en la Figura 5) , A. pasteurianusy A. peroxidans. Losmiembros del gneroGluconobacter no son superoxidantes. Gluconobacter oxydansy varias subespecies de esta especie son utilizadas comercialmente. Podra parecer que Gluconobacter es el ideal para producir el cido actico, pero en realidad no es as, porque produce cetonas y otros productos que dificultan la purificacin del producto final. Se usa Acetobacter , pero vigilando que no se agote el alcohol, porque en ese caso empezara a degradar el actico. El inculo puede provenir de cultivos puros o de vinagre de lotes previos.

Sustratos tcnicos: Los materiales de partida con bajo contenido en etanol como vino, suero de leche, malta o sidra, no requieren ningn componente adicional para constituir una solucin completa de nutrientes. Sin embargo, si se utilizan alcohol tcnico o licores de papa o de grano, deben ser aadidos nutrientes en muchos casos, para obtener el crecimiento y la produccin de cido actico ptimos. En la fermentacin sumergida la concentracin de los nutrientes debe ser cinco veces superior debido a la mayor biomasa que se saca del biorreactor con el vinagre. Recuperacin de los productos:

El cido actico que se obtiene en el proceso sumergido es turbio debido a la presencia de bacterias y el producto debe ser clarificado por filtracin. Una vez que se obtiene el filtrado, cuando se desea, se utiliza K4[Fe(CN)6] para decolorar el producto final. PRODUCCIN DE VINAGRE Introduccin: Se denomina vinagre al producto obtenido por fermentacin actica en contacto con el aire de lquidos alcohlicos de todas clases o de diversas disoluciones azucaradas o amilceas que hayan experimentado la fermentacin alcohlica. Claridad, brillo y edad, son atributos de un buen vinagre. Por fermentacin actica, es posible elaborar vinagres a partir de alcohol, vino blanco o tinto, manzana, sidra, melaza, malta y frutas. Los mejores vinagres de vino son los obtenidos con vinos de buena calidad. Los varietales se procesan a partir de un slo tipo de uva. Los vinagres saborizados se elaboran a partir de vinos blancos, con el agregado de hierbas frescas como romero, albahaca, tomillo y estragn y, tambin, con pimiento Cayena, chiles, ajo, nuez moscada, frambuesa, pieles de limn y miel. Los acetos o vinagres balsmicos se obtienen a partir del mosto de uvas y se aejan en cascos de madera noble como roble, castao, cerezo, fresno y mora. El aejamiento se realiza como mnimo durante diez aos. Los vinagres argentinos estn elaborados a partir de alcohol, vino blanco o tinto y manzana. Con 1 L de alcohol (96) se elaboran 89 L de vinagre; con 1 L de vino, 1,75 L de vinagre y con 1 L de jugo de manzana se obtiene 920 cm3de vinagre. Los de vino contienen una acidez del 6%, los de alcohol, 5% y los de manzana, 4%. Nociones sobre la tecnologa de elaboracin: En general, existen en el mercado dos tipos de vinagres de calidad. El primero se obtiene como producto de la fermentacin o acetificacin con cultivo superficial, donde las bacterias acticas se encuentran en contacto directo con oxgeno gaseoso situadas en la interface lquido-gas, o bien fijadas a soportes de materiales tales como virutas, elaborndose as la mayora de los vinagres tradicionales. El segundo tipo se elabora por la acetificacin o fermentacin con cultivo sumergido, donde las bacterias acticas estn sumergidas libremente en el seno del lquido a fermentar, en el que constantemente se introduce aire, solo o enriquecido con oxgeno, en condiciones que permitan la mxima transferencia posible desde la fase gaseosa a la fase lquida. As se obtienen de forma rpida los vinagres comerciales actuales de menor precio. Procesos en superficie: Pese al xito de los procesos sumergidos, los procesos en superficie se utilizan an de manera amplia en la produccin de vinagre, especialmente en la fabricacin de vinagre casero. Existen dos mtodos bsicos de produccin en superficie: MTODO DE ORLENS O MTODO LENTO. Es uno de los mtodos ms antiguos para fabricar vinagres. Emplea toneles de aproximadamente 250300 litros de capacidad, que se colocan tumbados en filas horizontales y superpuestas (como se ve en la Figura 6), provistos de dos agujeros de

aproximadamente 5 cm en cada extremo de los fondos de cada barril a 2/3 de la altura del fondo, que se rellenan con estopa para evitar la entrada de las moscas del vinagre, pero que dejan pasar aire. Adems, en el lateral superior se hace otro orificio que se tapa con un tapn de corcho por donde penetra un tubo de vidrio recto que llega casi hasta el fondo del lquido permitiendo renovar el sustrato sin alterar el velo bacteriano situado en la superficie

Este mtodo se trata de un procedimiento esttico donde el lquido a acetificar es una mezcla de vino de bajo grado alcohlico con un 20% de vinagre turbio. Los rendimientos de transformacin de etanol en actico son bajos y el proceso dura de 8 a 10 das una vez comenzada la acetificacin. Se comienza aadiendo 60 litros de un buen vinagre, y despus de 8 das se adiciona una quinta parte de este volumen de vino, que se transformar en vinagre. Inmediatamente se inocula el tonel con un cultivo de un tonel vinagrero en

marcha o con una telilla especialmente criada. Esta operacin se lleva a cabo con la varilla de vidrio recta, y se tapa el tonel. El gnero Acetobacter es aerobio, y por lo tanto si pasa ms de 2 min sin oxgeno muere. En este mtodo, al principio se usa Acetobacter xylinum, porque produce celulosa que le permite flotar, a diferencia que la mayora de las bacterias que se hunden. Estos toneles se mantienen en locales a temperaturas de 20-25C, y al cabo de 8 das se aaden poco a poco por el tubo recto otros 12 litros de vino; estas adiciones se reiteran cada 8das hasta que el lquido llegue casi al borde inferior del orificio de entrada de aire, quedando entonces en marcha normal el tonel vinagrero. A partir de este momento, semanalmente se sacan por el tubo de nivel 12 litros de vinagre ya hecho, que se sustituyen por 12 litros de vino, continundose as indefinidamente la elaboracin. El plazo de una semana entre cada adicin no es exacto y depende de la temperatura, de la clase y capacidad de las bacterias acetificantes, del grado alcohlico y composicin del vino. Pero en general para producir 12 litros de vinagre es necesario esperar 7 semanas. GENERADOR DE GOTEO O MTODO ALEMN. El fundamento de este mtodo y su diferencia con el mtodo de Orlens est en emplear virutas de haya que peridicamente quedan sumergidas en el lquido que est acetificndose. As se consigue aumentar la superficie de acetificacin de la bacteria y mejorar la transferencia de oxgeno, por lo que aumenta la velocidad de acetificacin. La cuba giratoria ms elemental se prepara con un orificio grande en el centro de uno delos fondos, para procurar la entrada de aire. En uno de los costados de esta cuba, en la parte ms alejada de la abertura, se practica un orificio estrecho, que puede obturarse con un tapn; es una canilla de madera o de vidrio para vaciado del envase. El tonel est dividido en dos partes desiguales por un falso fondo, agujereado con numerosos y finos orificios. La parte menor del tonel est llena de virutas de haya. En este compartimento penetra un largo termmetro para controlar la temperatura. Se obtienen cantidades de vinagre, que pueden llegar como mximo, cada 48 h, ala cuarta parte del contenido de un tonel. El vinagre elaborado, que se extrae de las cubas, se sustituye por porciones iguales de vino, continuando la elaboracin indefinidamente. Se emplean toneles verticales de encina con doble fondo, como se ve en la Figura 8. Sobre el primero, agujereado, se colocan capas de virutas de madera de haya, impregnadas de vinagre de buena calidad. Sobre el borde superior se lleva un diafragma perforado, con los orificios obturados con algodn. Al pasar el vino por el diafragma, burbujea el aire que existe entre las virutas. El vinagre se extrae por la parte inferior. Se pueden emplear barriles giratorios de roble, parcialmente llenos de virutas, consiguindose as una mejor aireacin. Las ventajas que se destacan en este proceso son la regulacin de oxgeno y su uso para la produccin continua de vinagre. El vinagre obtenido con el mtodo de cultivo superficial tiene el aroma y el gusto propio de la lentitud de la acetificacin que se ve favorecido por el simultneo envejecimiento. Los principales inconvenientes de estos mtodos que utilizan virutas como soporte son: la acumulacin de bacterias muertas sobre las virutas, debido a la falta de aireacin y aumentos de temperaturas; el desarrollo de bacterias productoras de celulosa (Acetobacter xylinum); la infeccin por angululas (pequeos nematodos) que son imposibles de

combatir una vez que se desarrollan; los aumentos de temperatura difcilmente controlables, con perdidas de alcohol por evaporacin en la corriente ascendente de aire caliente, y descenso del rendimiento; la necesidad de gran espacio (generadores de relleno).

Procesos sumergidos: Se entiende por fermentacin sumergida aquella en la que no se utiliza material poroso o soporte, sino que se hacen circular pequeas burbujas de aire a travs de la biomasa, con lo que se favorece el proceso fermentativo. Emplea toneles de madera o tanques de acero inoxidable quedando siempre una parte del vinagre de la operacin anterior como inculo para iniciar el ciclo siguiente. Se llena con vino, y se introduce posteriormente una fuerte corriente de aire. La acetificacin es muy rpida. Este proceso se utiliza ampliamente en la actualidad. Los rendimientos de la transformacin del alcohol en cido actico resultan ser muy elevados, y la velocidad a la que se desarrolla el proceso es mayor, as como la uniformidad del producto y, sobre todo, se puede lograr la acetificacin de iguales volmenes de alcohol en mucho menor volumen de instalacin, con el consiguiente ahorro de espacio. Se puede trabajar con dispositivos automticos que no slo regulen el control de la aireacin, sino tambin los ciclos de carga y descarga. El fundamento es la presencia de cultivo sumergido en el seno del lquido a acetificar, que se satura constantemente de pequeas burbujas de aire. Una mayor poblacin bacteriana as como la disponibilidad de oxgeno por los microrganismos permiten obtener un mayor rendimiento de la transformacin de etanol en cido actico (rendimientos del 94%) y una mayor velocidad del proceso (25-30 h). Este procedimiento requiere el estricto control de tres parmetros: la temperatura, la presin parcial de oxgeno y los ciclos de carga y descarga. La bacteria actica es viable entre 28-33C, pero la velocidad de fermentacin vara en funcin de la temperatura. La temperatura de la fermentacin debe estar comprendida dentro del intervalo 30-31C que es la ptima para un mejor rendimiento. La oxidacin de etanol a cido actico es una reaccin exotrmica que eleva la temperatura del depsito. Por lo tanto cuando la temperatura se eleva, aumentan las prdidas de alcohol y productos voltiles y, en menor cantidad, de cido actico, aunque lo ms importante es que ocurra la parada del proceso por la muerte de las bacterias. Un elevado suministro de aire puede causar el fenmeno de sobre oxidacin y arrastre delos componentes voltiles, y por otro lado, su carencia puede paralizar la acetificacin dado el carcter aerobio de las bacterias. Adems de la cantidad de aire, se debe tener en cuenta su calidad y pureza, ya que las bacterias acticas son sensibles a los contaminantes de este. Todos los parmetros estn interrelacionados en la acetificacin. El etanol no debe llegar a agotarse totalmente ya que las bacterias mueren rpidamente y se pierde el cultivo. Por ello en este tipo de sistema de produccin de vinagre, se suele llevar a cabo la acetificacin en forma discontinua realizndose ciclos de descarga-carga. As se impide que las bacterias acticas metabolicen el cido actico formado convirtindolo en CO2y agua.

Se descarga aproximadamente el 40-45% del volumen del lquido, que se repone con nueva materia prima suministrndole sustrato a la bacteria. Por eso, se puede trabajar de forma automatizada con dispositivos que regulen el control de la temperatura y de la aireacin, as como los ciclos de carga y descarga.

En la Figura 9 se muestra un esquema del acetificador, que esta constituido por un depsito de acero inoxidable de entre 10.000 y 30.000 litros. Los conductos estn rodeados por un intercambiador de calor de agua para disipar el calor producido en el proceso y mantener la temperatura a 30C.Para evitar las prdidas de compuestos voltiles se ha desarrollado un sistema cerrado, mejorando sensiblemente los resultados del proceso fermentativo. El fermentador consta de un sistema de recirculacin de aire y un sistema de control automatizado que inyecta oxgeno endicha corriente a medida que este es consumido por la biomasa.

PRODUCCIN DE CIDO GLUTMICO El cido glutmico: El cido glutmico es uno de los aminocidos ms importantes, tanto por su abundancia en la composicin de las protenas (6.3%), como por su papel en el intercambio de energa entre los tejidos y el crecimiento celular (Alberts B. et al. 2002). Aislado del gluten de trigo por H. Ritthausen en 1866, este aminocido, o su forma ionizada, el glutamato (abreviado Glu o E), pertenece al grupo de los llamados aminocidos cidos, o con carga negativa a pH fisiolgico, debido a que presenta un segundo grupo carboxilo en su cadena lateral (como se observa en la ilustracin) (Anfinsen, C.B. 1992).

Imagen 1. Estructura tridimensional.

del

cido

glutmico,

conformacin

plana

En 1908 Ikeda descubri que este compuesto era el responsable de la potenciacin del sabor en sopas y alimentos derivados del alga Laminaria japonica, utilizada en la cocina Japonesa. Es por ello, que hoy da se conoce su propiedad de proporcionar un sabor peculiar denominado umami, considerado como el quinto sabor. En la industria alimentaria, el cido glutmico se utiliza como potenciador del sabor en sazones y condimentos en forma de glutamato monosdico (MGS o E621) (Kirimura J. et al. 1969). Adems de intervenir en reacciones de transaminacin y en la sntesis de diferentes aminocidos como la prolina, hidroxiprolina, ornitina y arginina, el cido glutmico es el neurotransmisor excitatorio por excelencia de la corteza cerebral humana. Normalmente, funciona como mensajero qumico en la sinapsis neuronal, pero por encima de unos niveles crticos, el glutamato puede convertirse en un txico para el sistema nervioso, provocando su degeneracin y muerte, por lo que se le clasifica como excitotoxina (Palucha A. et al. 2005). En los ltimos 30 aos, el uso de esta excitotoxina en la alimentacin ha suscitado mucha controversia a raz de diversos artculos cientficos sobre el papel de esta sustancia en la patognesis y la patologa de muchas enfermedades del sistema nervioso central (SNC) y

otras enfermedades agudas y crnicas. En 1968, se describieron las reacciones agudas que pueden darse poco despus de ingerir alimentos que contengan glutamato (dolores de cabeza, debilidad, entumecimiento, palpitaciones, asma, problemas de sueo, dolores abdominales, calambres, hormigueo, opresin en el pecho, etc.), es decir, lo que se denomin el sndrome de restaurante chino (Rejane G. et al. 2002). A pesar de los numerosos estudios que han demostrado la toxicidad del glutamato, la legislacin espaola permite hasta 10g/Kg de E-621 (glutamato sdico) solo o en combinacin con otros aditivos como el E-620 o del E-622 al E625, en su funcin de aditivo alimentario general (salvo en alimentos para lactantes y nios de corta edad), mientras que en los condimentos y aderezos se permite la dosis mxima de quantum satis, es decir, un nivel mximo no especificado (BOE, 22/01/1986). Ruta biosinttica del cido glutmico Los aminocidos podemos clasificarlos en esenciales, que son aquellos que no somos capaces de sintetizar metabolitamente y que tenemos que incorporarlos en nuestra dieta, y los no esenciales, que son aquellos que s podemos sintetizar. Los aminocidos no esenciales se sintetizan a partir de precursores que derivan de distintas rutas metablicas, entre las que destacan: Ruta metablica Gluclisis Precursor de aminocido 3-Fosfoglicerato Fosfoenolpiruvato Piruvato Ciclo de Krebs Oxalacetato -Cetoglutarato. Pentosas-fosfato Ribosa-5-fosfato

El cido glutmico, o glutamato, es un aminocido no esencial, que deriva directamente de un intermediario del ciclo de Krebs, concretamente el -cetoglutarato. Esta conversin es posible principalmente gracias a la accin de enzimas como la Glutamato deshidrogenasa, capaz de catalizar la reaccin: -cetoglutarato + NH4+ + NADPH + H+ glutamato + NADP+ Y en menor medida por otras enzimas como la Glutamato sintasa, que usa la glutamina como donadora del grupo amonio: -cetoglutarato + glutamina + NADPH + H+ 2 glutamato + NADP+O La Carbamilfosfato sintetasa, que lo sintetiza de forma indirecta: HCO3- + glutamina + 2 ATP carbamil fosfato + glutamato + 2 ADP + Pi

Gracias a estas tres enzimas, podemos obtener anablicamente el cido glutmico o su forma ionizada, el glutamato (Stryer, 2003). En condiciones ptimas para la produccin de glutamato a partir de glucosa, predomina la ruta de Embden-Meyerhof-Parnas o Gluclisis que dirige los precursores del carbono hacia el ciclo del cido ctrico o ciclo de Krebs. El NADPH + H+ formado en la descarboxilacin oxidativa del isocitrato a -cetoglutarato suministra el cofactor reducido, que, junto con el NH3, se necesita para la conversin de -cetoglutarato a glutamato por la accin de la glutamato deshidrogenasa (Lehninger, 2005). Imagen 2. Desvo de los productos de la gluclisis al ciclo de Krebs. Las cepas productoras de cido glutmico comercial carecen del enzima -cetoglutarato deshidrogenasa del ciclo del cido ctrico y por consiguiente, en ausencia de iones NH4+ aunque con suficiente oxgeno, el cido -cetoglutrico se acumula (Lehninger, 2005). Los compuestos intermedios del ciclo de Krebs, necesarios para el aprovisionamiento del oxalacetato que interviene en la reaccin de condensacin de las citrato sintetasa y otras reacciones celulares, provienen de reacciones anaplerticas, como el paso de fosfoenolpiruvato con la adiccin de CO2 a oxalacetato. Por otra parte, los compuestos intermedios del ciclo de Krebs pueden provenir del ciclo del glioxilato. Estequiomtricamente a partir de 1.4 moles de glucosa se obtiene 1 mol de glutamato mediante el ciclo del glioxilato, mientras que la ruta que implica la fijacin del dixido de carbono bajo la accin de la fosfoenolpiruvato carboxilasa es ms eficaz y produce 2 moles de glutamato por 1 mol de glucosa (Lehninger, 2005). Es por ello, que con el objeto de incrementar la eficacia de la conversin se han introducido en la produccin algunos mutantes que tienen niveles bajos del enzima isocitrato liasa del ciclo del glioxilato. En el esquema adjunto se muestra la va metablica seguida para la produccin de glutamato a partir de glucosa, destacando las enzimas clave en el proceso (Lehninger, 2005).

Produccin Industrial del cido glutmico En 1909, Saburosuke Suzuki and Ikeda llevaron a cabo por primera vez la produccin industrial de L-glutamato monosdico (MSG). El primer proceso de produccin industrial consisti en la extraccin de glutamato a partir de protenas vegetales, las cuales eran tratadas con cido hidroclordrico para romper los enlaces peptdicos. El cido L-glutamico era entonces aislado desde este material y purificado como MSG. Esta produccin inicial de MSG estaba limitada debido a los problemas tcnicos que presentaba el mtodo para ser desarrollado a gran escala (Sano C., 2009). Extraccin de tejidos vegetales La protena vegetal hidrolizada (PVH) es fuente de glutamato procesado en la que hay concentraciones altas de dicho compuesto. Las protenas hidrolizadas que se utilizan para

realzar el sabor se preparan utilizando cidos o enzimas que permiten digerir qumicamente la harina de soja, el gluten de trigo, las cepas comestibles de levadura, etc. Este proceso, que consiste en hervir productos vegetales en un recipiente lleno de cido sulfrico durante varias horas, para luego neutralizar el cido con sosa custica, descompone las protenas en sus aminocidos constituyentes. As se obtiene un fango de color marrn que se recoge y se deja secar. El producto final es un polvo marrn con altas concentraciones de glutamato. Adems, igual que el glutamato obtenido por fermentacin, la PVH contiene las mismas sustancias cancergenas que este tipo de glutamato, as como las formas D y L de esta sustancia (Sano C., 2009). Mejoras en la produccin del cido glutmico no aparecieron hasta los aos 50s. Una de estas mejoras consista en la sntesis qumica directa, que fue utilizada para la produccin de MSG desde 1962 hasta 1973 (Sano C., 2009). Sntesis qumica El acrilonitrilo se forma catalticamente con CO/H2 y en presencia de [Co (CO)4]2, para dar un aldehdo que mediante la reaccin de Strecker, en presencia de cido cianhdrico y amoniaco, se transforma en el dinitrilo del cido glutmico. En medio bsico se obtiene la mezcla racmica del cido glutmico, que contiene los ismeros D y L: H2C=CH-CN OHC-CH2-CH2-CN NC-CH(NH2)-CH2-CH2-CN cido D,L-Glutmico La separacin de la mezcla racmica se consigue favoreciendo la cristalizacin de cido Lglutmico a partir de la disolucin sobresaturada de la mezcla de ismeros mediante siembra con el derivado L (Sano C., 2009).

CIDOS ORGNICOS PRODUCIDOS POR RIZOBACTERIAS SOLUBILIZAN FOSFATO: UNA REVISIN CRTICA

QUE

La produccin de cidos orgnicos de bajo peso molecular por las rizobacterias es uno de los mecanismos ms ampliamente conocidos de solubilizacin del fosfato del suelo, que hace al fsforo (P) disponible para la nutricin de las plantas. Dentro del perodo de 19082008 se report la capacidad solubilizadora de fosfatos por los cidos: oxlico, ctrico, butrico, malnico, lctico,succnico, mlico, glucnico, actico, glicnico, fumrico, adpico, indolactico y 2-cetoglucnico. Los gneros bacterianos con capacidad de producir cidos orgnicos que solubilizan fosfato se tienen: Pseudomonas, Rhizobium, Burkholderia, Achromobacter, Agrobacterium, Aereobacter, Flavobacterium, Yarowia, Streptosporangium y Erwinia. Los cidos glucnico y 2-cetoglucnico son los agentes ms

frecuentemente reportados como solubilizadores de fosfato. La capacidad de los cidos orgnicos para aumentar la disponibilidad de P, no slo se debe a la acidificacin en la rizsfera de la planta, sino tambin a su capacidad de formar complejos estables con elAl y Fe. Los cidos orgnicos incrementan la disponibilidad de micronutrientes, como Fe, Zn y Mn, en el suelo al disminuir el pH en la rizsfera, o por la quelacin de estos micronutrientes. De igual manera, los cidos orgnicos participan en elsuelo en fenmenos como la quimiotaxis microbiana y la detoxificacin de metales. Sin embargo, su papel en la mayora de estos procesos sigue siendo desconocido, debido a la falta de datos experimentales que expliquen las reacciones de los cidos orgnicos en el suelo. El objetivo de esta revisin es analizar el papel que juegan los cidos orgnicos producidos por las rizobacterias en la solubilizacin de fosfatomineral y susimplicaciones en el estatus nutricional del suelo.

PRODUCCION DE ETANOL Efecto de adicin de iones hierro y zinc sobre la produccin de etanol de dos cepas recombinantes de Saccharomyces cerevisiae La produccin de etanol por fermentacin es influenciada por la presencia de iones metlicos como hierro y zinc dado que son cofactores de la enzima alcohol deshidrogenasa. El estudio de este efecto permitira identificar el comportamiento de los microorganismos fermentadores en sustratos industriales que contienen altas concentraciones de este tipo de iones. Este trabajo evalu la produccin de biomasa, los azcares residuales y la produccin de etanol por fermentacin de tres cepas de S. cerevisiae, CBS8066, recombinantes GG570-CIBI y GG570-CIBII, bajo el efecto de la adicin de hierro a 0, 50 y 150 M, y zinc a 0 y 50 M. Las cepas presentaron inhibicin en la produccin de biomasa y etanol bajo efecto de iones de hierro y zinc, siendo dicha inhibicin mayor al estar en presencia de zinc o alta concentracin de hierro. GG570-CIBI mostr disminucin en produccin de biomasa de 4 g/L y una cada en produccin de etanol de 40% en el tratamiento 150 M hierro-50 M zinc (con respecto al tratamiento basal). GG570-CIBII fue la menos afectada con inhibicin en la produccin de etanol inferior a 11% a las 20 h de fermentacin. Adicionalmente, present la mayor produccin de etanol cuando hubo adicin de 150 M Fe con o sin adicin de zinc, siendo dicha produccin entre un 9 y 14% superior a la de las cepas CBS8066 y GG570-CIBI respectivamente, bajo las mismas condiciones. Posteriormente, GG570-CIBII ser evaluada en sustratos industriales debido a su menor inhibicin en la produccin de etanol, permitiendo as obtener mejores rendimientos. Produccin de etanol a partir de algas marinas

En un trabajo muy prometedor, se logr combinar la produccin de etanol, utilizando bacterias de fcil cultivo como Escherichia coli, con la degradacin de alginato (un glcido o hidrato de carbono presente en las algas) que no es digerido de forma natural por estas bacterias. Aprovechando que hay bacterias que s son capaces de digerirlo, como las del gnero Vibrio, se ha incorporado un trozo (36 kilobases) del genoma de la bacteria V. splendidus en el genoma de la bacteria E. coli; esta labor de ingeniera gentica ha permitido introducir la ruta metablica para digerir el alginato en E. coli, permitiendo su uso industrial en la produccin de etanol a partir de algas marinas. A partir de este logro se podra ofrecer una fuente importante de biocombustibles. Segn investigaciones, en menos del 3% de las aguas marinas costeras se pueden producir algas suficientes como para sustituir ms de 226.800 millones de litros de combustibles fsiles. El inconveniente que presenta es que es demasiado caro como para competir con otros combustibles derivados del petrleo, pero a medida que pase el tiempo, se encontrar la manera de introducirla en el mercado con un costo accesible. Lignocelulosa Como Fuente de Azcares Para la Produccin de Etanol. La lignocelulosa es el principal componente de la pared celular de las plantas, esta biomasa producida por la fotosntesis es la fuente de carbono renovable ms prometedora para solucionar los problemas actuales de energa. El principal impedimento tecnolgico para la utilizacin de la biomasa vegetal es, en general, la ausencia de una tecnologa de bajo costo dirigida a la recalcitrancia de la lignocelulosa. Se han desarrollado diversos mtodos que mejoran la hidrlisis de la lignocelulosa, como los pretratamientos fisicoqumicos y

biolgicos. La finalidad del pretratamiento es remover la lignina, hidrolizar la hemicelulosa a azcares fermentables, y reducir la cristalinidad de la celulosa para liberar la glucosa. El propsito de esta revisin es mostrar un panorama de los mtodos que se han desarrollado para hidrolizar la lignocelulosa.

BIBLIOGRAFIA: http://blogs.creamoselfuturo.com/bio-tecnologia/2011/05/03/el-acido-citrico-nosolo-esta-en-las-naranjas-y-limones/ http://es.scribd.com/doc/13167007/Fermentaciones-aerobicas-especiales http://es.scribd.com/doc/14715667/39/PRODUCCION-DE-ACIDOS-ORGANICOS http://html.rincondelvago.com/produccion-industrial-de-acidos-organicos.html http://www.redalyc.org/redalyc/pdf/573/57316076007.pdf http://www.gunt.de/networks/gunt/sites/s1/mmcontent/produktbilder/0836400 0/Datenblatt/08364000%204.pdf http://www.smbb.com.mx/revista/Revista_2009_3/Lignocelulosa.pdf http://www.revistas.unal.edu.co/index.php/biotecnologia/article/view/15581 http://blogs.creamoselfuturo.com/bio-tecnologia/2012/02/02/produccion-deetanol-a-partir-de-algas-marinas/ http://www.gunt.de/download/CE640_flyer_spanish.pdf https://sites.google.com/site/losacidosenlocotidiano/acidos-organicos