Universidade de Aveiro Departamento de Biologia Ano 2009

SNIA MARGARIDA ANDRADE E SANTOS

UM OLHAR SOBRE A POLUIO E DEGRADAO DOS RECURSOS

Universidade de Aveiro Departamento de Biologia Ano 2009

SNIA MARGARIDA ANDRADE E SANTOS

UM OLHAR SOBRE A POLUIO E DEGRADAO DOS RECURSOS

Dissertao apresentada Universidade de Aveiro para cumprimento dos requisitos necessrios obteno do grau de mestre em Toxicologia e Ecotoxicologia, realizada sob a orientao do Doutor Amadeu Soares, professor catedrtico do departamento de Biologia da Universidade de Aveiro.

Agradecimentos:

Apresento os melhores cumprimentos a Raquel Agra por todo o seu apoio ao longo da preparao deste trabalho.

O jri:

Presidente:

Antnio Jos Arsnia Nogueira, Prof. Associado c/ Agregao, Departamento de Biologia da Universidade de Aveiro Amadeu Mortgua Velho da Maia Soares, Prof. Catedrtico, Departamento de Biologia da Universidade de Aveiro Isabel Maria Cunha Antunes Lopes, Investigadora Auxiliar, CESAM Centro de Estudos do Ambiente e do Mar, Universidade de Aveiro Susana Patrcia Mendes Loureiro, Investigadorra Auxiliar, CESAM - Centro de Estudos do Ambiente e do Mar, Universidade de Aveiro

Orientador:

Arguente Principal:

Vogal:

Palavras-chave

Ecotoxicologia, ensino experimental das cincias

Resumo

No sentido de enriquecer a componente prtica dos programas do ensino das cincias, props-se um conjunto de actividades laboratoriais que exploram os conceitos associados Ecotoxicologia, j abordados nos programas propostos pelo Ministrio da Educao. Paralelamente foi criado um manual terico de apoio e motivao que aborda a problemtica da poluio e degradao dos recursos naturais. O trabalho dividiu-se em trs componentes: a parte terica, a parte experimental e um manual como elemento de apoio ao ensino experimental das cincias. A parte terica evidencia a abordagem feita cincia da Ecotoxicologia nos contedos programticos do ensino das cincias, descreve sumariamente a cincia da Ecotoxicologia e aborda a importncia da componente experimental no ensino das cincias. A parte prtica prope um conjunto de trabalhos experimentais adaptados aos conceitos tericos relacionados com a cincia da Ecotoxicologia, que so explorados nos programas de ensino das cincias. O manual de apoio aborda os principais problemas ambientais actualmente existentes, relacionados com os ecossistemas, com os recursos naturais existentes na Terra, com a interaco da populao humana com o meio ambiente. Faz uma breve descrio sobre poluio e a sua gesto, introduzindo conceitos sobre a cincia da Ecotoxicologia. Dada a importncia da componente experimental do ensino das cincias, e porque a interligao da cincia, tecnologia e sociedade a base para a construo de um futuro mais sustentvel, espera-se que este trabalho venha de encontro s necessidades do ensino experimental das cincias.

Keywords

Ecotoxicology, experimental laboratoriess in science education

Abstract

To enhance practical science education, it was proposed a set of science labs that explore the concepts associated to Ecotoxicology, already addressed in the science educational programs from the Ministry of Education. Simultaneously it was created an handbook to support and motivate the users to the problematic of pollution and the devastation of natural resources. This work was divided into three components: theoretical, practical and a handbook. The theoretical component of the work reinforces the approach made to the science of Ecotoxicology within the science education contents, makes a brief description about the evolution of Ecotoxicology and focus on the importance of the laboratories in the education of science. The practical component proposes a set of laboratories related to the Ecotoxicology contents that are exploited in the science education programs. The handbook addresses the main existing environmental problems on Earth, and the interaction of human population with the environment. It makes also a brief description about pollution and its management and introduces several concepts of Ecotoxicology. Given the importance of experimental skills in science education, and because the connection among science, technology and society is the basis for the construction of a sustainable future, it is expected that this work meets the needs of practical laboratories on science education.

NDICE:

1. Introduo .........................................................................................................10 2. Objectivos..........................................................................................................11 3. Abordagem Ecotoxicologia dos programas de ensino das cincias ...............11 4. Importncia da cincia Ecotoxicologia na tecnologia e sociedade ....................12 5. A importncia do ensino experimental das cincias..........................................19 6. Contedos prticos abordados no programa ....................................................22 7. Trabalhos prticos propostos ............................................................................23 7.1 Trabalho nmero 1 ......................................................................................24 7.2 Trabalho nmero 2 ......................................................................................30 7.3 Trabalho nmero 3 ......................................................................................34 7.4 Trabalho nmero 4 ......................................................................................38 7.5 Trabalho nmero 5 ......................................................................................44 7.6 Trabalho nmero 6 ......................................................................................48 7.7 Onde procurar materiais para a realizao das experincias ......................54 8. Concluses gerais .............................................................................................55 9. Referncias .......................................................................................................56 10. Anexos ............................................................................................................59

Lista de Figuras: Fig. 1 Medio das plantas com rgua no trabalho 1............................................25 Fig. 2 Aspecto da experincia 1 ............................................................................25 Fig. 3 Aspecto da experincia 2 ............................................................................28 Fig. 4 Aplicao do contaminante com pincel - trabalho 2 ....................................28 Fig. 5 Preparao do solo no contaminado - Trabalho 3.....................................31 Fig.6 Preparao do solo contaminado - Trabalho 3.............................................31 Fig. 7 Aplicao do contaminante trabalho 3......................................................32 Fig. 8 Aspecto da experincia antes de introduo dos vermes Trabalho 3 .........32 Fig. 9 Aspecto final do trabalho 3 ..........................................................................32 Fig. 10 - Captura de macroinvertebrados num curso de gua ..............................36 Fig. 11 - Embalamento e transporte dos macroinvertebrados para o laboratrio..36 Fig. 12 - Separao dos macroinvertebrados no laboratrio trabalho 4 .............36 Fig. 13 - Identificao dos macroinvertebrados.....................................................37 Fig. 14 - Aspecto geral do trabalho prtico nmero 5............................................39 Fig. 16 - Cor observada para o detergente (det), fertilizante (fert) e controlo (ctrl)43 Fig 17 - Qumico B; esquerda; e Qumico A .......................................................45 Fig. 18 - Adio de gua e leo a ambos os copos - trabalho 7............................45 Fig. 19 - Adio de qumico A ao copo 1 e de qumico B ao copo 2 .....................46 Fig. 20 - Aspecto dos copos depois da agitao dos qumicos .............................46 Fig. 21 - Aspecto dos copos depois de se retirar a camada aquosa de cada copo ...........................................................................................................................47 Fig. 22 - O copo 2 recebe uma dfnia porque est poludo ..................................47 Fig. 23 - Copos depois de novamente agitados aps receberem mais uma poro de cada um dos lquidos A e B ..........................................................................47 Fig. 24 - Segunda remoo da camada aquosa dos copos - trabalho 7 ...............48 Fig. 25 - O copo 2 recebeu outra dfnia porque contm poluente - Trabalho 7 ....48 Fig. 26 - Escala de avaliao dos indices de Hilsenhof .. 62

Lista de grficos: Grfico 1 - Taxa de emergncia de sementes em solo contaminado....................24 Grfico 2 - Medies dos comprimentos das plantas na terceira semana............28 Grfico 3 - Percentagem de imobilidade Ctrl/lix .47 Grfico 4 - Percentagem de mobilidade Ctrl/Vin.47 Grfico 5 - Percentagem de imobilidade Ctrl/Det ..................................................48

Lista de tabelas: Tabela 1 Desenho experimental do trabalho prtico nmero 1 ........................................22 Tabela 1 Desenho experimental do trabalho pratico 1 .....................................................22 Tabela 2 Nmero de plantas germinadas na segunda semana .......................................23 Tabela 3 Medies dos comprimentos das plantas na terceira semana ..........................23 Tabela 4 Organismos recolhidos no trabalho prtico nmero 4 .......................................34 Tabela 5 Desenho do trabalho nmero 5 .........................................................................38 Tabela 8 Descrio dos valores de tolerncia de Hilsenhoff ............................................52 Tabela 9 Valores de tolerncia de Hilsenhoff ...................................................................53 Escolas do Concelho de Aveiro que receberam o inqurito 54

PARTE TERICA 1. Introduo Para atingir a sustentabilidade do planeta necessrio estabelecer uma relao entre a sociedade, a tecnologia e a cincia (Hoffman et al., 2003). Os ecossistemas fornecem uma srie de servios dos quais a sociedade humana depende e que no so frequentemente substitudos pelas tecnologias existentes (Hoffman et al., 2003). A cincia importante na medida em que ajuda a sociedade a perceber at que ponto o uso da tecnologia pode melhorar a sustentabilidade do planeta. Por isso a Ecotoxicologia, como cincia que estuda os efeitos das substncias nos ecossistemas, pode auxiliar a sociedade a perceber quando que a utilizao da tecnologia pode ser til. A sociedade actual ter de aceitar o compromisso de assegurar um futuro sustentvel aos seus descendentes (Hoffman et al., 2003). Desta forma, o ensino experimental das cincias importante para formar cidados com atitudes proactivas face ao uso sustentvel dos recursos (Galvo et al., 2001a). Neste contexto, os programas de ensino tiveram de se adaptar a esta trialtica entre a cincia, tecnologia e sociedade, num contexto de desenvolvimento de futuros cidados com atitudes proactivas para a utilizao e concepo de tecnologia, permitindo a sustentabilidade dos recursos e uma sociedade responsvel. Como cincia, a Ecotoxicologia, leva-nos a adoptar determinadas atitudes em relao forma como exploramos os recursos. Nomeadamente, permite-nos compreender quais os efeitos negativos que provocamos nos ecossistemas quando realizamos diversas actividades dirias. Analisando os programas de ensino das cincias do Ministrio da Educao (ME, 2009) para o ensino bsico e secundrio, verificouse uma forte abordagem cincia da Ecotoxicologia ao nvel de conceitos tericos. Para alm da abordagem terica verifica-se tambm uma aluso concepo e execuo de trabalhos experimentais sobre a contaminao de recursos naturais (ME, 2009). No entanto, apesar do esforo realizado pelo ME na demonstrao da importncia do ensino experimental das cincias, a componente prtica existente nos manuais escolares habitualmente adoptados, no refora esta posio. Da anlise feita a quinze escolas do Concelho de Aveiro, verificouse que a componente experimental no muito abundante devido falta de materiais didticos de suporte para a sua realizao e devido carncia de outros meios materiais. A anlise s escolas consistiu na visita a duas escolas, EB23 de Cacia e Escola Secundria com 3 ciclo do ensino bsico Dr Jaime Magalhes Lima, e no envio de um inqurito (ver anexos) s restantes treze escolas (ver anexos). Pressupe-se que a realidade deste concelho reflicta, de algum modo, a situao das restantes escolas do pas. Com base na anlise dos programas do ensino bsico e na anlise dos trabalhos experimentais realizados nas escolas do concelho de Aveiro, foi proposto um conjunto de trabalhos experimentais no mbito da Ecotoxicologia, para apoio ao ensino experimental das cincias. Os trabalhos experimentais propostos tiveram como base os conceitos tericos relativos cincia da Ecotoxicologia abordados nos programas e foram adaptados de protocolos experimentais da OCDE (Organizao para o Comrcio

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e Desenvolvimento Econmico), e da Agncia de Proteco Ambiental dos Estados Unidos USEPA (U.S. Environmental Protection Agency), tendo em conta a realidade das escolas em termos dos meios humanos e materiais existentes. Este conjunto de trabalhos proposto pretende tambm realar a integrao dos conceitos cincia, tecnologia e sociedade numa vertente de desenvolvimento de atitudes interventivas, referida nos programas de ensino das cincias do Ministrio da Educao (ME, 2009). No sentido de apoiar a realizao dos trabalhos prticos propostos, foi criado um manual onde so abordadas as temticas do programa com nfase na Ecotoxicologia. O manual facilita a preparao da componente prtica e simultaneamente um elemento motivador dos alunos e professores para a problemtica da poluio e degradao dos recursos naturais. Os principais conceitos chave abordados no programa so explorados no manual e nas experincias propostas.

2. Objectivos Com este trabalho pretende-se: Demonstrar a abordagem cincia da Ecotoxicologia existente nos programas de ensino das cincias; Propor um conjunto de trabalhos prticos desenvolvidos no mbito do programa do ensino experimental das cincias na rea da Ecotoxicologia; Apresentar um manual de apoio da componente prtica proposta.

3. Abordagem Ecotoxicologia dos programas de ensino das cincias A anlise dos contedos programticos foi feita com base em contedos disponibilizados no endereo electrnico do Ministrio da Educao (ME, 2009). Alm disso, foram ainda analisados vrios manuais de biologia do ensino bsico e secundrio nomeadamente (Leal, J. I, et al., 1998), (Motta, L., et al., 2007), (Silva, A. D., et al., 2007), (Gomes, J. C., 2002), (Roque, M. et al., 1988), (Silva, A. D., 1989), entre outros. Observou-se que os contedos do ensino bsico, nomeadamente do oitavo ano de escolaridade, possuam uma forte componente de Ecotoxicologia, embora no a abordem com essa designao. Nalguns manuais foram encontradas aluses a alguns tratados internacionais no mbito da Ecotoxicologia e tambm a obras como Silent Spring de Rachel Carson. O programa constitudo essencialmente por temas sobre impacto da interveno humana na biosfera, gesto sustentvel dos recursos naturais, riscos das inovaes cientficas e tecnolgicas para o indivduo, para a sociedade e para o ambiente e temas relativos sustentabilidade e preservao da biodiversidade. Ao nvel do ensino secundrio, nomeadamente no 12 ano, os temas relativos Cincia da Ecotoxicologia so tratados de uma forma mais aprofundada sendo abordadas as interaces dos contaminantes com os ecossistemas (processos de

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eutrofizao, bioamplificao e sinergismo), processo de contaminao ambiental, os principais contaminantes ambientais, as suas fontes e os seus riscos para a sade com destaque para a magnitude dos seus efeitos (letais vs subletais). Alguns dos conceitos encontrados nos programas do ensino so conceitos chave da cincia da Ecotoxicologia ex. toxicidade, dose letal, efeito agudo, efeito crnico, agente mutagnico, agente teratognico e cancergeno. Em termos de aquisio de conhecimento atravs da realizao de trabalhos prticos, as directrizes dos programas referem a concepo e execuo de trabalhos experimentais sobre contaminao de recursos naturais (ME, 2009). Para alm disso, pretende-se que os alunos desenvolvam atitudes de reflexo e pensamento crtico sobre problemas ambientais causados pela actividade humana, que valorizem os avanos cientfico-tecnolgicos na preservao dos recursos naturais e que desenvolvam posturas interventivas junto da sociedade sobre questes de educao ambiental (ME, 2009). Os contedos pretendem que se d relevncia aos principais contaminantes ambientais, as suas fontes e os seus riscos para a sade humana para alm de sugerir a integrao das visitas de estudo no plano curricular de forma a articular actividades de preparao e sntese laboratoriais e de pesquisa com as realizadas durante as visitas de estudo (ME, 2009).

4. Importncia da cincia Ecotoxicologia na tecnologia e sociedade Desde h alguns anos tem-se reconhecido a importncia de preservar os recursos naturais como forma de assegurar um desenvolvimento econmico sustentvel. O conceito de desenvolvimento econmico sustentvel comeou por ser definido no Relatrio de Brundtland, elaborado em 1987 pela Comisso Mundial para o Ambiente e Desenvolvimento da ONU (Soares, A.M.V., 2006a). Neste relatrio, para alm de terem sido referidos vrios problemas ambientais escala mundial, foi tambm referido que o desenvolvimento econmico deve ter em conta o impacto sobre o ambiente (WHO, 1992). No entanto, ambiente e desenvolvimento encontram-se interligados (WHO, 1992). Muitos dos problemas ambientais dos pases em vias de desenvolvimento so consequncia da falta de desenvolvimento, (Soares, A.M.V., 2006a). nos pases desenvolvidos, o crescimento econmico muitas vezes responsvel pela deteriorao ambiental., (Soares, A.M.V., 2006a). O grau de desenvolvimento dos pases determina o tipo poluio e de degradao dos recursos naturais existente. Assim, nos pases em vias de desenvolvimento a falta de tecnologia no permite que os recursos naturais sejam preservados da depleco natural para satisfao das necessidades bsicas humanas. Por outro lado, nos pases industrializados a utilizao de tecnologia promove a poluio e os efeitos degradantes dos recursos naturais para satisfao das necessidades suprfulas da populao humana. A Ecotoxicologia evoluiu da necessidade de compreender os efeitos nocivos do nmero crescente de poluentes de origem antropognica, para os quais se desconhecia os seus efeitos no ambiente (Soares, A.M.V., 2006a). No ano de 1969, na Europa, Ren Truhaut, um toxicologista francs, criou o termo Ecotoxicologia. O conceito foi apresentado numa conferncia do

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Conselho Internacional da Unio Cientfica, da Europa, onde Truhaut liderou um grupo de Ecotoxicologia e foi encarregue de escrever uma definio precisa para este novo campo da cincia, que passou a ser a seguinte: o ramo da toxicologia que estuda os efeitos txicos provocados pelos poluentes naturais e sintticos nos constituintes dos ecossistemas (animal incluindo o ser humano, vegetal e microbiano), de uma forma integrada (Truhaut, 1977). A Ecotoxicologia o resultado da extenso do objectivo da toxicologia preservao da vida animal e vegetal. (Rombke et al., 1996; Cairns, 1995). Algumas das definies atribudas Ecotoxicologia so: a aplicao da toxicologia - como cincia que estuda os efeitos dos txicos nos organismos individuais - ao estudo dos efeitos ecolgicos dos poluentes (Moriarty, 1983); a cincia que procura prever os impactos dos qumicos nos ecossistemas (Levin et al., 1989); o estudo do destino e efeito dos agentes txicos nos ecossistemas (Cairns e Mount, 1990); o estudo dos efeitos txicos nos organismos no humanos, populaes e comunidades (Suter, 1993); o campo de estudos que integra os efeitos ecolgicos e toxicolgicos dos poluentes qumicos nas populaes, comunidades e ecossistemas com o transporte, transformao e degradao desses poluentes no ambiente (Forbes e Forbes, 1993); a cincia que prev os efeitos dos agentes txicos potenciais nos ecossistemas naturais e nas espcies no alvo (Hoffman et al., 1990). A realizao de uma avaliao de impacto ou efeito ecotoxicolgico necessita da aquisio de conhecimentos sobre o ecossistema em estudo e sobre a fsica e a qumica das substncias poluentes, (Soares, 2006b). necessrio compreender os factores qumicos, fsicos e biolgicospara que se possa determinar como que agentes potencialmente txicos actuam no ambiente e para prever o grau de exposio dos organismos., (Soares, 2006b). Atravs dos vrios estudos j desenvolvidos em Ecotoxicologia a sociedade capaz de abordar problemas como as substncias qumicas que utiliza, o que lhes acontece quando entram nos ecossistemas, como podem medir os efeitos nos organismos, quais so os parmetros relevantes para uma dada espcie ou comunidade no seu habitat natural, interpretar a informao fornecida pelos modelos de ecossistemas, monitorizar os efeitos dos poluentes, prever a distribuio de uma substncia no meio ambiente e os seus efeitos potenciais. , portanto, um instrumento essencial na luta contra a poluio, apoiando as polticas ambientais, leis, normas e mtodos de controlo., (Soares, 2006b). A Ecotoxicologia serve-se de ensaios de toxicidade para avaliar os efeitos adversos das substncias qumicas nos organismos vivos em condies padro e de forma a assegurar a reproductibilidade (Hoffman, 2003). importante assegurar a reproductibilidade e existncia de protocolos padronizados para que seja possvel a qualquer laboratrio em qualquer momento obter resultados comparveis, (Soares, et al., 1993). Quanto ao tipo de efeitos txicos, os ensaios podem ser letais e sub-letais ou crnicos. Os efeitos letais so quantificados atravs da medio da morte dos organismos enquanto os efeitos sub-letais so quantificados atravs da medio de alteraes no crescimento, desenvolvimento, reproduo, respostas patolgicas, bioqumicas, fisiolgicas e comportamentais (Calow, P., 1993). Estes efeitos so expressos por critrios quantificveis como o nmero de organismos mortos, a percentagem de ovos viveis, alteraes no comprimento e peso, percentagem de inibio enzimtica, incidncia de tumores, entre outros, (Calow, P., 1993).

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Os efeitos txicos variam consoante o perodo de exposio seja mais longo ou mais curto. Numa exposio aguda os organismos entram em contacto com uma elevada concentrao de substncia qumica durante um curto espao de tempo (horas ou dias). Quando a substncia txica rapidamente absorvida pelos organismos os efeitos observam-se imediatamente. No entanto, podem resultar efeitos a mais longo prazo semelhantes aos resultantes de uma exposio crnica, (Calow, P., 1993). Numa exposio crnica, os organismos esto expostos a concentraes reduzidas de uma substncia qumica durante perodos de tempo mais prolongados (semanas, meses ou anos), (Calow, P., 1993). Esta forma de exposio (crnica) permite que a substncia txica entre no organismo de forma contnua ou com intervalos frequentes, provocando efeitos observveis a longo prazo. Poder tambm ocorrer a manifestao de efeitos imediatos exposio, (Calow, P., 1993). O objectivo dos testes de toxicidade aguda estudar uma resposta especfica ao nvel celular, do tecido, do organismo ou de uma populao, durante um perodo de exposio curto (em relao ao tempo de vida do organismo) (Hoffman et al., 2003). Nestes testes o perodo de exposio pode ir de 24 a 96 h at 10 dias, sendo considerado curto em relao durao de uma gerao do organismo utilizado no teste (Hoffman et al., 2003). Os organismos so expostos a concentraes que normalmente seguem uma srie logartmica e decorrem na ausncia de alimento (Hoffman et al., 2003). A resposta estudada a morte ou a imobilizao (Hoffman et al., 2003). Os parmetros de medio so a CL50, a CI50 ou a CE50. Estes representam a concentrao no final do teste que provoca em 50% dos organismos mortalidade (CL50), imobilidade (CI50) ou efeito (CE50), respectivamente. Estes parmetros devem vir sempre acompanhados do tempo de exposio (CL50, - 24h) (Hoffman et al., 2003). O objectivo dos testes de toxicidade crnica determinar os efeitos da exposio prolongada a substncias txicas presentes no meio (Hoffman et al., 2003). Os ensaios crnicos tm um perodo de exposio comparativamente longo relativamente ao tempo de vida do organismo usado. Utilizam uma gama de concentraes inferior ao nvel letal, pois o objectivo estudar os efeitos subletais. Os organismos so alimentados durante o teste. Os parmetros usados para medio dos efeitos sub-letais so a CENO (Concentrao de Efeito No Observado) definida como a concentrao testada mais elevada para a qual no se observam quaisquer efeitos significativos, quando comparados com os controlos - a CEO (concentrao de Efeito Observado) definida como a menor das concentraes testadas em que se observam efeitos significativos, quando comparados com os controlos e por vezes a CMAT (Concentrao Mxima Admissvel do Txico) (Hoffman et al., 2003). Para testar a toxicidade das substncias qumicas, a exposio dos organismos feita atravs da introduo dos txicos no meio de ensaio. O modo como o txico fornecido aos organismos pode ser contnuo, esttico ou semiesttico, (Hoffman et al., 2003). Nos testes de fluxo esttico, o txico introduzido no meio de teste no incio do ensaio, no sendo renovado at ao final (Hoffman et al., 2003). Este regime de fluxo mais utilizado em ensaios agudos. Estes ensaios podem estar limitados nos casos em que a substncia de teste voltil ou muito densa, pois com estas propriedades a concentrao da substncia no se mantm constante durante o decorrer do ensaio (Hoffman et al., 2003).

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Nos testes de fluxo contnuo, os organismos testados so submetidos continuamente a entradas e sadas de solues frescas da substncia txica no meio de ensaio (Hoffman et al., 2003). Neste tipo de ensaios mais fcil controlar e manter constante a concentrao da substncia de teste. Este regime de fluxo de teste mais adequado realizao de ensaios crnicos porque permite a remoo contnua de material fecal e de metabolitos, para alm de assegurar uma concentrao de txico constante ao longo do tempo (Hoffman et al., 2003). Por outro lado, este regime de fluxo no se pode aplicar a ensaios que utilizem meios de teste slidos. Os principais inconvenientes destes testes so os custos elevados e a necessidade de grandes volumes de meio de ensaio e de substncia de teste (Hoffman et al., 2003). No caso de testes de fluxo semi-esttico existe um equilbrio entre os sistemas de fluxo contnuo e os de fluxo esttico. Utiliza-se o mesmo material laboratorial que nos testes estticos, no entanto, os organismos so transferidos periodicamente para novas solues de teste. Tal como nos ensaios de fluxo contnuo, a renovao peridica do meio permite a alimentao durante o ensaio sem haver acumulao de material fecal, alimentos ou metabolitos. No entanto, o aumento da frequncia de manipulao dos organismos de teste pode provocar leses e aumentar o seu stress, (Hoffman et al., 2003). Os ensaios de toxicidade consistem em controlos e tratamentos. Por questes de tratamento estatstico os tratamentos so replicados no mnimo trs vezes, sendo as rplicas sempre feitas simultaneamente em cada ensaio (Hoffman et al., 2003). Os controlos servem para assegurar que os efeitos observados esto associados exposio substncia em teste. Existem trs tipos bsicos de controlos, o controlo negativo, o controlo com solvente e o controlo de referncia. O controlo negativo ou branco consiste num grupo de organismos colocados no meio de diluio dos tratamentos, mas sem a substncia de teste ou o solvente (veculo) (Hoffman et al., 2003). Este tipo de controlo utilizado para determinar se existem efeitos relacionados com o meio de ensaio ou com a condio dos organismos de teste (Hoffman et al., 2003). O controlo com solvente, utilizado quando as substncias de teste so pouco hidrossolveis e necessitam de um solvente orgnico para se dissolverem melhor no meio de ensaio (Hoffman et al., 2003). Este controlo d-nos informao sobre os possveis efeitos imputveis ao uso do solvente. O controlo positivo (de referncia) um controlo negativo com adio de uma substncia de referncia. Uma substncia de referncia uma substncia para a qual se conhecem bem os efeitos sobre os organismos, previamente determinados atravs de experincias. As substncias de referncia obedecem aos critrios de serem txicas a baixas concentraes, induzem mortalidade com rapidez, so compostos estveis e com modo de aco no selectivo e devem ser detectveis atravs de tcnicas analticas correntes. Estas substncias so usadas para determinar o estado de sade e sensibilidade dos organismos, comparar toxicidades relativas de substncias utilizando o controlo como padro interno, para efectuar calibraes inter-laboratoriais e para avaliar a reproductibilidade dos resultados ao longo do tempo (Hoffman et al., 2003). Antes da realizao de um ensaio de toxicidade, devem ser definidas condies de validade. Para os ensaios agudos as condies de validade englobam o valor mximo de percentagem de mortalidade que pode ocorrer nos organismos usados nos controlos (no deve exceder 10%) (Soares, et

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al., 1993). Para os ensaios crnicos as condies de validade mais utilizadas so as variaes de pH do meio, a diminuio dos nveis de oxignio dissolvido e o n de descendentes produzidos (Soares, et al., 1993). A seleco das espcies nos testes ecotoxicolgicos tambm um factor muito importante e que dever obedecer aos seguintes critrios: ser representativa de um grupo ecolgico importante em termos taxonmicos (nvel trfico ou nicho), ocupar uma posio intermediria nas cadeias alimentares, estar disponvel em diferentes pocas e em nmero suficiente, ser fcil de obter em laboratrio, permitir a obteno de estirpes geneticamente uniformes, possur boas condies de sade, existir informao suficiente sobre a biologia do organismo, estar entre as mais sensveis e ser consistente nas respostas (Soares, 2006b). No devem ser usadas espcies indgenas, raras ou em vias de extino (Soares, 2006b). No existem espcies ideais, pois no existem espcies que cumpram todos os critrios. Devido variao inter-especfica, espcies diferentes expostas mesma gama de concentraes da mesma substncia podem mostrar efeitos diferentes (Soares, 2006b). Por esta razo importante efectuar os testes com vrias espcies, no mnimo uma bateria de testes deve incluir uma espcie de algas (Selenastrum, Chlorella), uma de invertebrados (consumidor primrio Daphnia ou Ceriodaphnia) e (consumidor secundrio peixe) (Soares, 2006b). Os ecossistemas envolvem interaces complexas de factores fsicos, qumicos e biolgicos, sendo difcil perceber a resposta de um sistema s substncias txicas (Levin S.A et al. 1989). Esta avaliao mais difcil devido capacidade de adaptao dos componentes biticos diversidade especfica do ecossistema (que pode mudar com o tempo) e s diferentes respostas estruturais e funcionais entre os componentes biolgicos (Levin S.A et al. 1989). Os ecossistemas so todos diferentes e mesmo os mais semelhantes no so necessariamente afectados do mesmo modo pelas mesmas substncias txicas. Pequenas alteraes no ambiente fsico ou na composio das espcies podem resultar em diferenas na distribuio de uma substncia e em efeitos diferentes (Levin S.A et al. 1989). A avaliao de risco ecolgico est muito limitada pela incapacidade de prever com fiabilidade a respostas ao nvel dos ecossistemas (Levin S.A et al. 1989). Algumas das razes incluem a grande variedade de ecossistemas e de tipos potenciais de perturbaes, falta de recolha de dados para comparao entre ecossistemas perturbados, existncia de pouca investigao sobre a ecologia dos ecossistemas, a grande variabilidade intra e inter- ecossistemas, entre outras (Levin S.A et al. 1989). Referimo-nos a uma perturbao quando induzida alguma aco que afecta o ecossitema para alm da sua condio normal ou de referncia (Levin S.A et al. 1989). A resposta de um ecossistema traduz-se pela alterao da sua dinmica e eventualmente por um desvio da sua condio de referncia (Levin S.A et al. 1989). Por outro lado, todos os ecossistemas possuem uma capacidade de recuperao, ou seja, a capacidade de voltar condio de referncia ou prximo dela (Levin S.A et al. 1989). Num ecossistema, a resposta a um determinado tipo de perturbao envolve sempre uma caracterizao da intensidade, frequncia e durao da exposio ao elemento perturbador (Levin S.A et al. 1989). Os ecossistemas tm uma capacidade normal de gerir vrios tipos de perturbaes naturais ou no naturais (Levin S.A et al. 1989). Podemos observar alguns exemplos de

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perturbaes naturais normalmente geridas pelos ecossistemas (ex. fogos naturais) (Levin S.A et al. 1989). A grande questo na avaliao de risco ecolgico perceber quando uma determinada perturbao provoca uma alterao relevante num determinado ecossistema (Levin S.A et al. 1989). Uma das abordagens utilizadas para avaliar os efeitos ecolgicos a identificao de indicadores que devero ser analisados para detectar potenciais alteraes nos componentes dos ecossistemas (Levin S.A et al. 1989). A manifestao dos efeitos ao nvel celular nos indivduos pode alertar para os efeitos potenciais de um poluente que mais tarde se iro reflectir ao nvel da populao e da comunidade. Por outro lado, os efeitos observados ao nvel do ecossistema denunciam um problema de poluio numa fase mais avanada. Desta forma, tanto os ensaios laboratoriais como as observaes de campo so igualmente importantes na deteco dos efeitos reais ou potenciais dos poluentes (Levin S.A et al. 1989). A Ecotoxicologia serve-se de mtodos capazes de prever os efeitos nos organismos, populaes e ecossistemas, e tambm de mtodos capazes de monitorizar os efeitos. Na categoria dos mtodos de previso esto os ensaios escala laboratorial e de campo que incluem testes agudos e crnicos em organismos terrestres, aquticos, ensaios de fitotoxicidade, ensaios de microcosmo, mesocosmo, QSAR e SAR. Os ensaios realizados em laboratrio que incluem os testes crnicos e agudos. Estes testes podem utilizar apenas uma espcie ou podem ser constitudos por uma bateria de testes com vrias espcies de nveis trficos diferentes (algas, invertebrados, peixes). O processo normalmente seguido por alguns protocolos utiliza as baterias de testes com vrias espcies. A avaliao de fitotoxicidade de uma substncia qumica essencial numa avaliao de risco, pois os produtores primrios constituem o nvel trfico essencial de um ecossistema (Hoffman et al., 2003). Por outro lado, como a maioria das substncias qumicas lanadas no meio ambiente atingem os ecossistemas aquticos, as avaliaes de toxicidade em algas e plantas aquticas so muito importantes (Hoffman et al., 2003). Actualmente os estudos aquticos so utilizados para auxiliar pesquisas ou avaliaes de risco ambiental. Os custos e a durao necessrios para realizar estes testes levaram os cientistas a pesquisar espcies de teste e tambm fases do ciclo de vida de maior sensibilidade (Hoffman et al., 2003). Por exemplo, a avaliao da toxicidade de um efluente necessita de vrios testes de toxicidade que levam dias sucessivos. A utilizao de ensaios (ex. Microtox) pode acelerar a mesma avaliao (Hoffman et al., 2003). A modelao de ecossistemas aquticos, conhecida por microcosmos e mesocosmos, permite simular ecossistemas ou partes deles de forma a poder estudar e avaliar o percurso seguido e os efeitos dos contaminantes. Os microcosmos so definidos por Giesy e Odum (Giesy, et al., 1990) como subconjuntos de ecossistemas naturais ligados artificialmente, que podem ser replicveis e conter vrios nveis trficos. Os mesocosmos so definidos como pores de ecossistemas naturais maiores, fisicamente fechadas, como lagoas e canais (Giesy, et al., 1990). Estes sistemas so auto-sustentveis por longos perodos de tempo. O sucesso da utilizao destes sistemas depende das escalas de amostragem temporais e espaciais que so estabelecidas (hoffman,

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2003). importante medir a exposio em funo do histrico usando parmetros como o tamanho, tempo entre geraes, habitat e necessidades alimentares (Hoffman et al., 2003). Para compreender as consequncias da entrada de um ou vrios poluentes nos ecossistemas aquticos devem-se usar experincias de laboratrio e campo adequadas e uma boa monitorizao de dados (Hoffman et al., 2003). As relaes estrutura actividade (SARs) so comparaes ou relaes entre uma estrutura qumica, sub-estrutura qumica ou alguma propriedade fsica ou qumica associada a uma dada estrutura e uma actividade biolgica (ex. toxicidade aguda) ou qumica (ex. hidrlise) (Hoffman et al., 2003). Quando o resultado descrito quantitativamente, diz-se uma relao de estrutura actividade quantitativa (QSAR) (Hoffman et al., 2003). A maior parte dos SAR foram desenvolvidos para prever efeitos ecolgicos de substncias qumicas orgnicas, enquanto os QSAR foram desenvolvidos para prever efeitos de substncias qumicas em organismos aquticos de gua doce (Hoffmanet al., 2003). Na categoria dos mtodos de monitorizao esto os programas de biomonitorizao, a utilizao de biomarcadores na monitorizao aqutica e terrestre, a utilizao de bioindicadores. Os dados de biomonitorizao de longa durao constituem a ligao entre os cientistas de campo e os legisladores (Hoffman et al., 2003). Os dados dos programas de biomonitorizao tm sido muito teis na identificao de problemas ecotoxicolgicos ao nvel local, regional e nacional para alm de terem um papel importante no desenho e avaliao de estudos ecotoxicolgicos (Hoffman et al., 2003). Os avanos tecnolgicos tm permitido recolher, analisar e avaliar cada vez mais dados (Hoffman et al., 2003). Estes dados esto disponveis escala local, regional e nacional, e os dados de uma escala podem ser usados para auxiliar estudos de outras escalas (Hoffman et al., 2003). Exemplo, um cientista interessado no estudo do impacto do mercrio num local especfico pode usar dados de um programa de biomonitorizao regional para identificar indicadores ecolgicos importantes a monitorizar (ex. peixes, plantas aquticas) (Hoffman et al., 2003). A avaliao do percurso percorrido pela gua e pelo ar, em larga escala, pode fornecer informaes importantes sobre a distncia das fontes e como estas podem afectar a rea de estudo (Hoffman et al., 2003). A pesquisa escala local tambm pode ajudar a interpretar os resultados de um programa de monitorizao de larga escala (Hoffman et al., 2003). Os estudos escala dos ecossistemas podem ajudar a avaliar questes ligadas ao desenho de amostragem, interaco entre e dentro dos ecossistemas (ex. ciclos biogeoqumicos, produtividade e dinmica de populaes), e a distribuio das substncias qumicas no ecossistema (Hoffman et al., 2003). A informao recolhida nos programas de biomonitorizao pode ser usada para melhorar a gesto dos recursos naturais a longo prazo (Hoffman et al., 2003). A utilizao cada vez maior de biomarcadores em ambientes naturais, onde os organismos esto expostos a vrios txicos (naturais ou antropognicos) ao longo do tempo, permite uma indicao mais precoce dos efeitos potenciais ao nvel da populao (Hoffman et al., 2003). Os biomarcadores so outra forma de monitorizar o estado do ecossistema em relao biodisponibilidade dos

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contaminantes (Hoffman et al., 2003). Podem ser medidos nos bioindicadores e evitam o seu desaparecimento. Os biomarcadores so divididos em trs classes: de efeito, de exposio e de susceptibilidade. Os biomarcadores de exposio medem a concentrao de substncia txica no organismo, os de efeito medem as concentraes de substncias metabolizadas pelo organismo a partir da exposio a uma determinada substncia txica e os biomarcadores de susceptibilidade analisam algumas caractersticas genticas que aumentam a sensibilidade dos organismos a alguns compostos. Todos eles so medidos em parte ou no total dos organismos e do indicaes muito precoces em relao ao estado de contaminao do ecossistema. Os biomarcadores medem substncias ou os seus metabolitos em parte ou no total do organismo dando indicaes de alteraes ao nvel celular, molecular e fisiolgico, provocadas por algumas substncias presentes no ecossistema (Hoffman et al., 2003). So um meio rpido e barato de avaliar a toxicidade e podem servir de marcadores para classes de substncias qumicas especficas (Hoffman et al., 2003). Alguns exs. de biomarcadores usados so a inibio das acetilcolinesterases, induo/inibio de actividade enzimtica, aberraes de sntese de hemoglobina, entre outros (Hoffman et al., 2003). Os bioindicadores so utilizados para monitorizar a condio do ecossistema. So seres vivos que por serem mais sensveis que as restantes populaes de determinados ecossistemas, so utilizados para indicarem o estado de contaminao do ecossistema (Hoffman et al., 2003). A monitorizao da sua presena ou ausncia permite obter as indicaes da condio do ecossistema. Os bioindicadores so uma parte importante da biomonitorizao.

5. A importncia do ensino experimental das cincias Os trabalhos experimentais assumem, na educao em cincias, uma importncia fundamental como ferramentas que permitem ao aluno encontrar solues para os problemas. A importncia destes trabalhos no ensino das cincias justificada pelo facto de estes motivarem os alunos, permitirem a visualizao da relao entre as diversas variveis envolvidas na interpretao dos fenmenos em anlise e permitirem o desenvolvimento de aptides prprias do trabalho experimental (Caamao, 2003). A realizao de trabalhos experimentais permite o desenvolvimento de competncias nos domnios do conhecimento, raciocnio, comunicao e atitudes (Galvo et al., 2001a). No entanto, os trabalhos experimentais desenvolvidos pelos alunos devem ser devidamente organizados e acompanhados pelos professores para que surtam o seu impacto (Praia, 1999 in Martins, 2003). Normalmente atribui-se s disciplinas de cincias um carcter prtico e experimental. A expresso experimental, que aparece frequentemente mencionada quer nos manuais escolares quer nos programas de ensino do ministrio da educao, entendida como actividade de laboratrio e/ou de experincia. Alguns autores defendem que este termo inclui todas as actividades

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em que os alunos tm uma participao activa (Leite, 2001). Em Portugal, os trabalhos prticos desenvolvidos nas aulas de cincias esto associados ao trabalho de laboratrio, ou seja, como j foi referido acima, o trabalho prtico entendido como sinnimo de trabalho laboratorial (Leite, 2001). Nem sempre a realizao de experincias de laboratrio envolve a participao activa do aluno, pois, pelas mais diversas razes, mais fcil o professor executar e os alunos observarem. Alm disso, existem ainda os casos em que as experincias prticas se resumem a discutir e analisar os resultados das experincias que vem descritos nos manuais. Quando os trabalhos experimentais se resumem a um conjunto de instrues para os alunos seguirem e executarem, sem terem tempo de reflectir sobre os objectivos desses trabalhos, invariavelmente a eficcia, em termos de aprendizagem, baixa (Caamao, 2003). Desta forma, os trabalhos experimentais no devem ser uma simples receita que os alunos seguem para obter os resultados esperados. Os trabalhos experimentais devem permitir aprender cincias sendo essencial que permitam aos alunos o envolvimento desde o planeamento at discusso dos resultados (Roberts, 2004). No ensino secundrio, o trabalho experimental esteve integrado nas disciplinas de cincias at dcada de 70 e posteriormente, em disciplinas independentes de carcter opcional (Leite, 2001). A reforma educativa implementada em incios da dcada de 90 veio reforar a importncia da realizao do trabalho laboratorial com a criao das disciplinas de Tcnicas Laboratoriais de Fsica, Qumica, Biologia e Geologia e com a maior importncia atribuda a esta componente nos programas oficiais das disciplinas de cincias, quer no ensino bsico quer no ensino secundrio (Leite, 2001). Com a ltima reforma curricular que entrou em vigor em pleno, no ensino secundrio, no ano lectivo 2004/2005, a componente prtica voltou a estar integrada nas disciplinas de cincias. Actualmente, e no que se refere ao ensino bsico, a importncia da componente prtica explicitada nas orientaes curriculares com a sugesto de actividades como sadas de campo, recolha e organizao de material, classificando-o por categorias ou temas, planificao e desenvolvimento de pesquisas diversas com base na resoluo de problemas, realizao de actividades experimentais, entre outras. Apela-se ainda ao envolvimento do aluno em experincias educativas diferenciadas como forma de desenvolver competncias essenciais para a literacia cientfica em diferentes domnios (Galvo et al., 2001a). O termo trabalho experimental aplica-se s actividades prticas em que existe manipulao e controlo de variveis, medio de valores da varivel dependente e controlo dos valores das variveis independentes (Leite, 2001; Martins, 2003). O trabalho experimental pode ser laboratorial, de campo ou outro tipo de actividades prticas. As actividades de laboratrio distinguem-se das de campo pelo local onde decorrem (Leite, 2001). A anlise dos manuais escolares e das prticas dos professores, quer do ensino bsico quer do ensino secundrio, mostram que os poucos trabalhos experimentais se limitam a ser meras prticas de verificao, ilustrao ou desenvolvimento de tcnicas de laboratrio, onde o aluno tem apenas que seguir o protocolo (Fernandes e Silva, 2004).

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Estas prticas parecem contribuir para o conhecimento de um nmero reduzido de procedimentos (Leite, 2001) e no permitem explorar toda a riqueza educativa do trabalho experimental (Cachapuz, 1995). Cachapuz et al., (2000a), refere que devem ser implementadas vrias metodologias diferentes, que incluem situaes experimentais com vrios graus de abertura e com integrao de percursos de pesquisa, a realizao de um relatrio descritivo do trabalho experimental para consolidar e reflectir sobre o trabalho realizado, a utilizao do grupo como forma de explorar a aprendizagem cooperativa e a comunicao e o recurso a mtodos interrogativos para fomentar o uso das ideias prprias dos alunos na realizao do trabalho experimental. De acordo com Canavarro (1999), existem vrios tipos de ensino, entre os quais o ensino por transmisso (EPT), o ensino por descoberta (EPD), ensino por mudana conceptual (EMC) e ensino por pesquisa (EPP). No ensino por transmisso o aluno limita-se a acumular os conhecimentos transmitidos pelo professor atravs de exposies orais. Os objectivos deste tipo de ensino so a instruo do aluno e a aquisio de conhecimentos (Canavarro, 1999). No ensino por descoberta, que surgiu por volta dos anos 70, o aluno aprende os contedos cientficos, por si prprio, atravs da observao (Canavarro, 1999). No ensino por mudana conceptual a tnica colocada na actividade cognitiva do sujeito. O aluno visto como construtor da sua prpria aprendizagem conceptual e, portanto, um sujeito activo no processo. O aluno fornece as alternativas e o professor organiza as estratgias que provocam o conflito cognitivo e com elas processa-se a aprendizagem. O erro permite o progresso do conhecimento cientfico, que incerto, dinmico, dialctico e pouco estruturado. As suas grandes finalidades so a mudana de conceitos e a instruo do aluno (Canavarro, 1999). O ensino por pesquisa engloba uma nova perspectiva sobre o ensino das cincias e tem como principais objectivos a construo de conceitos, competncias, atitudes e valores que contribuem para a educao pessoal e social do aluno. Perde-se nfase na instruo e acentua-se na educao. O aluno o sujeito activo do processo de ensino aprendizagem assumindo o papel de pesquisador e reflectindo criticamente sobre as suas maneiras de pensar, de agir e de sentir (Canavarro, 1999). Actualmente, a educao em cincias integrada com os aspectos pessoais, sociais e tecnolgicos porque o aluno visto como o elemento interventivo e dinamizador da sociedade e responsvel pela criao da tecnologia (Gil e Vilches, 2001,2004). De acordo com Gil e Vilches, (2001,2004), os alunos de hoje tero de tomar conscincia das complexas relaes entre cincia, tecnologia e sociedade. A abordagem do ensino das cincias do ponto de vista da integrao dos conceitos de cincia, tecnologia e sociedade permite aos cidados enfrentarem os desafios das questes sociais e tecnolgicas das suas vidas (Canavarro, 1999). O ensino das cincias orientado no sentido da compreenso da cincia, da tecnologia e do ambiente bem como das suas implicaes na sociedade e como so repercutidos nos objectos de estudo da cincia e da tecnologia (Cachapuz et al., 2002).

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 no contexto da abordagem integrada dos conceitos de cincia, tecnologia e sociedade que o ensino experimental tem a sua maior importncia, pois permite o desenvolvimento de competncias de anlise, sntese e aplicao para dar respostas aos problemas propostos pelos prprios alunos em que o professor apenas facilita e orienta o processo de resoluo. Esta estratgia de ensino encoraja os alunos a levantar questes, a discuti-las e resolv-las de uma forma dinmica. A grande finalidade desta forma de ensino garantir que as aprendizagens assim adquiridas sero teis no dia-a-dia (Cachapuz et al., 2000a, 2000b, 2002). Precisamos de uma populao mais responsvel, interventiva e dinmica nas atitudes de proteco e conservao dos recursos naturais e para isso, o ensino experimental das cincias tem um contributo inestimvel. A aprendizagem adquirida a partir do saber fazer muito mais eficaz do que aquela obtida apenas do saber saber. Talvez os agentes transmissores do conhecimento de hoje ainda estejam muito focados para o ensino dos conceitos e processos e portanto pouco preparados para uma abordagem prtica integrada da cincia, tecnologia e sociedade (Cachapuz et al., 2000a). Os conceitos so apenas o resultado do processo de aprendizagem obtidos das experincias prticas que lhe permitem adquirir e desenvolver capacidades, competncias, atitudes e valores que esto muito para alm da mera aprendizagem dos conceitos (Cachapuz et al., 2000a). Os problemas reais que se pretendem solucionar no podem ter uma abordagem estritamente disciplinar j que englobam diversas dimenses necessitando da interveno de domnios variados e complementares (Cachapuz et al., 2002).

PARTE PRTICA

6. Contedos prticos abordados no programa Conforme j foi referido no captulo da anlise dos contedos programticos, as directrizes do programa sugerem que a aquisio de conhecimento de procedimentos seja feita atravs da concepo e execuo de trabalhos experimentais sobre contaminao de recursos naturais, (ME, 2009). tambm sugerido que os alunos desenvolvam atitudes de reflexo e pensamento crtico sobre problemas ambientais causados pela actividade humana. Sugere-se ainda, como actividades prticas, a realizao de visitas de estudo em articulao com actividades laboratoriais e de pesquisa. Algumas das metodologias propostas pelo Ministrio da Educao para implementar os contedos so a interpretao de quadros, grficos e/ou tabelas sobre os contaminantes; o estudo de casos, as suas causas, as suas dimenses espaciais e temporais, as consequncias ambientais, humanas e as respectivas solues adoptadas; a problematizao de situaes de contaminao de recursos conhecidas da regio em que se inserem; e a concepo e realizao de trabalhos experimentais para simular a contaminao de aquferos e a avaliao da qualidade biolgica da gua.

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A componente de experincias prticas no muito abundante nos manuais escolares, embora seja bastante referida nos contedos programticos do ensino. As experincias prticas existentes nos manuais incluem trabalhos sobre a influncia da temperatura e luminosidade na germinao de sementes, a simulao do efeito das chuvas cidas sobre as plantas, realizao de uma compostagem, teste de efeito do dixido de enxofre nas plantas e nos materiais com metabissulfito de sdio (Amparo, D.S. et al., 1989), a existncia de partculas slidas na atmosfera (Amparo, D.S. et al., 1989) e simulao da eroso do solo. Alm de no serem muito abundantes, os trabalhos prticos existentes nos manuais, so muito incompletos no fornecimento de elementos chave para a sua realizao. No demonstram os resultados possveis, no indicam onde se podem encontrar os meios materiais necessrios, no do alternativas possveis utilizao dos materiais descritos, entre outros aspectos. Por outro lado, existem vrias limitaes na implementao de trabalhos prticos nas escolas, nomeadamente a falta de meios laboratoriais e a necessidade de um planeamento muito rigoroso que envolve bastante esforo dos docentes dentro e fora das aulas. A dimenso das turmas normalmente elevada para um s docente dinamizar uma actividade experimental ao mximo. O planeamento de actividades laboratoriais requer alguns cuidados muito criteriosos sobre vrios aspectos, entre os quais se destacam os meios materiais necessrios, os reagentes a utilizar, a obteno dos organismos necessrios, a durao da actividade experimental, o tipo de questes e conceitos que necessrio abordar para desencadear a participao activa dos alunos, etc. Ao nvel de trabalhos de campo, tambm possvel encontrar alguns manuais com pequenos trabalhos, mas s so possveis quando economicamente vivel a deslocao dos alunos para locais adequados realizao dos mesmos. Para alm disso, o trabalho de campo exige um complemento com trabalho laboratorial. Deste modo, justifica-se o esforo no sentido de criar vrias experincias de ecotoxicologia prticas de laboratrio a incluir no ensino bsico e secundrio no mbito dos programas de ensino das cincias.

7. Trabalhos prticos propostos O conjunto dos trabalhos prticos aqui apresentado foi desenvolvido a partir da anlise dos contedos programticos do ensino das cincias do ministrio. A conjugao desses contedos com a pesquisa de experincias j existentes nos manuais escolares, com alguns dos protocolos experimentais de ecotoxicologia existentes, com trabalhos laboratoriais desenvolvidos em laboratrios universitrios, e atendendo s condies existentes na realidade das escolas do concelho de Aveiro, produziram-se os trabalhos prticos a seguir apresentados. As adaptaes feitas aos protocolos so bastante profundas pois necessrio atender a uma srie de constrangimentos existentes na realidade das escolas. Os temas mais abrangidos pelas experincias propostas nos manuais escolares so a contaminao com materiais txicos, a anlise da importncia

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dos decompositores na reciclagem de materiais e a gua como um recurso vital (Leal, J. I, et al., 1998), (Motta, L., et al., 2007), (Silva, A. D., et al., 2007), (Gomes, J. C., 2002), (Roque, M. et al., 1988), (Silva, A. D., 1989). De uma forma geral, as experincias seleccionadas e adaptadas abarcam trs compartimentos do meio ambiente (ar, gua e solo), permitindo aos alunos terem uma boa percepo do impacto dos poluentes no meio ambiente. Existem vrias instituies que desenvolvem protocolos de metodologias experimentais prticas na rea da Ecotoxicologia. Entre elas podemos enumerar a OCDE (Organizao para o Comrcio e Desenvolvimento econmico), a EPA (Environment Protection Agency), o ECVAM (European Centre for Validation of Alternative Methods), a ASTM (American Standard Methods) e a ISO (International Standard Organization). Para realizar este trabalho, foram analisados os protocolos da OCDE, da ISO e da EPA, de onde se escolheram os que esto relaccionados com os contedos programticos do ensino bsico e secundrio nacional no mbito da Ecotoxicologia. Os protocolos que se encontravam no mbito do programa do ensino foram adaptados de forma a possibilitar a sua realizao com o menor nmero de meios possvel. Muitos dos protocolos da OCDE, EPA e ISO, que se enquadram no mbito do programa no puderam ser adaptados dado o seu elevado grau de complexidade.

7.1 Trabalho nmero 1 Designao: Efeitos sobre a germinao e crescimento de sementes expostas a solos contaminados. Objectivo: Este trabalho pretende avaliar efeitos crnicos em sementes expostas a contaminantes no solo. Observam-se os efeitos adversos na parte superior das plantas germinadas a partir de sementes expostas ao solo contaminado e medese o crescimento dessas plantas, avaliando os efeitos do contaminante no crescimento. A Ecotoxicologia recorre a testes de toxicidade em plantas terrestres para avaliar o efeito dos poluentes no solo resultantes das actividades da sociedade humana. Temas explorados Com este trabalho podem-se formular questes sobre os principais contaminantes libertados para o solo, quais as actividades humanas produtoras desses contaminantes, quais os efeitos provocados nos ecossistemas e qual a importncia do compartimento solo. O professor pode apresentar os conceitos de toxicidade, de poluio, de contaminao e de efeito crnico. O conceito de toxicidade de acordo com (Paracelsus, 1493-1541): todas as coisas so venenos apenas a dose determina que algo no um veneno pode ser abordado no

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mbito da medio dos efeitos no crescimento das plantas em comparao com o controlo. Os contaminantes utilizados produzem efeitos negativos no crescimento porque so txicos, da o conceito de toxicidade. A poluio est associada a vrias substncias que ocorrem no ambiente, pelo menos em parte como resultado da actividade humana, e que tm efeito nefasto nos organismos vivos(Moriarty, 1983). Neste trabalho associam-se as vrias substncias de teste utilizadas a diversas actividades humanas, abordando assim o conceito de poluio. ...Os efeitos crnicos so quantificados atravs da medio de alteraes no crescimento, desenvolvimento, reproduo, respostas patolgicas, bioqumicas, fisiolgicas e comportamentais (Calow, P., 1993). Estes efeitos so expressos por critrios quantificveis como o nmero de organismos mortos, a percentagem de ovos viveis, alteraes no comprimento e peso, percentagem de inibio enzimtica, incidncia de tumores, entre outros, (Calow, P., 1993). Neste trabalho medem-se as alteraes no crescimento das plantas expostas em comparao com os controlos, quantificando-se assim o efeito de cada concentrao de contaminante utilizado. O professor pode tambm utilizar este trabalho prtico para sensibilizar a comunidade local sobre os efeitos da contaminao do solo e qual a importncia da tecnologia usada no tratamento dos resduos e efluentes. Ainda ao nvel da sensibilizao, o professor pode reforar o facto do recurso solo no ser renovvel a um ritmo to acelerado quanto aquele com que degradado pelos poluentes e a sua importncia vital na manuteno da sustentabilidade. Este trabalho permite ainda a elaborao e interpretao de grficos ou tabelas sobre os contaminantes utilizados. Permite confrontar os resultados obtidos com notcias existentes na comunicao social, fazendo a ligao com a realidade. Descrio Este trabalho foi adaptado do Protocolo da OCDE 208 Terrestrial Plant Test: Seeding Emergence and Growth test (OCDE, 2003). De acordo com o estabelecido no protocolo, as sementes so expostas ao solo contaminado com a substncia de teste em vrias concentraes diferentes. Os efeitos so avaliados durante 14 a 21 dias (aps a germinao de 50% das sementes do controlo) (OCDE, 2003). O protocolo recomenda a avaliao visual dos efeitos (clorose, mortalidade, pragas, anomalias no desenvolvimento) e a germinao das sementes (OCDE, 2003). Alm disso est previsto no protocolo a avaliao da biomassa (comprimento e/ou massa). Este teste toxicolgico preconiza que a substncia de teste possa ser aplicada superfcie do solo ou incorporada nele, dependendo da via de exposio do solo ao contaminante (OCDE, 2003). Neste trabalho optou-se pela incorporao do contaminante no solo por ser uma das vias de exposio mais frequentes e porque envolve menos meios materiais. De acordo com (OCDE, 2003) o teste pode ser feito com uma nica concentrao ou pode ser feito com vrias concentraes, representando um teste dose-resposta (OCDE, 2003). As principais alteraes feitas ao protocolo foram a diminuio do nmero de sementes usadas, a diminuio do nmero de rplicas por controlo e por concentrao; As condies ambientais do teste (temperatura, humidade, fotoperodo) tambm no seguiram as condies padro; no foram utilizadas

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sementes padro e o tipo de solo utilizado tambm no obedeceu s condies recomendadas no protocolo. Todas estas alteraes tiveram como objectivo minimizar os meios a utilizar para a realizao do trabalho prtico em contexto escolar. Neste trabalho mediu-se apenas o comprimento da parte superior das plantas e observaram-se os efeitos nas folhas. O trabalho proposto utiliza vrias concentraes (doses), tendo-se observado para cada uma a respectiva resposta. Utilizaram-se sementes da espcie Triticum aestivum (trigo), por ser uma das espcies recomendadas pelo protocolo (Anexo II, OCDE, 2003) e por ser de mais fcil aquisio. Os materiais utilizados nesta experincia foram: Sementes de Triticum aestivum (trigo) ou outras ver em dicas. Recipientes plsticos (30) (podem-se utilizar recipientes como fundos de garrafas de plstico ou outros recipientes que possam ser adaptados experincia); Contaminantes (sugestes: lixvia, vinagre, detergente) Rgua e conta-gotas. A experincia decorreu com a seguinte ordem: Colocou-se uma poro de solo suficiente para preencher cada um dos 30 recipientes necessrios para a realizao da experincia; importante que essa poro seja aproximadamente igual em todos os recipientes. Semearam-se 2 sementes de Triticum aestivum (Trigo) em cada recipiente e regou-se cada recipiente com 50ml de gua canalizada para consumo humano. Separam-se 3 recipientes para servirem de controlo. Nestes no foram adicionados contaminantes. Destinaram-se apenas a testar se as sementes estavam em bom estado de conservao, a verificar qual o crescimento e germinao sem efeito dos contaminantes. Foram adicionados 3 contaminantes (lixvia, vinagre e detergente) ao solo com um conta-gotas logo aps o cultivo das sementes nos restantes recipientes. Para cada contaminante foram testadas 3 concentraes com 3 rplicas cada uma, conforme desenho experimental da tabela 1. Na tabela 1, cada crculo corresponde a um vaso. O nmero inscrito em cada crculo refere o nmero de sementes de trigo semeadas. A aplicao do contaminante foi feita apenas uma vez no incio da experincia. Colocaram-se os recipientes prximo de uma janela onde todos tivessem expostos mesma quantidade de luz natural. S se regou quando o solo ficou seco superfcie. Aps a segunda semana observou-se a emergncia das sementes nos controlos e nos tratamentos. Mediu-se o crescimento das plantas com uma rgua na terceira semana. A medio foi feita com as plantas na terra conforme figura 1.

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Tabela 1: Desenho experimental do trabalho prtico nmero 1

Dicas Esta experincia foi testada com lixvia clorada pura, vinagre de vinho branco puro e com detergente de lavagem de roupa mquina na concentrao de uma colher de ch para 150ml de gua. Utilizou-se solo constitudo por turfa e estrume de cavalo. Pode-se utilizar um solo normal para cultivo de plantas que se encontra venda em qualquer estabelecimento comercial. O nmero de sementes por recipiente depende da espcie de planta utilizada. No caso de aveia, trigo ou outras sementes pequenas podem-se colocar 5 a 10 sementes por cada recipiente com 15cm de dimetro (OCDE, 208, pg.5/19). Para sementes maiores devem-se colocar apenas 1 ou 2 por cada recipiente de 15cm (OCDE, 208, pg.5/19). Se os recipientes forem maiores ou menores podem-se alterar as quantidades por recipiente. O tempo de germinao das diversas sementes varivel. Podem ser utilizadas outras sementes tais como: Lactuca sativa (alface), Cucumis sativa (pepino), Pisum sativum (ervilha), Lycopersicon esculentum (tomate), Avena sativa (aveia) e Zea mays (milho) (OCDE, 208, pg.6/19). Resultados obtidos No final da segunda semana, observou-se a emergncia das sementes (tabela 2) e verificou-se que, em relao ao controlo, todos os tratamentos inibiram a germinao das sementes (grfico 1). Por outro lado, observou-se que a inibio da germinao aumentou com o aumento da concentrao para os trs contaminantes testados (grfico 1). A medio do crescimento realizou-se na terceira semana, quando j todas as plantas possuam 1 folha verdadeira (tabela 3). O crescimento na terceira semana permitiu observar que as plantas dos controlos atingiram o maior comprimento mdio (8,42cm) (grfico 2). Os comprimentos mdios observados nas plantas dos tratamentos com lixvia foram todos inferiores ao controlo e diminuram com o aumento da concentrao de lixvia (grfico 2). Nos tratamentos com vinagre, os comprimentos das plantas foram todos inferiores aos medidos no controlo e diminuiram com o aumento da concentrao do contaminante (grfico 2). Nos tratamentos com detergente, os comprimentos foram todos inferiores ao controlo e aumentaram com o aumento

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da concentrao (grfico 2). As observaes desta experincia permitiram concluir que os poluentes afectaram a germinao e o crescimento das plantas. No foram observadas pragas, no entanto as plantas tratadas com lixvia apresentaram no final da experincia alguma clorose (amarelecimento das folhas).

120 100 80 60 40 20 0

100 67 50 50

100 67 67 67

100 83 67 50

Ctrl

Lx1

Lx2

Lx3

Ct rl

Vn1

Vn2

Vn3

Ct rl

Det1

Det 2

Det 3

Grfico 1 - Percentagem de germinao por tratamento em relao ao controlo

Tabela 3: Medies dos comprimentos das plantas na terceira semana

Controlo 8,5--8,5 8--8,5 8,5--8,5 N Gotas Lixvia 4 gotas 8 gotas 16 gotas 7,5 7 6 Lixvia 7--7 6,5 6 Lixvia 7,5 6,5 6 Vinagre 8--7,5 7,5 7 Vinagre 8 8 7,5--7 Vinagre 8 7--8 7 Deterg. 7,5--7,5 7,5 8 Deterg. 7--7,5 8 8 Deterg. 7,5 8--7,5 8,5

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Controlo 10 8 6 4 2 0

Lixvia

Vinag

Deterg

1 2 3 Grfico 2 - Com prim ento m dio dos vrios tratam entos em relao ao controlo

Fig. 2 Aspecto da experincia 1 Fig. 1Medio das plantas com rgua no trabalho 1

Orientaes para o professor: Para explorar melhor os temas que se podero abranger neste trabalho laboratorial, conveniente durante uma pequena parte da aula (cerca de 30 minutos) antes da aula prtica, levantar questes sobre os principais contaminantes libertados para o solo, sobre quais as actividades humanas produtoras desses contaminantes, quais os efeitos crnicos provocados nos ecossistemas e qual a importncia do solo nos ecossistemas, para que os alunos formulem vrias hipteses em grupo. Isto permite que os grupos formados, que depois iro desenvolver o trabalho prtico, discutam os temas propostos pelo professor. Alm disso, esta interaco entre o grupo tambm permite uma melhor

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articulao entre os elementos durante o trabalho prtico.sendo tambm um elemento motivador para o tema. conveniente que todos os alunos estejam devidamente equipados para o trabalho prtico com bata ou avental, luvas e culos de proteco para a aplicao dos contaminantes no solo. A preparao da experincia dever demorar cerca de 40 minutos, mas depende da dimenso da turma e da forma como os grupos so orientados. Na segunda semana aps a sementeira, os alunos podem observar a emergncia das plantas e devem anotar quantas emergiram e calcular as percentagens que essa emergncia representa (grfico1). importante referir aos alunos a importncia dos controlos como pontos de referncia a adoptar na observao dos efeitos. possvel aproveitar esta aula para comear a estruturar o relatrio final da experincia. Na terceira semana j possvel medir os diversos comprimentos das plantas com uma rgua (figura 1). No necessrio retirar a planta da terra, basta colocar a rgua na vertical com a planta, encostada ao solo, conforme se observa na figura 1, tendo o cuidado de retirar meio cm ao comprimento lido. Comparamse os comprimentos das plantas medidos nos vrios tratamentos com os comprimentos medidos nas plantas dos controlos. Caso os valores das medies ainda no permitam fazer distines do crescimento nessa semana, podem-se fazer medies na semana seguinte. A comparao dos comprimentos dos controlos com os dos tratamentos permitir aos alunos observar que os contaminantes produzem efeito negativo sobre o crescimento das plantas. Se for possvel, os alunos podero introduzir estes dados num programa de excell, produzindo grficos sobre os efeitos dos contaminantes utilizados. Estes grficos, permitiro uma visualizao mais clara dos efeitos dos contaminantes. Pode-se tambm utilizar este trabalho prtico para sensibilizar a comunidade local sobre a contaminao do solo e sobre a atitude correcta a tomar com a gesto dos resduos e efluentes. Nesta fase prepara-se o relatrio final. Este trabalho dever ser concludo com uma abordagem sobre o facto do recurso solo no ser renovvel a um ritmo to acelerado quanto aquele com que degradado pelos poluentes e a sua importncia vital na manuteno da sustentabilidade da sociedade. Sugere-se a utilizao de alguns textos existentes no manual de apoio Um olhar sobre a poluio e degradao dos recursos. tambm possvel confrontar os resultados obtidos com notcias existentes na comunicao social, fazendo a ligao com a realidade. 7.2 Trabalho nmero 2 Designao: Avaliao dos efeitos potenciais nas plantas provocados pela deposio de contaminantes nas folhas. Objectivo: Este trabalho pretende avaliar os efeitos dos contaminantes nas plantas, medindo o seu crescimento e avaliando outros efeitos adversos observveis na parte area das plantas. A aplicao do contaminante na parte area das plantas

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simula a deposio dos poluentes gasosos libertados no decorrer de algumas actividades Humanas industriais. Temas explorados Atravs deste trabalho prtico o professor pode introduzir os conceitos de Poluio atmosfrica e efeito crnico. Quando for possvel utilizar um contaminante de forma a provocar efeitos agudos (mortalidade das plantas) podese tambm abordar o conceito de efeito agudo. Neste trabalho proposto no foi possvel observar o efeito de mortalidade, mas pode ser conseguido se aumentarmos a dose de contaminante ou alterarmos o tipo de contaminante. O efeito crnico poder ser avaliado nas observaes realizadas sobre a parte area das plantas sujeitas aos contaminates em comparao com os seus controlos. O conceito de poluio atmosfrica pode ser introduzido antes de abordar a valorizao dos avanos cientficos e tecnolgicos na preservao da atmosfera, pois ao levantar questes sobre quais as solues a adoptar para controlar as emisses para a atmosfera, os alunos podem argumentar e discutir no seio do grupo que tecnologias existem para evitar a contaminao atmosfrica. Tal como os restantes trabalhos prticos, este tambm permite dinamizar aces de sensibilizao junto da comunidade local, desencadeadas pelos alunos durante a realizao do trabalho prtico. possvel aproveitar os resultados deste trabalho para explorar questes sobre a identificao das actividades humanas que contribuem para a contaminao da atmosfera juntamente com notcias existentes nos meios de comunicao social. Se houver oportunidade, pode-se aplicar os conhecimentos adquiridos ao estudo de casos reais existentes a nvel local ou nacional. Pode ser possvel articular este trabalho com visitas de estudo. Descrio Este trabalho foi adaptado do protocolo da OCDE nmero 227 Terrestrial plant test: vegetative vigour test (OCDE, 2006). As principais alteraes feitas ao protocolo foram a diminuio do nmero de sementes usadas, do nmero de rplicas por controlo e por concentrao; alterou-se da forma de aplicao do poluente (usou-se um pincel e no um pulverizador), as condies ambientais do teste (temperatura, humidade, fotoperodo); no foram utilizadas sementes padro e o tipo de solo utilizado no obedeceu s condies padro recomendadas no protocolo. O protocolo prev uma aplicao nica de contaminante em concentraes limite, o que no foi tido em conta neste trabalho, pois o contaminante foi aplicado uma vez por dia durante dois dias seguidos. Apenas se mediram os efeitos nefastos visveis na parte superior das plantas, enquanto no protocolo so referidas as medies dos pesos das razes e a avaliao dos efeitos adversos em diversas partes das plantas (OCDE, 227, 2006). De acordo com o estabelecido no protocolo 227 da OCDE, o teste decorre com uma aplicao nica de contaminante e os efeitos so observados durante 21 a 28 dias. Est tambm previsto no protocolo conduzir este teste para vrias

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concentraes de poluente e assim determinar uma curva dose-resposta, no entanto, este mtodo no foi adoptado para facilitar a experincia. Os materiais utilizados nesta experincia foram: Sementes de Triticum aestivum (trigo) ou outras ver em dicas do trabalho nmero 1. Recipientes plsticos (6) (podem-se utilizar recipientes como fundos de garrafas de plstico ou outros recipientes que possam ser adaptados experincia) Contaminante (lixvia) A experincia decorreu com a seguinte ordem: Colocou-se uma poro de solo suficiente para preencher cada um dos 6 recipientes necessrios para a realizao da experincia; Semearam-se 2 sementes de Triticum aestivum (Trigo) em cada recipiente e regou-se cada recipiente com 50ml de gua canalizada para consumo humano. Aps a emergncia das sementes, que ocorreu na segunda semana, aplicou-se o contaminante (lixvia pura) com um pincel nas folhas das plantas durante 2 dias seguidos. Utilizou-se uma s concentrao de teste nas trs rplicas. Separam-se 3 recipientes para servirem de controlo. Nestes no foram adicionados contaminantes. Destinaram-se apenas a testar se as sementes estavam em bom estado de conservao e para servir de comparao com as plantas que foram submetidas a tratamentos. S foi possvel observar os efeitos produzidos na parte superior das plantas na terceira semana. Resultados obtidos Na terceira semana observou-se um ligeiro amarelecimento nas folhas das plantas do tratamento com lixvia. Nas plantas dos controlos no se verificaram anomalias nem amarelecimento. No foram observadas deformaes nas folhas ou a existncia de pragas. Os efeitos observados demonstram que a lixvia provoca efeitos crnicos nas plantas. Neste trabalho no podemos observar efeitos agudos pois no ocorreu a morte das plantas. No entanto, se aplicarmos o contaminante durante mais tempo (7 dias seguidos), ou se aplicarmos um contaminante que produza efeitos mais rpidos, podemos observar um efeito agudo (morte da planta). No se aplicou o contaminante durante mais tempo porque isso levaria a que a durao da experincia no fosse compatvel com o nmero de horas de cada ano lectivo reservadas para estas aulas.

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Fig. 4 Aplicao do contaminante com pincel Fig. 3 Aspecto da experincia 2

Orientaes para o professor: Antes de iniciar o trabalho laboratorial conveniente abordar quais as fontes e actividades humanas responsveis pela poluio atmosfrica e os seus impactos na sade humana e no meio ambiente. Todos os alunos devem estar devidamente equipados para o trabalho prtico com bata ou avental, luvas e culos de proteco durante a aplicao dos contaminantes nas plantas. Posteriormente realizao do trabalho laboratorial proposto, deve-se promover a discusso entre os alunos sobre a valorizao dos avanos cientficos e tecnolgicos na preservao da atmosfera, quais as solues a adoptar para controlar as emisses. possvel conjugar os resultados observados com notcias encontradas na comunicao social sobre o tema poluio atmosfrica. No manual de apoio existem alguns textos que permitem ajudar a abordar este tema da poluio atmosfrica. possvel articular este trabalho com visitas de estudo. A observao de efeitos crnicos e agudos depende da escolha do poluente, da concentrao utilizada e do tempo de exposio. De acordo com o protocolo da OCDE 227, pode-se comear com um teste de filtragem de concentraes para determinar a gama de concentraes a testar. Esta tcnica pode-se tambm utilizar para escolher o contaminante que provoca efeitos mais visveis. Alm disso, existem determinados tipos de poluentes que pelas suas propriedades fsico-qumicas no penetram com facilidade nas folhas das plantas e no provocam nenhum efeito observvel. Quando se pretende usar um poluente com propriedades hidrfobas pode-se usar um solvente capaz de se misturar com o poluente e de servir de veculo de aplicao e transporte nas folhas das plantas em estudo. No entanto, esta alterao de procedimento envolve a realizao de um ensaio de exposio das plantas ao solvente utilizado (controlo com solvente).

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Assim, despista-se a possibilidade de existir efeitos provocados pelo solvente e no pelo contaminante em si (OCDE, 2006). 7.3 Trabalho nmero 3 Designao: Efeitos no comportamento de organismos terrestres expostos a contaminantes Objectivo: Pretende-se testar o efeito de um contaminante no comportamento dos organismos expostos. O comportamento de evitamento testado em organimos invertebrados terrestres (Eisenia andrei) quando expostos a contaminantes incorporados no solo. Temas explorados A contaminao um dos conceitos abrangidos neste teste. A contaminao pode ser entendida como a presena de uma substncia estranha ao ecossitema em estudo que provoca algumas perturbaes no mesmo (Hoffman, 2003). Os efeitos das substncias testadas neste trabalho induzem um comportamento de evitamento. O comportamento de evitamento, no seio de um ecossistema contaminado, pode provocar alteraes nesse ecossistema. Isto pode acontecer porque mesmo no eliminando os organismos ou provocando danos fisiolgicos, a presena do contaminante altera o seu comportamento normal e isso afecta as relaes com outros organismos. O conceito de toxicidade relaciona um determinado efeito com uma determinada concentrao de contaminante. Neste trabalho no foram testadas concentraes diferentes, apenas poluentes diferentes, mas pode ser adaptado quando se pretender abordar o conceito de toxicidade. A adaptao consiste em aplicar concentraes diferentes do mesmo poluente e observar o comportamento de evitamento. Desta forma seria possvel relacionar o comportamento com a concentrao de contaminante em estudo. No entanto, o teste tal como est permite seleccionar os poluentes que eventualmente provocariam outros tipos de efeitos (crnicos ou agudos). Este trabalho pode ser articulado com uma visita de estudo a um aterro sanitrio a fim de criar nos alunos uma noo prtica da importncia do confinamento adequado destas infra-estruturas utilizadas no tratamento de resduos. As visitas de estudo so importantes, no entanto, se no forem apoiadas com trabalhos laboratoriais correm o risco de no se explorar todo o seu potencial educativo. As visitas de estudo apenas permitem aos alunos observar e formular questes, mas quando so complementadas com um trabalho de laboratrio, consegue-se que os alunos tenham outra percepo da problemtica observada e levantada durante a visita. Durante a discusso do trabalho prtico o professor dever conseguir explorar a ligao da cincia Ecotoxicologia que

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permite estudar efeito dos contaminantes nos organismos terrestres, com a tecnologia associada ao tratamento de resduos com as atitudes que a sociedade deve tomar para gerir o recurso natural solo. Tal como os restantes trabalhos pode ser utilizado para produzir material de sensibilizao da comunidade local para o problema da poluio dos ecossistemas terrestres. Ao nvel de conceitos tericos podem-se abordar os conceitos de aterro sanitrio e de compostagem. Alm disso pode-se conjugar este trabalho de laboratrio com a realizao de uma compostagem, utilizando o composto formado para testar a sua biodegradabilidade atravs da no observao do comportamento de evitamento dos organismos de teste. Descrio Este trabalho foi adaptado do protocolo da OCDE nmero 207 Eisenia fetida teste de contacto de 1994, (OCDE, 1994). Existem vrios mtodos de teste da toxicidade dos contaminantes nos organismos terrestres, incluindo aplicao tpica, alimentao contaminada e testes de imerso (OCDE, 1994). Neste protocolo so definidos dois tipos de teste: o teste de toxicidade por contacto com papel de filtro e o teste de contacto com o solo contaminado. O teste com solo d resultados de toxicidade mais representativos da exposio natural dos organismos terrestres aos contaminantes (OCDE, 1994). A durao do teste, segundo o protocolo, de 7 a 14 dias, sendo avaliada mortalidade ao stimo e ao dcimoquarto dia. O teste decorre a uma temperatura entre 20 e 22C na presena de luz em contnuo (OCDE, 1994). Os organismos de teste usados foram Eisenia andrei adultos, conforme o protocolo original. No trabalho proposto, avalia-se o comportamento de evitamento dos organismos quando expostos a vrios contaminantes. Escolheu-se o comportamento de evitamento, para medir a resposta de exposio aos contaminantes, por ser mais visvel para os alunos e talvez mais interessante do que o efeito mortalidade. Por outro lado no foram testadas vrias concentraes dos contaminantes porque o objectivo identificar vrios contaminantes produzidos pelas actividades humanas que so responsveis pela degradao dos recursos naturais. Utilizaram-se organismos da espcie Eisenia andrei porque no existiam outros disponveis na altura do teste. Os materiais a utilizar nesta experincia so: Invertebrados terrestres como Eisenia andrei ou Eisenia fetida. Recipientes plsticos (3) (podem-se reutilizar recipientes plsticos de comida) Contaminantes sugesto: (vinagre, lixvia, detergente roupa) Solo natural

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A experincia decorreu com a seguinte ordem: Prepararam-se as solues dos poluentes a testar, neste caso utilizaramse lixvia pura, vinagre de vinho branco puro e uma soluo de detergente de mquina para a roupa na proporo de uma colher de ch para 150ml de gua. Mediu-se a quantidade de solo suficiente para encher os trs recipientes de teste; Homogeneizou-se bem o solo e adicionou-se gua para que ele ficasse hmido o suficiente para permitir a deslocao fcil dos organismos de teste; No deve ficar demasiado ensopado (fig. 6); Dividiu-se o solo em seis pores iguais. Trs dessas pores serviram de controlos e nas trs pores restantes adicionou-se 25ml de cada um dos contaminantes (lixvia, vinagre e soluo de detergente) (fig.7); Nas trs pores destinadas aos controlos, adicionou-se um volume de gua da torneira equivalente ao volume dos contaminantes adicionados a cada poro de solo (25 ml); Em cada recipiente colocou-se uma parte com solo contaminado com um dos contaminantes e outra parte com solo sem contaminante, deixando um espao ao centro (fig. 9); Transferiram-se os organismos para os recipientes de teste, colocando 10 minhocas Eisenia andrei no centro de cada recipiente e deixaram-se migrar para o solo. Colocaram-se os recipientes a uma temperatura de cerca de 20C durante 48h e com um perodo de escuro durante a noite. Aps as 48h observou-se o comportamento dos organismos.

Dicas Alguns organismos de teste como a Eisenia fetida podem ser facilmente criados em vrios extractos animais. O meio de cultivo mais usado constitudo por uma mistura 50:50 de estrume de cavalo/vaca e turfa (OCDE, 1994). O pH deve estar prximo de 7.0 e a temperatura cerca de 20C (OCDE, 1994). importante que o meio no contenha excesso de urina ou amnia (OCDE, 1994). Os recipientes de cultivo podem ser de plstico ou madeira com dimenses 50x50x15cm e com tampas justas (OCDE, 1994). Os meios de cultura suportam 1 kg de organismos por cada 20 kg de meio (OCDE, 1994). Cada organismo pesa em mdia 1g. A cultura pode-se iniciar com cocos que levam 3 a 4 semanas a eclodir e 7 a 8 semanas para se tornarem adultos (OCDE, 1994). As solues dos poluentes devem ser bastante diludas de forma a evitar a morte dos organismos.

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Resultados obtidos A contagem dos organimos faz-se retirando cuidadosamente a poro de solo de controlo (no contaminado) para um tabuleiro ou outro recipiente (de preferncia branco), abrir o solo com as mos e escolher os organismos, contando-os ( conveniente usar luvas durante todo o processo). Depois procedese da mesma forma para a parte contaminada do teste. Deve-se fazer a comparao entre o nmero de organismos que evitaram e o seu controlo respectivo. Ao fim de 48 horas observou-se que todos os organismos evitaram os poluentes lixvia e vinagre e que 50% deles evitaram o detergente. O efeito de evitamento foi mais acentuado para o vinagre e para a lixvia. Podemos inferir que os organismos evitaram os contaminantes aos quais seriam mais sensveis. Com este resultado poderemos mostrar aos alunos que o efeito dos contaminantes nos organismos varia e que diferente derramar um contaminante com cloro ou outro mais cido ou at um simples detergente.

Fig. 5 Solo no contaminado

Fig. 6 Preparao do solo

Fig. 7 Aplicao do contaminante

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Fig. 9 Aspecto final

Fig. 8 Experincia antes de introduo dos organismos

Orientaes para o professor: Ao nvel de conceitos tericos podem-se abordar os conceitos de aterro sanitrio e de compostagem. Se a utilizao destas tecnologias de tratamento de resduos no for adequada poderemos provocar comportamentos de evitamento nos organismos e assim alterar os ecossistemas com todos os problemas que isso possa implicar na sustentabilidade dos recursos. Este trabalho pode ser articulado com uma visita de estudo a aterro sanitrio a fim de criar nos alunos uma noo prtica da importncia do confinamento adequado destas infra-estruturas utilizadas no tratamento de resduos. Durante a discusso do trabalho prtico o professor dever conseguir explorar a ligao da cincia ecotoxicologia que permite estudar efeito dos contaminantes nos vermes, com a tecnologia associada ao tratamento de resduos com as atitudes que a sociedade deve tomar para gerir o recurso natural solo. Tal como os restantes trabalhos pode ser utilizado para produzir material de sensibilizao da comunidade local para o problema da poluio dos ecossistemas terrestres. 7.4 Trabalho nmero 4 Designao: Observao dos efeitos dos poluentes na gua atravs do estudo dos ndices biticos de macroinvertebrados Objectivo: Ao medir os efeitos da poluio nas populaes de macroinvertebrados de um curso de gua podem-se avaliar os efeitos potenciais dos contaminantes. Para tal, utilizam-se os ndices biticos, os quais so frequentemente usados na monitorizao biolgica da qualidade da gua. Este trabalho demonstra a aplicao de estudos de biomonitorizao utilizados em Ecotoxicologia.

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Temas explorados Permite abordar os conceitos de contaminante , de ETAR (estao de tratamento de guas residuais), de carncia bioqumica de oxignio (CBO). Este trabalho pode ser usado como complemento de visita de estudo a uma ETAR, na medida em que se os efluentes forem tratados no vo afectar os indicadores biolgicos. Paralelamente pode-se fazer a medio de CBO (carncia bioqumica de oxignio) com sensores, o que permite aos alunos entender que as informaes obtidas pela utilizao dos medidores de oxignio podem ser complementadas e confirmadas pela utilizao de indicadores biolgicos. O professor pode ainda apresentar o conceito de biomonitorizao. possvel fazer vrias amostragens de macroinvertebrados ao longo do ano e em vrios pontos ao longo de um ou vrios cursos de gua, gerando conjuntos de dados que sero interessantes para avaliar a evoluo e os percursos de alguns contaminantes nos ecossitemas. Pode-se explorar tambm o conceito de efeito crnico. possvel avaliar efeitos crnicos da exposio dos organismos aos contaminantes durante vrios anos e verificar como evoluem as populaes em relao s concentraes de contaminantes num determinado curso de gua. Descrio Este trabalho foi adaptado de aulas prticas realizadas no mbito da disciplina de biodiversidade e conservao do departamento de Biologia da Universidade de Aveiro e do trabalho de (Perry, J. B., 2005). Os materiais a utilizar nesta experincia so: Rede de mo com malha fina. Sacos plsticos Pinas Tabuleiros brancos Lupa Chaves de identificao de invertebrados (McCafferty,W. P.,1998),(Pennak,R. W., 2001),( Voshell, J. R., Jr., 2002) A experincia decorreu com a seguinte ordem: Recolheram-se amostras de macroinvertebrados em dois pontos de um curso de gua situado na serra da Lous. O primeiro ponto situava-se num local livre de focos de poluio. O segundo ponto encontrava-se numa zona com elevada actividade agrcola. A recolha foi feita com redes finas de mo de modo a recolher o maior nmero de espcies possvel. A tcnica usada consistiu em colocar a rede junto ao fundo do curso de gua de modo a recolher os organismos que iam sendo levantados pela agitao do fundo com os ps. A

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recolha deve ser feita em cursos de gua no muito profundos (30 a 50 cm) e com pouca corrente. Os contedos recolhidos foram colocados em sacos plsticos transparentes e devidamente etiquetados com a indicao dos locais. Nesta fase podem-se tambm recolher outros elementos relativos vegetao existente, aos focos de poluio, s actividades exercidas no local ou na proximidade, entre outros que ajudem a interpretar os resultados. No laboratrio, colocaram-se as amostras recolhidas em tabuleiros plsticos brancos para ser mais fcil a separao e identificao dos macroinvertebrados capturados. Classificaram-se e contaram-se todos os organismos encontrados com o auxlio de chaves para identificao de macroinvertebrados e de uma lupa quando necessrio. Construiu-se uma tabela para cada local com os seguintes campos: ordem, famlia e nmero de organismos encontrados. Para o local no poludo construiuse a tabela 4. Para o local poludo construiu-se a tabela 4a. Dicas Para avaliar melhor se existe poluio no curso de gua devem-se fazer pelo menos duas recolhas de macroinvertebrados ao longo desse curso de gua. Uma recolha prxima da nascente onde no se suspeite da existncia de poluio e outra num ponto mais a jusante (idealmente junto foz). A amostra recolhida junto nascente utilizada como controlo e serve para identificar os efeitos provocados pela contaminao do curso de gua. Resultados obtidos A partir dos organismos recolhidos, calculou-se o ndice de riqueza EPT (tabela 4). Este ndice consiste no nmero total de espcies da ordem dos Ephemeroptera, dos Plecoptera e dos Tricoptera (EPT) encontrados numa amostra total de 100 organismos. Os organismos destas ordens so considerados muito sensveis poluio e portanto so indicadores de boa qualidade ecolgica da gua. Portanto, quanto maior o nmero, melhor a qualidade da gua. O valor mximo de 39 famlias das 3 ordens. Na experincia realizada encontraram-se 12 famlias das ordens (EPT) numa amostra de 190 organismos, portanto numa amostra de 100 organismos encontramos 7, 06 famlias. Se observarmos a Figura 26 o podemos determinar que a qualidade da gua melhor do que no ponto seguinte. Segundo a figura 26, a contaminao causou apenas um ligeiro impacto na qualidade da gua. No entanto, este ndice susceptvel variao sazonal da reproduo dos organismos envolvidos. Assim, a poca do ano e a regio onde se insere o curso de gua podem introduzir variaes neste ndice. Para consolidar melhor o resultado da qualidade ecolgica da gua, calculou-se o ndice bitico de Hilsenhoff. Em 1988, Hilsenhoff determinou valores de tolerncia da poluio de algumas famlias de macroinvertebrados (Tabela 8 em anexo) que serviriam como indicadores da qualidade ecolgica da gua. Para determinar o ndice bitico de Hilsenhoff, multiplicou-se o valor de tolerncia de Hilsenhoff pelo

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nmero de organismos de cada famlia das ordens EPT. Depois, dividiu-se o somatrio desse produto pelo somatrio do nmero de organismos das famlias EPT. O valor obtido para este ndice (3,48) mostra que a qualidade ecolgica da gua excelente, no possuindo indcios da presena de contaminao orgnica, de acordo com a Tabela 9 em anexo. Para as amostras recolhidas no ponto mais poludo do curso de gua, calculou-se um EPT de 5,23, o que denuncia uma pior qualidade da gua. De acordo com a escala de avaliao apresentada na Figura 13a, considera-se que a poluio causou um impacto moderado na qualidade da gua. Determinou-se tambm um ndice de Hilsenhoff de 4,80, que indica uma qualidade inferior com possibilidade da existncia de alguma poluio orgncia (tabela 9).

Tabela 4 : Organismos recolhidos num curso de gua na Serra da Lous, 2007

Ordem Famlia N de organismos recolhidos
69 25 14 49 3 1 1 2 1 1 1 3 Total

Valor de Produto das tolerncia de colunas Hilsenhoff anteriores

4 4 7 2 0 2 0 0 1 2 1 4 276 100 98 98 0 2 0 0 1 2 1 12

Heptageniidae Ephemeroptera Baetidae Siphlonuridae Leptophlebiidae Pteronarcyidae Nemouridae Plecoptera Leuctridae Chloroperlidae Perlidae Perlodidae Capniidae Trichoptera Hydopsychidae

170

590

ndice Bitico de Hilsenhoff = 590 / 170 = 3,47 ndice de riqueza EPT = (Soma do n de famlias das ordens (Ephemeroptera, Plecoptera e Trichoptera) x 100) / n total de organismos recolhidos destas famlias. = 12 x 100 / 170 = 7,06

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Tabela 4a : Organismos recolhidos num curso de gua na Serra da Lous, 2007

Ordem Famlia

N de organismos recolhidos
54 25 30 49 8 5 3 9 5 3 Total

Valor de Produto das tolerncia de colunas Hilsenhoff anteriores

4 4 7 7 0 2 1 2 1 4 216 100 210 343 0 10 3 18 5 12

Heptageniidae Ephemeroptera Baetidae Siphlonuridae Caenidae Pteronarcyidae Plecoptera Nemouridae Perlidae Perlodidae Capniidae Trichoptera Hydopsychidae

191

917

ndice Bitico de Hilsenhoff = 917 / 191 = 4,80 ndice de riqueza EPT = (Soma do n de famlias das ordens (Ephemeroptera, Plecoptera e Trichoptera) x 100) / n total de organismos recolhidos destas famlias. = 10 x 100 / 191 = 5,23

Fig. 10 Captura de macroinvertebrados num curso de gua

Fig.11 Embalamento e transporte dos macroinvertebrados para o laboratrio

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Fig. 12 Separao dos macroinvertebrados em laboratrio

Fig. 13 Identificao dos macroinvertebrados

Orientaes para o professor: Os rios, sem dvida, contam histrias, especialmente sobre as actividades humanas que decorrem ao longo do seu curso, (Perry, J.B., 2005). Existem vrios ensaios para determinar a qualidade da gua. No entanto, a anlise atravs da utilizao das comunidades de macroinvertebrados bnticos d-nos uma indicao das condies da qualidade da gua no passado e no presente, o que no possvel com a monitorizao fsica e qumica (Perry, J.B., 2005). Os macroinvertebrados bnticos tendem a ser relativamente sedentrios e tm tempos de vida na fase larvar relativamente longos (Perry, J.B., 2005). Alm disso, esto continuamente expostos s condies de um determinado curso de gua. Assim, foi determinada por Hilsenhoff, a tolerncia poluio de algumas famlias destes organismos, fazendo com que sejam indicadores ideais da qualidade da gua. Em geral, a existncia de uma grande proporo de famlias intolerantes poluio indicam uma boa qualidade da gua (Perry, J.B., 2005).

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Este trabalho tem duas componentes, uma de campo e outra de laboratrio. A preparao deste trabalho requer algum tempo, no entanto, o resultado em termos de aprendizagem muito rico. importante disponibilizar chaves para identificao dos macroinvertebrados ver referncias no ponto materiais a usar nesta experincia). Antes de realizar o trabalho de identificao, deve-se ensinar aos alunos como ler as respectivas chaves.

7.5 Trabalho nmero 5 Designao: Teste agudo de imobilizao com organismos aquticos expostos a trs contaminantes diferentes. Objectivo: Testar o efeito agudo de imobilidade em Daphnia magna para quatro contaminantes diferentes. Este teste uma das ferramentas da Ecotoxicologia para avaliar efeitos agudos dos poluentes em organismos aquticos. Temas explorados A dfnia um organismo aqutico muito utilizado em testes de toxicidade. A maioria dos protocolos europeus e internacionais utilizam este organismo. Trata-se de um organismo sensvel maioria dos contaminantes, tem um modo de reproduo assexual por partenognese, fcil de cultivar em laboratrio, tem dimenses reduzidas, tem um ciclo de vida curto, reproduz-se em quantidades elevadas e pertence a um grupo ecolgico representativo (herbvoro, filtrador passivo) (Koivisto, S., 1995); Concretamente, a espcie Daphnia magna uma espcie de zooplncton que habita lagos de guas calmas em vrias regies do planeta (Koivisto, S., 1995). A sua posio na cadeia alimentar muito til do ponto de vista da Ecotoxicologia, pois faz a ligao entre os produtores aquticos e os consumidores primrios, i.e., alimenta-se de algas que crescem em ecossistemas aquticos e serve de alimento a peixes que habitam esses ecossistemas (Koivisto, S., 1995). Os conceitos associados a este trabalho prtico so dose-letal e efeitos agudos. O efeito agudo medido neste trabalho a imobilidade que representa a morte dos organismos expostos. A dose que provoca o efeito mortalidade designa-se dose letal ou concentrao letal. A dose letal/concentrao letal pode ser determinada para uma certa percentagem (x) da populao de teste e representa-se por Dx/CLx. A DLx/CLx representa a dose/concentrao que provoca a morte de x% da populao do teste.

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Descrio Este trabalho foi adaptado do protocolo da OCDE nmero 202 Teste agudo de Imobilizao de 2004. O protocolo original utiliza dfnias juvenis da espcies (Daphnia magna) com menos de 24h para testar efeitos agudos (imobilidade) provocados por contaminantes durante 48h; A imobilizao registada ao fim de 24h e ao fim de 48h de exposio e comparada com os controlos (OCDE, 2004). As adaptaes realizadas a este protocolo para produzir esta proposta de trabalho consistiram na alterao do meio de teste, na alterao do nmero de organismos utilizado por rplica, no nmero de controlos utilizados e usaram-se menos concentraes de teste do que o recomendado no protocolo. Utilizou-se gua mineral engarrafada com pH = 7,14 em vez de um meio preparado de acordo com o procedimento padro. O nmero de organismos utilizado por rplica foi menor (3 organismos) do que o estabelecido no protocolo (5 organismos). Foram utilizados organismos de teste (Daphnia magna) com menos de 24h de vida. Testaram-se quatro contaminantes com quatro concentraes cada um e trs rplicas por concentrao. Devido falta de organismos de teste, utilizou-se apenas um controlo com quatro rplicas (tabela 5). Para que a experincia fosse mais simples de realizar em contexto escolar, utilizaram-se menos organismos e menos concentraes do que o estabelecido no protocolo OCDE 202. Os organismos no foram alimentados durante o teste, conforme protocolo. Os materiais a utilizar nesta experincia so: Recipientes transparentes (36 recipientes) (Podem-se utilizar pequenos boies de vidro, copos de plstico pequenos (ex. para caf) ou outros recipientes que sirvam para o efeito) Dfnias juvenis com menos de 24h (Daphnia magna ou D. longispina) (108 organismos) Os contaminantes sugeridos so Lixvia clorada, vinagre, vinagre de vinho branco gua mineral engarrafada com pH prximo de 7,13. A experincia decorreu com a seguinte ordem: Recolheram-se dfnias (Daphnia magna) de um laboratrio de ensaios ecotoxicolgicos (U.A., 2009) num total de 108 organismos; So necessrias trs dfnias por recipiente; Mediram-se 50ml de gua para cada recipiente, no total 36 recipientes; Rotularam-se os recipientes para os poluentes lixvia, vinagre, detergente, e para o controlo. Testaram-se quatro concentraes para cada contaminante e para cada concentrao utilizaram-se trs rplicas (Tabela 5). Utilizou-se apenas um controlo com quatro rplicas. Adicionaram-se as diversas concentraes dos poluentes aos recipientes.

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Colocaram-se trs dfnias em cada recipiente e deixaram-se durante 48h sem alimento (Fig. 14). Observou-se a imobilidade dos organismos nos recipientes aps 48h de exposio, anotando quantos se moveram e quantos estavam imveis em cada recipiente. Compararam-se os resultados com o controlo. Dicas Os organismos devem ser recolhidos no dia em que se iniciam os testes (OCDE, 2004). Deve-se ter cuidado na manipulao destes organismos pois so muito sensveis. Devem-se manipular com a ajuda de uma pipeta de pasteur de plstico ou ento com um contagotas tendo o cuidado de verificar se a ponta tem dimetro suficiente para aspirar as dfnias sem as ferir. O pH da gua utilizada foi 7,13, devendo sempre ser usada gua com um pH idntico para que os organismos no morram. Um outro contaminante com efeitos semelhantes lixvia o perxido de hidrognio (gua oxigenada a 10 vol).

Fig. 14 - Aspecto geral do trabalho prtico nmero 5

Tabela 5 : Desenho do trabalho nmero 5 Rplicas Lx1 Lx2 Lx3 Vn1 Vn2 []

Vn3

Det1

Det2

Det3

[]1 []2 []3 []4

3 dfn. 3 dfn. 3 dfn. 3 dfn.

3 dfn. 3 dfn. 3 dfn. 3 dfn.

3 dfn. 3 dfn. 3 dfn. 3 dfn.

3 dfn. 3 dfn. 3 dfn. 3 dfn.

3 dfn. 3 dfn. 3 dfn. 3 dfn.

3 dfn. 3 dfn. 3 dfn. 3 dfn.

3 dfn. 3 dfn. 3 dfn. 3 dfn.

3 dfn. 3 dfn. 3 dfn. 3 dfn.

3 dfn. 3 dfn. 3 dfn. 3 dfn.

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Resultados obtidos Registou-se imobilidade em 100% das dfnias expostas a todas as concentraes do poluente lixvia relativamente ao controlo (grfico 3). O vinagre provocou imobilidade em 50% das dfnias para as concentraes 3 e 4 e no provocou imobilidade nas dfnias para as concentraes 1 e 2 (grfico 4). O detergente no provocou qualquer imobilidade para as 4 concentraes testadas (grfico 5). Podemos concluir que alguns poluentes afectam os organismos mesmo em concentraes muito baixas, como o caso da lixvia.

Grfico 3 - % imobilidade Ctrl/Lixvia

150 100 50 0 Ctrl Lx1 Lx2 Ctrl Lx3 Lx4 0 100 100 100 100

Grfico 4 - % imobilidade Ctrl/Vin

60 40 20 0 Ctrl Vn1 Vn2 Ctrl Vn3 Vn4 0 0 0 50 50

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Grfico 5 - % imobilidade Ctrl/Det

1 0,8 0,6 0,4 0,2 0

0 Ctrl

0 Det1

0 Det2 Ctrl

0 Det3

0 Det4

Orientaes para o professor:

Este trabalho envolve bastante esforo na sua preparao. necessrio escolher bem os txicos que se vo utilizar e relacion-los com os poluentes mais vulgarmente libertados no meio ambiente. Por exemplo, o vinagre pode ser relacionado com as chuvas cidas ou efluentes cidos de alguns tipos de fbricas. Os detergentes podem estar ligados aos efluentes que contm fosfatos e outros contaminantes que promovem o processo de eutrofizao. Tambm a lixvia pode ser relacionada com as descargas de efluentes alcalinos.

7.6 Trabalho nmero 6 Designao: Bioacumulao de poluentes em organismos aquticos Objectivo:

Pretende-se demonstrar o efeito de bioacumulao dos poluentes lipossolveis nos organismos aquticos.

Temas explorados
Com este trabalho prtico pode-se demonstrar os conceitos de bioampliao, bioacumulao e bioconcentrao. Bioacumulao e bioconcentrao so termos que descrevem a transferncia dos contaminantes do ambiente externo para dentro do organismo (Hoffman, 2003). Nos organismos aquticos, a bioacumulao pode ocorrer pela exposio aos sedimentos contaminados ou pela cadeia alimentar (processo designado por transferncia trfica) (Hoffman, 2003). A bioamplificao define-se como sendo o aumento da concentrao dos contaminantes no organismo para

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alm da bioconcentrao (Hoffman, 2003). A bioamplificao mais significativa nas cadeias alimentares bnticas e para contaminantes muito hidrofbicos resistentes biotransformao e biodegradao (Hoffman, 2003). A bioconcentrao a acumulao dos contaminantes nos organismos pelas vias de exposio no alimentar (Hoffman, 2003). Uma substncia qumica pode existir em concentraes muito baixas para causar efeitos adversos nos organismos, no entanto se ela for bioacumulvel, e os organismos no a conseguem excretar, ento pode representar um risco mais elevado no ambiente (Clement et al, 1997). Quando estes organismos so ingeridos por outros em nveis trficos mais elevados o contaminante transferido para os nveis mais elevados em doses mais elevadas (Clement et al, 1997). Uma substncia qumica tem maior probabilidade de se bioacumular quanto menos hidrossolvel for (Clement et al, 1997). Se no solvel em gua, provavelmente solvel em gordura, logo pode-se acumular nos tecidos dos organismos e bioconcentrar-se (Clement et al, 1997). Casos de contaminao de toda a cadeia alimentar, como os de Minamata e outros, podero ser associados com este trabalho prtico. A leitura e discusso dos relatos da comunicao social ou outros artigos cientficos servem de base para o despertar de questes que podero ser aplicadas durante a realizao do trabalho prtico. Tambm possvel utilizar este trabalho para a promoo de actividades junto das comunidades locais.

Descrio
Este trabalho foi adaptado de uma publicao da US EPA que refere um conjunto de trabalhos didticos sobre biologia (Clement, J. et al., 1997). Foram feitas algumas pequenas alteraes ao documento original que incluiram a constituio dos qumicos a utilizar. O trabalho consiste em demonstrar a bioconcentrao de poluentes lipossolveis em Daphnia magna. So preparados dois qumicos, um lipossolvel e outro hidrossolvel. Depois so preparados dois copos constitudos por igual quantidade de gua e de leo. Estes copos simulam a constituio dos corpos das dfnias que vivem no meio aqutico. Aplica-se num copo o contaminante hidrossolvel e no outro o contaminante lipossolvel. O resultado desta etapa da experincia pretende demonstrar as propriedades de cada um dos contaminantes, o lipossolvel vai-se dissolver na fase oleosa e o hidrossolvel dissolve-se na fase aquosa. Depois retira-se de cada um dos copos a fase aquosa, o que pretende demonstrar que os contaminantes hidrossolveis so mais facilmente excretveis pelo organismo. No final desta fase, os alunos podem observar a fase oleosa colorida pelo contaminante lipossolvel o que denota acumulao de contaminante no organismo. Por outro lado o copo onde colocaram o contaminante hidrossolvel no paresenta qualquer colorido o que significa que o contaminante foi eliminado. Assim os alunos colam uma dfnia no copo em que existe contaminante indicando que o contaminante se encontra dentro do organismo.

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Material necessrio:
Copos transparentes ou outros recipientes reciclveis; Folha A4 com dfnias impressas ou j recortadas; Fita-cola; leo vegetal alimentar; Tinta base leo vermelha ou outra cor; Corante natural ou guache (cor azul ou outra); Conta-gotas ou pipetas de Pasteur; gua da torneira;

A experincia decorreu com a seguinte ordem:

Preparao prvia pelo professor: Prepararam-se previamente os qumicos A e B da seguinte forma: 10 ml de leo + tinta base leo gotas; Ver na fig.17. 10 ml de gua + tinta guache gotas; Ver na fig. 17. Qumico A mais perigoso mata com 3 Qumico B menos perigoso mata com 6

Fig. 17 Qumico B, esquerda, e Qumico A, direita

Na aula: 2 Distriburam-se 2 copos a cada grupo; um para o qumico A, outro para o B;

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Fig. 18 Adio de gua e leo a ambos os copos

3 Adicionou-se ao copo 1 e 2: 2cm de gua + 2cm de leo de acordo com a fig.18;

Fig. 19 Adio de qumico A ao copo 1 e de qumico B ao copo 2

4 Adicionou-se um pouco de A ao copo 1 e adicionar um pouco de B ao copo 2; Ver fig. 19.

Fig. 20 Aspecto dos copos depois da agitao dos qumicos

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5 Agitou-se ligeiramente at ficar com o aspecto da fig. 20; 6 Retirou-se a camada aquosa de cada copo, deixando a camada de leo; Ver fig. 21. 7 Colocou-se no copo que continha poluente uma dfnia; Ver fig, 22. 8 Adicionou-se 2 cm de gua a cada copo 1 e 2; Ver fig. 22. 9 Adicionou-se mais um pouco de A ao copo 1 e de B ao copo 2 e agitou-se ligeiramente; Ver fig. 23.

Fig. 21 Aspecto dos copos depois de se retirar a camada aquosa de cada copo;

Fig. 22 O copo 2 recebe uma dfnia porque est poludo; Ambos os copos recebem novamente 2cm de gua.

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Fig. 23 Copos depois de novamente agitados aps receberem mais uma poro de cada um dos qumicos A e B.

10 Retirou-se a camada aquosa de cada copo, deixando a camada de leo; Ver fig. 24.

Fig. 24 Segunda remoo da camada aquosa dos copos

11 Colocou-se mais uma dfnia no copo que contm poluente. Ver. fig. 25.

Fig. 25 O copo 2 recebeu outra dfnia porque contm poluente

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Resultados obtidos:
Verificou-se uma maior acumulao de poluente lipossolvel do que do poluente hidrossolvel, o que representado pela aplicao de 2 dfnias no copo 2. Ver Fig. 25.

Orientaes para o professor:

No incio da aula, os alunos so informados que o qumico A mais perigoso porque lipossolvel e so necessrias apenas 3 gotas para matar; o qumico B menos perigoso porque hidrossolvel e so necessrias 6 gotas para matar. Este trabalho exige uma boa preparao terica sobre as propriedades das substncias e a sua relao com o grau de toxicidade.

7.7. Onde procurar materiais para a realizao das experincias

Dado que os utilizadores destas experincias sero crianas menores, ainda que os professores as acompanhem sempre, os reagentes foram todos escolhidos de modo a comportarem o menor nvel de risco possvel. Alm disso, podem ser adquiridos em qualquer supermercado ou drogaria. Todos os organismos utilizados podem ser adquiridos em laboratrios de ecotoxicologia, nomeadamente em instituies como a Universidade de Aveiro/ laboratrio do CESAM, Universidade Nova de Lisboa, CIIMAR/Faculdade de Cincias da Universidade do Porto, Instituto de Cincias Biomdicas Abel Salazar (ICBAS). No necessrio cultivar os organismos se no existirem condies para tal porque bastante fcil obter os organismos para o momento da realizao dos trabalhos prticos. Existe um projecto promovido pelo CIIMAR/Faculdade de Cincias da Universidade do Porto que vende um kit de teste com dfnias e algumas substncias de teste (nomeadamente lcool, cafena e nicotina) que pode ser comprado por um preo razovel Projecto DAPHNIA.

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8.Concluses gerais
Da anlise s abordagens sobre ecotoxicologia existentes nos programas do ensino das cincias, e analisando a situao actual nas escolas, em termos de realizao de trabalhos prticos, conclui-se que possvel implementar maior componente prtica, apesar dos constrangimentos existentes em termos de meios materiais. Em termos de meios materiais a maioria das escolas possui entre outros meios (medidores de pH, estufa, microscpio, material de vidro graduado e bancadas de laboratrio). Contudo, necessrio criar materiais didcticos de apoio, pois estes so pouco abundantes nos manuais e a realizao de trabalhos prticos envolve um enorme esforo de preparao e organizao fora das aulas. Para alm disso, verifica-se que o ministrio da educao indica como literatura de referncia e apoio, obras e stios de internet internacionais, provavelmente devido sua escassez ao nvel nacional. O conjunto de trabalhos prticos aqui apresentado limitou-se a experincias laboratoriais, no entanto, possvel alargar o seu mbito a trabalhos de campo e outras actividades conducentes consciencializao da populao estudantil e da populao em geral sobre os principais contaminantes ambientais e os respectivos riscos para a sade humana e meio ambiente. O conjunto dos trabalhos prticos propostos permite abordar conceitos como contaminao, poluio, poluente, efeito crnico (trabalho 1), efeito agudo e crnico (trabalho 2), toxicidade (trabalho 3), biomonitorizao (trabalho 4), dose letal/concentrao letal (trabalho 5), bioacumulao, bioamplificao e bioconcentrao (trabalho 6). Todos estes conceitos fazem parte da cincia Ecotoxicologia e permitem lanar um olhar sobre a poluio e degradao dos recursos. Para alm de fazerem parte da cincia Ecotoxicologia so conceitos abordados nos programas do ensino das cincias. Desta forma possvel enfatizar a componente prtica no ensino experimental das cincias em articulao com a cincia Ecotoxicologia e tecnologia. De futuro, ser importante ampliar este conjunto de trabalhos prticos e realizar a sua implementao nas escolas.

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9. Referncias
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10. Anexos
Tabela 8: Descrio dos valores de tolerncia de Hilsenhoff (Resh et al., 1996)
Classe Plecoptera Capniidae Chloroperlidae Leuctridae Nemouridae Perlidae Perlodidae Pteronarcyidae Taeniopterygidae Ephemeroptera Baetidae Baetiscidae Caenidae Ephemerellidae Ephemeridae Heptageniidae Leptophlebiidae Metretopodiae Oligoneuridae Polymitarcyidae Potomanthidae Siphlonuridae Trichlorythidae Odonata Aeshnidae Calopterygidae Coenagrionidae Cordulegastridae Corduliidae Gomphidae Lestidae Libellulidae Macromiidae 3 5 9 3 5 1 9 9 3 Diptera Anthericidae Blepharoceridae Ceratopogonidae Chironomidae vermelho Chironomidae outro Dolochopodidae 2 0 6 8 6 4 Copleoptera Dryopidae Elmidae Psephenidae 5 4 4 Turbellaria Platyhelminthidae 4 Hirudinea Bdellidae 10 Oligochaeta 8 4 3 7 1 4 4 2 2 2 2 4 7 4 Liptidoptera Pyralidae 5 Megaloptera Corydalidae Sialidae 0 4 Mollusca Lymnaeidae Physidae Sphaeridae 6 8 8 1 1 0 2 1 2 0 2 Famlia Valor Tol. Classe Trichoptera Brachycentridae Calamoceratidae Glossosomatidae Helicopsychidae Hydropsychidae Hydroptilidae Lepidostomatidae Leptoceridae Limnephilidae Molannidae Odontoceridae Philpotamidae Phryganeidae Polycentropodiae Psychomydiiae Rhyacophilidae Sericostomatidae Uenoidae 1 3 0 3 4 4 1 4 4 6 0 3 4 6 2 0 3 3 Acariformes Decapoda 4 6 Isopoda Asellidae 8 Amphipoda Gammaridae Talitridae 4 8 Famlia Valor Tol. Classe Diptera Empidiae Ephydridae Psychodidae Simuliidae Muscidae Syrphidae Tabanidae Tipulidae 6 6 10 6 6 10 6 3 Famlia Valor Tol.

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Tabela 9: Valores de tolerncia de Hilsenhoff adaptado de (Resh et al., 1996) ndice Bitico 0 3,50 3,51 4,50 4,51 5,50 5,51 6,50 6,51 7,50 7,51 8,50 8,51 10,00 Qualidade da gua Excelente Muito Boa Boa Razovel Pouco Razovel Fraca Muito Fraca Grau de poluio orgnica Sem Poluio orgnica aparente Possibilidade de ligeira Poluio orgnica Alguma Poluio orgnica Poluio orgnica pouco significativa Poluio orgnica significativa Poluio orgnica muito significativa Poluio orgnica severa

Escolas do Concelho de Aveiro que receberam o Inqurito:

Centro Educativo Dr. Alberto Souto Colgio D. Jos I Colgio Portugus (Ensigest) empreendimentos educativos Escola Bsica dos 2 e 3 ciclos Castro Matoso Escola Bsica dos 2 e 3 ciclos Aires Barbosa Escola Bsica dos 2 e 3 ciclos Aradas Escola Bsica dos 2 e 3 ciclos Joo Afonso Escola Bsica dos 2 e 3 ciclos So Bernardo Escola Bsica integrada Eixo Estabelecimento de ensino de Santa Joana Escola Secundria com 3 Ciclo do ensino Bsico de Jos Estvo Escola Secundria com 3 Ciclo do ensino Bsico de Dr. Mrio Sacramento Escola Secundria Homem de Cristo

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Figura 26 - Escala de avaliao de valores de ndices biolgicos (SPP riqueza

especfica), (HBI ndice bitico de Hilsenhoff), (EPT Riqueza Ephemeroptera, Plechoptera e Trichoptera); Retirado de (Bode et al., 1996);

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