Espectrometra de masas (MS) Introduccin La espectrometra de masas es una tcnica instrumental universal y especifica, altamente sensible y que permite

la identificacin inequvoca de una sustancia. En la Espectrometra de masas la muestra es ionizada usando diversos procedimientos para ello. El ms usual es la tcnica denominada de Impacto Electrnico. Consistente en el bombardeo de la muestra (previamente vaporizada mediante el uso de alto vaco y una fuente de calor) con una corriente de electrones a alta velocidad. Mediante este proceso, la sustancia pierde algunos electrones y se fragmenta dando diferentes iones, radicales y molculas neutras. Los iones (molculas o fragmentos cargados) son entonces conducidos mediante un acelerador de iones a un tubo analizador curvado sobre el que existe un fuerte campo magntico y conducidos a un colector/analizador sobre el que se recogen los impactos de dichos iones en funcin de la relacin carga/masa de los mismos. Cuando a una molcula se le suministra una determinada energa, esta se descompone siguiendo un patrn concreto en el que se obtienen siempre los mismos fragmentos y en la misma relacin de intensidad. Este patrn concreto se representa grficamente en el espectro de masas, al que denomina por esta razn huella digital de la sustancia. De esta forma, el espectro de masas permite la identificacin inequvoca de las molculas. La espectrometra de masas se fundamenta en la separacin de partculas moleculares o atmicas por su diferente masa. El proceso de la espectrometra de masas comprende bsicamente cuatro etapas: Ionizacin de la muestra. Aceleracin de los iones por un campo elctrico. Dispersin de los iones segn su masa/carga. Deteccin de los iones y produccin de la correspondiente seal elctrica.

Espectro de masas Grfico que relaciona la intensidad relativa de los picos de masa del ion como funcin de la relacin masa/carga (m/z). Esta forma de registro de iones y sus intensidades sirven para establecer el peso molecular y estructura del compuesto a ser analizado. El ion molecular resulta de la ionizacin de la molcula a analizar. Este ion representa la molcula intacta y es el ltimo precursor de todos los iones fragmentados que componen el espectro de masas. El pico del ion molecular aparece a un valor m/z numricamente igual al peso molecular del compuesto.

Pico Base Es el pico ms alto de cada espectro. Se le asigna el valor 100 de forma arbitraria. Se considera la altura del resto de los picos como un porcentaje de la altura del pico base. Los equipos ms modernos estn programados para reconocer el pico base y ajustar el resto de los picos respecto a l. Ejemplo: ETILBENCENO Para obtener el espectro se bombardea vapor de etilbenceno con un haz de electrones que da lugar a la prdida de un electrn del analito y a la formacin de un ion molecular M+ como se muestra en la reaccin:

La especie cargada la molcula.

es el ion molecular, el ion molecular es un ion radial y tiene el mismo peso que

La colisin entre los electrones energticos y las molculas del analito, les proporcionan energa para dejarlas en estado excitado. Posteriormente se produce la relajacin mediante fragmentacin de los iones moleculares produciendo iones de masas ms bajas. El producto mayor es el , que surge de la prdida de un grupo CH3. Tambin se forman, en menor cantidad, otros ms pequeos cargados positivamente. Los iones producidos por impacto de electrones pasan a travs de la rendija del espectrmetro de masas, de donde salen de acuerdo con su relacin masa/carga originndose un espectro de masas.

Partes Fundamentales de un equipo MS Un espectrmetro de masas se compone de lo siguiente: Sistema de entrada Fuente de iones Analizador de masas Detector

Sistema de entrada Su objetivo es introducir una pequea cantidad de muestra en el espectrmetro de masas, donde sus componentes se convierten en iones gaseosos. Su finalidad es permitir la introduccin de una muestra representativa en la fuente de iones con la mnima perdida de vaco. Los E.M. ms modernos estn equipados con diversos tipos de entradas capaces de adaptarse a las distintas muestras: Sistemas indirectos de entrada Entradas por sonda directa Entradas cromatogrficas y de electroforesis capilar Sistemas indirectos de entrada: Es el sistema ms clsico y el ms simple, en el cual la muestra se volatiliza externamente y se introduce en la regin de ionizacin que esta a baja presin. El sistema de entrada es normalmente de vidrio para evitar posibles prdidas por adsorcin. Entrada por sonda indirecta: Los lquidos y los slidos no voltiles se pueden introducir en la regin de ionizacin mediante un soporte para muestra o sonda, el cual se inserta a travs de un cierre de vaco. El sistema de cierre se utiliza para controlar la cantidad de aire que entra despus de la insercin de la sonda en la regin de ionizacin. Las sondas tambin se usan cuando la cantidad de muestra es limitada ya que se pierde mucha menos cantidad. Entradas cromatogrficas y de electroforesis capilar: Es un tipo de sistema de entrada especial, est indicado su uso cuando al espectrmetro de masa va acoplado un sistema de cromatografa de gases o de lquidos de alta eficacia o a columnas de electroforesis capilar que permiten la separacin y determinacin de los componentes de mezclas complejas. Fuentes de Ionizacin Este transforma los componentes de una muestra en iones. En muchos casos el sistema de entrada y la fuente de iones estn combinados en un nico componente. En todos los casos, se obtiene un haz de iones positivos o negativos (normalmente positivos) que posteriormente se acelera hacia el interior del analizador de masas. La formacin de iones del analito es el punto de arranque de un anlisis por espectrometra de masas. El aspecto de los espectros de masas para distintas especies moleculares, depende en gran medida del mtodo utilizado para la formacin de los iones. Estos mtodos los podemos dividir en dos categoras: Fuentes de fase gaseosa. Fuentes duras. Las fuentes de iones se pueden clasificar tambin en fuentes duras y fuentes blandas. Fuentes duras. Su espectro da lugar a muchos picos y nos da informacin acerca de la naturaleza de los grupos funcionales e informacin estructural de los analitos. Fuentes blandas. Dan lugar a poca fragmentacin y el resultado es un espectro con muy pocos picos dndonos informacin til ya que nos permite la determinacin exacta del peso molecular de la molcula o molculas. Analizadores de masa La funcin del analizador de masas es anloga a la del sistema dispersante en un espectrmetro ptico. En el primero, sin embargo, la dispersin est basada en la relacin carga/masa de los iones del analito en vez de en la longitud de onda de los fotones. La capacidad de un EM de distinguir entre masas se expresa normalmente con el trmino de resolucin.

La resolucin se define como: Donde m es la masa nominal del primer pico y es la diferencia de masa entre dos picos adyacentes. La resolucin que se necesita en un EM depende en gran medida de su aplicacin. Analizadores de sector magntico: Los analizadores de sector magntico utilizan un imn permanente o un electroimn para hacer que el haz procedente de la fuente de iones se desplace con una trayectoria circular de 180, 90 o 60. Estos analizadores tambin son llamados de enfoque simple. Analizadores de masa de tiempo de vuelo (TOF): En estos aparatos se producen los iones positivos peridicamente por bombardeo de la muestra con impulsos de electrones, de iones secundarios o de fotones generados por lser. Los iones producidos de esta forma son acelerados en un tubo analizador libre de campo mediante un campo elctrico pulsante de 103 a 104 V. La separacin de los iones en funcin de la masa se produce durante su recorrido hacia el detector, situado al final del tubo. Analizadores de trampa de iones: Es un dispositivo en el que los cationes o aniones gaseosos pueden formarse y quedar confinados durante largos periodos de tiempo por la accin de campos elctricos y/o magnticos. Los espectrmetros de trampa de iones son ms robustos, compactos y ms econmicos que los anteriores. Espectrmetros de doble enfoque Este trmino se usa en los espectrmetros en los cuales las aberraciones direccionales y las aberraciones de energa de una poblacin de iones se minimizan simultneamente. El doble enfoque se consigue utilizando combinaciones de campos magnticos y electrostticos cuidadosamente seleccionados. Espectrmetro de masa cuadrupolar Son normalmente menos caros y ms robustos que los de sector magntico, adems tambin ofrecen la ventaja de emplear tiempos de barrido pequeos (<100ms), lo cual es particularmente til para realizar barridos de picos cromatrogrficos en tiempo real. Detector Los iones procedentes llegan al detector el cual generalmente est constituido por un ctodo emisor que al recibir el impacto producido por las partculas cargadas emite electrones. Estos electrones son acelerados hacia un d-nodo el cual emite varios electrones, esto se repite varias veces hasta obtenerse una cascada de electrones que llega al colector logrndose una corriente amplificada. La corriente obtenida puede amplificarse de nuevo por procedimientos electrnicos y se lleva a un sistema registrador. Aplicaciones El espectro de masas de un compuesto puro proporciona diversos tipos de datos que son tiles para su identificacin: PM Frmula molecular

Determinacin del peso molecular. Es independiente de la existencia de impurezas de menor peso molecular. Incluso si la impureza contiene mayor peso molecular y es posible reconocerla como tal impureza, la determinacin del PM no se ver afectada por ella. Los iones moleculares presentarn la misma masa que la molcula neutra, y se reflejar en el espectro como pico molecular M+; debido a la generacin de este ion molecular, la medida de masas moleculares mediante MS es la ms exacta que se conoce.

Su determinacin requiere de la identificacin del pico de ion molecular. El pico molecular suministra informacin acerca del PM de la sustancia problema, y adems sirve como punto de partida para la interpretacin del espectro de masas, y en consecuencia, debe tenerse siempre la mayor seguridad al identificar el pico molecular. La formacin del ion molecular, es con mucho el proceso primario de ms importancia. El pico molecular debe de cumplir con los siguientes requisitos: a) El ion molecular es el que presenta el potencial de aparicin ms bajo, es decir, el pico que aparece a una mnima energa de los electrones de bombardeo. b) El pico molecular presenta siempre masa par si la molcula no contiene nitrgeno, o si presenta un nmero par de tomos de nitrgeno; por el contrario, el pico molecular presentar masa impar si la molcula presenta un nmero impar de tomos de nitrgeno. c) El ion molecular debe contener todos los elementos que se puedan identificar en los fragmentos. d) La intensidad del pico molecular es proporcional a la cantidad de muestra introducida en la fuente de iones. e) Las diferencias de masa entre el pico molecular y las seales de picos correspondientes a iones fragmento debe ser qumicamente lgicas; esta regla se refiere a las seales que aparezcan relativamente prximas al pico molecular. A partir de diferencias de 30 unidades de masa, se podra decir que todas las diferencias de masa ya son qumicamente lgicas.

Cuando se emplea la ionizacin electrnica el fragmento inicial suele ser un ion radical positivo (M+) pues a la molcula se le arranca un electrn. Cuando se emplea la ionizacin qumica se obtienen especies llamadas quasimoleculares. Ionizacin qumica: se produce una transferencia de protones del gas reactivo a la especie de inters, obtenindose fundamentalmente el pico a (M+1)+. A veces se produce transferencia de hidruro de la especie de inters al gas reactivo y se obtiene el pico (M-1)+. Esta determinacin, naturalmente, requiere la identificacin del pico del ion molecular, o en algunos casos, del pico (M + 1)+ o (M - 1)+. Es siempre aconsejable ser precavido donde el pico del ion molecular puede estar ausente o ser pequeo en relacin con los picos debidos a impurezas. La determinacin de la masa exacta del in molecular slo es posible con instrumentos de alta resolucin, capaces de detectar diferencias de masas de unas pocas milsimas de unidad de masa. Una unidad de masa atmica es la doceava parte de la masa del tomo de C12. Determinacin de la frmula molecular. Se pueden determinar a partir del espectro de masas de un compuesto, siempre que el pico del in molecular pueda ser identificado y su masa exacta determinada. Mtodos: Frmulas a partir de instrumentos de alta resolucin. A menudo puede asignarse una nica frmula para un compuesto a partir de la masa exacta del pico del ion molecular. Esta aplicacin, sin embargo, requiere instrumentos de alta resolucin capaces de detectar diferencias de masas de unas pocas milsimas de unidad de masa.

Informacin estructural a partir de modelos de fragmentacin. Los estudios sistemticos de modelos de fragmentacin para sustancias puras han desembocado en el establecimiento de ciertas guas que permiten predecir los mecanismos de fragmentacin y una serie de reglas generales que son una ayuda en la interpretacin de espectros. Rara vez es posible (o deseable) explicar todos los picos del espectro. Sin embargo, si que se utilizan los modelos caractersticos de fragmentacin. Identificacin de compuestos por comparacin de espectros. Cuando son asequibles compuestos de referencia, la identificacin final se basa entonces en una comparacin de los espectros de masas del analito con los espectros de muestras patrn de los compuestos esperados. El procedimiento se basa en suponer que (1) los modelos de fragmentacin son nicos y (2) que las condiciones experimentales se pueden controlar lo suficiente como para producir espectros reproducibles. La probabilidad que tienen compuestos diferentes de dar el mismo espectro se hace cada vez menor a medida que aumentan los picos espectrales. Por esta razn, la ionizacin por impacto de electrones es el mtodo elegido para comparar espectros. Sistemas de bsqueda en bibliotecas computarizados. A pesar que las bibliotecas de datos espectrales de masas son asequibles en forma de textos, los espectrmetros de masas ms modernos estn equipados con sistemas de bsqueda en biblioteca computarizados muy eficaces. Normalmente se encuentran dos tipos de bibliotecas: unas muy extensas y otras ms pequeas pero especficas. Las bibliotecas de espectros de masas ms extensas (> 150 000 espectros) son asequibles comercialmente. Las bibliotecas pequeas normalmente contienen de unos pocos cientos a unos pocos miles de espectros para aplicacin a una determinada rea, tal como residuos de pesticidas, drogas o muestras forenses. Las bibliotecas pequeas forman parte a menudo del grupo de paquetes ofrecidos por los fabricantes de instrumentos y es casi siempre posible para el usuario del instrumento generar una biblioteca o hacer adiciones sobre una biblioteca existente. Los resultados se muestran al usuario y, si lo desea, los espectros de referencia se pueden visualizar en un monitor o se pueden imprimir para una comparacin visual. Frmulas a partir de relaciones isotpicas. Los datos de un instrumento de baja resolucin que puede slo discriminar entre iones que difieren en masa por un nmero entero de masa pueden dar informacin til sobre la frmula de un compuesto, con tal que slo el pico del ion molecular sea suficientemente intenso para que su altura y las alturas de los picos de los istopos (M + 1)+ y (M + 2)+ puedan determinarse con precisin. Con un instrumento de baja resolucin (slo distingue entre iones cuyas masas difieren en un nmero entero), puede obtenerse informacin til sobre la frmula molecular con tal de que el pico del in molecular sea lo suficientemente alto y los picos de istopos puedan ser determinados con precisin. Ion Molecular (M+) Define el lmite de la molcula Seal a masas altas Perdidas lgicas

Reglas para definir el Ion molecular La seal de masa ms alta del espectro no necesariamente corresponde al ion molecular. La masa del ion molecular debe ser par, a menos que la molcula contenga un nmero impar de tomos de nitrgeno. Picos de los Isotopos En los espectros de las figuras aparecen picos que corresponden a masas mayores que la del ion molecular. Estos picos se pueden atribuir a iones que tienen la misma frmula qumica pero diferentes composiciones isotpicas. El tamao de los diferentes picos depende de la abundancia natural relativa de los isotopos. Los picos de los isotopos proporcionan a menudo un mtodo til para la determinacin de la formula de un compuesto.

Picos resultantes de las colisiones Las colisiones ion-molcula pueden producir picos que corresponden a masas ms elevadas que la del ion molecular. A presiones normales de la muestra, la nica reaccin importante de este tipo es aquella en la que, por medio de las colisiones, se transfiere un tomo de hidrgeno al ion para dar un ion molecular protonado; el resultado es un pico intenso (M+1)+.

Origen M+1 y M+2 El ion molecular, en algunas ocasiones, puede presentar tendencia a originar compuestos bimoleculares; esta tendencia la presentarn compuestos con muchos heterotomos o compuestos fcilmente protonizables: + M ------- (( ) + H) + ((M) H)

De sta forma, en algunos compuestos aparecer un pico a la masa M+1, en lugar del pico molecular; en estos casos, al aumentar la cantidad de muestra introducida en la fuente de iones, la intensidad del pico M+1 aumentar proporcionalmente, mientras que los restantes picos del espectro aumentarn slo de forma lineal con la cantidad de muestra. Debido a la existencia de diversas especias isotpicas, el espectrmetro de masas, no detectar un solo pico molecular , sino varios, que correspondern a las diversas composiciones isotpicas del ion molecular. En el espectro, se denominar pico molecular al pico de masa M, denominndose los picos M+1 y M+2 , etc.picos isotpicos. Regla del Nitrgeno La Regla del Nitrgeno nos dice que: Los compuestos que contienen un nmero non de tomos de Nitrgeno en su molcula, tendrn un peso molecular non o impar. Mientras que molculas con un numero par de tomos de Nitrgeno producir un in de masa nominal par.