Prelbm 352001 36

UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA Y A DISTANCIA-UNAD Escuela de Ciencias Agrcolas, Pecuarias y del Medio Ambiente- ECAPMA Programa: Ingeniera Agroforestal
PREINFORME: Laboratorio Bioqumica Metablica-LBM Nombre y Apellido: Gloria Isabel Perdomo Cdigo: 1006517732; Fecha: 04-05-2013
BIOQUIMICA METABOLICA PREINFORMES DE PRCTICAS
GLORIA ISABEL PERDOMO CODIGO 1.006.517.732
TUTOR JAIRO GRANADOS MORENO GRUPO: 352001_36
UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA Y A DISTANCIA - UNAD ESCUELA DE CIENCIAS AGRARIAS, PECUARIAS Y DEL MEDIO AMBIENTE. PROGRAMA DE INGENIERIA AGROFORESTAL CERES SAN VICENTE DEL CAGUAN 2013
UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA Y A DISTANCIA-UNAD Escuela de Ciencias Agrcolas, Pecuarias y del Medio Ambiente- ECAPMA Programa: Ingeniera Agroforestal PREINFORME: Laboratorio Bioqumica Metablica-LBM Nombre y Apellido: Gloria Isabel Perdomo Cdigo: 1006517732; Fecha: 04-05-2013
PRCTICA 2: Capacidad Amortiguadora INTRODUCCIN La capacidad amortiguadora se usa para comparar soluciones amortiguadoras y es igual a las mili-equivalencias de cido o base fuerte que puede neutralizar la solucin amortiguadora sufriendo as un cambio de PH en su unidad. Tal capacidad depende de las concentraciones absolutas del sistema y la proporcin relativa de las formas disociadas y sin disociar y da como mxima cuando el cociente, es decir, la sal o acido es prxima a la unidad. Mentefacto o diagrama conceptual 1.3.3. Diagrama de Flujo
Rotular
Alistar titulacion
Evaluar el PH final Registrar PH
Adicionar concentrados
2.
TABLA DE DATOS
Valores Evaluados Vm (mL) Ph1
MUESTRAS Concentrad o Harina Forraje Sangre Orina
Wm (g)
Ph2
3. RESULTADOS ESPERADOS: 1. MATERIALES Y MTODOS 1.1. Materiales y equipos requeridos

Material / Equipo Erlenmeyer Pipetas Graduadas Esptula Metlica Agitador De Vidrio Probeta Graduada Bureta Soporte Universal Beaker Potencimetro Equipo De Titulacin Balanza Digital De 100ml De 25ml Metlico, con pinza para bureta Vaso precipitado De 250ml Caractersticas De 125ml De10ml
Se espera que la capacidad amortiguadora sea mayor con la sangre que con el buffer, y que este sea mayor en comparacin con la leche. Se espera que al diluir sustancias como concentrado pulverizado y agua destilada, igualmente con harina y forraje picado para comparar su PH (potencial bufferante), se espera que el concentrado sea mayor en la sangre y en la orina. GLOSARIO
Soluciones amortiguadoras: Son aquellas soluciones cuya concentracin de hidrogeniones vara muy poco al aadirles cidos o bases fuertes. El objeto de su empleo, tanto en tcnicas de laboratorio como en la finalidad funcional del plasma, es precisamente impedir o amortiguar las variaciones de pH y, por eso, suele decirse que sirven para mantener constante el Ph. Homestasis: Homeostasis es el conjunto de fenmenos de autorregulacin que llevan al mantenimiento de la constancia en las propiedades y la composicin del medio interno de un organismo; es la caracterstica de un organismo vivo, por la cual mediante la absorcin de alimentos y vitaminas (metabolismo) puede regular las funciones que
Muestras Biolgicas
Concentrado ,Orina, Sangre Y Forraje
existen dentro de l, para mantener una condicin estable y constante. La homeostasis es posible gracias a los mltiples ajustes dinmicos del equilibrio y los mecanismos de autorregulacin. Acido dbil: es aquel cido que no est totalmente disociado en una disolucin acuosa. Aporta iones al medio, pero tambin es capaz de aceptarlos. Si representramos el cido con la frmula general HA, en una disolucin acuosa una cantidad significativa de HA permanece sin disociar, mientras que el resto del cido se disociar en iones positivos negativos , formando un equilibrio cido-base. y
1.2 Reactivos a utilizar
Reactivo Hidrxido de Sodio cido Clorhdrico Fenolftalena Rojo De Metilo Agua Destilada Solucin Buffer Fosfato
Frmula NaOH HCl 2 4 C 0H14O 15 15 3 2 C H NO 2 HO HPO4

2
Concentracin 0,1N 0,1N
BIBLIOGRAFIA
1.3 Procedimiento 1.3.1. En campo: Recolectar en campo las muestras de Leche (20mL), harina (5gr), Forraje picado (5gr), sangre (20mL) de acuerdo a los protocolos establecidos para tal efecto; las muestras se empacarn en bolsas negras, las cuales se rotularn con los datos de origen.
Granados M. J. E Mdulo de Bioqumica metablica. Escuela De Ciencias Agrcolas Pecuarias Y Del Medio Ambiente. ECAPMA. http://www.itescam.edu.mx/principal/sylabus/fpdb/recursos/r5 5275.PDF Definicin de homeostasis - Qu es, Significado y Concepto http://definicion.de/homeostasis/#ixzz2RuVsvh9Q
1.3.2 En Laboratorio Mtodo de titulacin volumtrica: con agua destilada, solucin buffer y leche. Tcnica potenciomtrica: con agua destilada, Clorhdrico, harina y forraje picado. cido
PRCTICA 3: CARBOHIDRATOS NO ESTRUCTURALES INTRODUCCIN Los carbohidratos no estructurales se dan debido a la acumulacin de carbohidratos solubles en los tejidos de las plantas, se produce cuando la tasa de formacin de glucosa durante el proceso de fotosntesis supera la cantidad necesaria para el crecimiento y la respiracin.
En esta prctica se determinaran los carbohidratos no estructurales, se les llama as al no hacer parte de la pared celular, estn muy activos y representan azucares libres que se almacenan en los rganos de reserva.
1.3.3. Diagrama de Flujo
Compuestos
Carbohidratos
No Estructurales
Activos
Planta
Raiz-Tallo-Corona Metabolismo
1. TABLA DE DATOS
Mentefacto o diagrama conceptual

CARBOHIDRATOS NO ESTRUCTURALES Son
Formados
por Carbono
Compuestos Activos
En el
No Forman
Parte
Hidrogeno Oxigeno
Posee
Metabolismo
De la
de la Pared Celular
En
Tabla. Datos para la cuantificacin de CNE
Planta Almacenados Races Tallos Coronas Fermentacin
Rpida y total
1. MATERIALES Y MTODOS 1.1. Materiales y equipos requeridos

Material / Equipo Caractersticas
3. RESULTADOS ESPERADOS: Se espera aprender mediante el mtodo de Fenol acido Sulfrico determinar la cantidad de carbohidratos totales No estructurales, extraerlos basndose en su contenido de almidones hidrolizables y azcares solubles y medir por
medio de la lectura espectrofotomtrica.
Balanza Analtica Bao Termosttico Beaker Varilla de vidrio Papel de filtro Tubos de Ensayo Con gradilla De 100 - 200 - 400 ml
Se espera adquirir conocimientos suficientes sobre los carbohidratos no estructurales, como son estos compuestos activos en el metabolismo de las plantas.
GLOSARIO Carbohidrato: es un compuesto orgnico con la frmula general CM (H 2 O), n, es decir, que consta slo de carbono, hidrgeno y oxgeno, los dos ltimos en la relacin atmica 2:1. Los
1.2 Reactivos a utilizar Reactivo Glucosa Agua destilada Fenol Frmula C6H12O6 H2O C6H5OH Concentracin
carbohidratos pueden ser vistos como los hidratos de carbono, de ah su nombre. Es esencialmente un sinnimo de sacrido, una gran familia de los hidratos de carbono naturales que llenan numerosos papeles en los seres vivos. Glucosa: La glucosa es un monosacrido con frmula molecular C6H12O6, la misma que la fructosa pero con diferente posicin relativa de los grupos -OH y O=. Es una hexosa, es decir, que contiene 6 tomos de carbono, y es una aldosa, esto es, el grupo carbonilo est en el extremo de la molcula. Transmitancia: se define como la cantidad de energa que atraviesa un cuerpo en determinada cantidad de tiempo. Se define tambin como la fraccin de luz incidente, a una longitud de onda especificada, que pasa a travs de una muestra. Espectrofotmetro: instrumento de anlisis qumico utilizado para medir en funcin de la longitud de onda la relacin entre dos valores de la misma magnitud fotomtrica. Es un instrumento que tiene la capacidad de manejar un haz de Radiacin Electromagntica.
1.3 Procedimiento Extraccin Depositar en el vaso de precipitados y agregar 50ml de solucin de HCl, agitar por 3 minutos y llevar al Beaker con la solucin al bao termosttico a 90C por 20 min. Dejar enfriar por 5 min y filtrar, medir el volumen filtrado y llevar 5ml de este a un tubo de ensayo en el cual se adicionara 5 ml de NaOH y agitar por 15 seg. Tapar y rotular as FCNE (filtrado para carbohidratos NE). Cuantificacin: Rotular 3 tubos de ensayo as B (blanco), St (estndar), m (muestra y adicionar los reactivos en el orden que se indica en la tabla 1, agitar por 20 seg. Y llevar al bao mara por 3 min. Sacar y agitar 10 seg. Dejar enfriar completamente. Cuantificacin Agronmica: Mezcla reactiva: Rotular 7 tubos de ensayo as 1, 2, 3, 4, 5,6, B, colocar en bao de hielo y adicionar los reactivos indicados en la tabla 1.
BIBLIOGRAFIA
Granados M. J. E Mdulo de Bioqumica metablica. Escuela De Ciencias Agrcolas Pecuarias Y Del Medio Ambiente. ECAPMA. http://www.es.wikipedia.org/wiki/Carbohidratos http://www.fao.org/docrep/field/008/AB489S/AB488S00.carbo hidratos no estructurales.htm http://www.slideshare.net/LINEYANDREA/carbohidratos4402131
PRCTICA 4: Actividad de Catalasa INTRODUCCIN La catalasa es una enzima que se encuentra en organismos vivos y cataliza la descomposicin del perxido de hidrgeno (H202) en oxgeno y agua. 2 H2O2 2 H2O + O2 La catalasa como biocatalizador de origen proteco, es una enzima xido - reductasa que participa en la degradacin del perxido de hidrgeno (H2O2), hasta Oxgeno molecular (O2) y agua (H2O). Dicha biomolcula, est presente en peroxisomas y mitocondrias de clulas animales y vegetales, protegindolas de la toxicidad de los radicales libres perxido, impidiendo su acumulacin y beneficiando el metabolismo celular. Mentefacto o diagrama conceptual 1.3.3. Diagrama de Flujo
Catalizar Enzima
Presente en
Celulas vivas Animal

de
vegetal
descomposicion rapida perxido de hidrogeno

en
agua
oxigeno
2. TABLA DE DATOS
que
Organismos
actan Animales Vegetales como Pueden catalizadores descomponer son perxido de hidrogeno sustancias que
por aceleran las
Tabla 1 Datos para Actividad Cataltica de Catalasa (ACAT)
Vivos
TUBOS B 1 2 3 4 5 6
mL de KMnO40,01N
Vs (mL)
enzimas reacciones qumicas responsables sin ser de la destruidas o alteradas Actividad qumica tienen En intervalo de temperatura El H2O2 es toxico para la mayora de los

Material / Equipo Soporte Universal Pipetas Graduadas Beaker Erlenmeyer Probeta Graduada Bureta Tubos de Ensayo Caractersticas Metlico, con pinza para bureta De10ml De 400 ml De 125ml De 100ml De 25ml Con gradilla
3. RESULTADOS ESPERADOS: Se espera determinar la actividad de catalasa por medio del mtodo permanganomtrico. Se espera cuantificar la actividad enzimtica de la catalasa en muestras de origen vegetal y animal; enzima que se puede encontrar en todos los seres vivos catalasa, necesaria para descomponer el perxido de hidrgeno, un compuesto txico, que se produce durante el metabolismo
Muestras Biolgicas
Concentrado, frutas o verduras, Orina y Sangre.
celular. Se espera aprender y familiarizarse con las propiedades de los enzimas y observar la actividad de la catalasa
1.2 Reactivos a utilizar Reactivo Perxido de Hidrogeno cido Sulfrico Permanganato de Potasio Extractos de Catalasa (ECAT) Frmula H2O2 H2SO4 KMnO4 Concentracin 0.05 M 2N 0.01 M
GLOSARIO Enzima Catalasa: La catalasa es en una enzima que la podemos encontrar en muchos organismos vivos, y cataliza la reaccin de descomposicin del perxido de hidrgeno en agua y oxgeno. La catalasa cumple una funcin protectora contra determinados microorganismos patgenos, sobre todo anaerobios. Las bacterias anaerobias, mueren al estar en contacto con oxgeno, es por esta razn que el oxgeno producido por esta enzima tiene efecto bactericida sobre estos microorganismos.
1.3 Procedimiento 1.3.1Extraccin Frutas , verduras concentrados

Pesar 2g de muestra picada pulverizada y colocarla en un tubo de centrifuga ,luego adicionar 10mL de solucin fra de buffer fosfato 0,05M, pH=6,8-7,0, agitar, con agitador de vidrio (3min) y centrifugar a 2500rpm ,durante 5min Sacar el sobrenadante, pasarlo a una probeta, medir su volumen, registrarlo como : Vs y tomar 5 mL de ste para depositarlo en un tubo de ensayo ,taparlo, rotularlo como :EVCAT(extracto de verdura para catalasa ) EFCAT(extracto de fruta para catalasa), ECCAT (extracto de concentrado para catalasa), colocarlos inmediatamente en bao de hielo.
Perxido de hidrgeno: H2O2, es uno de los productos del metabolismo celular en diversos organismos, pero dada su potencial toxicidad, es transformado enseguida por la enzima catalasa.
Se produce durante la oxidacin de las coenzimas FAD y FMN, biomolculas importantes en la oxidacin de sustratos a partir del oxgeno molecular .Tambin se genera por la oxidacin de cidos grasos (AG) en los peroxisomas.
Perxido de hidrxido, conformada espacialmente en su estructura cuaternaria como una protena homotetramrica de peso molecular que oscila entre 210 a 280 Kilodaltons(kD) con 4 subunidades idnticas, constitudas por un grupo prosttico de protoporfirina y el grupo hemo (Fe-III), representando estos, un 1,1 % y 0,09 % respectivamente del peso molecular total de la Enzima. Mtodo permanganomtrico: el cual se titula el perxido residual, es decir, el que no particip en la RBE, con una solucin de permanganato de potasio (KMnO4) de concentracin conocida. Para deteccin de Perxido residual en rehso de filtros Este procedimiento permite una rpida determinacin de la ausencia de Perxido en el agua de enjuague del filtro de dilisis.
Sangre y orina
En un tubo de ensayo, colocar 0,2 mL de sangre y 10 mL de buffer fosfato fro, agitar vigorosamente hasta obtener mezcla completa, tapar, rotular: SSCAT (Solucin sangunea para catalasa) y guardar en refrigeracin bao de hielo. En el caso de la orina, mezclar 4 mL de muestra con 6 mL de buffer fro, agitar, tapar, rotular: SOCAT (solucin de orina para catalasa), colocar en bao de hielo. 1.3.2 Cuantificacin
BIBLIOGRAFIA
Agronmica Mezcla Reactiva

Alistar 7 tubos de ensayo y rotularlos as: B, 1, 2,3, 4,5, 6, colocarlos en bao de hielo y adicionar los reactivos en el orden dado.
Granados M. J. E Mdulo de Bioqumica metablica. Escuela De Ciencias Agrcolas Pecuarias Y Del Medio Ambiente. ECAPMA. http://www.enzima catalasa | La Gua Qumica http://quimica.laguia2000.com/conceptosbasicos/enzima-catalasa#ixzz2S4klkgGo de
http://www.es.wikipedia.org/wiki/Catalasa http://www.www.acienciasgalilei.com/qui/formulacion/peroxid os.htm
Titulacin permanganomtrica
Montaje de titulacin, colocar el Erlenmeyer debajo de la bureta y titular adicionando lentamente el KMnO4, agitando, hasta que aparezca y permanezca un color rosado violeta plido, por 30 segundos, en la solucin reactiva, registrar los mL de permanganato gastados en este proceso.
Zootecnia
Mezcla reactiva Cinco tubos de ensayo para los reactivos que se indican para la realizacin de esta prctica.
PRCTICA 5: CUANTIFICACIN DE NITRGENO NO PROTEICO (NNP) (Fraccin A de Van Soest) 1.3.3. Diagrama de Flujo INTRODUCCIN Los compuestos que forman el NNP son los que contienen amonaco, nitritos y nitratos y otros como la urea, el Biuret o el cido rico. En el laboratorio, el nitrgeno no proteico (NNP), que est incluido en: rea, amonaco y pptidos, es tradicionalmente aquel que pasa en el filtrado despus de la precipitacin con un reactivo especfico para protena. para separar el nitrgeno insoluble del soluble (NNP), esto se realiza mediante la lisis de polipptidos, hasta pptidos der menor peso molecular , de tal forma que son metablicamente ms cercanos a la protena soluble(PS) 4. Mentefacto o diagrama conceptual
Nitrogeno No Proteico
Son Compuestos Excretado Nitrgeno Amoniacal Urea En forma de Orina Utilizado por Bacterias
TABLA DE DATOS
NITROGENO NO PROTEICO
Son Utilizado
Nitrgeno Amoniacal Urea
Compuestos que Pueden ser Convertidos en Protenas
por Bacterias Para Fabricar Aminocidos
Tabla: Datos para Nitrgeno no proteco (NNP) Tubos Wm (g) Vf (mL) Estndar (st)
Excretado
En forma de orina
m Tipo y origen de la muestra

Material / Equipo Papel Filtro Capsula de Porcelana Vaso de Precipitado Probeta Graduada Tubos de Ensayo Caractersticas
3. RESULTADOS ESPERADOS: Se espera determinar con el resultado del anlisis una buena aproximacin al contenido de protena en el alimento, ya que el nitrgeno tambin proviene de componentes no proteicos. Se espera cuantificar el nitrgeno no proteico (NNP) denominado tambin fraccin A de Van Soest, mediante el reactivo: cido Tricloroactico.
Porcelana Vidrio De 100ml Con gradilla
Se espera aprender y familiarizar con las propiedades del NNP y Aplicar tcnicas instrumentales analticas de Lectura Agite
1.2 Reactivos a utilizar Reactivo cido Tricloroactico

Urea
Frmula
Cl3COOH CO(NH2)2
Concentracin 10% 0.25

1%
vigorosamente por 15 seg. Y deje reposar 5 min. A temperatura ambiente. Espectrofotomtrica: alistar el espectrofotmetro a una longitud de onda (I) de 540 nm, y calibrarlo con el tubo de ensayo blanco, leer absorbancia de las dems soluciones, St y m. Y registrar valores en la tabla de datos. Kjeldhal y espectrofotomtricas para determinar el contenido de NNP y Protena verdadera (PV) en forrajes y concentrados. Se espera adquirir conocimientos suficientes sobre El NH3 que es el principal nutriente nitrogenado para las bacterias del rumen; lograr claridad sobre como tener suficientes fuentes de energa para que stas lo puedan utilizar y as puedan biosintetizar aminocidos. GLOSARIO
Agua Destilada
Cloruro de mercurio Fosfato pH 7 Indicador de tashiro Cloruro de hidrogeno
H2O
HgCl2 H3PO4
C15H14N3O2Na
HCL
1.3 Procedimiento 1.3.1. Extraccin con cido Tricloroactico (ATA).

Forraje: se toman 15 submuestras de 250 gr cada una, se cortan a la altura del pastoreo evitando lugares donde se pueda alterar la muestra como orillas de camino zonas prximas alambrados, etc. Se guarda preferiblemente en una bolsa de papel o plstico en un lugar con baja temperatura y etiquetar con todos los datos concernientes al lugar de la toma de la muestra. Suelo: se toman mnimo 10 submuestras de suelo a profundidad de 20 cm, retirando la capa vegetal de la superficie y retirando de la muestra los residuos guardando en una bolsa plstica, dejar secar a la sombra si est muy hmeda.
Nitrgeno no proteico: se denominan as a los compuestos de nitrgeno que pueden ser convertidos en protenas por algunos organismos vivos. Protena: son macromolculas formadas por cadenas lineales de aminocidos. El trmino protena proviene de la palabra francesa protine. Cada clula en el cuerpo humano contiene protena. La protena es una parte muy importante de la piel, los msculos, rganos y glndulas. Amoniaco: es un compuesto qumico cuya molcula consiste en un tomo de nitrgeno (N) y tres tomos de hidrgeno (H) de acuerdo con la frmula NH3. Pptidos: Son un tipo de molculas formadas por la unin de varios aminocidos mediante enlaces peptdicos.
Pesar +/-1.0 gr. De muestra pulverizada y registrar como (Wm), adicionar en vaso de precipitado y agregar 30 mL de agua destilada fra, agitar por 1 min., luego deje reposar 15 min y adicione 20 mL de solucin de ATA y agite por 1 min., deje reposar a temperatura ambiente por 15 min. Filtre sobre probeta y mida el volumen del filtrado, coloque 5 mL del filtrado en un tubo de ensayo y rotule as FNNP (filtrado para nitrgeno no proteico, el papel filtro con el residuo ponerlo en una capsula de porcelana y secar a 105c por 30 min. 1.3.2. Cuantificacin: Cuantificacin de N por mtodo espectrofotomtrico de Biuret Lowry Rotular 3 tubos de ensayo as, B (blanco), St (estndar), m (muestra). Adicionar reactivos segn orden indicado en el cuadro nmero 2.
BIBLIOGRAFIA Granados M. J. E Mdulo de Bioqumica metablica. Escuela De Ciencias Agrcolas Pecuarias Y Del Medio Ambiente. ECAPMA. http://www.Nitrogeno no proteico/ Gua de Qumica 2000. com/conceptos-bsicos/Nitrogeno#ixzz2S4klkgGo http://www.es.wikipedia.org/wiki/Nitrogeno

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BIOQUIMICA METABOLICA PREINFORMES DE PRCTICAS

GLORIA ISABEL PERDOMO CODIGO 1.006.517.732

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Evaluar el PH final Registrar PH

MUESTRAS Concentrad o Harina Forraje Sangre Orina

3. RESULTADOS ESPERADOS: 1. MATERIALES Y MTODOS 1.1. Materiales y equipos requeridos

Concentrado ,Orina, Sangre Y Forraje

1.2 Reactivos a utilizar

Frmula NaOH HCl 2 4 C 0H14O 15 15 3 2 C H NO 2 HO HPO4

Concentracin 0,1N 0,1N

1.3.3. Diagrama de Flujo

Mentefacto o diagrama conceptual

Tabla. Datos para la cuantificacin de CNE

Planta Almacenados Races Tallos Coronas Fermentacin

1. MATERIALES Y MTODOS 1.1. Materiales y equipos requeridos

Celulas vivas Animal

descomposicion rapida perxido de hidrogeno

Tabla 1 Datos para Actividad Cataltica de Catalasa (ACAT)

1. MATERIALES Y MTODOS 1.1. Materiales y equipos requeridos

Concentrado, frutas o verduras, Orina y Sangre.

1.3 Procedimiento 1.3.1Extraccin Frutas , verduras concentrados

Agronmica Mezcla Reactiva

http://www.es.wikipedia.org/wiki/Catalasa http://www.www.acienciasgalilei.com/qui/formulacion/peroxid os.htm

Nitrgeno Amoniacal Urea

Compuestos que Pueden ser Convertidos en Protenas

por Bacterias Para Fabricar Aminocidos

m Tipo y origen de la muestra

3. MATERIALES Y MTODOS 3.1. Materiales y equipos requeridos

Porcelana Vidrio De 100ml Con gradilla

1.2 Reactivos a utilizar Reactivo cido Tricloroactico

Concentracin 10% 0.25

1.3 Procedimiento 1.3.1. Extraccin con cido Tricloroactico (ATA).

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