La cerveza como fuente

diettica de silicio y su efecto protector frente a la intoxicacin por aluminio: influencia sobre la absorcin y la acumulacin de este metal neurotxico
Marzo 2006

Dra. Mara Jos Gonzlez Muoz Dra. Isabel Meseguer Soler D. Antonio Pea Fernndez
Departamento de Nutricin, Bromatologa y Toxicologa. rea de Toxicologa, Facultad de Farmacia. Universidad de Alcal.

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La cerveza como fuente diettica de silicio y su efecto protector frente a la intoxicacin por aluminio: influencia sobre la absorcin y la acumulacin de este metal neurotxico

Este trabajo ha sido dirigido por el siguiente grupo de investigacin: Dra. Mara Jos Gonzlez Muoz Dra. Isabel Meseguer Soler D. Antonio Pea Fernndez Departamento de Nutricin, Bromatologa y Toxicologa. rea de Toxicologa. Facultad de Farmacia. Universidad de Alcal

A la memoria del Dr. Salvador Granero Ribelles

Ttulo: La cerveza como fuente diettica de silicio y su efecto protector frente a la intoxicacin por aluminio: influencia sobre la absorcin y la acumulacin de este metal neurotxico. Autores: Este trabajo ha sido realizado por el siguiente grupo de investigacin: Dra. Mara Jos Gonzlez Muoz Dra. Isabel Meseguer Soler D. Antonio Pea Fernndez Departamento de Nutricin, Bromatologa y Toxicologa. rea de Toxicologa. Facultad de Farmacia. Universidad de Alcal

SUMARIO

INTRODUCCIN ........................................................................................6
1.1. Aluminio .......................................................................................6 1.2. Silicio ...........................................................................................9

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OBJETIVOS.............................................................................................12 MATERIALES Y MTODOS .........................................................................13

3.1. Animales y protocolo experimental .................................................13 3.2. Muestras ......................................................................................16 3.3. Pruebas bioqumicas .....................................................................16 3.4. Metodologa para el anlisis de elementos .......................................17 3.5. Tratamiento estadstico .................................................................19

RESULTADOS Y DISCUSIN ......................................................................20

4.1. Contenido de aluminio y silicio en muestras de cerveza.....................20 4.2. Estudio Agudo ..............................................................................21 4.2.1. Excrecin fecal ................................................................................21 4.2.2. Excrecin urinaria ............................................................................23 4.2.3. Niveles sanguneos...........................................................................25 4.2.4. Conclusiones ...................................................................................27 4.3. Estudio Crnico ............................................................................27 4.3.1. Control de animales .....................................................................27 4.3.2. Excrecin fecal ............................................................................29 4.3.3. Excrecin urinaria ........................................................................30 4.3.4. Niveles sanguneos.......................................................................31 4.3.5. Niveles en tejido cerebral ..............................................................33

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CONCLUSIONES ......................................................................................35 ANEXO ..................................................................................................36 BIBLIOGRAFA ...................................................................................40

o INTRODUCCIN

La enfermedad de Alzheimer, descrita por primera vez por Alois Alzheimer en 1906 (Alzheimer, 1906 y 1907), es un trastorno neurodegenerativo que constituye la causa ms comn de demencia entre la poblacin de edad avanzada. Se caracteriza por un gradual deterioro funcional en varias partes del sistema nervioso central, debido a la muerte progresiva de neuronas. Comienza con una insidiosa disminucin progresiva de la memoria, que posteriormente va a afectar a las capacidades cognitiva, conductual y psicolgica del enfermo. Las caractersticas neuropatolgicas, incluida la atrofia cortical y subcortical, son: la formacin de ovillos neurofibrilares intraneuronales, deposicin de pptido -amiloide en placas neurticas o seniles, formacin de hebras neuronales, prdida de funcin sinptica, estrs oxidativo y apoptosis, con una importante prdida neuronal. Estos efectos se observan mayoritariamente en el hipocampo y en la regin cortical en cerebros con enfermedad de Alzheimer (Guimer y cols., 2002; Gupta y cols., 2005). Aunque la etiopatognesis de la enfermedad de Alzheimer es desconocida, los factores ambientales, sumados a la predisposicin gentica, van a participar en el desarrollo de la enfermedad, pudiendo ser el aluminio uno de estos factores (Domingo, 2000; Rondeau, 2002).

1.1. ALUMINIO
El aluminio (Al) es el tercer elemento ms abundante y el metal ms abundante de la corteza terrestre, encontrndose en todos los compartimentos que estn en contacto con el ser humano: aire, agua, alimentos, drogas, cosmticos, y materiales de hogar (papel de aluminio) (Reinke y cols, 2003). Adems, el Al se emplea en la industria farmacutica como anticido, y en la alimentaria para producir emulsiones, modificar texturas, etc. (PrezGranados y Vaquero, 2002).

En el medioambiente penetra a travs de partculas en el aire formadas por la erosin natural del suelo, minera o agricultura, erupciones volcnicas y uso de combustibles fsiles. Una de las fuentes de exposicin ms importante para el ser humano son las aguas municipales de consumo, cuyos niveles van a variar dependiendo de varios factores fisicoqumicos y mineralgicos, y por el uso de coagulantes de aluminio durante el tratamiento del agua (Nieboer y cols., 1995; Rondeau, 2002). Por tanto, la exposicin a aluminio es inevitable. Respecto a su posible esencialidad, hasta hoy no se han descrito ninguna alteracin fisiolgica asociada a su deficiencia (Baydar y cols., 2003). Sin embargo, la neurotoxicidad del Al en humanos s est bien establecida (Fattoretti y cols., 2003). En individuos sanos, la absorcin de Al a travs del intestino es suficientemente lenta, y la eliminacin a travs de la orina suficientemente elevada, como para minimizar los efectos adversos que sobre la salud tienen niveles normales de exposicin (Popplewell y cols., 1998). Prcticamente la totalidad del Al ingerido pasa a travs del tracto digestivo sin absorberse. La absorcin intestinal depende del pH del tracto gastrointestinal (Grske y cols., 2000; Lote y Saunders, 1991). Un exceso de citrato podra aumentar la absorcin de Al, mientras que la ingestin de cido silcico la inhibira (Deng y cols., 1998; Powell y Thompson, 1993). Respecto a la distribucin de este elemento en el organismo, se ha sugerido que depende de la especie animal, de la va de entrada, y de la forma qumica del aluminio administrada (Sahin y cols., 1994). El Al absorbido se acumula en una serie de rganos, entre los que se encuentra el cerebro, ya que atraviesa la barrera hematoenceflica (Bells y cols., 1998; Yokel y cols., 1999). Parece que el aclaramiento del Al del cerebro es mucho ms lento que el de otros rganos, posiblemente debido a la escasa renovacin neu-

ronal, de ah que se acumule fcilmente en este rgano (Baydar y cols., 2003; Becaria y cols., 2002). En sangre, el aluminio se une a la transferrina, siendo eliminado rpidamente del flujo sanguneo por deposicin en diversos tejidos o por excrecin (Prez-Granados y Vaquero, 2002), la cual tiene lugar fundamentalmente a travs de la orina (Yokel, 2000). El Al puede afectar a la biodisponibilidad de elementos esenciales como calcio, cobre, hierro, magnesio y zinc, por los que compite reduciendo su presencia (Dlugaszek y cols., 2000; Williams, 1999). La toxicidad del aluminio se puso de manifiesto en 1972, tras el sndrome neurolgico que apareca en pacientes sometidos a dilisis prolongada (Winship, 1993). Posteriormente, varios estudios establecieron una relacin significativa entre los niveles de Al de las aguas de bebida y una mayor incidencia de la enfermedad de Alzheimer (Jacqmin-Gadda y cols., 1996; Martn y cols., 1997). Por tanto, el Al fundamentalmente es un metal neurotxico que, en grandes cantidades, provoca en el hombre ataxia, dificultades en el habla y en la ingesta de alimentos, convulsiones y encefalopata. Sin embargo, el mecanismo molecular de la neurotoxicidad del Al no se conoce en la actualidad (Domingo y cols., 2000). Al parecer, puede atravesar la barrera hematoenceflica y, por tanto, penetrar en el cerebro, induciendo una degeneracin neurofibrilar y muerte neuronal (Alfrey y cols., 1976). Por eso se le relaciona con la demencia y otros desrdenes, como la enfermedad de Alzheimer, aunque esta hiptesis actualmente se encuentra en debate (Flaten, 2001; Nayak, 2002; Rondeau, 2002; Zatta y cols., 2003). As pues, el Al ha sido propuesto como uno de los factores ambientales causantes de la enfermedad de Alzheimer en base a las siguientes evidencias experimentales:
I La induccin de cambios fibrilares en neuronas de animales de experimenta-

cin tras la inyeccin de sales de aluminio en tejido cerebral.

I Las concentraciones elevadas de Al en las placas neurticas y maraas neuro-

fibrilares encontradas en cerebros de pacientes con esta enfermedad.

I Las correlaciones establecidas de Al, fundamentalmente en aguas de consu-

mo, y la prevalencia de la enfermedad en estas zonas.

I El descenso observado en la progresin de la enfermedad tras la administra-

cin de desferrioxamina (agente quelante del Al) en pacientes diagnosticados clnicamente con enfermedad de Alzheimer (Domingo, 2000). A pesar de que estas hiptesis se encuentran en estudio, los resultados hasta la fecha no son suficientes como para intentar prevenir o reducir significativamente la exposicin a este metal en todas las fuentes. Adems del sistema nervioso, el Al afecta tambin al sistema seo, ya que como el calcio, se deposita en el hueso, inhibiendo la formacin de la matriz y la mineralizacin del hueso, tanto directamente como a travs de la inhibicin de la funcin paratiroidea. Se ha observado el desarrollo de osteomalacia en los enfermos con insuficiencia renal crnica en hemodilisis (Cannata, 1996 y 1998; Jarava y cols., 2001). Tambin provoca anemia microctica, mediante un mecanismo desconocido, en pacientes con serias alteraciones renales (Ganchev y cols., 1998; PrezGranados y Vaquero, 2002).

1.2. SILICIO
El silicio (Si), es el segundo elemento ms abundante en la corteza terrestre (Parry y cols., 1998). Es fundamental para el crecimiento y desarrollo del hueso y cartlago en humanos, por lo que se considera un elemento mineral esencial. Estudios recien-

tes muestran que una suplementacin de Si en la dieta reduce la prdida de masa sea, y activa la remineralizacin en el hombre y mujer pre-menopusica (Reffitt y cols., 2003). Por tanto, la deficiencia de este elemento, ocasiona fundamentalmente problemas en el crecimiento, deformaciones seas y desarrollo anormal del esqueleto y alteraciones en la flexibilidad, efectos descritos en animales, pero no clarificados en el ser humano (Prez-Granados y Vaquero, 2002). Adems, diversos trabajos muestran que la deficiencia de Si afecta al metabolismo del tejido conectivo, as como a la formacin de la matriz del hueso (Hott y cols., 1993; Seaborn y Nielsen, 1993). Sin embargo, no se encuentra establecido el requerimiento mnimo recomendado de ingesta de Si en el ser humano, ya que la informacin disponible se encuentra muy limitada, y el rango de datos es muy elevado (Nielsen, 1999; Prez-Granados y Vaquero, 2002). Su relacin con el Al y la enfermedad de Alzheimer radica en su capacidad potencial para limitar la biodisponibilidad del Al, al prevenir su absorcin a nivel gastrointestinal (Doucet y cols., 2001; Perry y Keeling-Tucker, 2000) y disminuir la reabsorcin del Al a nivel renal, protegiendo as de los efectos neurotxicos de ste (Reffitt y cols., 1999). No obstante, estas hiptesis se encuentran actualmente en debate. Las fuentes principales de Si biodisponible son los alimentos ricos en fibra, fundamentalmente los cereales con cscara: azcar de remolacha, salvado de trigo, soja, preparados de pectina, alfalfa, arroz y avena con cscara, etc. (Pennington, 1991; Prez-Granados y Vaquero, 2002; Sripanyakorn y cols., 2004). La cerveza, bebida obtenida por maceracin de cscaras de cereales, contiene aproximadamente 36 mg/L de Si biodisponible procedente del cido ortosilcico de la malta que se extrae durante el proceso de maceracin (Bellia y cols.,

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1994; Jugdaohsingh y cols., 2002; Pennington, 1991; Sripanyakorn y cols., 2004; Tucker y cols., 2001). Por tanto, la cerveza se ha propuesto como una de las fuentes de Si ms importante en la dieta occidental (Jugdaohsingh y cols., 2002; Pennington, 1991). El contenido en Si del agua de bebida, depende de la localizacin geogrfica, y se considera una buena fuente de silicio cuando contiene alrededor de 10 mg/mL (Prez-Granados y Vaquero, 2002). La absorcin de este elemento a travs de la dieta es ineficaz, ya que aproximadamente el 50% del Si presente en los alimentos es insoluble o prcticamente insoluble, al encontrarse en forma de aluminosilicatos y slica. Adems, en los pases desarrollados, la baja ingesta de fibra alimentaria y los procesos de refinado, afectan a la biodisponibilidad de este elemento por parte de la poblacin en general (Broadhurst, 1999; Prez-Granados y Vaquero, 2002; Van Dyck y cols., 1999). Sin embargo, el cido silcico presente en alimentos y bebidas, es rpidamente absorbido (Prez-Granados y Vaquero, 2002). Se ha comprobado que aproximadamente el 50% del Si de la cerveza, es absorbido fcilmente por el hombre (Sripanyakorn y cols., 2004). Y la principal va de excrecin es la urinaria (Jugdaohsingh y cols., 2002).

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s OBJETIVOS

El presente trabajo pretende estudiar el efecto de la cerveza sobre la toxicocintica del Al, es decir, sobre su absorcin, distribucin, acumulacin y eliminacin de este metal, as como su posible relacin en la prevencin de su neurotoxicidad. En una primera etapa se ha realizado un estudio de intoxicacin agudo con Al de tres das de duracin, evaluando este posible efecto protector de la cerveza. Para ello, se han utilizado dos tipos de cerveza, con y sin alcohol, y a dos dosis diferentes, una equivalente a un consumo moderado-bajo en el hombre (0,5 L/da), y otra a moderado-alto (1 L/da). Una vez comprobada esta hipottica influencia y determinado el tipo y la dosis de cerveza ms efectivas, se ha procedido a realizar un estudio crnico de tres meses de duracin, con el fin de confirmar los resultados obtenidos en el estudio agudo y determinar, adems, el posible efecto sobre la acumulacin de este metal neurotxico en el tejido cerebral.

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t MATERIALES Y MTODOS

3.1. ANIMALES

Y PROTOCOLO EXPERIMENTAL

El estudio fue llevado a cabo con ratones de la cepa NMRI, en el Centro de Experimentacin Animal de la Universidad de Alcal, homologado por el ministerio de Agricultura Ref. 28005-22 A, Real Decreto 233-88. Para ello se utilizan ratones machos de seis semanas de vida, con un peso alrededor de los 30 g. Se distribuyen en jaulas Macrolon tipo III con rejillas metlicas. Las condiciones de estabulacin son las estndar en experimentacin animal: temperatura ambiente de 21 C 1 C, humedad relativa del 55% 10%, y con un ciclo diario de doce horas de luz (8:00 20:00) y doce horas de oscuridad. Los animales tienen acceso libre al agua y a la comida (Panlab AOH). 3.1.1. DISTRIBUCIN

DE ANIMALES PARA EL ESTUDIO AGUDO

Se establecen once grupos de animales, de 12 ratones cada uno, que se someten a un tratamiento y/o intoxicacin agudo de tres das de duracin. Para ello se utiliza una cnula esofgica, para asegurar la dosis exacta de ingesta del animal. El tercer da de tratamiento, se introduce cada ratn en una jaula metablica, durante 24 horas, para posteriormente recoger heces y orina. A continuacin se sacrifican por exanguinacin mediante pinchazo intracardiaco, previamente narcotizados con halotano. Este sacrificio se lleva a cabo segn la Directiva 86/609/CEE del 24 de Noviembre de 1986, relativa a la aproximacin de las disposiciones legales, reglamentarias y administrativas de los Estados miembros respecto a la proteccin de animales utilizados para la experimentacin y otros fines cientficos. Las heces y orinas se guardan en tubos de polietileno previstos de tapn, previamente lavados con cido ntrico diluido al 10%, y las sangres en tubos de vidrio heparinizados y con tapn de silicona. Todas las muestras se almacenan a -20 C hasta su determinacin.

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Los diferentes grupos son:

I Grupo Control negativo: a los cuales se les administra slo agua desioni-

zada, para utilizarlos como grupo de referencia, y as poder valorar las modificaciones que se producen en los otros grupos de animales.
I Grupo Control positivo: intoxicados con Al, en forma de nitrato de alu-

minio [Al(NO3)3.9H2O] (Aldrich, CAS 7784-27-2), a una concentracin de 450 mg/kg/da en agua desionizada. Este grupo se utiliza para valorar el efecto de la intoxicacin.
I Grupo Cerveza con alcohol dosis moderada-alta: 0,5 mL/da de cerveza

con alcohol desgasificada, equivalente a 1 L/da en humano.

I Grupo Cerveza sin alcohol dosis moderada-alta: 0,5 mL/da de cerveza

sin alcohol desgasificada, equivalente a 1 L/da en humano.

I Grupo Cerveza con alcohol dosis moderada-baja: 0,25 mL/da de cerve-

za con alcohol desgasificada, equivalente a 0,5 L/da en humano.

I Grupo Cerveza sin alcohol dosis moderada-baja: 0,25 mL/da de cerve-

za sin alcohol desgasificada, equivalente a 0,5 L/da en humano.

I Grupo Aluminio y cerveza con alcohol dosis moderada-alta: 0,5 mL/da

de cerveza con alcohol desgasificada y 450 mg/kg/da de nitrato de aluminio. I Grupo Aluminio y cerveza sin alcohol dosis moderada-alta: 0,5 mL/da de cerveza sin alcohol desgasificada y 450 mg/kg/da de nitrato de aluminio.

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I Grupo Aluminio y cerveza con alcohol dosis moderada-baja: 0,25 mL/da

de cerveza con alcohol desgasificada y 450 mg/kg/da de nitrato de aluminio.

I Grupo Aluminio y cerveza sin alcohol dosis moderada-baja: 0,25 mL/da

de cerveza sin alcohol desgasificada y 450 mg/kg/da de nitrato de aluminio.

I Grupo Aluminio y cido silcico: se les administra 50 mg/L de cido sil-

cico, SiO2 Si(OH)4, a razn de 0,5 mL/da, con nitrato de aluminio en agua desionizada a una concentracin de 450 mg/kg/da. 3.1.2. DISTRIBUCIN

DE ANIMALES PARA EL ESTUDIO CRNICO

En esta segunda fase del estudio, ratones machos de la cepa NMRI, con un peso inicial aproximado de 30 g, se dividen aleatoriamente en cuatro grupos (n = 12) y se someten diariamente, durante tres meses, a los siguientes tratamientos:
I Grupo Control negativo

I Grupo Control positivo

I Grupo Aluminio y cido silcico, grupos anlogos a los descritos en el estu-

dio agudo y, por ltimo:

I Grupo Aluminio y cerveza: a los que se les administra el tipo y la dosis de

la cerveza seleccionada en la primera etapa del proyecto, junto con una dosis de 450 mg/Kg/da de nitrato de aluminio.

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Para este ensayo, la administracin de los diferentes compuestos y dosis se realiza a travs del agua de bebida, debido a que, la utilizacin de cnulas esofgicas, durante un tiempo prolongado, provoca irritacin en el esfago de los ratones, produciendo heridas con la subsiguiente infeccin y muerte del animal. Cada jaula posee un bibern que abastece de agua a los ratones de forma libre. En el agua de bebida se disuelven las cantidades adecuadas (segn la dosis y peso de los ratones de cada caja y grupo), y cada 2 das se repite el proceso, previo vaciado y limpiado de los biberones, para proporcionarles la dosis adecuada y para evitar precipitacin y/o aparicin de hongos (sobretodo en los biberones con cerveza). Adems, se observan y pesan los ratones diariamente. Al concluir los tres meses de tratamiento, el ltimo da se introduce cada ratn en una jaula metablica, durante 24 horas, para permitir la recogida de heces y orina. A continuacin se sacrifican por exanguinacin mediante pinchazo intracardiaco, siguiendo el proceso anteriormente mencionado. Adems de heces y orinas, se recogen muestras de sangres y cerebros, que se guardan a -20 C hasta su posterior anlisis, siguiendo el mismo proceso que en el estudio agudo.

3.2. MUESTRAS
Las muestras utilizadas para el presente estudio fueron: cerveza con alcohol (5,5% Vol) y cerveza sin alcohol (menos de 1%Vol).

3.3. PRUEBAS

BIOQUMICAS

En las muestras de orinas recogidas al concluir el estudio agudo y al final de cada mes en el estudio crnico, se realiza la determinacin de creatinina. El m-

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todo empleado es el mtodo de Jaffe modificado (Spierto y cols., 1979), mtodo en el que se basa el kit comercial de Qumica Clnica Aplicada (QCA SA).

3.4. METODOLOGA
3.4.1. PREPARACIN

PARA EL ANLISIS DE ELEMENTOS

DE LA MUESTRA

La destruccin de la materia orgnica se realiza con cido ntrico concentrado, HNO3 cc. (65% Suprapur, E. Merck, Darmstadt, Germany), utilizando digestores de tefln hermticos, siguiendo la metodologa previamente descrita por: Granero y cols., 2004; Granero y Domingo, 2002. Se usa este tipo de material (tefln) debido a su gran resistencia al ataque con cidos, y tambin por ser fcilmente lavable y por su casi nula contaminacin de la muestra. Se procede a pesar la cantidad de muestra disponible, mximo 0,2 mg, en los digestores de tefln y se aaden 2 mL de HNO3 cc. para obtener la fraccin soluble de la muestra. Se realiza una predigestin a temperatura ambiente durante 8 horas y seguidamente una digestin a 96 C durante 12 horas en estufa. Transcurrido este tiempo, se dejan enfriar los contenedores de tefln y se abren en una campana de gases para evitar el NOx formado durante el tratamiento de la muestra. Con el fin de separar los silicatos no disueltos durante el ataque, el digerido se filtra con filtros de papel Whatman 50 52 (filter papers hardened, 90 mm , 52 Whatman International Ltd., England) y se enrasa a 10 ml con H2O destilada-desionizada (sistema Millipore, Milli-Q, resistividad >18,2 M.cm). Las disoluciones obtenidas se guardan por duplicado en tubos de polietileno a 20 C.

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3.4.2. TCNICAS

ANALTICAS USADAS

Las tcnicas utilizadas son la espectrometra de masas de plasma acoplado inductivamente (ICP-MS, Perkin Elmer modelo Elan-6000) para la determinacin del Al y la espectrometra de emisin atmica de plasma acoplado inductivamente para el anlisis del Si (ICP-OES, Thermo Jarrell Ash., modelo Poly Scan G1E), tcnicas de anlisis elemental que se complementan con la tcnica de absorcin atmica. Para la determinacin bioqumica de creatinina en orina, se emplea la espectroscopia ultravioleta-visible (UV-VIS, Espectrofotmetro Perkin Elmer UV/VIS modelo lambda 12). 3.4.3. CONTROL

DE CALIDAD

La fiabilidad de la tcnica del ICP y la idoneidad del material empleado, se ha comprobado mediante la obtencin de duplicados de cada muestra, as como por el uso de un material de referencia (NIST 1643c), el cual se pasaba cada 10 muestras para chequear la desviacin de la sensibilidad del instrumento. Para cada elemento, la cuantificacin se ha basado en el istopo ms abundante libre de interferencias analticas, as como de la longitud de onda (Meneses y cols., 1999; Schuhmacher y cols., 1997a y 1998a). Como control de las determinaciones de creatinina, se utiliza Seriscann Normal de QCA.

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3.5. TRATAMIENTO

ESTADSTICO

Los resultados obtenidos han sido procesados utilizando el programa Excel XP, integrado dentro del programa Microsoft Office XP y como programa estadstico, el Statgraphics 5.0. La normalidad de las variables se ha comprobado aplicando la prueba de Kolmogorov-Smirnov, y la homogeneidad mediante la F Snedecor. Los datos han sido analizados mediante el anlisis de la varianza de una va (1-way ANOVA), y las diferencias entre las diferentes medias han sido evaluadas con los tests de comparaciones mltiples de LSD, con un intervalo de confianza del 95%, es decir, una probabilidad de 0,05 o menor se consider significativa.

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c u a t r o RESULTADOS Y DISCUSIN

4.1. CONTENIDO

DE ALUMINIO Y SILICIO EN MUESTRAS DE CERVEZA

El contenido de Al de las distintas cervezas utilizadas es muy similar: 0,40 0,12 g/g para la cerveza con alcohol, y 0,39 0,04 g/g para la cerveza sin alcohol (Tabla 1). Estos resultados se encuentran dentro del rango aportado por Lpez y cols. (1998) de 0,037-0,795 g Al/mL, y concuerdan con los obtenidos por otros autores: 0,49 0,11 g Al/mL (Granero y cols., 2004); 0,56 0,10 g Al/mL (Vias y cols., 2002), para cervezas embotelladas. Segn la Agencia para las Sustancias Txicas y el Registro de la Enfermedad, ATSDR, de los EEUU, el mnimo nivel de riesgo (MRL) para el Al es de 2,0 mg/kg/da (ATSDR, 2001). Por tanto, el consumo diario de 1 L de cerveza para un individuo de 70 kg aportara el 0,29% de este MRL, no representando riesgo alguno para la salud. En relacin al contenido en Si, las concentraciones medias de la cerveza con alcohol y sin alcohol son de 24,56 2,45 g/g y 18,21 2,48 g/g respectivamente, valores significativamente diferentes (p<0,001). Aunque ambas concentraciones son inferiores a los datos previamente publicados por Granero y cols. (2004) y Sendra y Carbonell (1999): 36,8 y 36,0 g/mL, se encuentran dentro del rango de valores aportados por Sripanyakorn y cols. (2004) para cervezas embotelladas (10,1-35,0 mg Si/mL).

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c u a t r o

4.2. ESTUDIO
4.2.1. EXCRECIN 4.2.1.1. NIVELES

AGUDO

FECAL

DE

AL

La va de excrecin fundamental del Al es a travs de la orina, por lo que los niveles de este metal en las heces son la suma del metal no absorbido y del excretado a travs de la bilis (DeVoto y Yokel, 1994). La suplementacin de cerveza parece influir sobre la toxicocintica del Al presente en la dieta. As, al comparar los animales control negativo con los que han recibido los diferentes tipos y dosis de cerveza, puede observarse un incremento en los niveles fecales de Al, si bien las diferencias encontradas no son significativas (Tabla 2). Por otra parte, los ratones que han recibido cerveza con alcohol, a ambas dosis, excretan ms Al (276,98 y 201,66 g/g) que los suplementados con cerveza sin alcohol (198,27 y 145,41 g/g). Estos efectos podran ser atribuidos al Si contenido en esta bebida, ya que este elemento es capaz de limitar la absorcin del Al diettico en el tracto gastrointestinal, incrementando su excrecin por va fecal (Bellia y cols., 1996). De los dos tipos de cerveza estudiados, la que parece ejercer un efecto ms acentuado es la cerveza con alcohol, a la dosis moderada-alta, aunque sin alcanzar significancia. Hay que indicar que la cerveza con alcohol presenta niveles de Si ligeramente superiores a la sin alcohol (Tabla 1), por lo que en principio este resultado seria el esperado. Cuando los animales son intoxicados con Al y tratados con cido silcico, los niveles fecales de Al aumentan de forma significativa (p<0,001) respecto a los ratones intoxicados control positivo (2878,94 vs. 1633,94 g/g) (Tabla 2). Ello indicara una posible interaccin del Si con el Al, dificultando la absorcin de este ltimo a nivel gastrointestinal.

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c u a t r o

Estos resultados concuerdan con los obtenidos por otros autores (Bellia y cols., 1996; Grske y cols., 2000). El posible mecanismo de esta interaccin sera la formacin de especies de aluminosilicatos, como los hidroxi-aluminosilicatos (HAS) (Parry y cols., 1998; Perry y Keeling-Tucker, 1998). Estos compuestos son una fase crtica secundaria mineral del ciclo biogeoqumico del Al, y se ha sugerido que se forman a pH fisiolgico de 4,5 aproximadamente (Perry y KeelingTucker, 1998). Un efecto similar se observa cuando el cido silcico es administrado a travs de la cerveza en los animales intoxicados con Al. As, todos los grupos tratados con cerveza presentan niveles fecales de Al superiores a los ratones intoxicados control positivo, aunque slo existen diferencias significativas (p<0,001) para el grupo de los ratones tratados con cerveza con alcohol, a dosis moderada-alta (Tabla 2). Por tanto, el Si contenido en la cerveza parece ejercer una interaccin en el mismo sentido que la observada tras la administracin de cido silcico. Asimismo, la posible interaccin de Al y Si a nivel gastrointestinal parece ser dependiente de la dosis de Si presente en el lumen, ya que la cerveza con alcohol es la que contiene mayor concentracin de cido silcico, como se ha comentado anteriormente. De hecho, Birchall y cols., en 1989, sugieren que la interaccin Al/Si tiene lugar cuando las concentraciones de cido silcico sobrepasan un umbral determinado. A la vista de estos resultados podramos sugerir que la cerveza podra ejercer un papel protector frente a la intoxicacin por Al a travs de la dieta, al dificultar la absorcin de ste en el tracto gastrointestinal. 4.2.1.2. NIVELES SI

DE

El Si contenido en la cerveza, cido silcico en forma monomrica o cido ortosiclico (Jugdaohsingh y cols., 2000 y 2002), es rpidamente absorbido y excretado a

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c u a t r o

travs de la orina (Yokel, 2000; Sripanyakorn y cols., 2004), de ah que no se hayan detectado niveles de Si en las heces de los animales estudiados (Tabla 2). Estudios de cintica realizados con cido silcico en humanos, muestran tambin que la cintica de absorcin/excrecin es rpida para este elemento (Popplewell y cols., 1998). 4.2.2. EXCRECIN 4.2.2.1. NIVELES

URINARIA

DE

AL

A pesar de que el Al es poco biodisponible, una pequea, pero suficiente cantidad, se absorbe en el tracto gastrointestinal (Drueke, 2002; Grske y cols., 2000), de ah que la excrecin de Al en orina sea significativamente mayor (p<0,001) en el grupo de ratones intoxicados con este metal, respecto al control negativo (1,03 vs. 0,73 g/g). Los niveles urinarios de Al de los ratones suplementados con los diferentes tipos de cerveza son inferiores a los del grupo control negativo (Tabla 3). Esto podra atribuirse a que la absorcin a nivel gastrointestinal del Al diettico estara dificultada en estos grupos, como se ha comentado anteriormente. Por otro lado, se puede observar que los niveles urinarios de Al de estos grupos son mayores conforme los niveles de Si aportados aumentan. Es decir, los grupos a los que se les administra mayores niveles de Si, que fueron los suplementados con cerveza con y sin alcohol a dosis moderada-alta, excretan ms Al por orina (0,67 y 0,49 g/g), que los suplementados con menos Si, cerveza con y sin alcohol a dosis moderada-baja (0,44 y 0,47 g/g). Este hecho indicara que el cido silcico tambin podra actuar sobre el Al a nivel renal, impidiendo la reabsorcin del Al, lo cual facilitara su excrecin por orina (Bellia y cols., 1996), siendo en nuestro caso dosis-dependiente. Bellia y cols. (1996) sugieren la existencia de una interaccin en el tbulo contorneado proximal

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de las nefronas entre el Si y Al, lo que permitira su co-deposicin. Sin embargo, para Reffitt y cols. (1999) esta hiptesis no est clara. Respecto a los grupos de ratones que fueron intoxicados con Al, la suplementacin con Si en forma de cido silcico o a travs de la cerveza, tambin produce una disminucin (p<0,001) de los niveles de Al en orina al compararlos con los animales control positivo (Tabla 3). Adems, se observa de igual modo que, en funcin de la dosis administrada de Si, los niveles urinarios de Al mantienen tambin un comportamiento dosis-dependiente. As, el grupo intoxicado y tratado con cido silcico y, por tanto, el que recibe la mayor concentracin de Si, presenta niveles de Al urinario superiores a todos los grupos de ratones suplementados con cerveza y Al, siendo significativa la diferencia (p<0,001) con los suplementados con menores concentraciones de Si (cerveza con y sin alcohol a dosis moderada-baja) (Tabla 3). Estos resultados podran avalar la hiptesis del posible efecto protector del cido ortosilcico sobre el Al, que funcionara, por tanto, a nivel gastrointestinal, dificultando la absorcin del Al (Bellia y cols., 1996; Grske y cols., 2000; Parry y cols., 1998) y a nivel renal, posiblemente disminuyendo la reabsorcin del Al (Bellia y cols., 1996), de forma dosis-dependiente. 4.2.2.2. NIVELES SI

DE

Al comparar los niveles urinarios de Si del grupo control positivo con los del control negativo (15,20 vs. 19,74 g/g) se observa una disminucin significativa (p<0,001) de los niveles de ste en los ratones intoxicados con Al (Tabla 3). Ello reforzara la hiptesis de una interaccin de ambos elementos a nivel del tracto gastrointestinal. Este efecto tambin puede observarse al comparar los niveles urinarios de Si de los grupos control suplementados con cerveza con alcohol a ambas dosis

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(16,86 y 9,44 g/g) con los correspondientes intoxicados con Al (12,82 y 4,72 g/g), siendo la diferencia significativa (p<0,001). Sin embargo, no ocurre lo mismo en los animales tratados con cerveza sin alcohol, cuyos niveles de Si son similares a los de los respectivos controles (Tabla 3). La presencia de alcohol parece ser el factor discriminante. As, Reffitt y cols. (1999) sugieren la posibilidad de que el alcohol ejerce un efecto sinrgico con el Si en la excrecin urinaria de Al, por lo que, al eliminarse conjuntamente (Popplewell y cols., 1998), el sinergismo sera recproco. Por otra parte, los niveles urinarios de Si de los animales control suplementados con cerveza son menores a los del control negativo (Tabla 3). Reffitt y cols. (1999) atribuyen este hecho a la existencia de algn componente de la cerveza que, de alguna manera, favorezca la distribucin del Si en el organismo. 4.2.3. NIVELES

SANGUNEOS

4.2.3.1. ALUMINIO No se han encontrado diferencias significativas al comparar los niveles sanguneos de Al de los ratones control positivo con los de los ratones control negativo (1,09 vs. 0,95 g/g) (Tabla 4). Este dato sera indicativo de la escasa absorcin del Al, y de su rpida distribucin una vez ha penetrado en el organismo (PrezGranados y Vaquero, 2002; Van Landeghem y cols., 1998; Yokel, 2000). Los niveles sanguneos de Al de los grupos suplementados con los diferentes tipos de cerveza son menores, en todos los casos, que los del control negativo, siendo la diferencia significativa (p<0,001) en aqullos en los que se les administra la dosis de cerveza moderada-baja (Tabla 4). Este hecho pondra tambin de manifiesto la interaccin del cido silcico contenido en la cerveza sobre la absorcin del Al diettico, como se ha comentado anteriormente.

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Respecto a los diferentes grupos de ratones intoxicados con Al, se observa tambin que los niveles de Al en sangre son menores en todos los grupos que han tenido un aporte de cido silcico, respecto al control positivo, siendo esta diferencia significativa (p<0,001) en todos los grupos tratados con cerveza (Tabla 4). Al comparar estos ltimos resultados, se observa de nuevo que existe una relacin entre los niveles sanguneos de Al y la concentracin de Si administrada. Es decir, a mayor concentracin de Si aportado, mayor presencia de Al en sangre. As, entre todos los grupos tratados con Si y Al, los animales que presentan mayores niveles de Al plasmticos son aquellos suplementados con cido silcico (0,90 g/g), luego los tratados con cerveza con alcohol a dosis moderadaalta (0,73 g/g), y as sucesivamente, a medida que el aporte de Si disminuye (Tabla 4). Esto podra ser debido posiblemente a que el cido silcico aportado favorece de alguna forma la presencia del Al en sangre, para su posterior excrecin a travs de la orina, hecho que se observara en los niveles urinarios de aluminio, que aumentaran con la dosis aportada de Si (Tabla 3), y/o a que el Si dificultara de algn modo la distribucin tisular del Al, aumentando, por tanto, la presencia de ste en sangre (Bellia y cols., 1996), aunque en este punto existen discrepancias, ya que otros investigadores obtienen resultados contrarios (Reffitt y cols., 1999). 4.2.3.2. SILICIO Hay que indicar que no se ha detectado Si en sangre, debido, posiblemente, a la cintica de absorcin/eliminacin rpida del cido silcico (Popplewell y cols., 1998). Este elemento mineral posee un elevado aclaramiento renal, por lo que el Si presente en suero es rpidamente filtrado por el rin, siendo baja la reabsorcin en la nefrona (Reffitt y cols., 1999).

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4.2.4. CONCLUSIONES Los resultados obtenidos sugieren que el cido silcico contenido en la cerveza, podra interferir con el Al disminuyendo su biodisponibilidad a tres niveles diferentes: a nivel gastrointestinal, dificultando su absorcin (Bellia y cols., 1996; Grske y cols., 2000; Parry y cols., 1998), a nivel renal, disminuyendo su reabsorcin (Bellia y cols., 1996), y a nivel de distribucin, impidiendo su distribucin tisular (Belles y cols., 1998; Dobranskyte y cols., 2004; Exley, 1999; Reffitt y cols., 1999; Yokel y cols., 1999). Por tanto, y teniendo en cuenta las hiptesis anteriores, la cerveza podra ejercer un papel protector frente a la toxicocintica del Al, siendo la CERVEZA CON ALCOHOL y a la DOSIS MODERADA-ALTA, la que produce un mayor efecto. De ah que sta haya sido el tipo y la dosis de cerveza elegida para la consecucin del estudio crnico.

4.3. ESTUDIO

CRNICO

Segn los resultados obtenidos en el estudio previo de intoxicacin aguda, el tipo y dosis de cerveza que parece ejercer un mayor efecto protector, es la cerveza con alcohol a dosis moderadamente alta. Por tanto, al grupo de: Aluminio y cerveza: se les administra 0,5 mL/da de cerveza con alcohol desgasificada y 450 mg/kg/da de nitrato de aluminio. 4.3.1. CONTROL 4.3.1.1. PESO

DE ANIMALES

DE RATONES

Las curvas de crecimiento obtenidas para los animales control (positivo y negativo) y aquellos tratados con Al y/o cerveza/silicio quedan reflejadas en la Fig. 1. (Anexo)

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Dichas curvas indican un ritmo de crecimiento similar para los cuatro grupos de animales, no apareciendo diferencias significativas entre ellos. En todos los grupos se aprecia un aumento de peso a medida que avanza el ensayo, hasta las ltimas semanas del mismo, donde se estabiliza. Los pesos de los animales se corresponden con el rango de pesos dados por Charles Rives Company (IFFA CREDO). Estos resultados concuerdan con los obtenidos por Fraga y col. (1990), quienes encuentran que el Al no ejerce efecto sobre el peso de los ratones. 4.3.1.2. CREATININA

URINARIA

La creatinina es el producto final en el catabolismo del fosfato de creatinina muscular y su excrecin, que ocurre exclusivamente por filtracin glomerular, tiene correlacin con la masa muscular o con el peso corporal total. Normalmente, su eliminacin es constante en los mamferos. Adems la cantidad de creatinina excretada no depende de la actividad fsica, dieta o diuresis. Para que se verifique una disminucin en la excrecin de la creatinina, la funcin renal debe estar considerablemente alterada. Esta concentracin es menor en el perodo nocturno y aumenta gradualmente durante el da. De la misma manera, la excrecin parece variar con la edad y el ritmo circadiano. En individuos mayores las concentraciones son menores (Elbert, 1997). Por ello, se ha decidido utilizar el valor de creatinina, adems de como factor de correccin para la determinacin de elementos en orina, como un parmetro bioqumico de control del estado de salud de los roedores durante el experimento. En lneas generales, y segn los datos de creatinina obtenidos (Figura 2), no se infiere el desarrollo de ninguna alteracin fisiolgica debida a la intoxicacin con aluminio, que pudiera interferir con los resultados obtenidos, en relacin con las hiptesis de este trabajo.

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c u a t r o

4.3.2. EXCRECIN 4.3.2.1. NIVELES

FECAL

DE

AL

El posible efecto del cido silcico sobre la biodisponibilidad del Al a nivel gastrointestinal (Bellia y cols., 1996; Granero y cols., 2004) se pone de manifiesto en los niveles de Al determinados en las heces de los animales tras la intoxicacin crnica de tres meses de duracin (Tabla 5). As, los ratones tratados con cido silcico excretan significativamente (p<0,001) ms Al que los animales intoxicados control positivo (665,87 vs. 487,38 g/g). El mismo efecto pero ms atenuado se observa al comparar los niveles de Al de los ratones tratados con cerveza con alcohol frente a los animales control positivo (560,46 vs. 487,38 g/g), si bien las diferencias resultaron ser significativas (p<0,05). El menor efecto de la cerveza sobre la toxicocintica del Al, podra ser debido a que, como se ha mencionado anteriormente, el posible mecanismo de esta interaccin (la formacin de especies de aluminosilicatos) depende de la dosis de Si presente en el lumen, por lo que al aportar una menor concentracin de cido silcico en el grupo tratado con cerveza que en el tratado con cido silcico, el efecto observado ser tambin menor. Estos resultados concuerdan con los observados en el estudio agudo, y con los encontrados por otros autores (Bellia y cols., 1996; Grske y cols., 2000), as como con los aportados por Granero y cols. (2004) en el proyecto anterior. Por tanto, un consumo moderado-alto de cerveza con alcohol parece afectar a la absorcin del Al a nivel del tracto digestivo, dificultando la entrada de este metal potencialmente txico al organismo.

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4.3.2.2. NIVELES

DE

SI

Al contrario que en el estudio agudo, s se observan niveles de Si fecales en los animales tras el estudio crnico, aunque las diferencias no son significativas entre los distintos grupos estudiados (Tabla 5). Estos valores, son coincidentes con los obtenidos por Granero y col., 2004. Las concentraciones de Si en heces de los animales intoxicados con Al son ligeramente superiores a las del grupo control negativo (123,45 vs. 116,12 g/g), lo que podra indicar una posible interaccin del Si con el Al presente en la dieta. Los niveles fecales de Si son ligeramente ms elevados en los grupos intoxicados con Al y tratados con cerveza y cido silcico, 131,06 g/g y 140,56 g/g, respectivamente, respecto a los grupos control positivo y negativo (Tabla 5). Estos datos avalaran la hiptesis de la formacin de compuestos inabsorbibles entre el Al y el Si. 4.3.3. EXCRECIN 4.3.3.1. NIVELES

URINARIA

DE

AL

En trminos generales, los grupos intoxicados con Al presentan niveles urinarios de este metal ligeramente superiores a los ratones control negativo, aunque las diferencias encontradas no son significativas. Asimismo, la excrecin urinaria de Al de los grupos tratados con Si y cerveza resultan ser similares a la de los grupos controles (Tabla 6). Estos datos difieren de los obtenidos en el estudio agudo, donde las concentraciones urinarias de Al para todos los grupos intoxicados pero tratados con Si fueron menores respecto al control positivo (Tabla 3). Estas diferencias entre el estudio agudo y crnico pueden ser atribuidas a posibles cambios en la homeostasis de estos elementos minerales como consecuen-

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c u a t r o

cia de la edad de los animales (Gmez y cols., 1997), que ha aumentado durante la duracin del estudio crnico (tres meses). Otros investigadores (Domingo, 1999; Granero y cols. 2004), tampoco aprecian un incremento en la excrecin urinaria del Al en animales intoxicados con Al y tratados con Si. Por tanto, la hiptesis apuntada a tenor de los datos obtenidos en el estudio agudo, acerca de una interaccin de estos elementos minerales a nivel renal, parece no cristalizarse como vlida. 4.3.3.2. NIVELES SI

DE

Al comparar los niveles urinarios de Si del grupo control positivo con los del control negativo (0,19 vs. 0,24 g/g) se observa una disminucin de los niveles de ste en los ratones intoxicados con Al, aunque sin alcanzar significancia (Tabla 6). Ello reforzara la hiptesis de una interaccin de ambos elementos a nivel del tracto gastrointestinal. Resultados similares fueron aportados por Granero y cols. (2004) en el proyecto anterior. 4.3.4. NIVELES

SANGUNEOS

4.3.4.1. ALUMINIO Al igual que en el estudio agudo, no se observan diferencias significativas al comparar los niveles sanguneos de Al de los ratones control positivo con los de los ratones control negativo (1,72 vs. 1,49 g/g) (Tabla 7). Este dato sera indicativo de la escasa absorcin del Al, y de su rpida distribucin una vez ha penetrado en el organismo (Prez-Granados y Vaquero, 2002).

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Respecto al tratamiento con Si, se puede observar que los niveles de Al en sangre de los animales suplementados tanto con cerveza como con cido silcico son menores respecto al control positivo, siendo esta diferencia significativa (p<0,001) (Tabla 7). Esto sera consecuencia de la interaccin del Si con el Al a nivel del tracto gastrointestinal. Tampoco se encuentran diferencias al comparar los valores de Al en sangre de los animales tratados con cerveza con alcohol (0,94 g/g) con los tratados con cido silcico (0,82 g/g), por lo que la cerveza con alcohol a esta dosis parece ser efectiva en dificultar la entrada del Al al organismo. 4.3.4.2. SILICIO Aunque los niveles de Si en sangre de los ratones control positivo y los animales control negativo (23,78 vs. 29,63 mg/g) (Tabla 7) no resultaron ser significativamente diferentes, los niveles de este elemento son ligeramente inferiores en los animales intoxicados, indicando una posible interaccin del Si y el Al dietticos. Las concentraciones sanguneas de Si de los animales tratados con cerveza o cido silcico son menores respecto a los ratones intoxicados control positivo, siendo esta diferencia significativa (p<0,001) para el grupo tratado con cido silcico, hecho que pone de manifiesto la interaccin del Si con el Al. Es decir, se observa que, aquellos ratones tratados con Si (para ambos grupos), presentan niveles mayores de excrecin, tanto urinaria como fecal, para este elemento (Tablas 5 y 6). Ello, junto con una posible distribucin tisular favorecida, hace que los niveles sanguneos de Si estn disminuidos.

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c u a t r o

4.3.5. NIVELES

EN TEJIDO CEREBRAL

4.3.5.1. ALUMINIO Los resultados obtenidos confirman que el tejido cerebral es un rgano diana para el Al, ya que este se acumula de forma significativa tras una intoxicacin crnica. As, los niveles de Al del tejido cerebral de los animales intoxicados son significativamente mayores (p<0,01) con respecto a los ratones control negativo (3,85 vs. 2,08 g/g) (Tabla 8). A pesar de que los menores niveles de Al en tejido cerebral corresponden a los roedores del grupo control negativo, estos no muestran diferencias significativas con los grupos tratados con Si, a travs de la cerveza o del cido silcico. Por tanto, podemos considerar que el tratamiento ha resultado totalmente satisfactorio. Los niveles de Al son significativamente menores (p<0,01) en los cerebros de los ratones tratados con cido silcico que los correspondientes a los animales control positivo (2,34 vs. 3,85 g/g). Asimismo, se observa que la administracin de Si a travs de la cerveza, ocasiona tambin una disminucin de los niveles de Al del tejido cerebral, aunque no de forma significativa (2,34 vs. 3,85 g/g). Estos datos son concordantes con los obtenidos respecto a la eliminacin del Al por heces: la mayor excrecin en animales tratados podra ser una de las causas de la menor acumulacin del Al en el cerebro. A tenor de estos resultados se puede decir que la administracin de Si podra ser efectiva frente a la acumulacin de Al en el cerebro de los ratones, como tambin observ en el estudio previo el Dr. Granero y cols., 2004.

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c u a t r o

4.3.5.2. SILICIO Aunque no se hallan diferencias significativas, los niveles de Si cerebral de los roedores intoxicados con Al son mayores que los controles negativos (25,83 vs. 13,64 g/g) (Tabla 8). El incremento en el contenido en Si se podra deber a que, por un lado, existen evidencias de que el Al produce radicales libres que inducen la peroxidacin lipdica, produciendo un dao en las membranas neuronales y un incremento en la permeabilidad de la barrera hemotoenceflica (Srivastava y cols., 2002; Tokutake, 1997) y, por tanto, un aumento en la entrada de Si diettico al tejido cerebral. Por otro lado, Desouky y cols., 2002 y 2003, sugieren, a partir de varios estudios en reptiles, que el Al interacciona con el Si, permitiendo la entrada conjunta posiblemente a travs de especies de aluminosilicatos, como posible mecanismo de detoxificacin de este metal neurotxico. Asimismo, numerosos estudios han demostrado que el Al y Si se encuentran presentes en el interior de grnulos de lipofuscina contenidos en placas seniles y maraas neurofibrilares, en cerebros (Candy y cols., 1992; Clauberg y Joshi, 1993; Kaneko y cols., 2004; Kohila y cols., 2004), as como en cerebros de pacientes con EA (Tokutake, 1997; Tokutake y cols., 1995; Tokutake y Oyanagi, 1995). Los grnulos de lipofuscina son lisosomas degradados, debido a la acumulacin gradual de compuestos inorgnicos. Se observa tambin que los niveles de Si en tejido cerebral son mayores en los grupos intoxicados con Al y tratados con Si, frente a los controles positivo (Tabla 8), resultado previsible ya que estos roedores son suplementados con Si.

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c CONCLUSIONES

Al ser el Al un metal potencialmente neurotxico, presumiblemente asociado en la actualidad a la enfermedad de Alzheimer, y otras enfermedades degenerativas importantes, sera conveniente reducir la exposicin a este metal en todas las fuentes. Debido a la posible interaccin entre el Al y Si observada a nivel del tracto gastrointestinal, y a la disminucin de la presencia de Al en plasma y tejido cerebral, podramos indicar que el Si, en forma de cido silcico, puede reducir la biodisponibilidad del Al y, por tanto, sera un elemento a considerar como factor de proteccin frente a este metal. El tratamiento con cerveza con alcohol a una dosis moderada-alta, parece ejercer el mismo efecto. Por tanto, un aporte moderado de cerveza podra ser tenido en cuenta en los hbitos dietticos de la poblacin como un posible factor protector, hecho que reafirma la reciente inclusin de esta bebida en la pirmide nutricional. Sin embargo, el consumo de bebidas alcohlicas nunca se debe considerar como un modo de incrementar ciertos nutrientes, que pueden encontrarse en otros alimentos en la dieta, ya que su consumo debe estar dentro de unos lmites, que dependen tanto del sexo como de la edad. Adems, un abuso de consumo de alcohol se asocia con un incremento en la morbilidad y mortalidad (Yuan y cols., 2001), si bien un consumo moderado puede tener efectos beneficiosos sobre la salud, como por ejemplo en enfermedades cardiovasculares (De Loromier, 2000), as como en la prevencin de la resorcin y prdida sea en el ser humano (Rapuri y cols., 2000; Tucker y cols., 2001; Tunner y Sibonga, 2001). De ah que, y dado que algunos de los efectos observados en el estudio agudo entre la cerveza con y sin alcohol no resultaron significativos, sera interesante completar este trabajo realizando un estudio crnico con cerveza sin alcohol, con el objeto de comprobar si el efecto protector del Si se produce tambin en ausencia del alcohol. As mismo, sera fundamental la determinacin de biomarcadores de peroxidacin lipdica en cerebros, debido a la capacidad del Al de inducir radicales libres, para comprobar si el Si es capaz de interferir en este mecanismo de dao cerebral.

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s ANEXO

Tabla 1. Contenido de Al y Si en cerveza (g/g)

Cerveza con alcohol Aluminio Silicio 0,40 0,12a 24,56 2,45a Cerveza sin alcohol 0,39 0,04a 18,21 2,48b

Los valores de la misma fila con diferente letra son significativamente diferentes.

Tabla 2. Estudio agudo: Niveles fecales de Al y Si (g/g)

Grupo Control Negativo Control Positivo Cerveza con alcohol dosis moderada-alta Cerveza con alcohol dosis moderada-baja Cerveza sin alcohol dosis moderada-alta Cerveza sin alcohol dosis moderada-baja Aluminio y Cerveza con alcohol dosis moderada-alta Aluminio y Cerveza con alcohol dosis moderada-baja Aluminio y Cerveza sin alcohol dosis moderada-alta Aluminio y Cerveza sin alcohol dosis moderada-baja Aluminio y cido silcico Aluminio 134,59 1633,94 276,98 201,66 198,27 145,41 35,00a 591,13b 90,63a 26,13a 68,25a 22,15a Silicio n.d. n.d. n.d. n.d. n.d. n.d. n.d. n.d. n.d. n.d. n.d.

2195,52 561,56c 1889,73 935,32bc 1918,17 701,52bc 1757,74 236,16bc 2878,94 1109,35d

Los valores de la misma columna con diferente letra son significativamente diferentes. N.d.: No detectado.

Tabla 3. Estudio agudo: Niveles urinarios de Al y Si (g/g)

Grupo Control Negativo Control Positivo Cerveza con alcohol dosis moderada-alta Cerveza con alcohol dosis moderada-baja Cerveza sin alcohol dosis moderada-alta Cerveza sin alcohol dosis moderada-baja Aluminio y Cerveza con alcohol dosis moderada-alta Aluminio y Cerveza con alcohol dosis moderada-baja Aluminio y Cerveza sin alcohol dosis moderada-alta Aluminio y Cerveza sin alcohol dosis moderada-baja Aluminio y cido silcico Aluminio 0,73 0,09a 1,03 0,36b 0,67 0,14aac 0,44 0,12d 0,49 0,17cd 0,47 0,15cd 0,62 0,17ac 0,51 0,14cd 0,61 0,16acd 0,48 0,23cd 0,75 0,18a Silicio 19,74 4,50a 15,20 3,43bc 16,86 4,52ab 9,44 3,72de 12,96 4,40bcd 4,32 2,63f 12,82 1,61cd 4,72 3,10f 13,20 4,24bcd 5,28 3,20ef 14,75 2,05bc

Los valores de la misma columna con diferente letra son significativamente diferentes.

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Tabla 4. Estudio agudo: Niveles sanguneos de Al y Si (g/g)

Grupo Control Negativo Control Positivo Cerveza con alcohol dosis moderada-alta Cerveza con alcohol dosis moderada-baja Cerveza sin alcohol dosis moderada-alta Cerveza sin alcohol dosis moderada-baja Aluminio y Cerveza con alcohol dosis moderada-alta Aluminio y Cerveza con alcohol dosis moderada-baja Aluminio y Cerveza sin alcohol dosis moderada-alta Aluminio y Cerveza sin alcohol dosis moderada-baja Aluminio y cido silcico Aluminio 0,95 0,43ab 1,09 0,28a 0,83 0,33bc 0,62 0,26cde 0,78 0,21bcd 0,48 0,24e 0,73 0,10bcd 0,61 0,17cde 0,72 0,22bcde 0,56 0,23de 0,90 0,29ab Silicio n.d. n.d. n.d. n.d. n.d. n.d. n.d. n.d. n.d. n.d. n.d.

Los valores de la misma columna con diferente letra son significativamente diferentes. N.d.: No detectado.

Figura 1. Curvas de crecimiento de los ratones. Estudio crnico.

Curvas de crecimiento
50

40

Peso (g)

30

20

10

0 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12

C. Negativo Cerveza

C. Positivo Silicio

Semanas

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Figura 2. Niveles de creatinina en orina para cada grupo de animales en un estudio crnico
Creatinina en orina
90 80

micromol/24 h

70 60 50 40 30 20 10 0 1 2 3

C. Negativo Cerveza

C. Positivo Silicio

Mes

Tabla 5. Estudio crnico: Niveles fecales de Al y Si (g/g)

Grupo Ratones Control Negativo Ratones Control Positivo Ratones Intoxicados con Al y tratados con cerveza con alcohol a dosis moderada-alta Ratones Intoxicados con Al y tratados con cido silcico Aluminio 279,72 62,36a 487,38 70,78b 581,03 92,62c 665,87 160,39c Silicio 116,12 25,19a 123,45 16,53a 131,06 29,40a 140,56 80,02a

Los valores de la misma columna con diferente letra son significativamente diferentes.

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Tabla 6. Estudio crnico: Niveles urinarios de Al y Si (g/g)

Grupo Ratones Control Negativo Ratones Control Positivo Ratones Intoxicados con Al y tratados con cerveza con alcohol a dosis moderada-alta Ratones Intoxicados con Al y tratados con cido silcico Aluminio 0,012 0,006 0,015 0,006 0,017 0,003 0,017 0,004 Silicio 0,24 0,07 0,19 0,08 0,22 0,10 0,27 0,06

Tabla 7. Estudio crnico: Niveles sanguneos de Al y Si (g/g)

Grupo Ratones Control Negativo Ratones Control Positivo Ratones Intoxicados con Al y tratados con cerveza con alcohol a dosis moderada-alta Ratones Intoxicados con Al y tratados con cido silcico Aluminio 1,49 0,29a 1,72 0,50a 0,94 0,45b 0,82 0,23b Silicio 29,63 4,72a 23,78 8,96ab 21,00 5,84ab 11,64 3,32c

Los valores de la misma columna con diferente letra son significativamente diferentes.

Tabla 8. Estudio crnico: Niveles en tejido cerebral de Al y Si (g/g)

Grupo Ratones Control Negativo Ratones Control Positivo Ratones Intoxicados con Al y tratados con cerveza con alcohol a dosis moderada-alta Ratones Intoxicados con Al y tratados con cido silcico Aluminio 2,08 1,41a 3,85 0,33b 2,45 1,14ab 2,34 1,12a Silicio 13,64 11,15a 25,83 9,92ab 37,17 7,76bc 45,26 11,26c

Los valores de la misma columna con diferente letra son significativamente diferentes.

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bibliografa BIBLIOGRAFA

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El Centro de Informacin Cerveza y Salud recomienda en todo momento un consumo responsable de cerveza