Regional Distrito Capital Sistema de Gestin de la Calidad

Informe de Laboratorio No 1 Aislamiento de microorganismos tolerantes al etanol

Centro de Gestin Industrial Abril de 2013

Regional Distrito Capital Sistema de Gestin de la Calidad

Informe de Laboratorio No 1 Aislamiento de microorganismos tolerantes al etanol

Integrantes Diego Felipe Pulido Sastoque Camilo Andrs Jimnez Tibavija Katherine Barreto Gonzlez

Instructor Sonia Marcela Buitrago

Centro de Gestin Industrial Abril6 de 2013

1. Marco terico Crecimiento microbiano Es un incremento en el nmero de clulas o aumento de la masa microbiana. El crecimiento es un componente esencial de la funcin microbiana, ya que una clula individual tiene un periodo de vida determinado en la naturaleza y la especie se mantiene solamente como resultado del crecimiento continuo de la poblacin celular. Saccharomyces cerevisiae Es un organismo que puede crecer tanto en condiciones aerobias como anaerobias. Este microorganismo muestra cinco fases de crecimiento cuando es cultivado en medio lquido con glucosa como fuente de carbono. En condiciones anaerobias produce etanol, pero tambin lo produce en condiciones aerobias, pues slo el 10% de la glucosa es metabolizada a travs de la respiracin, siendo el resto metabolizado de forma fermentativa.

2. Objetivos Objetivo general Aislar, seleccionar y evaluar cepas microbianas a partir de diferentes sustratos para la obtencin del producto de inters.

Objetivos especficos

Aislar diferentes microorganismos tolerantes a etanol diferentes sustratos.

a partir de

Evaluar la tolerancia a diferentes concentraciones de etanol de los microorganismos aislados. Evaluar la tolerancia de los microorganismos aislados a diferentes concentraciones de glucosa Identificar los parmetros para seleccionar una cepa ptima para ser usada en la produccin del metabolito de inters Conocer las tcnicas de recuento como una alternativa para determinar microorganismos viables tolerantes a concentraciones de etanol y glucosa.

3. Procedimiento Equipos Incubadora. Autoclave. Balanza. Sustancias de aislamiento Agar OGY. Agar con 4% de etanol Agar con 8% de etanol Agar con 12% de etanol Agar con 16% de etanol Agar con 10% de glucosa Agar con 15% de glucosa Agar con 20% de glucosa

Luego, se toma una caja con los cultivos y se recoge una pequea muestra con un asa

Se agrega una gota de agua en una lmina de vidrio y se mezcla con la muestra en el asa

Se lleva a una estufa a 30C, por cinco minutos

Se lava con agua y se agrega alcohol cetona, por 45 segundos

Se lava con agua, y se agrega una gota de lugol por un

Se fija, pasndolo por un mechero y se le agrega una gota de cristal violeta por un minuto

Se enjuaga con agua y se agrega una gota de fucsina por 45 segundos

Se lava y se deja secar la muestra a temperatura ambiente

Se procede a examinar las tinciones en un microscopio.

Se distribuyen las soluciones en 8 tubos de ensayos con 9 ml de cada una

Se prepara una solucin de lactosa, sacarosa, glucosa, fructosa, xilosa, arabinosa, maltosa y etanol al 5% en 70 mL de caldo preparado anteriormente y se esterilizan en la autoclave.

Despus, se toma una muestra de la misma colonia a la que se le hizo la tincin de

Se agrega la muestra en cada tubo

Se incuban los tubos por 4 das y a 30C

Se vuelve a tomar muestra de la misma colonia y se asla en una caja de Petri con agar

Se incuba la caja por 4 das a 30C

4. Resultados Se realizo el recuento de las colonias en cada una de las cajas de Petri, con las diferentes concentraciones de etanol y glucosa. Los resultados son ilustrados en la siguiente tabla: Concentracin OGY control OGY control Etanol 4% 8% 12% 16% Glucosa 10% 15% 4.7 x 105 3.1 x 105 > 1.6 x 104 > 1.6 x 104 6.3 x 104 100 1.8 x 106 UFC/ mL en la muestra

20%

> 1.6 x 104

UF C/m L 700000 600000 500000 400000 300000 200000 100000 0 4%

Etanol

8%

12%

16%

C onc entra c ion eta nol (% )

Glucosa
UF C /mL 5000000 4000000 3000000 2000000 1000000 0 10% 15% Conc entra c ion g luc os a (% ) 20%

4.1 Aislamiento y crecimiento del microorganismo. Caractersticas macroscpicas. FORMA redonda AGAR OGY etanol 16% COLOR TAMAO Crema Mediano AGAR SABOURAUD glucosa 20% COLOR TAMAO Crema Pequeo TEXTURA Cremoso

FORMA redonda

TEXTURA Cremoso

Caractersticas macroscpicas - Levaduras

4.2 pruebas bioqumicas. A continuacin se muestran los resultados de las pruebas bioqumicas realizadas al microrganismo que ha sido objeto de este informe. AZUCAR Glucosa Sacarosa Maltosa Xilosa Arabinosa Lactosa Fructosa Etanol ACTIVIDAD + + + +/+ + + PROD CO2 + + + + ------------

Basndonos en los resultados obtenidos despus de dicho ensayo se puede afirmar que el microorganismo al cual se le realizaron la pruevas bioqumicas no es un Saccharomyces cerevisiae

5. Discusin de resultados De acuerdo con los datos obtenidos en la prctica de laboratorio del da 7 de abril, se pudo establecer que el crecimiento del microorganismo es diferente en cada concentracin de etanol o de glucosa. La adaptacin que tienen las levaduras en cierto contenido de etanol se debe a una modificacin de composicin lipdica de las membranas debida a un enriquecimiento de las mismas en esteroles y cidos grasos de cadena larga. (Charpentie, 1991). En un cultivo anaerobio las clulas de las levaduras, al ser mas ricas en esteroles, mantienen por mas tiempo su actividad fermentara, degradando una mayor cantidad de azucares. (Guidici y col, 1983). El resultado obtenido en las concentraciones de glucosa son las esperadas ya que, segn la literatura las levaduras Saccharomyces cerevisiae pueden soportar una concentracin de 190 g/L. (Ciesarova, Sajibidor et al, 1996).

6. Analice la aplicacin profesional de la prctica realizada

Dada la actual importancia de la biotecnologa en los procesos industriales, encontramos unas caractersticas muy favorables para la produccin de etanol en concentraciones de hasta un 18% de este, con ayuda del microorganismo que creci; partiendo de azucares reductores y en especial de la glucosa. Este tipo de tcnicas son favorables para la industria tanto en los procesos de etanol para fines de obtencin de combustible, como para fines de etanol para industrias que se dedican a la elaboracin de bebidas con contenidos alcohlicos. De esta forma es viable segn los datos obtenidos en el aislamiento del microorganismo afirmar que con la ayuda de este podemos obtener ptimos rendimientos en la fabricacin de sidra a partir de manzana royal pues este tipo de bebida solo requiere un mximo de 6% de etanol. 7. Conclusiones Se logr aislar levaduras con el fin de determinar su tolerancia a diferentes concentraciones de etanol y glucosa Segn los resultados del ensayo se puede concluir que la levadura a la que se le realizo el aislamiento y lo ensayos a diferente concentraciones de etanol es tolerante hasta un 18% de concentracin del mismo Se realizaron ensayos para determinar la concentracin de glucosa capaz de soportar el microorganismo, para lo cual encontramos que el micro organismo es tolerante hasta a un 20% de glucosa Se pudo observar un nmero aceptable de cepas viables del microorganismo aislado.

8. Bibliografa - Chandrakant, P. y Bisaria. (2000). Simultaneus bioconversion of glucose and xylose to ethanol by Saccharomyces cerevisiae in the presence of xylose isomerase. Applied Microbiology and Biotechonology, vol 53, pp 301-309

9. Cibergrafa -

www.biologia.edu.ar/microind/crecimiento%20bacteriano.htm www.slideshare.net/guested7523/crecimiento-microbiano