UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN MARCOS

FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUMICA

Hematologa: Recuento de Glbulos Rojos

Anlisis Clnico I

2013
Profesor Responsable: Q.F. Dr. Juan Parreo Tipn Alumna: Fiorella Yahaira Prez Guerrero Cdigo: 08040106 Ao de Estudio: Quinto Semestre Acadmico: 2013-I Da de Laboratorio: Jueves de 10:00 am 14:00pm
ANLISIS
CLINICO I

I.

INTRODUCCIN
Los glbulos rojos son las clulas sanguneas que contienen en su interior la hemoglobina; y son los principales portadores de oxgeno a las clulas y tejidos del cuerpo, es por ello que presentan una forma bicncava para adaptarse a una mayor superficie de intercambio de oxgeno por dixido de carbono en los tejidos. Existen muchos factores necesario para su produccin de gbulos rojos como: la Vitamina B12, el Acido flico y el Hierro. Una disminucin de los valores normales de glbulos rojos puede deberse a la presencia de Anemias, Cncer, Enfermedades sistmicas, Hemorragias, Fibrosis de mdula sea o alteraciones en la dieta diaria; mientras que valores aumentados pueden deberse a Enfermedades pulmonares crnicas, Cardiopatas, Altitud o Poliglobulia de diferentes causas. Es por ello que en la presente prctica se conocern los diferente mtodos para determinar el conteo de glbulos rojos; un examen que nos ayuda a diagnosticar si un paciente tiene anemia o polisitemia, estos resultados dependern mucho de el nmero de eritrocitos que hay por milmetro cbico de sangre.

II.

OBJETIVOS
Conocer el mtodo y procedimiento adecuado para el recuento de glbulos rojos. Demostrar la factibilidad y eciencia de la cmara de Neubauer en el conteo de Glbulos Rojo. Conocer y comprender el fundamento del manejo de la cmara de Neubauer y la pipeta de Thoma. Conocer las caractersticas morfolgicas de los Glbulo Rojos. Determinar cuantitativamente el nmero de eritrocitos por mm3 de sangre total.

III.

MARCO TERICO III.1. Hematologa

Es el estudio de la sangre y sus componentes celulares. Ya los antiguos griegos haban reconocido la importancia de la sangre, pero recin con la investigacin del microscopio lo cientficos pudieron descubrir que estaba formada por varios componentes. Herfilo descubri la importancia de diagnosticar el pulso; es decir, la sangre que fluye a travs de las arterias entre el ao 500 y el 250 a.C. La sangre transporta las sustancias a travs de todo el organismo, estando compuesta bsicamente por dos partes: la porcin lquida denominada plasma y las clulas que viajan en el plasma. El plasma constituye hasta el 55% del volumen sanguneo y est compuesto por el 91.5% de agua y 8.5% de solutos disueltos. Entre los solutos se puede mencionar las protenas plasmticas, como la albumina, la globulina y el fibringeno, y otros como las vitaminas, enzimas, hormona y electrolitos. Por su parte las clulas de la sangre comprenden los glbulos rojos, los glbulos blancos y las plaquetas. Los glbulos rojos tambin conocidos como eritrocitos representan casi el 99% de las clulas del plasma, siendo las responsables del transporte de oxigeno por todo el cuerpo y contienen una sustancia denominada Hemoglobina (Hb), que fija la molcula de oxigeno para permitir su transporte a travs de la corriente sangunea y hacia el interior de las clulas donde se libera.

Componentes de la sangre

III.2. Hematimetra
Es la exploracin complementaria bsica de todo servicio de urgencia, que estudia la cuantificacin y evaluacin de los distintos grupos celulares (hemates, plaquetas, leucocitos, etc) y nos permite detectar alteraciones cuantitativas de estas. La cantidad de hemates puede ofrecer datos de salud o de la presencia de una anemia, enfermedades generales, o diferentes tipos de cncer. Como los hemates son los encargados de transportar la hemoglobina (protena que porta el oxgeno a los tejidos), su disminucin produce cansancio y sensacin de fatiga. Uno de los estudios ms conocidos es el Hemograma.

III.3. Hemograma y Hemograma completo

Son dos pruebas principales que se realizan para evaluar la sangre y las clulas de la sangre en los pacientes quirrgicos: el hemograma, que abarca el recuento de eritrocitos, el recuento de glbulos blancos, la hemoglobina (Hb), el hematocrito (Hct), los ndices hematimtricos y el recuento de plaquetas; y el hemograma completo que comprende los datos del hemograma y el recuento diferencial de glbulos blancos. El hemograma completo es una prueba estndar que se solicita a todos los pacientes quirrgicos. Este estudio se suele emplear en el periodo intraoperatorio para determinar las modificaciones del estado hemodinmico del paciente.

Hemograma
Recuento de Eritrocitos. Recuento de Glbulos Blancos. Hemoglobina (Hb) Hematocrito (Hct). ndices Hematimtrico. Recuento de Plaquetas

Hemograma Completo
Hemograma Recuento diferencial de Glbulos Blancos

Hemograma Completo

A. Recuento de Glbulos Rojos

Los glbulos rojos se forman en la medula sea a partir de una nica clula madre progenitora mediante un proceso de maduracin especfico que es la eritropoyesis. Despus de abandonar la mdula sea, el glbulo rojo pasa a circulacin donde vive unos 120 das y luego es eliminado de la circulacin por los macrfagos del bazo y la mdula sea. Estos glbulos rojos son los que llevan el oxgeno a todo el organismo.

RGR

El RBC es la cantidad de glbulos rojos que son producidos en unas 20 gotas de sangre o 1 milmetro cbico (1mm3). Los niveles normales de RBC fluctan entre 4.5 y 6.1 millones por milmetro cbico para los hombres, y entre 4.0 y 5.3 millones para las mujeres. El RBC se puede encontrar disminuido en algunos tipos de anemias, mientras que tambin se pueden encontrar valores aumentados en pacientes talasmicos, policitemia vera, poliglobulias por estados de deshidratacin como los que se producen en pacientes quemados y en ancianos. Tambin existe una poliglobulia fisiolgica en los recin nacidos y en individuos que viven en altitudes elevada.

B. Hematocrito
Es otra forma de medir el recuento de glbulos rojos y es el porcentaje de glbulos rojos dentro del nmero total de clulas sanguneas en el organismo. Los valores normales fluctan entre 40 y 54% para los hombres y 37 y 47% para las mujeres. Los valores del hematcrito indican la densidad de la sangre as como su capacidad para llevar oxgeno. Un hematocrito bajo es otro indicador de anemia.

C. Hemoglobina
Es una protena presente en los glbulos rojos que lleva el oxgeno al organismo. Los niveles normales de hemoglobina son de 12 a 16 gramos por decilitro (g/dl) en las mujeres y de 14 a 18 g/dl en los hombres.

III.4. Anormalidades : Anemia y Policitemia

Anemia

DEFINICIN: Concentracin baja de hemoglobina en la sangre. Puede acompaarse de otros parmetros alterados, como disminucin del nmero de glbulos rojos, o disminucin del hematocrito. CAUSAS: Deficiencia de hierro CONSECUENCIAS: Cuando existe anemia severa, los tejidos y rganos del organismo no reciben suficiente oxgeno, la persona se siente cansada, su pulso esta acelerado, tolera mal el esfuerzo y tiene sensacin de falta de aire.

Policitemia

DEFINICIN: Trastorno en el cual aumenta el hematocrito. CAUSAS: Aumento del nmero de eritrocitospor volumen sanguneo. CONSECUENCIAS: cefaleas, vrtigo, alteraciones visuales y confusin mental.

IV.

MTODO OPERATORIO Hemograma Determinacin: Recuento de Glbulos Rojos Mtodo: Mtodo Sistemtico Tcnica: Dilucin con cmara de Neubauer Muestra: Sangre Cantidad: 0.5L Paciente: Varn de 23 aos de edad Recuento de Glbulos Rojos Fundamento:
Se fundamenta en la dilucin de sangre en el lquido de Gower que nos permite observar claramente los hemates, luego esta dilucin se coloca en una cmara de Neubauer con la ayuda de una pipeta automtica o pipeta Pasteur y se cuentan en el microscopio a un objetivo de 40x para calcular el nmero de glbulos rojos por mm3. Todo mtodo manual de recuento celular incluye 3 fases: Dilucin de la sangre Muestreo de la sangre diluida en un volumen Recuento de clulas en ese volumen

Recuento de Glbulos Rojos

 Alcohol al 70% Diluyente de glbulos rojos: Lquido de Gower Anticoagulante

REACTIVOS

Pipeta de Thoma para glbulos rojos (perla roja) Tubos de ensayo Cubrehematimetro Boquilla Equipo para venopuncion Algodn Vial Papel Filtro

MATERIALES

Microscopio Hemocitmetro: Cmara de Neubauer

EQUIPOS

PROCEDIMIENTO

Toma de sangre
Se practica puncin venosa. La sangre es recogida en un vial con anticoagulante.

Recoleccin de muestra
Colocar el tubo de plstico y la boquilla para aspirar en la pipeta. Llenar la pipeta de Thoma con 0.5 L de sangre.

Dilucin de la sangre
Introducir la pipeta de Thoma en el frasquito que contiene el diluyente (Gower) y llenar de lquido de dilucin hasta la marca de 101 (dilucin de 1/200). Limpiar la punta con papel filtro.

Muestreo de la sangre diluida en un volumen

Se hace rotar manualmente de 2 a 3 minutos. Descartar 3 a 4 gotas del tallo

Recuento de clulas en ese volumen

Colocar una gota pequea cerca de un extremo de la cmara para que por capilaridad se llene exactamente. Hacer el recuento con objetivo de 40x

V.

RESULTADOS

Recuento

Margen Superior izquierdo: Margen Superior derecho: Margen Inferior izquierdo: Margen Inferior derecho: Centro: TOTAL (N):

105 hemates 110 hemates 88 hemates 76 hemates 97 hemates

476 hemates

Clculos:
Frmula (hemates /mm3) = N x 10 x 200 x 400 80 Hemates /mm3 = 476 x 10 x 200 x 400 80 = 4, 760,000 Hemates /mm3

Valores de Referencia:

VI.

DISCUSIN
Como se sabe los eritrocitos o glbulos rojos son clulas de color amarillento, con la forma de un disco bicncavo, sin ncleo y contienen un pigmento llamado hemoglobina que les otorga su caracterstico color; lo que se realiz en la prctica es determinar que mtodo es el ms sencillo y eficiente para el recuento de este nmero de eritrocitos presentes en 1 mm 3 de sangre y ver si se encuentra dentro de los valores normales respectivos. Para ellos es necesario comentar la gran importancia durante todo el proceso, uno de ellos es la funcin que cumple el lquido de Gower, como medio de disolucin, ya que no solamente debe de diluir los eritrocitos hasta cifras legibles, sino que tambin permita identificarlos y que destruya otros elementos celulares que no son de inters en este momento. En general se puede usar cualquier solucin isotnica como diluyente un ejemplo es la Solucin salina de NaCl al 0.9%. Tambin es muy importante observar que en la cmara de Neubauer las reas de recuento de eritrocitos y linfocitos son diferentes. Los glbulos rojos se cuentan en las reas coloreadas de rojo, mientras que los glbulos blancos se cuentan en las reas coloreadas de azul. Para realizar el conteo se enfoca con el objetivo 40x, y se localiza el cuadro central con el condensador bajo y luz dbil. Para proceder al recuento, que se lleva a cabo en los cuadrados pequeos del retculo marcado en color rojo, contando las clulas en cada cuadro, en barrido o fila. Hoy en da tambin existen mtodos automatizados que aceleran los procesos de determinacin de glbulos rojo; sin embargo no suelen ser tan seguros para ciertos tipos de anormalidades de hemates.

VII.

CONCLUSIN
El mtodo sistemtico con la cmara de Neubauer para el conteo de Glbulos Rojo es el mtodo ms rpido y preciso, empleado hoy en da en la gran mayora de laboratorios de anlisis. El mtodo sistemtico nos permiti determinar la cantidad de Eritrocitos por milmetro cbico de sangre. Los eritrocitos o glbulos rojos son clulas de color amarillento, con la forma de un disco bicncavo, sin ncleo

Para nuestro paciente varn de 23 aos de edad se encontr un total de 4, 760,000 Hemates /mm3 de sangre.

VIII.

CUESTIONARIO 1. Cul es el fundamento del proceso de la hematimetra?

La Hematimetra se basa en cuantificar y evaluar diferentes grupos celulares, los glbulos rojos (hemates), los glbulos blancos (leucocitos), las plaquetas, el contenido de hemoglobina, y otros parmetros relacionados con su cantidad, forma y contenido. Los principios generales de este recuento se basan en 2 puntos bsicos, los cuales consisten: Primero escoger un lquido de dilucin, que no solamente diluya los eritrocitos hasta cifras legibles, sino que tambin permita identificarlos y que destruya otros elementos celulares que en ese momento no nos interesen. Segundo utilizar equipos automatizados o microscopio a 40x que nos proporcionen las lecturas del nmero de eritrocitos por mm3.

2. Cul es la composicin qumica de los lquidos de dilucin utilizados en Hematimetra?

Lquido de Dilucin Soluciones de Gower Componentes
Sulfato de sodio (Na2SO4) cido actico glacial Agua destilada Cloruro de Sodio (NaCl) Cloruro de Sodio (NaCl) Sulfato de sodio (Na2SO4) Cloruro de Magnesio(MgCl2) Agua destilada

Cantidad
12,5 g 33,3 mL c.s.p 200 mL 0.9% 5g 2.5g 2.5g c.s.p 1L

Solucin salina

Liquido de Hayem

3. Explique mediante un esquema el retculo de Thomas.

Conteo de Glbulos Rojos

4. Explique la frmula utilizada en el recuento de los Glbulo Rojos?

FRMULA: El volumen de sangre en el cual se han contado las clulas resulta de multiplicar la profundidad de la cmara (V) por el factor de dilucin (FD), la superficie de los cuadrados (S) y el nmero de cuadrados contados (X). Superficie de los cuadrados (S) Con la cmara de NEUBAUER: La Superficie de 1 cuadrado grande es igual (1/20 mm de lado)

Profundidad de la cmara (V) Volumen de un cuadrado grande (1/10 mm de profundidad)

Nmero de cuadrados contados (X) Si contamos "a" glbulos rojos en "n" cuadrados pequeos, el nmero de glbulos por cuadrado ser a/n.

Factor de dilucin (FD) Si la sangre se diluy a 1/200, habr que multiplicar el valor por 200
respectivamente.

 Si en un volumen 1/4000 mm3 hay a/n glbulos rojos, en 1 mm3 habr Y.

Luego:

Reemplazado en nuestra Frmula

Donde: aes el nmero de glbulos rojo encontrado.

5. Cul es el fundamento de los mtodos automatizados para el recuento de hemates? Seale los inconvenientes de estos equipos
EQUIPO AUTOMATIZADO DE CONTAJE CELULAR El "Cell Coulter" de la empresa Beckman-Coulter. Es un equipo de contaje celular que se basa en la medida de los cambios en la resistencia elctrica que se producen cuando una partcula no conductora en suspensin en un electrolito atraviesa un pequeo orificio.

En la imagen podemos observar una pequea abertura entre los electrodos es la zona sensible a travs de la que pasan las partculas que se encuentran en suspensin. Cuando una partcula atraviesa el orificio desplaza su propio volumen de electrolito. El volumen desplazado es medido como un pulso de voltaje. La altura de cada pulso es proporcional al volumen de la partcula. Controlando la cantidad de la suspensin que circula a travs del orificio es posible contar y medir el tamao de las

partculas. Es posible contar y medir varios miles de partculas por segundo, independientemente de su forma, color y densidad.

En la unidad de Citometra de flujo y Microscopia Confocal de los Servicios Cientfico-Tcnicos de la Universidad de Barcelona se dispone de contadores celulares. Sin embargo, es posible determinar la densidad celular empleando mtodos ms sencillos. Nos basta con una cmara de contaje celular, por ej. la cmara de Neubauer, y un microscopio. Una cmara de contaje celular es un dispositivo en el que se coloca una muestra de la suspensin a medir. El dispositivo presenta unas seales que determinan un volumen conocido (x microlitros). Al contar bajo el microscopio el nmero de partculas presentes en ese volumen se puede determinar la densidad de partculas en la suspensin de origen.

IX.

BIBLIOGRAFA

1. Joanna Kotcher Fuller. Instrumentacin quirrgica: teora, tcnicas y procedimientos. 4 Edicin. Editorial Mdica Panamericana. Madrid, Espaa 2007. Pg. 428-430

2. Mara Muoz Zambrano, Cecilia Morn Cortijo. Manual de procedimientos de laboratorio en tcnicas bsicas de hematologa. 1 Edicin. Instituto Nacional de Salud (INS). Lima, Per. 2005. Pg. 33-35

3. Jagner Hinostroza Inga. Conteo de Glbulos Rojos mediante Procesamiento de Imgenes y Redes Neuronales. 2006 PDF Disponible en [http://www.wiphala.net/courses/research/ST235/2006II/groups/proposal12.pdf]

4. Francisco Cullar Ambrosi,Francisco Falabella Falabella. Hematologia. 6 Edicin. Editorial CIB. Bogot, Colombia. 2004. Pg. 14-16