Comisin Oceanogrfica Intergubernamental

Manuales y Guias

11

DETERMINACION DE LOS HIDROCARBUROS DEL PETRLEO EN LOS SEDIMENTOS

1982 Unesco

PREFACIO

El presente informe ha sido preparado por la Comisin Oceanogrfica Intergubernamental (COI) de la Unesco con la colaboracin de un consultor, el Dr. Karsten H. Palmork, del Instituto de InvestigacionesMarinas, de Bergen (Noruega), a peticin del Progra.ma de las Naciones Unidas para el Medio Ambiente (PNUMA), por conducto del programa de su Centro de Actividades para el Programa de los Mares Regionales, el Programa Coordinado para la Investigacin y Vigilancia de la Contaminacin en el Mediterrneo (MEDPOL). Se agradece el apoyo prestado por el PNUMA.

Los mtodos analticos presentados -y sus limitaciones- han sido examinados y aprobados por el Grupo de Expertos de la COI sobre Mtodos, Patrones e Intercalibracin (GEMSI), a reserva de que, a medida de que se disponga de ms informacin en cuanto a la eleccin de los disolventes, el rendimiento de la extraccin, la eleccin de los patrones, etc., los mtodos propuestos se modifiquen en consecuencia.
Los mtodos presentados en este informe se han elaborado con el fin de servir de mtodos de referencia para determinar el petrleo en los sedimentos para el Programa MEDPOL. Sin embargo, como pueden tener una aplicacin mucho ms amplia que una mera zona regional, se publican para uso de los cientfficos marinos interesados de todo el mundo.

- 3 -

INDICE

1.
2.
3.

INTRODUCCION ........................................................ ALCANCE Y CAMPO DE APLICACION ....................................... REFERENCIAS Y MATERIAL DE CONSULTA .................................. PRINCIPIO ........................................................... REACTIVOS ...........................................................
5.1

6
6

4.
5.

7
7 8 8

Productos qumicos ........................................... Patrones internos ............................................

5.2
6.

APARATOS Y EQUIPO

...................................................

9
10 10

7.

PROCEDIMIENTO DE OBTENCION DE'MUESTRAS . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

7.1 7.2 7.3 7.4

8.

Planificacin................................................. Seleccin de los puntos de muestre0 .......................... Recoleccin y almacenamiento de muestras ..................... Tipos de muestras ............................................

1 0
12 13

PROCEDTMIENTO DE ANALISIS ...........................................

14
14

8 . 1
8.2 8.3 8.4 8.5

Preparacion de las muestras .................................. Determinacin del peso en seco

...............................

14
15

Mineralizacin de la matriz de sedimento .....................

Extraccin de los hidrocarburos del petrleo ................. 15 Separacin de alcanos . y compuestos aromticos utilizando c o l m a s de almina (utilizar antes del anlis.is por fluorescencia de rayos ultravioleta y del anlisis cromatogrfico en fase gaseosa capilar). . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Lavado de extractos utilizando columnas de slice

15
16

8 . 6 8.7

............

El mtodo de separacin por fluorescencia de rayos ultravioleta ............................................ Calibracin

18 20 23

8.7.1 8.7.2

..................................................

Ensayos en blanco

.............................................

- 4 -

8.7.3

Clculo de la concentracin de la muestra original ............ 23 Prueba del amortiguamiento de la fluorescencia ................ 23 Cromatografa en fase gaseosa utilizando columnas de relleno ..................................................... Cromatografa en fase gaseosa utilizando columnas capilares de slice fundida ................................... Cromatografa en fase gaseosa/espectrometra de masas computadorizadas (GC/MS/Comp) .................................

8.7.4
8.8

24

8 . 9

24

8.10

25 30
'

9.

BASE PARA LA OBTENCION DE DATOS DE CALIDAD

...........................

9.1
9.2 9.3 9.3.1 9.3.2 9.3.3 9.3.4

planificacin

................................................. ........................................

30 30

Garanta de la calidad

Definiciones de algunos trminos estadsticos La especificidad La sensibilidad La precisin

La exactitud

................. 31
31 31 31 31 31 34

..............................................
...............................................

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ...................................................

.lo. OBSERVACIONES FINALES ................................................

11 . APENDICE 1 ...........................................................

- 5 -

DETERMINACION DE LOS HIDROCARBUROS DEL PETROLEO EN LOS SEDIMENTOS

1.

INTRODUCCION

La necesidad de analizar los hidrocarburos del petrleo en los sedrmentos puede obedecer a diferentes razones. Por ejemplo, para citar algunas, i) al deseo de establecer los valores aniiientales antes de iniciar perforaciones frente a la costa o actividades de produccin de petrleo; ii) a que en la zona ae que se trate, un banco pesquero haya sido expuesto a un derramamiento de petrleo, o iii) a que la zona de que se trate est expuesta a contaminacin permanente proveniente de un trfico intenso o de una refineria. Todo este tipo de situaciones puede tener repercusiones sobre la vida marina y la pesca. En consecuencia, es de suma importancia conocer la extensin de la contaminacin por el petrleo, el grado en que ha afectado a la vida marina y la duracin de sus efectos. El anlisis de muestras de agua de mar de una zona revelern si la contaminacin sigue afectando o no dicha agua. El anlisis de muestras de peces grasos o del hgado de peces magros proporcionar informacin acerca del grado en que la contaminacin por el petrleo ha afectado a los peces. El anlisis de muestras de sedimentos puede revelar los resultados de las precipitaciones atmosfricas a lo largo del tiempo, los valores bsicos anteriores a la iniciacin de actividades que dan origen al vertimiento de contaminantes, los resultados de un derramamiento de petrleo, una infiltracin crnica, la contaminacin crnica originada por una refineria o simplemente el resultado de los hidrocarburos asociados con las partculas que se depositan, como grnulos fecales, organismos miiertos o vivos, minerales arcillosos y silicatos. A estas particulas se debe, por lo general, la remocin de los hidrocarburos de la columna de agua. Adems, los hidrocarburos del petrleo disueltos pueden ser absorbidos directamente por los sedimentos segn su contenido de materia endgena, como, por ejemplo, cidos hmicos. ?Qu tipo de metodologia debe utilizarse para obtener una estimacin de los hidrocarburos del petrleo? Se han descrito numerosos mtodos analticos acerca de cmo estimar estos hidrocarburos. Los mtodos van desde los gravimtricos (extractables no voltiles), la absorcin de rayos ultravioleta (poliolefinas conjugadas, compuestos aromticos), la fluorescencia de rayos ultravioleta (compuestos no saturados, compuestos aromticos, etc., segn la excitacin, la emisin, la extraccin y la volatilidad), los mtodos por rayos infrarrojos (IR) frecuencia de estiramiento de los grupos CHz-, 2930 c m ' , la cromatografia en fase gaseosa utilizando columnas de relleno (hidrocarburos totales, alcanos normales especificos, relaciones parafina normal/isoprenoides) , la cromatografia en fase gaseosa utilizando columnas de capilares de silice (fundida alcanos normales especificos e hidrocarburos aromticos policiclicos despus de su separacin previa sobre silice o slice cubierta con almina o almina solamente), a la cromatografia en fase gaseosa/espectrometria de masas sumadas a un sistema de datos (componentes especificos, componentes preseleccionados) utilizando el sistema en el modo de vigilancia de iones determinados "selected ion monitoring mode" (SIM).
El presente trabajo de referencia sobre mtodos tratar de los mtodos utilizados hasta la fecha (es decir, la fluorescencia de rayos u.ltravioleta, la cromatografa en fase gaseosa utilizando columnas de relleno o columnas capilares de silice fundida y la cromatografia en fase gaseosa/espectrometria de masas), todos los cuales han sido recomendados por diversos grupos,y ms recientemente por el Grupo de Expertos sobre Mtodos, Patrones e Intercalibracin (GEMSI) de la GIPME, en su cuarta reunin, celebrada en Curacao, Antillas Neerlandesas, del 25 al 31 de marzo de 1982.

- 6 -

Los tres mtodos requieren el mismo procedimiento cuidadoso para el tratamiento, el muestreo, la extraccin y la realizacin (vanse las secciones 7.3, 7.4 y 8.1, 8.2, 8.3, 8.4 y 8.5). Se producen diferencias en la etapa analtica, la utilizacin de instrumentacinylaexpresinde 10s resultados. En el mtodo de la fluorescencia por rayos ultravioleta (que se describe en la seccin 8.7) el resultado se presenta en forma de un nmero de unidades de criseno, una expresin del "petrleo" presente en la muestra. En el mtodo de la cromatografia en fase gaseosa utilizando una columna de relleno, el resultado se expresa como hidrocarburos totales "total hydrocarbons" (THC). En el mtodo de la cromatografa en. fase gaseosa utilizando columnas capilares y en el de la cromatografa en fase gaseosa/espectrometria de masas, los resultados pueden expresarse en forma de componentes especficos de alcanos normales, hidrocarburos aromticos policiclicos y a otros componentes determinados de antemano, o de los tres, utilizando la cromatoqrafia en fase gaseosa/espectrometria de masas en la modalidad de vigilancia de iones determinados (SIM). Los tipos de petrleo que pueden aparecer en el medio ambiente marino pueden diferir considerablemente e ir desde el petrleo crudo hasta diferentes destilados como el petrleo combustible para buques, el petrleo o las precipitaciones atmosfricas. Todos estos "tipos" de petrleo tienen algo en comn: contienen componentes que se disuelven en el agua de mar y componentes que son degradados por las bacterias y por la luz ultravioleta. En consecuencia, no es el caso de tratar de efectuar anlisis para determinar el contenido de "petrleo" como tal, ya que, una vez que ha llegado al mar, ya no existe en su forma original. Por lo tanto, el mtodo de la fluorescencia por rayos ultravioleta puede utilizarse en este caso como un mtodo de separacin para descubrir ''puntos calientes'' (es decir, zonas localizadas donde existen concentraciones sumamente elevadas de un contaminante) .

El fundamento terico del anlisis de los hidrocarburos del petrleo debe consistir en plantear las siguientes preguntas: qu tipo de componentes son los ms nocivos? qu componentes derivados del petrleo terminan en los sedimentos? Una vez contestadas estas preguntas, ha llegado el momento de analizar los componentes especficos.

2.

ALCANCE Y CAMPO DE APLICACION

Los mtodos de referencia descritos son el mtodo de seleccin por fluorescencia de rayos ultravioleta, un mtodo de cromatografia en fase gaseosa (FID) y un mtodo de cromatoqrafia en fase gaseosa/espectrometra de masas para determinar los hidrocarburos del petrleo totales y especificos en las muestras de sedimentos. Para el anlisis quimico de las muestras, se extraen los hidrocarburos con pentano despus de haber saponificado el sedimento bajo reflujo durante 1,5 horas con KOH netanolada. El extracto se separa en una fraccin de alcanos y una fraccin de compuestos aromticos en una columna de almina (vase la seccin 8.5 para los anlisis por fluorescencia de rayos ultravioleta, y mediante cromatografia en fase gaseosa capilar) y se purifica en una columna de gel de silice (vase la seccin 8.6 para los anlisis por cromatografia en fase gaseosa con columna de relleno y la cromatografia en fase gaseosa/espectrografia de masas). El limite de deteccin para los hidrocarburos del petrleo ''totales" es aproximadamente 1 mg/kq de sedimento ; para los hidrocarburos especficos es de 100 ng/kg.

3.

REFERENCIAS Y MATERIAL DE CONSULTA

Anon, 1980. Guidelines for Data Acquisition and Data Quality Evaluation in Environmental Chemistry. Analyt. Chem. 52 (1980) 2242-2249.

l -

Farrington, J.W., 1980. An Overview of the Biogeochemistry of Fossile Fue1 Hydrocarbons in the Marine Environment, en Petroleum in the Marine Environment, Advances in Chemistry Series 185, Leonid Petrakis y Fred T. Weiss eds., American Chemical Society, Washington D.C. 1980. Friedrich, H., 1973. Marine Biology. Sidgwick & Jackson, Londres. An introduction to its problems and results.

Futoma, D.J., Ruven Smith, S., Smith, T.E. y J. Tana.ka. 1981. Polycyclic Aromatic Hydrocarbons in Water Systems. CRS Press, Inc., Boca Raton, Florida, 1981. Hites, R.A., R.E. Laflamme y J.G. Windsor jr., 1980. Polycyclic Aromatic Hydrocarbons in Marine/Aquatic Sediments: Their Ubiquity, en Petroleum in the Marine Environment, Advances in Chemistry Series 185, Leonid Petrakis y Fred T. Weiss eds., American Chemical Society, Wa.shington D.C. 1980. McAuliffe, C.D., 1980. The Multiple Gas-Phase Equilibration Method and Its Application to Environmental Studies en Petroleum in the Marine Environment, Advances in Chemistry Series 185, Leonid Petrakis y Fred T. Weiss eds., American Chemical Society, Washington D.C., 1980. Moore, H.B. y Neil, R.G., 1930. An instrument for sampling marine muds. J. Mar. Biol. Ass. U.K. XVI: 589-594. Overton, E.B. y J.L. Laseter, 1980. Distribution of Aromatic Hydrocarbons in Sediments from Selected Atlantic, Gulf of Mexico, and Pacific Outer Continental Shelf Areas, en Petroleum in the Marine Environment, Advances in Chemistry Series 185, Leonid Petrakis y Fred T. Weiss eds., American Chemical Society, Washington D.C. 1980.

4.

PRINCIPIO

Despus de tomar una muestra del sedimento con una cuchara de van Veen o un sacatestigos de gravedad, los hidrocarburos del petrleo se aislan de las muestras de sedimentos mediante saponificacin con KOH metanolada durante 1,5 horas, seguida de extraccin con pentano. Se utiliza una submuestra para determinar el peso en seco. En las muestras con un elevado grado de contaminacin, la cantidad Yotal'' de hidrocarburos del petrleo puede estimarse utilizando un mtodo de examen mediante fluorescencia por rayos ultravioleta (seccin 8.7) y tambin por cromatografia en fase gaseosa con columnas de relleno y detector de ionizacin de llama, integrando ambos la mezcla compleja resuelta y no resuelta (seccin 8.8). Como patrn externo se utiliza un petrleo, tan parecido al petrleo contaminante como sea posible. Determinados hidrocarburos aromticos no biognicos '(por ejemplo, naftalenos, fenantrenos y dibenzotiofenos) , que son los compuestos aromticos predominantes en las muestras contaminadas por los hidrocarburos del petrleo, se analizan cuantitativamente utilizando una columna capilar de silice fundida, tres patrones internos (es decir, difenilo-dlO, antraceno-d10 y pireno-dl0 y un espectrmetro de masas como detector. En el caso de una muestra de sedimento anxico, el azufre elemental puede alterar el patrn de la cromatografia en fase gaseosa. Este problema puede mitigarse agregando una o dos gotas de mercurio metlico durante el periodo de reflujo o utilizando una columna de cobre. Sin embargo, si la mezcla se saponifica con KOH metanolada, el azufre se elimina por completo.

5.

REACTIVOS

Todos los reactivos utilizados deben ser de la mejor calidad que pueda obtenerse; grado p.a. o de cromatografia. Si los disolventes utilizados presentan blancos muy elevados, deben redestilarse para garantizar la mejor calidad.

- 8 -

5.1 5.1.1 5.1.2 5.1.3 5.1.4

Productos quzmicos Agua destilada Metano1 p.a. Merck 6009 Hidrxido Potsico (KOH) p.a. Merck 5033 Cuerpos slidos de ebullicin, Alundum (R) Aproximadamente 8 a 4 mallas. Cat. no 1590-D 18, Arthur H. Thomas Company, Filadelfia Pa. 19105, U.S.A. Pentano, -UvasolMerck 7179 Hexano, Uvasol Merck 4369 Nitrgeno, Grado 3 Acido crmico que contenga 4 g 6e dicromato potsico (K2Cr207) en un litro de cido sulfrico concentrado Gel de slice (Kieselgel 60) tamao de las particulas 0,63-0,125 mm (malla ASTM 120-230) Merck 9386 Oxido de aluminio, cido de Woelm (anionotrpico) grado de actividad 1 para cromatografia. M. Woelm ESCHWEGE, Alemania Patrones internos: Difenilo-dl0 MD-208 (99 tomos % D) Lot.nE B-1011. Merck & Co. Inc. Rahway,N.J.

5.1.5 5.1.6 5.1.7 5.1.8

5.1.9

5.1.10

5.2 5.2.1

o Merck Sharp & Dohme Canada Limited, Montreal, Canad .(NSD-ISOToPES)

5.2.2

Antraceno-di0 MD-46 (98 tomos % D) Lot. no C-570.

Merck & Co.,Inc. Rahway,N.J.

o Merck Sharp & Dohme Canada Limited, Montreal, Canad (MSD-ISOTOPES)

5.2.3 Pireno-di0 MD-363 (98 tomos % D) Lot. no C-569. Merck & Co., Inc.Rahway, N.J.

o Merck Sharp & Dohme Canada Limited, Montreal, Canad (MSD-ISQTOPES)

5.2.4 Una mezcla que contenga aproximadamente 0,5 ng de 5.2.1, 5.2.2 y 5.2.3 por ml disueltos en hexano. La mezcla puede prepararse de la siguiente manera: pasar 100 mg de 5.2.1, 5.2.2 y 5.2.3 a un matraz aforado y diluir hasta 100 ml con hexano; solucin A. Tomar 1 mldela solucinAy dilira100 ml con hexano. Un ml de esta solucin l g de cada uno de los patrones por (solucin B) contiene aproximadamente 10 r ml. Tomar 5 ml de solucin B y diluir a 100 nl con hexano. La solucin resultante (solucin C)' contiene aproximadamente 0,5 ng/ml de cada uno de los patrones deuterados. La pesada debe efectuarse con una exactitud de 0,0001 g y registrarse, de forma que pueda calentarse exactamente la concentracin de la solucin.

- 9 -

6.

APARATOS Y EQUIPO Cajas termoaisladas de plstico; durante los periodos de,calor utilizar un refrigerador (+l a +40C) o hielo para enfriar. Congelador (-18 a-200C-),si los viajes para la extraccin de muestras duran ms de 48 horas. Hoja de aluminio limpia para envolver las muestras de sedimentos. Frascos de vidrio limpios para las muestras de sedimentos. Etiquetas o marbetes para identificar las muestras de sedimentos (vase la Fig. 5)

6.1

6.2

6.3 6.4 6.5

6.. 6 6.7

Seis matraces de vidrio de 250 ml;

Quickfit o Jena.
+

Una balanza, E Mettler tipo B5, n9 14788 (-0,001xg) y una del tipo de las que se cargan por la parte superior K71 no 88298 (100-200 g) (20,l 9). Isomantel, tipo FSEu/lL/6, 220/240 voltios 6x280 'watios, fase S/PH, circuitos 1, nmero de serie WB 4649, Isopad i.td., Bosehamwood, Herts. Isopad F.E.R. Control tipo no 7422 Bx. Seis embudos de separacin de vidrio de 250 ml con vlvulas de cierre de tefln; vidrio borosilicatado BS 2021. Un Rotavapor; Rotavapor Bchi, EL, bao de temperatura y controlador. Glasapparatefabrik, Flawil (Siza), con

6.8

6.9 6.10

6.11

6.12 6.13 6.14 6.15 6.16 6.17

Matraces de vidrio de fondo redondo de 100 ml para el Rotavapor. Paquetes de viales (2 ml) 5080-8712, viale-4330-0525 P, Hewlett Packard. Paquetes de juntas hermticas, 9080-8713 Capsule-1540-0132. P Hewlett Packard. Un par de pinzas para cerrar los viales; Wheaton 224301, Millville, N.J.

Jeringa (100 ni) para transvasar disolventes (Hamilton). Jeringas (10 y ni) para la injeccin de la muestra en GC y GC/MS, jeringa Hamilton 7001, Supelco, 1 mc. Bellefonte, Pennsylvanie 16823. Cromatgrafo de fase gaseosa para columnas de relleno y columnas capilares de slice fundida. Cromatgrafo de fase gaseosa/espectrmetro de masas/sistema de datos adaptado para columnas capilares de vidrio ode-slice.fundida. Columnas capilares de vidrio o de slice fundida de aproximadamente 25 m x 0,21 mm d.i. revestidas de SE-52, SE-54'0 SP-2100. Estufa de desecacin u horno (1000 a 3000C)

6.18

6.19

6.20

6.21 6.22

Espectrofotmetro de fluorescencia por rayos ultravioleta.

NOTA:

10

Los objetos de vidrio que se utilicen por primera vez en el procedimiento (seccin 8) deben lavarse a fondo, utilizando el procedimiento siguiente:

- lavar con agua y jabn;

enjuagar con agua limpia, preferiblemente agua corriente, y finalmente enjuagar con agua destilada y dejar secar;

- dejar el material de vidrio con cido crmico (5.1.8), preferiblemente

toda la noche;

- enjuagar con agua, por ltimo, varias veces con agua destilada y dejar
secar.

7.

PROCEDIMIENTO DE OBTENCION DE MUESTRAS

El Plan de obtencin de muestras constituye la base de las operaciones relativas a los estudios de contaminacin por los hidrocarburos del petrleo y es,.en consecuencia, muy importante. Los diferentes mtodos de obtencin de muestras de sedimentos para el anlisis qumico pueden subdividirse en cuatro categoras: 1) planificacin, 2) seleccin de lugares de muestreo y del nmero de muestras necesarias para abarcar la zona de que se trate, 3) la recoleccin de las muestras (cuchara de van Veen o sacatestigos de gravedad) y tcnicas de almacenamiento, y 4) tipo de muestras

7.1

Planificacin tipo de situacin

Debe elaborarse un plan de obtencin de muestras segn el que haya de investigarse.

Es poco probable que los sedimentos contengan una cantidad apreciable de hidrocarburos disueltos, ya que el petrleo habria pasado a travs de la columna'de agua antes de llegar a los sedimentos. Lo ms probable es que los hicrocarburos solubles hayan desaparecido antes de que las gotas hayan alcanzado los sedimentos (McAuliffe, 1980). Antes de iniciar un estudio o vigilancia, debe trazarse una lnea de referencia: el ritmo de sedimentacin es normalmente lento y la obtencin de muestras una vez por ao o cada dos aos debera bastar para controlar las tendencias.
7 ' . 2

Seleccin de los puntos de muestreo

Los puntos de muestreo se determinan, por lo comn, sobre una amplia cuadrcula que abarque la zona geogrfica afectada por un derramamiento de petrleo, que se elige como zona de referencia, o donde vayan a tener lugar en el futuro las actividades de perforacin (Fig.1)

Como el anlisis de las muestras de hidrocarburos del petrleo es costoso, han de seleccionarse cuidadosamente tanto el nmero de muestras recogidas como los puntos de muestreo. Las muestras deben seleccionarse de manera que permitan el logro de los objetivos fijados; por lo comn, esto significa recoger muestras en exceso cuando slo se seleccionara un nmero determinado de muestras para su anlisis, en una etapa posterior.

11

Siempre que sea posible han de recogerse muestras por duplicado en cada punto de la cuadrcula. El anlisis de los duplicados permitir determinar la varianza en los parmetrcs medidos. Esta varianza puede utilizarse luego para indicar el nmero de muestras duplicadas necesario para detectar un cambio estadstico en los valores medidos dentro de unos lmites de confianza especificados. El nmero de muestras duplicadas calculado para fines estadsticos da por supuesto que losvalores presentan una "distribucin normal" (es decir, que son Gaussianos, Fig. 2 ) .

3 n.m.

---- -I I I I
l I

7 0 ! !

I I
I

2 n.m.

Fig. 1

Sistema de cuadrcula para la obtencin de las muestras de sedimentos. = estaciones de muestreo; A = posiciones de perforacin; la flecha seala en la direccin de la corriente residual.

T
X
a

Fig. 2

Distribucin normal, curva de Gauss.

- 12 Esta distribucin se encuentra por lo comn cuando los hidrocarburos de petrleo presentes en el sedimento reflejan la precipitacin atmosfrica a travs del tiempo. Si los componentes presentes se han originado en un derramaniento reciente, con una distribucin desigual de petrleo en los sedimentos, las concentraciones de los hidrocarburos en un grupo de muestras duplicadas pueden no estar distribuidas normalmente y, en consecuencia, no son de aplicacin las pruebas de Student "t-tests". En tales casos, estas muestras deben clasificarse segn el lugar causante de la contaminacin. 7.3 Recoleccin y almacenamiento de muestras Las muestras de sedimentos pueden tomarse con una cuchara de van Veen.

Fig. 3-Cuchara de van Veen para recoger muestras de sedimentos (segn H. Friedrich).

Una vez recuperado el tomamuestras, debe dejarse escurrir el agua, evitando alterar la capa superficial de las muestras. De la capa superior de 5 cm deben tomarse cuidadosamente submuestras por duplicado de aproximadamente 500 ml, a travs de la abertura de la parte superior del tomamuestras (Fig. 3). Tan pronto como se han obtenido las submuestras, deben envolverse en hoja de aluminio o colocarse en frascos de vidrio y congelarse inmediatamente a -2OOC para proceder posteriormente a su anlisis. Las muestras de sedimentos pueden recogerse tambin utilizando un sacatestigos para sedimentos provisto de un revestimiento interno de vidrio (Moore y Neil, 1930, Fig. 4).

El revestimiento de vidrio que contiene la muestra de sedimentos puede congelarDespus de deshelarlo con una toalla caliente, el sedimento puede sacarse a presin del revestimiento de vidrio y cortarse con un cuchillo en las longitudes deseadas.
se.

- 13 -

agua

a.
sedimento

b.

Fig. 4 - a. Revestimiento de vidrio de un sacatestigos de gravedad. El sedimento de la parte superior puede utilizarse para el anlisis de tendencias. b. Esquema del sacatestigos completo.

Una vez obtenida la muestra de sedimento, es muy importante almacenarla en un lugar seguro un marbete en que estn consignadas su identidad y toda la informacin necesaria (Fig. 5). En todo momento.la muestra debe protegerse de la luz del sol y mantenerse ya sea en un refrigerador ( + 1 a +40C) o en una caja termoaislada enfriada con hielo hasta que pueda congelarse, preferiblemente entre -18 y -2O.OC.

7.4

Tipos de muestras

En algunos casos, al tomar muestras de sedimentos (por ejemplo, en el caso de derramamientos de petrleo), es aconsejable recoger, adems, otros tipos de muestras para su anlisis qumico. Debe tomarse una muestra del petrleo contaminante (1-5g) para determinar su origen e identidad. En algunos casos, deben recogerse muestras de agua (3-5 1) pa.ra determinar si sigue presente la Contaminacin por el petrleo e las masas de agua y deben recogerse tambin organismos marinos para analizar en R1l.o~los hidrocarburos del petrleo , establecindose asi el grado de contaminacin.

CHAIN OF CUSTODY RECORD

14

E N W RO N MENTAL PROTECTION AGENCY

OlSPOSlTlOH O C S C M ? L E S A M C L E HO.

SIGNATURE

TIME T A X E H InOURSI O A T E T A U E H
FRESERVATIVC

S O U R C E OF S A M C L E

; > : : a

OlfPOSlTlOH O F S A H P L L

SIGHATURC

SIGHATURE
O

L
Fig. 5.

Marbete para la identificacin de las muestras recogidas (utilizado por la U.S. Environmental Protection Agency).

8.

PROCEDIMIENTO DE ANALISIS Preparacin de las muestras

8.1

Se pesa un matraz limpio y seco, de fondo redondo, habindole quitado el tapn esmerilado y se anota el peso. Se pesan aproximadamente 150 g con una exactitud de 0,1 4 . del sedimento parcialmente deshelado y se anota el peso exacto y se calcula el peso en hmedo.

8.2

Determinacin del peso en seco

Se coloca en la estufa de desecacin o en el horno secador (a 1000 durante dos horas), utilizando un par de pinzas limpias, un frasco de pesada limpio, al cual se le habr quitado el tapn esmerilado. Es importante utilizar las pinzas cada vez que se toque el vidrio, para evitar que queden huellas de los dedos y partculas de polvo en el frasco de pesadas. El tapn y el frasco se ponen en un desecador a enfriar . Luego se pesan cuidadosamente el frasco vaco y el tapn en una balanza analtica. El peso obtenido es el peso del frasco de pesadas seco y vaco y del tapn. Se anota el peso. S e quita el tapn y se colocan 25 a 50 g de material de sedimento en el frasco de pesadas y se vuelve a poner el tapn. Se determinan cuidadosamente el peso del frasco de pesadas deL tapn y del sedimento. El peso obtenido es el peso en hmedo del sedimento ms el peso del frasco y del tapn. Se coloca el frasco en la estufa de desecacin o en el horno (lOOO), quitando el tapn y colocndolo tambin en el horno. Al cabo de 24 horas, se vuelve a colocar el tapn en el frasco, se saca el frascon el tapn del horno secador, y se colocan ambos en un desecador a.enfriar. pesa el frasco tapado y se anota el peso. Se repite el ciclo desecado hasta que diferencia entre pesadas sucesivas sea inferior al 5% del peso total. Se anota peso en hmedo (PH) y el peso en seco (PS)y se calcula la razn entre ambos (PH/PS).

co Se la el

Nota: Al analizar hidrocarburos del petrleo en sedimentos, se produce menos alteracin si la muestra de sedimento se pesa en hmedo en lugar de secarla a 1000. Sin embargo, si se registran tanto el peso en hmedo como el peso en seco, los valores pueden compararse con los valores registrados anteriormente.

- 15

b.3

Mineralizacin de la matriz de sedimento

El equipo necesario para esta fase se muestra en la Fig. 6. A 80-100 g. de muestra de sedimento hmedo en un matraz de fondo redondo se agregan 100 ml de metanol bidestilado, 3 0 de KOH y cuerpos slidos de ebullicin. Se aade 1 ml de una mezcla de patrn interno que contenga 0,5mg./ml de bifenilo antraceno y pireno denterados respectivamente disueltos en hexano. Se hace refluir la mezcla durante 1 hora 30 minutos (Fig. 7).
8.4 Extraccin de los hidrocarburos del petrleo

Se enfra el extracto de metanol a la temperatura ambiente, se pasa a un embudo de separacin (Fig. 8) y se extrae dos veces con 25ml de pentano (Uvasol)' Se separa la fase de metanol de la fase de pentano y se pasa esta ltima a un matraz de evaporacin y se reduce el volumen a 0,5ml utilizando un Rotavapor (Fig. 9). Se trasvasa cuantitativamente el volumen reducido a un vial de vidrio utilizando pentano (Fig. 10). Se. concentra cuidadosamente este extracto hasta obtener aproximadamente 0,2 ml utilizando N gaseoso seco antes del lavado en una columna de almina 2 (5.1.10).

Fig. 6.

Vista de conjunto del equipo necesario para tratar las muestras de sedimentos, A = N (5.1.7), B = vial (6.13), C = KOH (5.1.31, D = metanol (5.1.2) 2 E = cuerpos slidos de ebullicin (5.1.4), F = patrones internos (5.21, G = -pentano (5.1.5), H = muestra de sedimento-1 = embudo de separacin (6.10) y J = montaje para el reflujo de muestras (6.8).

8.5

Separacin de alcanos y compuestos aromticos utilizando columnas de almina (utilizar antes del anlisis por fluorescencia de rayos ultravioleta y del anlisis cromatogrfico en fase gaseosa capilar)

Se llena hasta unos 5 cm (1,15 9.) con xido de aluminio (5.1.10) una pipeta de Pasteur provista de un tapn de lana de vidrio. La columna se lava tres veces con 2 ml de pentano (5.1.5) y se agrega el extracto de la muestra a la parte superior de la columna. La elucin se efecta como se indica en el Cuadro 1. Los diferentes eluatos se evaporan a sequedad utilizando un chorro de N 2 gaseoso. Para el mtodo de fluorescencia por rayos ultravioleta, se disuelven los residuos que

- 16

contienen los compuestos aromticos (es decir, las fracciones 3 y 4) en hexano libre de compuestos aromticos y se trasvasan cuantitativamente a un matraz graduado de 1 5 ml y se aade hexano hasta la marca. Para el anlisis cromatogrfico en fase gaseosa, se disuelven los residuos en una cantidad conocida de hexano (entre 40 ml y 1 ml, segn la concentracin de los hidrocarburos).

Fig. 7.

El matraz que contiene el sedimento, el metanol, el KOH y los cuerpos slidos de ebullicinestnlistos para el reflujo.

8.6 Lavado de extractos utilizando columnas de slice

Se llena con 0,5 g de slice (5.1.9) una pipeta de Pasteur provista de un tapn de lana de vidrio. Se lava la columna 3 veces con pentano (5.1.51, luego se coloca la muestra en la parte superior de la columna y se lava el vial 3 veces con 1,O ml de pentano. Se eluyen los componentes del petrleo totalmente con 12 ml. de pentano en total. Se reduce el extracto de pentano a sequedad utilizando un chorro de N 2 gaseoso.

Fuadro 1.

17

Elucin de las diferentes fracciones en la separacin de alcanos y compuestos aromticos (de un extracto de sedimento).

Eluclto NO
1 2

ml. de eluata

disol vente de elucin pentano pentano

relacin de disolvente

fracciones resultantes alcanos disolvete solamente compuestos aromticosa) compuestos aromticos superioresb)

4 4 4 4

pentano: diclorometano diclorometano

7: 3

~~~

~~~

(para la ilustracin de las separaciones, vase la Fig. 13, pg. 21).

b)
b)

Para el equivalente del eluato Para el equivalente del eluato

3, vase la Fig. 14 a. 4, vase la Fig. 1 4 b.

Para los anlisis cromatogrficos en fase gaseosa que utilizan una columna de relleno y tambin para la cromatografa en fase gaseosa/espectrometra de masas en la modalidad SIM, se disuelve el residuo en una cantidad conocida de hexano (entre 40 ml y 1 ml segn la concentracin de los hidrocarburos).

Fig. 8.

Trasvase del extracto de metano1 a un embudo de separacin (6.10).

18 -

Fig. 9. Reduccin del extracto de pentano bajo presin reducida utilizando el Rotavapor (6.11).
8.7

El mtodo de separacin por fluorescencia de rayos ultravioleta

Se presenta a continuacin la metodologa relativa al anlisis de los hidrocarburos del petrleo utilizando la fluorescencia de rayos ultravioleta. Al efectuar estos anlisis, deben tenerse constantemente en cuenta los puntos mencionados en el Apndice 1. Se introduce una muestra del extracto disuelto en n-hexano, en una clula de slice de 1 cm tapada. Se mide la intensidad de la fluorescencia a 360 nm (excitaA ser posible, se investigarn los espectros de excitacin y de emicin a 310 nm). sin de cada muestra. La mezcla de sustancias fluorescentes (esto es, los bencenos sustituidos, los naftalenos y los compuestos aromticos policclicos) contenidos en los aceites combustibles brutos y residuales se excita ms intensamente a 310 nm y emiten una fluorescencia ms intensa en la proximidad de 360 nm.

- 19

Fig. 10.

Trasvase del volumen reducido del extracto de pentano a un vial (6.13) utilizando una pipeta de Pasteur.

Fig. 11.

Se utilizan unos alicates (6.15) parE sellar el vial que contiene el extracto que ha de inyectarse en el cromatgrafo de fase gaseosa.

- 20

Fig. 12.

Inyeccin de la muestra en el cromatgrafo de fase gaseosa, HP 5880 (6.18), equipado zon una columna capilar de slice fundida (6.20).

8.7.1 Calibracin La intensidad de la fluorescencia de la solucin de hexano se compara con la fluorescencia de una solucin de referencia. Debe utilizarse criseno como sustancia de referencia patrn, a menos que se disponga de una sustancia de referencia ms adecuada. La solucin de criseno ha de tener aproximadamente la misma intensidad de emisin que el extracto desconocido. Las calibraciones se harn al menos una vez al da en condiciones operatorias idnticas.

- 21

. . .

fenantreno

fenantrenos - C 1 fenantrenos - C,

Fig. 13.

Separacin del extracto de una muestra de sedimento de Spitsbergen (derramamiento de petrleo en la mina de carbn de Svea (1979)). a) antes de la separacin sobre alhina cida b) 1. eluato 4 ml de pentano; fraccrn de alcanos c) 2. eluato

4 ml 4 ml

de pentano de pentano; CH2C12 (7:3): fraccin de compuestos

d) 3. eluato aromticos

(vase la pg. 17, Cuadro 1, seccin 8.5).

22

O d a,

4J

iH a,
ci k
(d

( d

. .
n o
1 II>
I w

AOQC

Fig. 14a.

Una mezcla de hidrocarburos aromticos policclicos (PAH) cromatografiados sobre almina cida (8.51, 3. eluato (4 ml de pentano.:

1
Flg. 14b.

Una mezcla de hidrocarburos aromticos policTclicos (PAH) cromatografiados sobre almina cida (8.5), 4. eluato (4 ml de CH2Cls).

8.7.2 Ensayos en blanco

23

A lo largo de todo el procedimiento, hay que tener mucho cuidado de cerciorarse de que no se contaminen las muestras; por ejemplo, hay que evitar la exposicin innecesaria de la muestra de sedimento, el n-hexano o el extracto final a la atmsfera o a otras fuentes potenciales de contaminacin. Se debe verificar frecuentemente, mediante ensayos en blanco, que los disolventes y el equipo no estn contaminados. Lo mejor es recorrer todo el procedimiento omitiendo la muestra de sedimento. Si en los ensayos en blanco se manifiesta una fluorescencia lo bastante elevada como para indicar la existencia de contaminacin (es decir, si la fluorescencia es mayor que la correspondiente a 1 microgramo por litro de criseno), deben eliminarse las fuentes de contaminacin en lugar de corregir los valores obtenidos en funcin del valor en blanco.

8.7.3

Clculo de la concentracin de la muestra original

La concentracin de hidrocarburos en el extracto de la muestra, en equivalentes de criseno, se lee a partir de la curva de calibracin del criseno y se corrige cualquier fluorescencia del blanco. La concentracin de la muestra original en equiva'lentesde criseno se calcula entonces de la siguiente manera: A=--.-B x C D A = concentracin de hidrocarburos en las muestras originales en pg/g B = Concentracin en el extracto de la muestra enl_lCT/ml
C

= =

Volumen del extracto en ml.

Peso de la muestra original en gramos

El resultado obtenido es la concentracin equivalente. de criseno enpg/gramos.

8.7.4 Prueba del amortiguamiento de la fluorescencia Puede darse que existan en la muestra en concentraciones elevadas, otros compuestos distintos de los hidrocarburos; que podran amortiguar o inhibir la fluorescencia de los hidrocarburos de la muestra. A fin de comprobar si es as, puede realizarse el siguiente ensayo:
i)

se mide la fluorescencia del extracto de la muestra; se mide la fluorescencia del patrn criseno;

ii)

iii) se mezclan volmenes iguales del extracto de la muestra y del patrn criseno y se mide la fluorescencia de la mezcla;
La fluorescencia de la mezcla debe ser igual a:

fluorescencia fluorescencia del de1 patrn de criseno + extracto de la muestra 2 2 Si la fluorescencia es menor en un 20% o ms que el valor previsto, existe un amortiguamiento importante y debera intentarse un lavado de la muestra (8.6) Fluorescencia de la mezcla

- 24 8.8 Cromatografa en fase gaseosa utilizando columnas de relleno

Para estimar el "petrleo total" en los sedimentos, puede recurrirse a la cromatografa en fase gaseosa con columnas de relleno, si bien con este procedimiento se pierde mucha informacin. Se inyectan 2 p1.del extracto de la muestra, sometido al procedimiento de lavado (8.6), en el cromatgrafo de fase gaseosa (vase el Cuadro 2 en lo que respecta a las condiciones cromatogrficas). Puede utilizarse la solucin siguiente como muestra de referencia: 2p1. de una solucin quecontenga150 mg de petrleo crudo o del petrleo de que se trate en 25 ml de hexano; se inyectan 12 pg. Los cromatogramas pueden integrarse empleando un integrador o un planmetro. Ha resultado provechoso integrar solamente una por lo tanto, se "ventana" del cromatograma; por ejemplo, entre n-C 5 y n-C2 ' debe integrar y determinar el rea por pg. de petrleo de regerencia para estimar el y n-C "petrleo total" empleando el rea entre n-C 26' 15

El petrleo de referencia ha de analizarse en condiciones idnticas a aquellas en que se analizan las muestras reales.
cuadro 2. Condiciones para la cromatografa en fase gaseosa en columna de relleno.

Un cromatgrafo de fase gaseosa equipado con un detector de ionizacin por llama Gas portador: Columna : Nitrgenow17 ml/min 200 cm x 4 mm d.i. 3% SP 2100 sobre Chromosorb 80-100 de malla W HMDSO 3000~ 350012 Valor inicial 800C Tiempo inicial 3 min. Coeficiente de programacin 8oC/min. Tiempo final 15 min. 2p1.

Temperatura de inyeccin: Temperatura de admisin: Programacin de las temperaturas :

Volumen inyectado: 8.9

Cromatografa en fase gaseosa utilizando columnas capilares de srllice fundida -

Se inyectan 1-2vldel extracto de la muestra, sometido al procedimiento de separacin indicado supra (seccin 8.51, por la tcnica de inyeccin continua. Las condiciones cromatogrficas figuran en el Cuadro 3. Cuadro 3.. Condiciones para la-:cromatografaen fase gaseosa en columnas capilares Cromatgrafo de fase gaseosa HP 5880A equipado con un detector de ionizacin por llama. Gas portador: Gas de relleno: Columna : 2 Nitrgeno a 8 libras/pulg , 1,5 ml/min Nitrgeno 40 ml/min 25m x 0,33 mm d.i. slice fundida SE-54

- 25 Temp. de inyeccin: Temp. ( 3 e admisin: Programacin de la temperatura : 2 8 0 ~ 2 8 0 ~ Valor inicial 40oC Tiempo inicial 4 min. Coeficiente de programacin 10oC/min. Tiempo final 15 min. 1,5 &l continuo.

Volumen inyectado:

Las reas correspondientes a los picos se miden utilizando un sistema electrnico de integracin y se consigue la identificacin comparando los tiempos de retencin de la fase gaseosa cromatogrfica con los de patrones conocidos y con anlisis anteriores de cromatografia en fase gaseosa/espectrometra de masas de muestras similares utilizando condiciones idnticas y la nisma columna. La cuantificacin de las reas mximas identificadas e integradas se realiza por comparacin con el patrn interno ms aproximado.

8.10 Cromatografa en fase gaseosa/espectrometra de masas computadorizadas ( GC/MS/Comp

Se inyectan 0,3pJdelextracto de la muestra, sometido al procedimiento de lavado antes descrito (8.6) , por la tcnica de inyeccin continua. Las condiciones cromatogrficas se describen en el Cuadro 4. Cuadro 4. Condiciones para el cromatgrafo en fase gaseosa/espectrmetro de masas computadorizadas (GC/MS/Comp)

Finnigan GC/MS/Comp Modelo 9000/3200F/6100

Gas portador:

Helio 1,5 , x l / m i n 25 m x 0,2 mm d.i. slice fundida Sp 2100

Columna : Temp. de inyeccin: Programacin de las temperaturas:

2 8 0 ~ valor inicial 200C, luego 20-100SC en 1 min. tiempo inicial 1 min. coeficiente de programacin 6nCJrnin. de 100-2300C tiempo final 5 min. isotrmico O, 3 p-3-continuo

Volumen inyectado:

La columna se extiende en toda la longitud a la fuenteinica en el espectmetro de masas Finnigan 3200. Se ha demostrado que se pueden analizar los hidrocarburos aromticos que se indican a continuacin utilizando la modalidad de vigilancia de iones determinados (SIM), Cuadro 5. Las Figs. 15a y 15b en las pginas 28 y 29 son ejemplos de cromatogramas de hidrocarburos aromticos seleccionados obtenidos por la modalidad de vigilancia de iones determinados (SIM).

Cuadro 5.

Hidrocarburos aromticos seleccionados para los anlisis

Componentes Naftaleno Metii-naftalenos (C 1 Naftalenos-C 2 Naftalenos-C3 Fenantreno Metii-fenantrenos (C 1 Fenantrenos-C 2 Metil-dibenzotiofenos (C 1 Dibenzotiofenos-C 2 Dibenzotiofenos-C 3

Iones moleculares m/z m/z m/z m/z m/z m/z m/z m/z m/z m/z 128 142 156 170 178 192 206 198 212 226

La cuantificacin de los naftalenos se basa en el patrn interno, bifenilo deuterado (in-164). Se utiliza antraceno deuterado (in-188) para la cuantificacin del fenantreno, del metil-fenantreno y del metil-dibenzotiofeno; y se emplea pireno deuterado (in-212) para la cuantificacin del dimetil-fenantreno, el dimetildibenzotiofeno y el trimetil-dibenzotiofeno. Las reas comprendidas bajo los diferentes picos se calculan utilizando una computadora Finnigan 6100. Los factores de respuesta para los distintos hidrocarburos aromticos relativos a los patrones deuterados, bifenilo, antraceno y pireno, se determinan inyectando cantidades conocidas de los componentes aromticos elegidos en una mezcla de crudo de Ekofisk (rico en naftalenos y fenantrenos) y de crudo ligero de Arabia (rico en dibenzotiofenos) . Se cromotografan 20 mg de crudo de Ekofisk en una columna de slice corta de slice en una pipeta de Pasteur). Se activa el gel de slice (120-230 algunos de los mallas) durante la noche a 1 0 5 W antes de SU empleo. Los alcanos (-y naftalenos inferiores) se eluyen con 7 ml de pentano. La fraccin aromtica se eluye a continuacin con 5 ml de pentano. El eluato se evapora a sequedad y se disuelve a continuacin en 100plde hexano.
(2,5 cm

El petrleo bruto ligero de Arabia se trata del mismo modo para obtener una mezcla aromtica rica en dibenzotiofenos. Estas dos mezclas se analizan utilizando la cromatografa en Fase gaseosa con un detector de ionizacin por llama (FID), una columna capilar y en las mismas condiciones que las empleadas para los anlisis GC/MS. Se parte de lalliiptesis de que los componentes que se asemejan entre s dan la misma respuesta por unidad de peso. La composicin de las mezclas aromticas (en porcentaje) se calcula a partir de las reas de los diagramas GC. Cuando se conoce la composicin, se aden cantidades exactas de naftaleno, 2,6-dimetiinaftaleno y 2,3,6-trimetilnaftaleno, de forma que se puedan determinar los naftalenos. Se aade fenantreno para determinar el metil-fenantreno y el metil-dibenzotiofeno, y fluoranteno para determinar el dimetil-fenantreno, el di y eltrimetil-dibenzotiofeno. Se analizan entonces las nuevas mezclas por GC y se integran las reas correspondientes a los picas. La informacin resulta ya suficiente para determinar los naftalenos, fenantrenos y dibenzotiofenos en la mezcla aromtica.

- 27 Para poder calcular los factores de respuesta correspondientes a los diferentes hidrocarburos aromticos por GC/MS, se aaden cantidades conocidas de los tres patrones deuterados a las mezclas aromticas y se analizan entonces las muestras por GC/MS siguiendo la modalidad SIM. Dado que se conocen tanto la cantidad de hidrocarburos aromticos como los patrones deuterados, pueden calcularse los factores de respuesta. Ejemplo :

El factor de respuesta (fr) del naftaleno respecto del bifenilo-d10 es el nmero por el que se multiplica el rea del fragmento-128 (el naftaleno se detecta utilizando el in-128) para obtener la cantidad verdadera. El factor de respuesta del naftaleno se calcula del siguiente modo:
fr

,= cantidad conocida de naftaleno/rea del naftaleno

cantidad conocida de patrn interno (bifenilo-d 10)/rea del patrn interno
.v.

fr

18,5/733351 - o,66 37,3/980978

, .

La cantidad de naftaleno, fenantreno, etc., procede de la mezcla patrn.

El factor de respuesta del fenantreno se calcula utilizando patrn interno = antraceno-d 10

La mezcla aromtica patrn se prepara utilizando mezclas de petrleos crudos Ekofisk y ligera de Arabia a las que se aaden cantidades conocidas de los patrones ( . o s hidrocarburos aromticos en las mezclas de petrleo bruto se cuandeuterados. ? tifican por GC/MS/SIM y se calculan entonces los factores de respuesta (vase supra). La mezcla resultante se utiliza entonces como patrn para el clculo de los factores de respuesta utilizados para la cuantificacin de los naftalenos, fenantrenos y dibenzotiofenos. Cuadro 6. Cantidad en lg/ml. de los diferentes hidrocarburos aromticos en el petrleo patrn determinada por el GC (FID).

Eompuesto
naftaleno metil-naftaleno naftaleno-C 2 naftaleno-C 3 BIFENILO-D10

p ,/mi
18,5 81,6 115,6 75,7 37,3

Compuesto fenantreno 6,2 3310 20,7 29,3 fenantreno-C 2 dibenzotiofeno-C 20,5 47,3

ANTRACENO-~10
metil-fenantreno metil-dibenzotiofeno

dibenzotiofeno-C 29,8 3 PIRENO-DI0 33,2

28

RR 1

PATRON AROMaT ICO m2-2-8 1

F 1 R 2

PATRON AROMATIC0 26-2-81

17l3

1m

1
N

!TMN
c12
I
.

164

1s

128

1u

200

3 8 L I

480

100

m C I

rn

4aa

Fig. 15a.

.. Cromatograma en fase gaseosa de . lassolucinaromtica patrn de una columna capilar con deteccin espectromtrica de masas SIM, en la que figuran los siguientes picos:

Registro AAln : 99-alcanos 128-naftaleno 142-metil-naftalenos 170-trimetil-naftalenos

Registro A.2: 99-alcanos 156-dimetil-naftalenos 164-difenilo-d 10 (patrn interno) 179-trimetil-naftalenos

El registro AA1 es el espacio de almacenamiento en el sistema de datos.

29

f i R 4

PATRON AROMATICO 26-2-81

f i R 5

PATRON AIiOMATICO m 2 8 1

1
I
192
188

226

TMD

212

1EO

26U

360

466

Fig. 15b.

Cromatograma en fase gaseosa de la solucin aromtica patrn de una c o l m a capilar con deteccin espectomtrica de masas SIM en que figuran los siguier,tes picos : 178-fenantreno 188-antraceno-d10 (patrn interno) 192-metil-fenantrenos 198-metil-dibenzotiofeno Registro AA5: 202-fluoranteno, pireno 206-dimetilfenantreno nos 2 12-dime. tiofeno , pireno-d 10 (patrn interno) 226-trimetildibenzotiofeno

Registro 4 :

- 30 9. BASE PARA LA OBTENCION DE DATOS DE CALIDAD

Para garantizar la mejor calidad posible de las mediciones analticas del medio ambiente que se llevan a cabo, el Comit para el Mejoramiento del Medio Ambiente de la Sociedad Americana de Qumica (ACS) encarg a su Subcomit sobre Quimica Analitica Whientallaelaboracinde unaserie dedirectrices: "DirectricesparalaAdquisicin de Datos y la Evaluacin de la Calidad de los Datos en materia de Qumica Ambiental". Estas directrices son tiles para la realizacin de anlisis qumicos fiables de las muestras ambientales y, por lo tanto, deberan permitir un intercambio y utilizacin de mayor confianza entre laboratorios de los datos obtenidos. Este captulo se basa principalmente en las ideas expuestas en las citadas directrices. Las mediciones analiticas ambientales se llevan a cabo para una diversidad de fines (vase la introduccin). La amplia gama de necesidades en materia de datos analticos y los muchos modos de utilizar la informacin pueden requerir distintos grados de certidumbre analtica. Por ende, resulta importante establecer la necesidad de exactitud en cada situacin. Existen muchas fuentes de dificultades en los anlisis ambientales: un gran nmero de compuestos orgnicos; una amplia variedad de parmetros, ausencia de conocimientos tcnicos o lagunas en ellos, sesgo en el muestreo, errores sistemticos y humanos figuran entre las. dificultades enumeradas en las "Directrices". Planificacin. Dadas todas estas dificultades, la exactitud es muy difcil de lograr. Tiene, por tanto, la mayor importancia la buena planificacin de cada etapa de los trabajos. Este tipo de plan o de modelo se halla de manera implcita o explcita en la base de todo procedimiento de medicin. Los datos se generan y utilizan para responder cuestiones de las que puedan sacarse conclusiones. Si el modelo, es decir, las interxelaciones de los datos con el problema, es falso, las conclusiones sacadas sern igualmente errneas, incluso si las mediciones son de buena calidad.

9.1

El plan modelo debera basarse en un esfuerzo de cooperacin entre el analista, que conoce las tcnicas de medicin, el cientfico que utilizar los datos y el estadstico que eventualmente evaluar los mismos. Es ms, no debera emprenderse un programa de mediciones en tanto no se haya establecido un.plan modelo de este tipo. El plan debe comprender los aspectos generales del problema y el sistema analtico que se utilizar para su resolucin, con referencia preferentemente a detalles escritos de los planes y procedimientos (protocolos).

9.2

Garanta de la calidad. Al objeto de determinar y corregir los problemas, debera idearse un programa de garantia de la calidad que debera comprender:

1.

El mantenimiento de personal calificado, mtodos por escrito y validados, e instalaciones y servicios de laboratorio adecuadamente construidos, equipados y mantenidos.
El suministro de muestras representativas y testigos. El empleo de material de vidrio, disolventes y otros materiales de ensayo, todos ellos da alta calidad.
La calibracin, el ajuste y el mantenimiento del equipo.

2.
3.

4.

5.

La utilizacin de muestras testigo y muestras patrn, con los registros adecuados. La observacin directa de la ejecucin de determinados ensayos crticos.

6.

- 31 -

7.
8. 9.

El examen y la crtica de los resultados. Las pruehasdela capacidad interna y externa de ensayo. La utilizacin de muestras por duplicado. La comparacin de los resultados por duplicado con otros laboratorios (intercalibracin)

10.

11.
12.

Las respuestas a las reclamaciones de los usuarios. El control de los resultados. La correccin de las desviaciones de las normas de calidad.

13.

Estoselementosbsicos para garantizar lacalidaddelimitan el marco al que deben ajustarse los protocolos por escrito, comprendidos todos los procedimientos analticos, para obtener resultados fiables. Es mucho ms probable obtener datos exactos cuando se utilizan competentemente los patrones internos y externos, y cuando el laboratorio ha dado pruebas de ajustarse a unos niveles razonables de exactitud, por participacin en un ejercicio de intercalibracin. 9.3 9.3.1 Definiciones de algunos trminos estadsticos

La especificidad de un mtodo analtico qumico es el grado en que el valor medio de las mediciones corresponde a la sustancia que ha de determinarse y no a otras sustancias que pueden hallarse preser?tes en la muestra que se analiza. La sensibilidad de un mtodo analtico quimico es el cambio ms pequeo en la cantidad que se ha de medir que da lugar a un cambio detectable en el resultado. En este caso es sinnimo del trmino detectabilidad mnima. 9.3.2 La precisin de un mtodo analitico qumico es el grado minacin representativa de una sustancia en una muestra cin que se aproxime a la medicin media de un nmero infinico la misma muestra. (La precisin, en otras palabras, significa de los resultados analticos). 9.3.3 en el que una deterproducir una medide determinaciones de la reproductibilidad

en el que el valor me9..3.4 La exactitud de un mtodo analtico qumico es el qrado dio Ze las mediciones obtenido por el mtodo se aproxima al valor verdadero de la sustancia medida (eliminndose fisica o matemticamente los efectos de otras sustancias que interfieren).

10.

OBSERVACIONES FINALES

La eleccin de mtodos para el anlisis apropiado de los hidrocarburos del petrleo no es muy amplia y la opcin viene dictada por la situacin especifica de que se trate y el objeto del anlisis. Sin embargo, la metodologa analtica existente es sensitiva y selectiva, de modo que pueden determinarse los distintos hidrocarburos aromticos en los sedimentos a concentraciones de hasta lod9 g/g peso en seco del se6 se representa una visin general del modo ms comn de analidimento. En la Fig. 1 zar muestras de sedimentos actualmente.

32 -

Figura 16. Diagrama de flujo de un tipo de anlisis de hidrocarburos en muestras de sedimentos (de Farrington, 1980).

MUESTRA DE SEDIMENTO Extraccin con soxhlet Saponificacin directa por hidrlisis alcalina

I
Total extractables

l . Separacin
en pentano Peiada

Separacin en pentano

1 Material lipido extractable

Pesada

iii! G,
saponificable no saponificable Desecho Separacin del azufre

Cromatografa en columna Pesada

r
I
L Hidrocarburos
Aromticos (<3 anillos) Tr.metilcetonas

Aromticos

Fluorescencia de rayos ultravioleta

Cromatografa en fase gaseosa (caracterizacin de la mezcla) Cromatografa en fase gaseosa.- espectrometra de masas

33

Hoy en da es factible separar cientos de componentes aromticos distintos, pero existen hasta ahora muy pocos patrones comercialmente asequibles. Sin embargo, si los componentes que se pueden identificar se analizan, ya sea mediante patrones y tiempos de retencin o por GC/MS, esos componentes pueden ser controlados de manera que un aumento o una disminucin de las concentraciones en los sedimentos a travs del tiempo pueden detectarse y, con ello, establecerse tendencias. En el futuro prximo,las actividades en aumento en el ocano exigirn mayores esfuerzos a los quimicos analistas, tanto en lo tocante al anlisis de muestras in situ como a la realizacin de investigaciones en el laboratorio para resolver cuestiones tales como la solubilidad de los hidrocarburos aromticos en general, pero tambin la manera en que la solubilidad de los diferentes componentes aromticos en los sedimentos cambia con el tiempo.

- 34 -

APENDICE 1

Grupo Ad hoc de Trabajo del GEMSI sobre el Anlisis de los Hidrocarburos del Petrleo Disueltos/Dispersos en el Agua del Mar

Woods Hole, Massachusetts (Estados Unidos de Amrica) 16-18 de marzo de 1981, pgs. 4-5

Utilizacin de la fluorescencia de rayos ultravioleta en un programa de vigilancia de la contaminacin por petrleo Todas las tcnicas de medicin son slo parte del plan global de vigilancia, que comprende la planificacin, el muestreo, la extraccin, la medicin, la comunicacin y la interpretacin de datos. Muchas de estas etapas son idnticas o se asemejan, independientemente de la tcnica de medicin utilizada en el programa de vigilancia. Una evaluacin completa de la simplicidad, la sensibilidad y el costo debe tener en cuenta todas estas etapas. El Grupo Ad hoc estim que se deben tener presentes las siguientes consideraciones cuando se tome la decisin de utilizar la fluorescencia de rayos ultravioleta para la vigilancia deloshidrocarburos del petrleo disueltos/dispersos: i) La tcnica de la fluorescencia de rayos ultravioleta proporciona mediciones relativamente groseras de los hidrocarburos del petrleo disueltos/ dispersos, y solamente si se dispone de datos suficientes (por ejemplo, cientos de muestras para el Golfo de Mxico) es posible determinar con la certeza adecuada los "puntos calientes" de contaminacin y las tendencias en la concentracin de los hidrocarburos del petrleo disueltos/ dispersos. Se trata de una tcnica fcil de transferir a los paises que cuentan con una capacidad en desarrollo, y ello constituye una consideracin de primera importancia para elegirla para el MARPOLMON como mtodo para determinar los hidrocarburos del petrleo disueltos/dispersos en el agua del mar. Empero, los pases desarrollados que cuentan con capacidad y calificacin en otros mtodos distintos del de la fluorescencia de rayos ultravioleta, como son la cromatografa en fase gaseosa y la cromatografa en fase gaseosa/espectrometria de masas (GCGC-MS), que permiten anlisis ms detallados, deben ser alentados a aplicar estos mtodos a los problemas relativos a la contaminacin, en la esperanza de aumentar la comprensin no slo acerca de lo que se mide por la tcnica de la fluorescencia de rayos ultravioleta, sino de la distribucin general de los diversos tipos de compuestos concretos en los hidrocarburos del petrleo disueltos/dispersos. Adems, el Grupo Ad hoc estim que los pases desarrollados deberan prestar ayuda a los pases en desarrollo en cuanto a la adquisicin de esos instrumentos ms sofisticados y en la capacitacin en materia de anlisis en el marco del componente de TEMA de la COI. El acopio de datos constituye tan slo la primera etapa de semejante programa de vigilancia y debe preverse lo necesario para una evaluacin peridica de los datos y, en base a esas evaluaciones, para la formulacin de recomendaciones. Esto es de aplicacin en el caso de cualquier mtodo que se emplee.

ii)

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Existen importantes limitaciones inherentes a la tcnica de la fluorescencia de rayos ultravioleta y, por ello, debera ser considerada como un punto de partida para un programa de vigilancia de este tipo, que aumentar en su grado de sofisticacin y alcance conforme los niveles de conocimientos especializados y el equipo disponible alcancen un estadio en el que se puedan aplicar tcnicas ms sofisticadas. El programa deberia comprender un esfuerzo continuo de experimentacin en lo relativo a los efectos de factores, tales como la meteorizacin de los diversos crudos de petrleo sobre sus propiedades de fluorescencia. El programa debera incluir la presentacin de muestras representativas de diversas regiones con miras a su anlisis ms detallado en los laboratorios que cuentan con instalaciones de anlisis GCGC y GCGC-MS, con objeto de evaluar mejor los tipos y, de ser posible, las fuentes de los compuestos que originan la fluorescencia medida.

V)

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Se seal que otros mtodos, como la cromatografa en fase gaseosa y la cromatografia en fase gaseosa/espectrometria de masas (GC y GC-MS) en capilares de vidrio, no presentan los problemas de preparacin de patrones inherentes al mtodo de la fluorescencia de rayos ultravioleta. Una consideracin primordial para la aplicacin de esos mtodos a una actividad mundial del MARPOLMON radica en las limitaciones en materia de disponibilidad de instrumentos y pericia tcnica. No obstante, dado que dicha instrumentacin y pericia tcnica existen en algunos pases desarrollados y posiblemente puedan existir en un futuro prximo en muchos paises en desarrollo, el MARPOLMON deberia alentar, dondequiera que resulte posible, la aplicacin de esas tcnicas conjuntamente con la fluorescencia de rayos ultravioleta, fomentando as la comprensin de la distribucin y el destino de los hidrocarburos del petrleo en el medio marino.