PROTOCOLO Pauterizacion de Hongos

Centro PyME-A D EN EU L a b ora tori o CI S PH oCoMe
Protocolo de Pasteurizacin Qumica de S ustratos E nriq uecidos p ara el C ultiv o de Pleurotus ostreatus
I. Entidades Intervinientes en el Proyecto
Protocolo Patente N 0 9 0 1 0 2 9 7 9
Prog ra m a H ong os Com es ti b l es I ng . S ta ri k Cri s ti a n
Entidad Autora del Proyecto:

Tipo de entidad Nombre Actividades a desarrollar Unidad de transferencia de los servicios, por medio de la tcnica desarrollada, al grupo de productores de hongos.
Organismos del Centro PyME estado Provincial
Equipo Tcnico:
NOMBRE Y APELLIDO Cristian Starik Leticia Villalba PROFESION Ing. Agrnomo. Lic. Biotecnologa ORGANISMO DEL CUAL DEPENDE CISPHoCoMe Centro PyME CISPHoCoMe Centro PyME FUNCION EN EL PROYECTO Investigador Investigador
II. Diagnstico:
La produccin de hongos comestibles crece a pasos afianzados y la elaboracin del sustrato es uno de los cuellos de botella ms importante de la produccin. El desarrollo de microorganismos contaminantes en el sustrato durante la etapa de incubacin (crecimiento) es uno de los principales problema a afrontar www..hongosdelneuquen.com.ar mail: laboratorio@hongosdelneuquen.com.ar TE: 0299-4855163
por el productor. Estos hongos contaminantes (en su mayora Deuteromycetes) aparecen invadiendo el sustrato y ocupando el un espacio que debera ser ocupado por Pleurotus ostreatus var. Florida. Dependiendo de la especie contaminante, el tipo de antagonismo que genere entre ambos
microorganismos (contaminante & Pleurotus), la presin de inculo en el sustrato, las condiciones qumicas del sustrato y ambientales de las salas; pueden causar grandes perdidas a los productores. Normalmente para disminuir la incidencia de las contaminaciones se pasteuriza el sustrato a temperaturas que van desde los 66 C a los 90C durante varias horas. Este mtodo es efectivo pero es econmicamente oneroso para productores pequeos cuyo nivel de produccin dejo de ser artesanal pero no es lo suficientemente alto como para encarar grandes inversiones. As es que se presenta la posibilidad de realizar una disminucin de la presencia de microorganismos indeseables en el sustrato por medio de la utilizacin de una o varias sustancias qumicas que combinando distintos efectos logre la desinfeccin del sustrato sin afectar la produccin y el crecimiento de Pleurotus y sin producir contaminacin ambiental o riesgo para la salud humana.
III. Objetivos del Proyecto
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El objetivo del proyecto es la bsqueda de algn sistema de desinfeccin que remplace la tradicional pasteurizacin por vapor logrando buenos rendimientos y minimizando los problemas de contaminacin, sin afectar al medio o producir metabolitos txicos para la salud. En este trabajo se persigue que el mtodo de desinfeccin sea econmico, simple, no contaminante e inocuo.
IV. Descripcin Detallada del Mtodo y Fundamento Terico.
Las Grgolas, pertenecientes al gnero Pleurotus spp., son hongos de la Podredumbre Blanca, clasificados tambin como descomponedores
primarios, debido a que cuentan con un paquete enzimtico especifico que los ayuda a degradar la lignina y la celulosa, ambos componentes estructurales de los tejidos vegetales. Estos hongos tpicamente son lignvoros pero no slo degradan lignina, debido a que para acceder a ella deben atravesar la celulosa con su consecuente degradacin complementaria. La formulacin de un sustrato debe ser desarrollada considerando, las caractersticas de los residuos disponibles en la zona, los requerimientos nutricionales de la especie con que se trabajar y la eficacia del tratamiento de descontaminacin a utilizar. En cuanto a la utilizacin de residuos de la zona es fundamental establecer su homogeneidad, disponibilidad y estacionalidad, ya que de esto depende el plan anual de elaboracin de substrato.
Las formulaciones simples estn formadas por uno o, a lo sumo, dos componentes que garantizan cubrir los requerimientos nutricionales mnimos del hongo aportando principalmente carbono y nitrgeno. Una formulacin compleja generalmente esta compuesta de un substrato base, aditivos e inertes. Se denomina substrato base al componente que aporta mayoritariamente la fuente de carbono producto de la degradacin de la lignina y la celulosa. Por ello, en el caso de las formulaciones complejas, el sustrato base seleccionado debe ser capaz de aportar grandes cantidades de carbono en una relacin carbono/nitrgeno de entre aproximadamente 150 y 350. Los aditivos son componentes que se utilizan para mejorar el contenido total de nitrgeno y fsforo en la formulacin y algunos microelementos como manganeso y cobre. Estos pueden ser orgnicos o inorgnicos. Los aditivos generalmente representan menos del 40 % de la formulacin. Los inertes cumplen funciones fsicas y qumicas, como es el ajuste de la densidad y el control del pH. Preferentemente, la relacin C/N de la formulacin debera estar ente 50 y 80 y el contenido de nitrgeno total entre 0,8 % y 1,3 %. El componente utilizado como sustrato base generalmente representa entre el 60 % y el 80 % de la formulacin y, en algunas casos, hasta el 100 % para formulaciones simples. Para un normal crecimiento, las Grgolas deben disponer de agua en su medio. La humedad del sustrato debe ajustarse entre 60 % y 70 % y la tcnica de hidratado depender de la velocidad y de la capacidad de absorcin del
para aquellos
agua de cada uno de los componentes. Es decir, se debe establecer una cronologa de hidratacin componentes con distintas
caractersticas de hidratado. En trminos generales el pH del sustrato debe ser ligeramente cido, el ptimo para el crecimiento de esta especien est entre 5,6 y 6,5. En este punto es importante advertir acerca de la habilidad de algunas cepas para crecer y desarrollarse a pH extremos, gracias a su capacidad de modificacin del mismo del medio. Algunos ejemplos de sustrato base pueden ser: paja de cereales, virutas y aserrines de maderas blandas, y cscara de girasol. Preferentemente, como sustrato se emplean virutas de maderas blandas que deben cumplir con determinadas caractersticas. Desde un punto de vista qumico, se deben evitar las virutas de aquellas maderas que contengan compuestos antifngicos naturales que limiten el crecimiento de Pleurotus spp., como las resinas o los compuestos fenlicos presentes en ciertos tipos de maderas. Respecto de su caractersticas fsicas, no se deben emplear virutas de maderas de elevada dureza, es decir especies de crecimiento lento de maderas muy densas. Por ultimo, teniendo en cuenta su aspecto biolgico, no pueden ser utilizadas aquellas virutas que, producto del mal almacenamiento o inadecuado manejo, al momento de ser utilizadas contengan ms de 10.000 unidades formadoras de colonias (UFC) de hongos contaminantes por gramo seco, a
saber: Trichoderma spp., Penicillum spp., Verticillum spp., Aspergillus spp., Cladosporium spp., Rizopus spp., Mucor spp. y Alternaria spp., entre los ms destacados. Concretamente, pueden ser utilizadas virutas de maderas de especies de rpido crecimiento con alburas blandas y poco densas, carentes de resinas y sin elevadas cantidades de compuestos fenlicos. Preferentemente pueden utilizarse entonces las virutas de madera de lamo (Populus spp.), sauce (Salix spp.), morera (Morus spp.), haya (Fagus spp.), nogal (Juglans spp.), cerezo (Prunus spp.), abedul (Betuna spp.), roble o encina (Quercus spp.), lenga (Notofagus pumilio) entre otros. Mas preferentemente, se pueden emplear las virutas de madera de lamo (Populus spp.) y sauce (Salix spp.). Algunos ejemplos de aditivos orgnicos pueden ser: salvado de trigo, harina de maz, melaza, heno de alfalfa y urea, y entre los aditivos inorganicos podemos nombrar: nitrato de potasio y nitrato de calcio. Algunos ejemplos de aditivos inorgnicos inertes pueden ser perlita, carbonato de calcio y sulfato de calcio. Preferentemente, al sustrato de la presente invencin se agrega afrechillo como fuente nitrogenada primaria. Este agregado sirve para corregir conjuntamente con la harina de maz la deficiencia de nitrgeno de la viruta de madera de forma tal que la formulacin final cubra los requerimientos de nitrgeno de Pleurotus spp. Preferentemente tambin, se agrega al sustrato harina de maz como fuente nitrogenada secundaria y adems fuente de hidratos de carbono
fcilmente asimilables (HCFA), o sea de energa. La importancia de los HCFA est dada por la necesidad de transformar rpidamente el contenido de nitrgeno presente en la formulacin en protena fngica, para lo que el metabolismo demanda energa rpida provista por los HCFA. De lo contrario el alto contenido de nitrgeno, el elevado pH del sustrato y la elevada temperatura que se desarrolla dentro del mismo facilitaran en gran medida la generacin de amoniaco gaseoso dentro del sustrato que se encuentra embolsado tornndose txico para Pleurotus spp. e inhibiendo su crecimiento. Preferentemente, se agrega yeso, que cumple la funcin de encapsular o generar un microambiente de reaccin cida en torno a las fuentes nitrogenadas tanto primaria como secundaria, lo que tambin disminuye la generacin de amoniaco. Es por esta razn de generar un microambiente que estos tres componentes, afrechillo, harina de maz y yeso, se mezclan en seco previamente antes de ser incorporados a la viruta tratada. La eficacia del tratamiento de descontaminacin a utilizar est directamente relacionado con la riqueza nutricional del la formulacin ya que tratamientos ms agresivos y eficaces, los que logran una marcada reduccin de los microorganismos contaminantes, permiten trabajar con formulaciones de mayor riqueza en nutrientes. La posibilidad de que se desarrollen en colonias los microorganismos que trae consigo el sustrato formulado y que tienen la capacidad de degradar el mismo, debe reducirse al mnimo. Esto puede hacerse por disminucin del
nmero de microorganismos viables presentes en el sustrato o por inhibicin temporaria de su capacidad de desarrollo. De ambas formas se limita la posibilidad de que ocupen el nicho las colonias de microorganismos contaminantes. La pasteurizacin Trmica es la ms utilizada y consiste en someter a la formulacin de sustrato a temperaturas elevadas de entre 65 C y 85 C utilizando vapor de agua que se genera por medio de una caldera y es inyectado en un tnel de pasteurizado en el que se encuentra alojado el sustrato. Generalmente el proceso dura entre 6 a 10 horas dependiendo de la cantidad de sustrato pasteurizado, la capacidad de la sala y la temperatura de pasteurizacin. Durante este lapso es necesario la quema de algn tipo de material combustible (gas, Gas oil, etc.) para la generacin del vapor. Este mtodo reduce la carga de microorganismos contaminantes viables por debajo de un umbral determinado que permite el eficaz desarrollo de Pleurotus spp. La presente invencin considera los siguientes factores como punto de partida para el desarrollo de la misma: 1.- la utilizacin de sustrato selectivos para Pleurotus spp; 2.- la capacidad de algunas cepas expuestas a medios alcalinos para modificar valores de pH extremos y crecer satisfactoriamente; 3.- la posibilidad de minimizar la generacin de amonaco dentro de la bolsa, a pesar de trabajar con sustratos enriquecidos, a travs del uso de compuestos de reaccin cida y el agregado de HCFA;
4.- los efectos de un compuesto altamente alcalino, a saber: lisis de la membrana celular, desnaturalizacin de protenas y efecto quimiosttico, sobre supervivencia de los microorganismos contaminantes; y, por ltimo, 5.- la posibilidad de forzar la salida de un estado de resistencia y pasaje a un estado vegetativo ms vulnerable de los microorganismos contaminantes presentes en el sustrato. 6.- la bsqueda de mtodos alternativos en los que no se utilicen combustibles para la pasteurizacin de sustratos.
Es de vital importancia la seleccin de las cepas a cultivar dado que distintas cepas pueden adaptase a distintas rangos trmicos de crecimiento as como requerir distintas temperaturas de induccin. Las caractersticas en cuanto a requerimientos trmicos de cada cepa repercuten directamente en costo de produccin ya que las distintas salas deben ser climatizadas de acuerdo a las exigencias biolgicas de la cepa en cuestin. Algunas cepas pueden ser ms productivas que otras y al mismo tiempo su habilidad saprofita competitiva puede variar. Muchas veces el mercado exige determinadas caractersticas de producto, como por ejemplo color, forma, tamao, y stas deben ser tenidas en cuenta al momento de seleccionar la cepa. Preferiblemente, la presente invencin puede ser utilizada para descontaminar sustratos para la produccin de distintas especies del gnero
Pleurotus spp., a saber: Pleurotus sajor-caju, Pleurotus ostreatus, Pleurotus ostreatus variedad Florida, Pleurotus pulmonarius, entre las ms destacadas. Segn una forma preferida de la presente invencin, se propone un proceso para pasteurizar un sustrato determinado para utilizarlo para el cultivo de hongos comestibles del gnero Pleurotus spp. que comprende las etapas de: a) prefermentar viruta de madera blanda o semiblanda; b) interrumpir la prefermentacin mediante el agregado de una suspensin alcalina; c) escurrir la viruta; d) mezclar en la viruta prefermentada con una mezcla de aditivos secos; e) inocular el sustrato obtenido en el punto d) con semilla del hongo a cultivar; f) embolsar el sustrato y perforar las bolsas; g) incubar el sustrato inoculado. Preferentemente, la etapa a) del proceso para cultivar hongos de acuerdo con lo anterior comprende los subetapas de: i) humedecer viruta de madera; y ii) airear la viruta de madera. Como puede observarse, en primer lugar se debe realizar una prefermentacin de la viruta que tiene una duracin aproximada de 24 a 48 horas. El proceso se completa cuando se obtiene una diferencia de temperatura entre el centro de la pila y el ambiente de aproximadamente 10 C.
Al efecto se dispone preferiblemente la viruta de madera en una pileta o contenedor con un adecuado sistema de drenaje y desagote o, en su defecto, en recipientes de menor tamao o contenedores que sumen la capacidad requerida y que estn preparados de alguna manera permitiendo realizar, luego del correspondiente tratamiento qumico, un eficaz escurrido de la viruta. Con una herramienta adecuada, una vez humedecida la viruta, sta se mezcla para homogeneizar la humedad de la misma. Se debe contar con una balanza para cuantificar las cantidades necesarias de viruta y agua de manera de lograr una humedad en la pila de aproximadamente un 65 a 70 %, o con un recipiente cubicado para manipular la adicin de agua. Con un termmetro de escala adecuada se controla la diferencia de temperatura entre el centro de la pila y el medio ambiente, durante el transcurso del proceso de prefermentacin. La prefermentacin es una activacin primaria del crecimiento de los microorganismos presentes en la viruta. Se trata de un evento aislado que luego es interrumpido, con el objetivo de que aquellos microorganismos que se encuentran protegidos por estructuras de resistencia o bajo estados de latencia sostenidos, sean activados e inicien su crecimiento vegetativo convirtindose en una masa bitica vulnerable para luego ser sometidos al tratamiento qumico. Una vez transcurridas las 24 horas., se deber realizar un mezclado, removiendo la viruta hmeda con la ayuda de una horquilla o una herramienta semejante. Es recomendable que esta tarea se realice dentro de los mismos contenedores en que se va a realizar el tratamiento qumico para ahorrar mano
de obra y equipamiento. Una vez removida, la viruta es tapada y permanece en estas condiciones durante otras 24 horas buscando lograr una diferencia de temperatura entre el centro de la pila y el ambiente de aproximadamente 10 C. Luego de transcurridas aproximadamente 48 horas se detiene el proceso de fermentacin por accin del tratamiento qumico mediante el agregado de una suspensin alcalina. La suspensin preferentemente es una suspensin de hidrxido de calcio o cal comercial. Para esto se prepara preferentemente una suspensin de cal en agua al 3 % peso en peso que es agregada al/los recipiente/s que contiene/n la viruta hmeda. La suspensin as obtenida es agregada a la viruta luego de prefementarla. Una vez que se agrega la suspensin es necesario homogenizar la mezcla para que el tratamiento sea efectivo y debe dejarse transcurrir al menos aproximadamente 18 horas. por lo que normalmente se deja hasta el da siguiente. El efecto quimiosttico y desinfectante de la suspensin de Ca(OH)2 es fundamentalmente por modificacin del pH. Esto provoca dos efectos sobre los microorganismos presentes en activo crecimiento: i) los iones hidroxilo inducen una peroxidacin lipdica dando como resultado la ruptura de los fosfolpidos que componen la membrana celular; y ii) el optimo funcionamiento de las enzimas se obtiene a un pH neutro, mientras que la alcalinizacin que provee el hidrxido de calcio produce la desnaturalizacin de las protenas. En forma paralela e independiente del tratamiento de la viruta de madera, se prepara una mezcla de componentes secos, para lo cual se pesan
en una balanza adecuada las cantidades necesarias de afrechillo, harina de maz y yeso, y se mezclan en seco con una mezcladora por gravedad en las proporciones correspondientes. Cabe mencionar en este punto que a partir del momento en que la viruta recibe el tratamiento qumico debe ser tratada como un producto pasteurizado, por lo que no debe ser expuesta a condiciones que puedan generar posteriores contaminaciones manteniendo rigurosamente su asepsia. Una vez efectuado el tratamiento qumico y luego de aproximadamente 18 horas, la viruta debe ser escurrida. Es muy importante que la viruta quede bien escurrida por lo que se recomienda un escurrido de al menos una hora o ms. Previo al escurrido, conviene humedecer el suelo circundante para minimizar la posibilidad de que la viruta tratada se contamine con polvillo. Una alternativa para el escurrido es emplear una malla o media sombra con la que se reviste internamente los contenedores antes de agrega la viruta, luego la viruta es prefermentada y tratada qumicamente, y por ultimo se toman los extremos de la malla o media sombra y se eleva junto con su contenido con la ayuda de un aparejo o por medio de la torre de un tractor, mantenindose la viruta elevada escurriendo durante al menos una hora. Es durante este tiempo que la viruta debe ser protegida del viento si lo hubiera y del polvillo. Una vez escurrida la viruta, se deposita en una plataforma ubicada en la entrada de la sala de inoculacin, y cuyo piso tenga preferentemente un declive que permita continuar el escurrido mientras se fracciona e ingresa a la sala de
incubacin. Esta plataforma debe estar previamente desinfectada. Una vez efectuado el escurrido de la viruta tratada qumicamente, se procede a mezclarla con la mezcla de los componentes secos ya preparada. Cuando la viruta est bien escurrida, la misma debe ser mezclada con el resto de los componentes del sustrato. En esta instancia se mezcla la viruta hmeda ya escurrida con la mezcla de componentes secos, a saber afrechillo, harina de maz y yeso, que fuera preparada previamente. Es muy importante homogenizar la mezcla lo mayor posible. Al efecto, esto puede realizarse en una mezcladora con una capacidad de aproximadamente 1 m3 o un contenedor plstico con la misma capacidad en donde realizar el mezclado manualmente, mientras que los operarios deben cubrirse con guantes, barbijo y cofia usando al mismo tiempo ropa adecuada, para evitar contaminaciones. Una vez preparado el sustrato, se prosigue con la inoculacin con la cepa de Pleurotus spp. que se desea cultivar. Durante la inoculacin del sustrato se deben extremar los controles de la asepsia. La inoculacin debe realizarse en una sala completamente desinfectada y con la mayor cantidad de recaudos posible, preferentemente a sala cerrada, es decir, sin corrientes de aire; los utensilios a utilizar se deben desinfectar; se deben usar guantes, barbijo y cofia o similar, junto con ropa adecuada y limpia. La tasa de inoculacin se establece en aproximadamente el 8 % peso en peso de semilla respecto del sustrato pasteurizado empleado, es decir aproximadamente 80 kg de semilla por tonelada de sustrato.
La Inoculacin se efecta en un recipiente adecuado con capacidad para contener cmodamente el sustrato. Para realizar la inoculacin se carga sustrato formulado a un recipiente que preferentemente pueda contener holgadamente de aproximadamente 20 a 22 kg de sustrato, de manera de poder mezclar en l el contenido de una unidad de inculo una vez desgranado. Se denomina unidad de inculo al tamao de presentacin entregado por el laboratorio proveedor cuando se habla de semilla, la que generalmente pesa alrededor de 2,1 kg. Una vez ms, es de suma importancia la homogenizacin de la mezcla. A continuacin, se realiza el embolsado del sustrato inoculado. Preferentemente, el embolsado se realiza manualmente por medio de una palita diseada para tal fin. Se utilizan bolsas de 20 cm de dimetro de polietileno de baja densidad de 50 micrones de espesor. Las bolsas llenas alcanzan una longitud de aproximadamente 70 cm y un peso de aproximadamente 7,5 kg, lo que determina una densidad de aproximadamente 0,34 g/cm3. Las bolsas llenas de sustrato son colocadas en pinches. stos estn construidos con hierro liso n 12 a 14 con punta en el extremo superior y con un apoyo tipo trpode situado en el extremo inferior, confeccionados
generalmente con planchuela o hierro liso. Se colocan tres bolsas por pinche y con un rodillo perforador se procede al perforado de las bolsas en toda su
superficie e inmediatamente son incubadas en una sala a una temperatura de aproximadamente 27 C durante por lo menos los primeros tres das. En la siguiente Tabla se esquematizan las actividades llevadas a cabo durante el proceso en funcin del tiempo empleado en concretarlas. Tabla 1
PROCESO
ACTIVIDADES 1 Humedecido de la viruta 2 3
DAS 4 5 6 7
PREFERMENTADO Aireado de la viruta TRATAMIENTO QUIMICO Interrupcin de la pre-fermentacin Agregado de hidrxido de calcio Escurrido de la viruta ELABORACIN E INOCULACIN Mezclado de la viruta con el resto de los componentes secos Inoculacin del sustrato Embolsado EMBOLSADO Pinchado de las bolsas Micro-perforado de las bolsas
El periodo de incubacin puede durar entre 20 a 30 das dependiendo de las caractersticas del sustrato, del tipo y vigor de la cepa, y de las condiciones ambientales brindadas. Durante el periodo de incubacin no es necesaria la iluminacin de la sala pero si deben controlarse la temperatura y concentracin de CO2 en la misma. La temperatura optima de crecimiento de estos hongos ronda entre aproximadamente 25 y 27 C. Es importante destacar que este rango de www..hongosdelneuquen.com.ar mail: laboratorio@hongosdelneuquen.com.ar TE: 0299-4855163 la
temperatura debe ser logrado en el interior de la bolsa y que sta, al comienzo de la incubacin, est fra mientras que luego de aproximadamente 8 das comienza a generarse calor metablico por el crecimiento propio del organismo, lo que incrementa a la temperatura interna de la bolsa. Conociendo esto es que la temperatura de la sala de incubacin debe manipularse para lograr el rango ptimo de temperatura en el interior de la bolsa. Por ejemplo, preferentemente durante los primeros 4 das de debe mantener entre aproximadamente 27 y 28 C, desde el quinto hasta el dcimo segundo da entre aproximadamente 19 y 22 C, y desde aqu en adelante
aproximadamente 25 C. Esto varia dependiendo de la intensidad del calor metablico generado. Si bien Pleurotus spp. tiene una extraordinaria capacidad para crecer en medios con una muy elevada concentracin de CO2 atmosfrico soportando sin inconvenientes hasta 20.000 ppm = 2,0 % , en el interior de la bolsa pueden alcanzarse valores de 500.000 ppm o ms si no se permite el intercambio gaseoso del interior de la bolsa con el medio y no se recambia el aire de la sala, lo que inhibira su crecimiento. Generalmente se efectan de 1 a 2 recambios diarios del volumen total de la sala dependiendo de la cantidad de sustrato alojado en ella.
PROTOCOLO
Preparacin de un sustrato para el desarrollo de Grgolas por pasteurizacin qumica. En la siguiente Tabla 2 se detallan las materias primas y sus cantidades empleadas:
Tabla 2 COMPONENTE para preparar 2.500 kg de sustrato hmedo Viruta de lamo Afrechillo Harina de maz Yeso (sulfato de calcio) Cal (Hidrxido de calcio) Agua (1): agua utilizada durante la prefermentacin. (2): agua empleada para preparar la suspensin de cal. Prefermentacin. Se mezclaron 220 litros de agua con 100 kg de viruta seca de madera de lamo y se dispusieron en contenedores usados como recipientes de prefermentacin. La viruta fue remojada de manera uniforme hasta lograr una 570,0 (67,3 %) 97,5 (11,5 %) 82,5 (9,7 %) 97,9 (11,5 %) 133,0 220 lts(1) + 4.446 lts(2) Cantidad en Kg.
humedad cercana al 68 % peso en peso. Una vez humedecida y mezclada la viruta permaneci en estas condiciones sin ms intervenciones durante 24 horas. Luego de este periodo fue removida y aireada buscando favorecer la activacin de los microorganismos presentes y as lograr el aumento de la temperatura del interior de la pila. Obteniendo una temperatura en la pila superior a 22 C y una diferencia de 10 C entre el interior de la pila y el ambiente, luego se efectu el tratamiento qumico. Tratamiento qumico. Se prepar una suspensin de hidrxido de calcio para agregarla en la siguiente proporcin: 780 litros de suspensin de hidrxido de calcio la 3% por cada 100 kg de viruta seca en cada recipiente de fermentacin. Para tratar los 570 kg de viruta seca se requirieron 4.446 lts de agua y 133 kg de cal. Una vez que se agreg la suspensin, se homogeneiz la mezcla y se dej transcurrir 18 horas. Mezclado de los componentes secos. En forma paralela, se pesaron y se mezclaron los componentes secos del sustrato, afrechillo, harina de maz y yeso, segn las cantidades necesarias en este caso para la obtencin final de 2.500 kg de sustrato, a saber: 97,5 kg de afrechillo, 82,5 kg de maz molido y 97,9 kg de yeso. Elaboracin e Inoculacin. Transcurridas 18 horas desde el tratamiento qumico, la viruta se escurri durante una hora colgada en mallas de media sombra. Durante este
tiempo el sustrato se aloj en una zona protegida donde las contaminaciones con otros microorganismos se controlaron al mximo. Una vez escurrido, el sustrato se deposit en una plataforma previamente desinfectada, cuyo piso con declive permiti que el escurrido del sustrato continuara a la espera de ser mezclado con el resto de los componentes. Luego, se agregaron 49 kg de mezcla seca por cada 100 kg de viruta seca tratada para luego seguir con su inoculacin, fraccionamiento y posterior ingreso a la sala de incubacin. Transcurridos aproximadamente 20 das fueron puesto a fructificar bajo las condiciones antes detalladas.
Marco para el anlisis de los resultados: Para la validacin de este protocolo se tubieron en cuenta los siguientes parmetros a analizar: Nmeros de bolsas desechadas durante la incubacin, ya sea por problemas de contaminacin o por ineficiente invasin del micelio de Pleurotus spp. Eficiencia Biolgica (E.B.) general de cada uno de los lotes tomados estos como repeticiones de unidades experimentales y medida en: Kg. de hongos frescos brutos / Kg. de materia seca orgnica del sustrato.
Se establecer los siguientes valores medio a alcanzar por cada parmetro:
<7% de descarte de bolsas >60 % de Eficiencia Biolgica.
Estos valores de referencia fueron establecidos luego del anlisis de distintas fuentes bibliogrficas y de la experiencia personal del equipo tcnico que desarrollo el Proyecto.
V. Resultados: Los siguientes datos fueron recolectados luego de realizar la experiencia en establecimientos de productores.
PRODUCTOR: Alba Ortiz ESTABLECIMIENTO: Las Delicias DOMICILIO: Neuquen, San Patricio del Chaar, picada 1.5.
Este establecimiento produce hongos desde enero del 2008. El productor dispone de una cmara de fructificacin de 50 m2 y una sala de incubacin de 20 m2 ambas salas cuentan con el equipamiento necesario para lograr proporcionar la condiciones ambientales requeridas para el desarrollo del cultivo. Es decir, cuenta con control de; temperatura (equipo de fro-calor), humedad (humidificadores), luz (sistema de iluminacin) y ventilacin
(extractores) para la remocin del CO2. Tambin cuenta con un galpn en donde dar condiciones de acopio necesarias para los insumos empleados. Este establecimiento tiene una capacidad productiva actual de 200 kg/mes y un potencial que alcanza los 500 kg de hongos mensuales.
DETALLE DE PRODUCCIN 2008 Tabla 1: LOTE* da/mes/ao MSO** (Kg.) Sustrato Hmedo (Kg.) 181207 210108 200208 300408 230708 250908 205 178 247 300 447 440 740 632 882 1067 1613 1588 Pn. Bruta de Hongos (Kg.) 159.750 109.770 197.300 216.950 256.860 263.210 77.9 61.6 79.8 72,3 57,3 59.8 4.2 5.3 7.0 6.0 4.3 6.0 E.B. (%) DESCARTE DE BOLSAS (%)
* Corresponde a la fecha de inoculacin del sustrato ** MSO: Materia Seca Orgnica.
PRODUCTOR: Lusa Brandt ESTABLECIMIENTO: Mujeres de Campo DOMICILIO: Ro Negro, General Roca, B Chacra Monte, Las Araucarias 4455
Este establecimiento produce hongos desde enero del 2009. El productor dispone de una cmara de fructificacin de 20 m2 y una sala de incubacin de 12 m2 ambas salas cuentan con el equipamiento necesario para lograr proporcionar la condiciones ambientales requeridas para el desarrollo del cultivo. Es decir, cuenta con control de; temperatura (equipo de fro-calor), humedad (humidificadores), luz (sistema de iluminacin) y ventilacin (extractores) para la remocin del CO2. Este establecimiento tiene una capacidad productiva actual de 110 kg/mes y un potencial que alcanza los 350 kg de hongos mensuales.
DETALLE DE PRODUCCIN 2009 Tabla 1: LOTE* da/mes/ao MSO** (Kg.) Sustrato Hmedo (Kg.) 260109 130309 Total * Corresponde a la fecha de inoculacin del sustrato ** MSO: Materia Seca Orgnica. 221 227 796 809 Pn. Bruta de hongos (Kg.) 139 141 62.8 62.1 7.0 4.9 E.B. (%) DESCARTE DE BOLSAS (%)

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IV. Descripcin Detallada del Mtodo y Fundamento Terico.

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www..hongosdelneuquen.com.ar mail: laboratorio@hongosdelneuquen.com.ar TE: 0299-4855163

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ACTIVIDADES 1 Humedecido de la viruta 2 3

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Se establecer los siguientes valores medio a alcanzar por cada parmetro:

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