UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR

FACULTAD DE FILOSOFA, LETRAS Y CIENCIAS DE LA EDUCACIN

CARRERA DE CIENCIAS NATURALES Y DEL AMBIENTE, BIOLOGA Y QUMICA Laboratorio de Bioqumica Integrantes: Curso: 4to semestre de CC.NN Fecha: 28 de mayo del 2013 Informe de prctica NO 2 TEMA: Identificacin de protenas por coloracin y precipitacin a partir de la

clara (albumina) de huevo

OBJETIVOS GENARAL: Identificar protenas por coloracin y precipitacin a partir de la clara (albumina) de huevo.

MATERIALES: Gradilla para tubos de ensayo 6 tubos de ensayo Pinzas para tubos de ensayo Fsforos Mechero de Bunsen Vaso de precipitacin Agitador de vidrio

REACTIVOS Y SUSTANCIAS: Agua Clara de huevo diluida en agua cido ntrico concentrado Amoniaco concentrado Sulfato cprico al 1% Hidrxido de sodio al 40% Acetato de plomo 5% Alfa naftol al 1% en alcohol cido actico concentrado cido sulfrico concentrado Reactivo de ESBASH H2O Albumina + H2O HNO3 NH3 CuSO4 NaOH Pb(C2 H3 O2)2 C10 H7 OH CH3-COOH H2 SO4 mezcla de una solucin acuosa de cido pcrico al 1% y otra solucin de cido ctrico al 2 %.

MARCO TEORICO: Protenas Las protenas son molculas formadas por cadenas lineales de aminocidos. El trmino protena proviene de la palabra francesa protine y sta del griego (proteios), que significa 'prominente, de primera calidad'.

Por sus propiedades fsico-qumicas, las protenas se pueden clasificar en protenas simples (holoproteidos), que por hidrlisis dan solo aminocidos o sus derivados; protenas conjugadas (heteroproteidos), que por hidrlisis dan aminocidos acompaados de sustancias diversas, y protenas derivadas, sustancias formadas por desnaturalizacin y desdoblamiento de las anteriores. Las protenas son indispensables para la vida, sobre todo por su funcin plstica (constituyen el 80% del protoplasma deshidratado de toda clula), pero tambin por sus funciones biorreguladoras (forman parte de las enzimas) y de defensa (los anticuerpos son protenas). Las protenas desempean un papel fundamental para la vida y son las biomolculas ms verstiles y diversas. Son imprescindibles para el crecimiento del organismo y realizan una enorme cantidad de funciones diferentes, entre las que destacan:

Estructural. Esta es la funcin ms importante de una protena (Ej: colgeno), Inmunolgica (anticuerpos), Enzimtica (Ej: sacarasa y pepsina), Contrctil (actina y miosina).

Homeosttica: colaboran en el mantenimiento del pH (ya que actan como un tampn qumico), Transduccin de seales (Ej: rodopsina) Protectora o defensiva (Ej: trombina y fibringeno) Las protenas estn formadas por aminocidos los cuales a su vez estn formados por enlaces peptdicos para formar esfingocinas. Las protenas de todos los seres vivos estn determinadas mayoritariamente por su gentica (con excepcin de algunos pptidos antimicrobianos de sntesis no ribosomal), es decir, la informacin gentica determina en gran medida qu protenas tiene una clula, un tejido y un organismo. Las protenas se sintetizan dependiendo de cmo se encuentren regulados los genes que las codifican. Por lo tanto, son susceptibles a seales o factores externos. El conjunto de las protenas expresadas en una circunstancia determinada es denominado proteoma. Aspecto bioqumico Las protenas son biopolmeros, estn formadas por un gran nmero de unidades estructurales simples repetitivas (monmeros). Debido a su gran tamao, cuando estas molculas se dispersan en un disolvente adecuado, forman siempre dispersiones coloidales, con caractersticas que las diferencian de las disoluciones de molculas ms pequeas. Por hidrlisis, las molculas de protena se dividen en numerosos compuestos relativamente simples, de masa molecular pequea, que son las unidades fundamentales constituyentes de la macromolcula. Estas unidades son los aminocidos, de los cuales existen veinte especies diferentes y que se unen entre s mediante enlaces peptdicos. Cientos y miles de estos aminocidos pueden participar en la formacin de la gran molcula polimrica de una protena. Todas las protenas tienen carbono, hidrgeno, oxgeno y nitrgeno, y casi todas poseen tambin azufre. Si bien hay ligeras variaciones en diferentes protenas, el contenido de nitrgeno representa, por trmino medio, 16% de la masa total de la molcula; es decir, cada 6,25 g de

protena contienen 1 g de N. El factor 6,25 se utiliza para estimar la cantidad de protena existente en una muestra a partir de la medicin de N de la misma. La sntesis proteica es un proceso complejo cumplido por las clulas segn las directrices de la informacin suministrada por los genes. Las protenas son largas cadenas de aminocidos unidas por enlaces peptdicos entre el grupo carboxilo (-COOH) y el grupo amino (-NH2) de residuos de aminocido adyacentes. La secuencia de aminocidos en una protena est codificada en su gen (una porcin de ADN) mediante el cdigo gentico. Aunque este cdigo gentico especifica los 20 aminocidos "estndar" ms la selenocistena y en ciertos Archaea la pirrolisina, los residuos en una protena sufren a veces modificaciones qumicas en la modificacin postraduccional: antes de que la protena sea funcional en la clula, o como parte de mecanismos de control. Las protenas tambin pueden trabajar juntas para cumplir una funcin particular, a menudo asocindose para formar complejos proteicos estables. Estructura de las protenas

CLASIFICACION Segn su composicin.- pueden clasificarse en protenas "simples" y protenas "conjugadas".

Las "simples" o "Holoprotenas" son aquellas que al hidrolizarse producen nicamente aminocidos, y son: Globulares Prolaminas:Zena (maz),gliadina (trigo), hordena (cebada) Gluteninas:Glutenina (trigo), orizanina (arroz). Albminas:Seroalbmina (sangre), ovoalbmina (huevo), lactoalbmina (leche) Hormonas: Insulina, hormona del crecimiento, prolactina, tirotropina Enzimas: Hidrolasas, Oxidasas, Ligasas, Liasas, Transferasas...etc. Fibrosas Colgenos: en tejidos conjuntivos, cartilaginosos Queratinas: En formaciones epidrmicas: pelos, uas, plumas, cuernos. Elastinas: En tendones y vasos sanguineos Fibronas: En hilos de seda, (araas, insectos) Las "conjugadas" o "Heteroprotenas" son protenas que al hidrolizarse producen tambin, adems de los aminocidos, otros componentes orgnicos o inorgnicos. La porcin no protica de una protena conjugada se denomina "grupo prosttico". Las protenas conjugadas se subclasifican de acuerdo con la naturaleza de sus grupos prostticos. NOMBRE Nucleoprotenas Lipoprotenas Fosfoprotenas Metaloprotenas Glucoprotenas COMPONENTE NO PROTEICO Acidos nuclicos Lpidos Grupos fosfato Metales Monosacridos EJEMPLOS Nucleosomas de la cromatina Ribosomas
de muy baja densidad (VLDL) y de baja densidad (LDL)

serina, treonina, tirosina, aspartato o histidina. Hemoglobina, citocromos,

rubredoxina, ceruloplasmina

Ribonucleasa Mucoprotenas Anticuerpos Hormona luteinizante

DESARRROLLO DE PRCTICA:
1) En el vaso de precipitacin colocar clara de un huevo aadir el doble de agua y agitar con el agitador de vidrio. 2) Colocar 2ml de la mescla en 5 tubos de ensayo, y numerar cada tubo del 1, 2, 4, 5. 3) En el tubo de ensayo sobrante (3) colocar clara de huevo pura. Tubo de ensayo 1 REACCION XANTOPROTEICA

1. En el tubo 1 con clara huevo diluida colocar cido ntrico concentrado HNO3 2. Encender el mechero de Bunsen, proceder a calentar lentamente el tubo con la mescla hasta lograr un precipitado. 3. Dejar enfriar, y una vez frio aadir gotas de amoniaco NH3 hasta lograr un cambio en el precipitado anterior

4. Observar detenidamente los cambios de coloracin y apuntarlos en observaciones.

Tubo de ensayo 2 REACCION DE BEURET 1. En el tubo 2 con clara de huevo diluida, colocar con mucho cuidado Hidrxido de sodio al 40% NaOH 2. Aadir a esta mescla 2 gotas de Sulfato cprico al 1% CuSO4. 3. Observar detenidamente los cambios de coloracin o de textura y apuntarlos en observaciones. Tubo de ensayo 3 1. 2. 3. 4. REACCION DE AZUFRE

En el tubo 3 con clara pura, colocar Hidrxido de sodio al 40% NaOH Proceder a calentar lentamente el tubo con la mescla durante 2 min. Dejar enfriar, y una vez frio aadir gotas de acetato de plomo Pb(C2 H3 O2). Observar detenidamente los cambios de coloracin o de textura y apuntarlos en observaciones. REACCION DE MOLISH

Tubo de ensayo 4

1. En el tubo 4 con clara de huevo diluida, colocar 1ml. de Alfa naftol al 1% en alcohol C10 H7 OH. 2. Inclinar el tubo de ensayo y con mucho cuidado hacer resbalar lentamente por las paredes del tubo gotas de cido sulfrico concentrado H2 SO4. 3. Observar detenidamente los cambios de coloracin o de textura y apuntarlos en observaciones.
Tubo de ensayo 5 REACCION DE ADAM 1. En el tubo 5 con clara de huevo diluida, colocar 1ml. de cido actico concentrado CH3-COOH 2. Inclinar el tubo de ensayo para evitar una reaccin brusca, aadir gotas de cido sulfrico concentrado H2SO4. 3. Observar detenidamente los cambios de coloracin o de textura y apuntarlos en observaciones. Tubo de ensayo 6 REACCION DE ESBASH

1. En el tubo 6 con clara de huevo diluida, colocar barias gotas del reactivo de ESBASH, y aadir gotas de agua. 2. Observar detenidamente los cambios de coloracin o de textura y apuntarlos en observaciones. OBSERVACIONES:
Tubo de ensayo 1 REACCION XANTOPROTEICA al calentar mescla la Al aadir gotas de amoniaco NH3

clara de huevo diluida al colocar cido ntrico concentrado HNO3

se forma precipitado color blanco

un de

se forma un precipitado de color amarillento

Se el precipitado cambia de color a uno mucho ms anaranjado

Tubo de ensayo 2

REACCION DE BEURET Al aadir a esta mescla 2 gotas de Sulfato cprico al 1% CuSO4.

clara de huevo diluida al colocar Hidrxido de sodio al 40% NaOH

No tiene un cambio fcilmente visible

la mescla toma un color violeta azulado

Tubo de ensayo 3

REACCION DE AZUFRE

clara pura al colocar Hidrxido de sodio al 40% NaOH

Al calentar lentamente la mescla durante 2 min. La mescla toma un color amarillento

Al aadir gotas de acetato de plomo Pb(C2 H3 O2). Se forma un anillo sobrenadante de color marrn obscuro

No tiene un cambio fcilmente visible

Tubo de ensayo 4

REACCION DE MOLISH Al aadir lentamente gotas de cido sulfrico concentrado H2 SO4.

Clara de huevo diluida al colocar 1ml. de Alfa naftol al 1% en alcohol C10 H7 OH.

Se forma un anillo sobrenadante de color marrn claro

Se forma un anillo de color verdoso entre las dos sustancias

Tubo de ensayo 5

REACCION DE ADAM al aadir a la mezcla gotas de cido sulfrico concentrado H2SO4. Se forma un anillo de color violeta entre las dos sustancias

clara de huevo diluida al colocar 1ml. de cido actico concentrado CH3-COOH

La mezcla lechoso

tomo

un

aspecto

Tubo de ensayo 6

REACCION DE ESBASH

clara de huevo diluida al colocar barias gotas del reactivo de ESBASH, y aadir gotas de agua.

La mezcla se torna de un color amarrillo fosforescente

CONCLUSIONES: Hemos identificado la existencia de protenas en la albumina de la clara de huevo a travs de varias tcnicas de reaccin como son: la reaccin xantoproteica, reaccin de Beuret, de Azufre, de Molish, de Adam y de Esbash. Hemos demostrado como las protenas reaccionan con distintos reactivos, tornndose de distintos colores segn el reactivo o incluso con un cambio en su aspecto.

RECOMENDACIONES: Tener mucho cuidado al momento de manejar los distintos cidos pero en especial el cido sulfrico H2 SO4, el cual para su manejo es recomendable, inclinar el tubo de ensayo y con mucho cuidado hacer resbalar lentamente por las paredes del tubo gotas de dicho acido, con el fin de evitar una reaccin brusca o desfavorable.. FUENTE DE INFORMACION: Practica de autora de Dra. Portero. http://es.wikipedia.org/wiki/Prote%C3%ADna http://www.monografias.com/trabajos10/compo/compo.shtml Fotos a cargo de la estudiante Katherine Simbaa.