FUNDAMENTOS BSICOS DE LA ESPECTROSCOPA UVVISIBLE El principio de la espectroscopa ultravioletavisible involucra la absorcin de radiacin ultravioletavisible por una molcula, causando

la promocin de un electrn de un estado basal a un estado excitado. La longitud de onda comprende entre 160 y 780 nm. La absorcin de radiacin UVvisible por una especie se da en 2 etapas: Excitacin electrnica Relajacin. Puede ser por: emisin de calor reaccin fotoqumica emisin de fluorescencia / fosforescencia Las bandas que aparecen en un espectro UVvisible son anchas, ya que se superponen transiciones vibracionales y electrnicas. La excitacin corresponde a los electrones de enlace, por ello los picos de absorcin pueden correlacionarse con los tipos de enlaces. Por este motivo la espectroscopia UVvisible es vlida para identificar grupos funcionales en una molcula. Existen 4 tipos de transiciones posibles con electrones n, y : ! * : un electrn de un orbital sigma se excita al correspondiente sigma antienlazante en un compuesto saturado. La energa requerida es grande. La frecuencia radiante corresponde al UV de vaco y los mximos no se observan en la regin UV comnmente accesible. n ! * : se produce en compuestos saturados con pares de electrones no compartidos. Requiere menos energa que la anterior. La mayora de los picos aparecen a longitudes de onda menores de 200nm. ! * y n ! * : requieren presencia de grupos funcionales no saturados que aporten electrones pi. Es a estos centros absorbentes a los que se les denomina cromforos. La energa necesaria produce picos de absorcin dentro de la regin espectral experimentalmente accesible (200700nm). La mayora de las aplicaciones de la espectroscopa de absorcin en compuestos orgnicos se basa en estas transiciones. Tambin hay absorcin en la que participan electrones d y f. LIMITACIONES Limitaciones de la ley de beer: Con frecuencia se encuentran desviaciones de la proporcionalidad entre la medida de la absorbancia y la concentracin cuando b es constante. En algunas ocasiones estas desviaciones estn relacionadas con el fundamento de la ley y representan limitaciones propias de la misma. Otras veces surgen como consecuencia de la forma en que se realizan cambios qumicos asociados con cambios de concentracin; las dos ltimas son conocidas a veces como desviaciones instrumentales y desviaciones qumicas, respectivamente.

a) limitaciones propias de la ley de beer: La ley de Beer describe de forma correcta el comportamiento de absorcin de un medio que contiene concentraciones de analito relativamente bajas; en este sentido es una ley lmite. A concentraciones altas (generalmente>0.01M), la distancia media entre las molculas responsables de la absorcin disminuye hasta el punto en que cada molcula altera la distribucin de carga de las molculas vecinas. Esta interaccin, a su vez, puede alterar la capacidad de las molculas para absorber la radiacin de una determinada longitud de onda. Como la magnitud de la interaccin depende de la concentracin, la aparicin de este fenmeno da lugar a desviaciones de la linealidad entre la absorbancia y la concentracin. Un efecto similar se encuentra, a veces, en medios que contienen concentraciones de absorbente bajas pero concentraciones altas de otras especies, especialmente electrlitos. La estrecha proximidad de los iones al absorbente altera la absortividad molar de ste por interacciones electrostticas; el efecto se reduce mediante dilucin. Aunque, normalmente, el efecto de las interacciones moleculares no es significativo para concentraciones inferiores a 0.01M, entre ciertos iones o molculas orgnicas grandes aparecen algunas excepciones. Por ejemplo, se ha comprobado que la absortividad molar del catin del azul de metileno en disoluciones acuosas a 463nm aumenta un 88% cuando la concentracin del colorante aumenta de 105 a 102M; incluso por debajo de 106M no se observa un cumplimiento estricto de la ley de Beer. Tambin surgen desviaciones de la ley de Beer como consecuencia de la dependencia de con el ndice de refraccin del medio. Por ello, si los cambios de la concentracin causan alteraciones significativas en el ndice de refraccin n de una disolucin, se observan desviaciones de la Ley de Beer. Para este efecto puede hacerse una correccin mediante la sustitucin de por la cantidad n/(n2+2)2 en la ecuacin log(Po/P)=A. En general, esta correccin nunca es muy grande y rara vez es significativa para concentraciones menores de 0.01M. b) Desviaciones qumicas: Cuando un analito se disocia, se asocia o reacciona con un disolvente para dar lugar a un producto con un espectro de absorcin diferente al del analito, se producen desviaciones de la ley de Beer. Las disoluciones acuosas de los indicadores cidobase son un ejemplo caracterstico de este comportamiento. Por ejemplo, el cambio de color asociado con un indicador tipo HIn se produce como consecuencia de los cambios en el equilibrio HInH+ + In c) Desviaciones instrumentales originadas por la radiacin policromtica: El cumplimiento estricto de la ley de Beer slo se observa cuando la radiacin es realmente monocromtica; esta observacin es otra manifestacin aun del carcter lmite de la ley. Desafortunadamente, en la prctica es raro el uso de radiacin restringida a una sola longitud de onda debido a que los dispositivos que aslan porciones de la seal de salida de una fuente continua generan una banda de longitudes de onda ms o menos simtrica en torno a la deseada. La siguiente deduccin muestra el efecto de la radiacin policromtica en la ley de Beer. Consideramos un haz formado slo por dos longitudes de onda ' y ''. Asumiendo que la ley de Beer se aplica estrictamente para cada una de estas longitudes de onada, podemos escribir para la radiacion landa': A'=log(P'o/P')= 'bc o P'o/P'=10('bc) 2

y P'=P'o10('bc) de forma similar, para landa'': P''=P''o10('bc) Cuando la medida de la absorbancia se realiza utilizando una radiacin compuesta por ambas longitudes de onda, la potencia del haz emergente de la disolucin viene dado por P'+P'' y la del haz del disolvente por P'o y P''o. Por tanto, la medida de la absorbancia Am es: Am=log[(P'o+P''o)/(P'+P'')] Sustituydo por P' y P'' se convierte en Am=log[(P'o+P''o)/(P'o10('bc)+P''o10(''bc))] Ahora bien, cuando '='' esta ecuacin se simplifica de la siguiente forma: Am='bc y se cumple la ley de Beer. Sin embargo, la relacin lineal entre Am y la concentracin deja de ser lineal cuando las absortividades molares difieren entre s; es ms, cabe esperar mayor desviacin de la linealidad cuanto mayor sea la diferencia entre ' y ''. Esta deduccin puede extenderse de forma que incluya longitudes de onda adicionales; el efecto seguira siendo el mismo. Es un hecho experimental observado que las desviaciones de la ley de Beer resultantes del uso de un haz policromtico no son apreciables, con tal de que la radiacin utilizada no abarque una regin del espectro en la cual el absorbente muestre cambios grandes en la absorcin en funcin de la longitud de onda. Tambin se ha observado experimentalmente que las medidas de absorbancia en el mximo de los picos estrechos hace que la desviacin de la ley de Beer no sea significativa si la anchura de banda efectiva del monocromador o filtro f es menor que 1/10 de la mitad de la anchura del pico de absorcin en la semialtura. d) Desviaciones instrumentales originadas por la radiacin parsita: La radaicin que emerge del monocromador suele estar contaminada con pequeas cantidades de radiacin dispersada o parsita, la cual alcanza la rendija de salida como resultado de dispersiones y reflexiones en varias superficies internas. La radiacin parsita, con frecuencia difiere sustancialmente en su longitud de onda de la radiacin principal, y adems, puede no haber atravesado la muestra. Cuando las medidas se hacen en presencia de radiacin parsita, la absorbancia observada viene dada por A'=log[(Po+Ps)/(P+Ps)] donde Ps es la potencia de radiacin parsita no absorbida. Cuando las concentraciones y los caminos pticos son elevados, la radiacin parsita puede causar desviaciones significativas en la relacin lineal entre la absorbancia y el camino ptico. Efecto del ruido instrumental en los anlisis espectrofotomtricos:

La exactitud y la precisin de los anlisis espectrofotomtricos suelen estar limitadas por los ruidos asociados al instrumento. a) Ruido instrumental como funcin de la transmitancia: Una mediada espectrofotomtrica lleva consigo tres etapas: un ajuste del 0%, un ajuste del 100% y una medida del porcentaje de T cuando se sita la muestra en la trayectoria de la radiacin. El ruido asociado a cada una de estas etapas se combina para dar una incertidumbre neta en el valor final de T obtenido. La relacin entre el ruido encontrado en la medida de T y la incertidumbre en la mediada de la concentracin puede deducirse escribiendo la ley de Beer de esta forma: c=logT/b=0.434lnT/b Mediante algunas operaciones, relacionamos la desviacin estndar de la concentracin c con la desviacin estndar de la transmitancia t: (c/c)= ( t/TlnT)= (0.434 t/TlogT) Para un nmero limitado de mediadas, se reemplaza la desviacin estndar de la poblacin c y t por la desviacin estndar de la muestras sc y st y se obtiene: sc/c=(0.434st/TlogT) Esta ecuacin relaciona la desviacin estndar relativa de c (sc/c) con la desviacin estndar absoluta de la medida de transmitancia (st). APLICACIONES E INFORMACIN OBTENIDA Anlisis cualitativo: El disolvente empleado influye en las posiciones de los mximos, los polares desplazan a mayor longitud de onda. Las mediciones de absorcin son tiles para descubrir la presencia de ciertos grupos funcionales que actan como cromforos. Anlisis cuantitativo: Por la ley de Lambert Beer podemos medir la concentracin de la sustancia que absorbe al medir la cantidad de radiacin absorbida, independiente de la radiacin incidente: A = b c = log T = log(I0/I) Caractersticas: Gran aplicacin: una gran variedad de especies inorgnicas y orgnicas que absorben a longitud de onda de UVVisible y pueden cuantificarse; otras que no absorben por s mismas pueden hacerlo al ser tratadas qumicamente. Alta sensibilidad: hasta 107 M segn se modifique una tcnica. Selectividad: puede analizarse cada especie por separado. Buena precisin: r =13% que puede reducirse. Facilidad y comodidad. Procedimiento: 4

 Eleccin longitud de onda: el anlisis espectrofotomtrico se hace a que sea pico de absorcin para obtener mayor sensibilidad. Variables que influyen en absorbancia: naturaleza del disolvente, pH de la disolucin, temperatura, concentracin de electrolitos y presencia de interferentes. Determinacin de la relacin entre absorbancia y concentracin: se prepara la curva de calibrado partiendo de una serie de disoluciones patrn de composicin similar a las muestras reales. Limpieza y manejo de las celdas. Anlisis de mezclas de sustancias absorbentes: AT = A1 + A2+...+ AN. Mtodos de medida: Espectrofotomtrico ordinario. Espectrofotomtrico de escala expandida o de anlisis de trazas. Determinaciones simultneas. Adicin estndar. Espectroscopa de derivadas. Valoraciones espectrofotomtricas. Sistemas que absorben: Transiciones electrnicas: ! * , n ! * , n! * , ! *. Molculas inorgnicas con orbitales d y f (lantnidos y actnidos). Molculas con transferencia de carga :M ! L y L ! M. MATERIALES QUE SE ANALIZAN: La espectroscopa ultravioletavisible es la ms limitada para la informacin de compuestos, ya que solo puede sernos de utilidad para aquellos que tengan un cromforo o instauraciones visibles en la regin comprendida entre los 100 y los 800 nm. (Energa comprendida entre las 286 y 36 Kcal/mol). Cromforo: es cualquier grupo de tomos que absorben luz independientemente de que presente color o no. Tambin puede presentar un grupo auxcromo que es el que amplia la conjugacin de un cromforo mediante la comparticin de electrones de no enlace. Debemos tener en cuenta que la obtencin de un espectro UV supone en primer lugar disolver la sustancia en un disolvente adecuado, que tambin absorbera en el UV, por lo que en la prctica la espectroscopia UV se ve limitada a longitudes de onda superiores a 200220 nm. Debido a ello, como podemos imaginar, no son muchos los grupos funcionales que podremos determinar con la espectroscopia UV, siendo de destacar que todos ellos deben poseer al menos un enlace doble, como compuestos aromticos carboxlicos. Resultados que se obtienen: Se obtienen unas lneas a determinadas longitudes de onda que corresponden con los mximos de absorcin. Estos se deben a la presencia de cromforos en la molcula. Para caracterizar dichas absorciones, adems de la longitud de onda mxima para cada absorcin, debemos recordar la ley de LambertBeer, segn la cual: Absorbancia = lc Donde: 5

= Coeficiente de extincin molar, es una constante relacionada con el rea de incidencia del cromforo y la probabilidad de de que produzca la absorcin. l = recorrido en cm. de la radiacin a travs de la muestra. c = concentracin de la muestra en moles/litro. (Consideraremos que cuando es inferior a 10000 esa absorcin se debe a una transicin electrnica prohibida por las reglas de seleccin) Al final lo que conseguimos es una tabla en la que tenemos relacionadas la longitud de onda de mxima absorcin y el coeficiente de extincin molar , y con esta informacin, tendramos que buscar en alguna tabla de valores ya tabulados a que cromforo o grupo funcional hacen referencia.