Вы находитесь на странице: 1из 8

I 1. Para preparar o complexo trisoxalatoferrato(III) de potssio, partiu-se de 20g de sulfato ferroso amoniacal (NH4)2Fe(SO4)2.

6 H2O e utilizou-se um excesso de cido oxlico/oxalato de amnio, obtendo 13,7g do produto final. a) Poderia ter utilizado outro sal de ferro em vez do sulfato ferroso amoniacal? Justifique a razo desta escolha. b) Escreva a equao global que traduz esta sntese. 2(NH4)2FeII(SO4)2.6 H2O + 3H2C2O4 -> [FeIII(C2O4)3]3- + 2(NH4)2SO4 + 6H20 + 2H2SO4 (confirmar; ficam a faltar 2 H+ do lado dos produtos.falta H2O2?nao diz no enunciado...) c) Que reagente utilizou como oxidante? Escreva a semi-reao de reduo. H2O2 agente oxidante forte e facilmente eliminado 2[FeII(C2O4)3]4-(s) -> 2[FeIII(C2O4)3]3-(s) + 2e- - semi-reaco de oxidao 2e- + H2O2(aq) -> 2OH- (aq) semi-reaco de reduo ::: 2[FeII(C2O4)3]4-(s) + H2O2(aq) -> 2[FeIII(C2O4)3]3-(s) + 2OH-(aq) Neste passo temperatura < 40C para evitar projeces d) Com que finalidade aumentou a temperatura aps se ter completado a reao de oxidao? O hidrxido frrico forma-se ento devido aos ies OH- (formados no passo anterior) e que se podem ligar ao ferro livre, caracterizando-se por um precipitado castanho. A formao do precipitado deve-se ao Ksp baixo(constante de solubilidade). Aumenta-se ento a temperatura para que o hidrxido de sdio formado solubilize e depois com a adio de cido oxlico este se coordene ao ferro que precipitou. e) Calcule o rendimento. M(sulfato ferroso amoniacal)=392,14 g/mol; m=20g; n=0,051mol M(K3[Fe(C2O4)3])=437,27g/mol; m=13,7g; n=0,031mol Rendimento = 0,031/0,051 (obtido/previsto) = 60,78% 2. a) Se adicionar amnia a uma soluo de ferro (II) o que acontece? Escreva a respectiva equao qumica. Fe2+(aq)+2OH- (aq)+2NH4+(aq) Fe(OH)2(s)+2NH4+(aq) Forma-se um precipitado verde azulado; Em excesso de NH3 o precipitado no se dissolve. Extra: Fe3+(aq)+3OH- (aq)+3NH4+(aq) Fe(OH)3(s)+3NH4+ (aq) Forma-se um precipitado laranja; Nota terica: O Fe (OH) 3 no se dissolve em excesso de base, no entanto, com uma diminuio do pH, tal j poderia ser possvel. b) Se adicionar a [Fe(H2O)6]3+ um pouco de fluoreto de sdio e depois umas gostas de uma soluo de iodeto de sdio obtm um resultado diferente do que se juntar simplesmente a soluo de iodeto ao aquocomplexo de ferro. Atravs de esquemas qumicos justifique estas observaes.

Iodeto de potssio/sdio (sem NaF) 2Fe3+ (aq) + 2I- (aq) 2Fe2+ (aq) + I2 (aq) Como o iodo muito pouco solvel e voltil, no possvel a sua observao; A adio de CHCl3 permitiu a observao de iodo molecular (I2) de cor acastanhada, ao formar duas fases distintas: a aquosa contendo o excesso de I-, e a orgnica contendo o iodo molecular. Iodeto de potssio/sdio (com NaF) [Fe(H2O)6]3+ (aq) + 6F- (s) [FeF6] 3-(aq) + 6H2O (aq) Com a adio de KI, no ocorre reaco uma vez que o F- um ligando mais forte que I-.
Par Redox F- /F2 Fe2+ /Fe3+ I- /I2 K/K+ E0 (V) +2,87 +0,67 +0,62 -2,92

Como o voltil e pouco solvel, no possvel a sua observao. Apenas se torna visvel quando se adiciona clorofrmio, verificando-se a formao de duas fases: uma aquosa onde est presente o excesso de I- e uma outra, a fase orgnica, que se encontra no fundo do tubo, onde existe o Iodo Molecular, da a cor violeta/roxa. No segundo caso, adicionou-se Fluoreto de Sdio, verificando-se que o Flor se iria complexar com o Ferro. Com a adio posterior de iodeto de potssio, no houve reaco e isto pode ser explicado pelos diferentes potenciais redox do Flor e do Iodo. Isto , o ferro por ter um estado de oxidao +3, torna-se bom redutor, procurando ento um mau redutor para se ligar. Comparando os potenciais redox do Flor e do Iodo, verifica-se que o F- pior redutor que o I-, da permanecer ligado ao ferro, enquanto que o I- continua ligado ao K+. Observam-se ento duas fases incolores, a de cima a aquosa e a que se encontra no fundo do tubo a orgnica. (No ter antes a ver com a fora de ligao dos ligandos srie espectroqumica?) II 1. Os frascos A e B contm 2 protenas hmicas que foram parcialmente purificadas durante a actividade experimental. a) Indique justificando como poderia identificar qual a protena presente em cada um destes frascos. b) Para cada uma destas protenas descreva resumidamente as etapas realizadas na sua purificao, comentando a molaridade e pH dos tampes utilizados. Como avaliou o grau de pureza da protena? Sugira outra tcnica que lhe permita confirmar a ausncia de protenas contaminantes. c) A espectrofotometria de absoro atmica foi utilizada para doseamento dum determinado io metlico na actividade experimental. Tendo em conta a tabela 1, que valores esperaria obter por esta tcnica para a

I-

amostra de mioglobina obtida na aula assumindo que a amostra estava pura. Se os resultados no corresponderem aos esperados quais as causas de erro que aponta como mais provveis indicando sugestes para ultrapassar este problema?

2. Com que objectivo foi usada a espectrofotometria de absoro de fluorescncia? Comente as variaes espectrais observadas para a amostra de triptofano quando o solvente gua foi substitudo por etanol? Justifique. Espectroscopia de Fluorescncia Tcnica que permite analisar as propriedades microambiente da molcula em estudo no estado excitado, dependendo do pH, temperatura, presso e das ligaes de hidrognio. A fluorescncia e a fosforescncia so fenmenos da fotoluminescncia . As caractersticas de fluorescncia so influenciadas pela estrutura da protena. Obtm-se os espectros de excitao e emisso da protena A funo de referncia no espectofluormetro IF=kI0FAbs. Diferenas entre Espectroflourimetro e Espectrofotmetro Devem-se s diferentes sensibilidades das duas tcnicas;

No espectrofluormetro, a gama de resposta linear do detector superior, pois o limite de deteco de uma a trs ordens de magnitude menor do que no espectro de absoro, sendo que a primeira tncica tambm influenciada pelo microambiente.

Comparao dos espectros de emisso do Triptofano: espectro de emisso Trp+etanol tem o mximo localizado a um comprimento de onda menor do que o espectro de emisso Trp+tampo. Este desvio verifica-se pois o etanol mais apolar que a gua. Assim, no espectro de emisso com tampo (gua) o triptofano passa a estar exposto a um meio mais polar, deslocando o pico para comprimentos de onda maiores - Fenmeno de Relaxao do Solvente. Assim, a partir do espectro de emisso pode-se ter conhecimento da polaridade do meio que rodeia uma determinada molcula. Nos espectros de emisso, os compostos ficam maioritariamente no seu estado excitado. A relaxao do solvente, estabiliza essa excitao diminuindo a energia do estado excitado. Assim, como a energia e o comprimento de onda so grandezas inversamente proporcionais, com a diminuio da energia, o pico de emisso ir ocorrer para maiores comprimentos de onda. Assim, sabendo que a relaxao do solvente tanto maior quanto mais polar for o solvente que rodeia a molcula, e como o etanol mais apolar que a gua (tampo) normal que o espectro de emisso do Trp+etanol tenha um mximo localizado para comprimentos de onda menores (maior energia), pois no existe um grande efeito de relaxao do solvente.

3. Que tipo de informao pode obter atravs da tcnica de espectrofotometria de infravermelho? Comente os resultados obtidos na actividade experimental. FTIR Fourier Transformed InfraRed uma espectroscopia vibracional das ligaes moleculares do composto com radiao infravermelho; A vibrao activa no IV quando existe uma alterao do momento dipolar resultante da vibrao; Fornece informao sobre a estrutura secundria da protena; O espectro de IV de protenas inclu bandas caractersticas: Amida I e Amida II; uma tcnica no destrutiva e de medio precisa, permitindo um grande. nmero de medies num curto espao de tempo. Discusso de resultados: Na anlise conformacional de protenas por FTIR, existe uma banda particularmente importante, correspondente amida I. Esta surge a uma frequncia de aproximadamente 1658 cm-1. A origem molecular desta banda deve-se existncia de ligaes C = O, que quando sujeitas a esta tcnica sofrem alongamento. A banda correspondente amida I, fornece informao sobre a estrutura ao nvel secundrio das protenas.

Mioglobina: Observaram-se trs picos principais: 3301,55 cm-1, 1658,49 cm-1, 1544,71 cm1. Pode-se concluir que a mioglobina possui na sua constituio -hlices, correspondente a 1658,49 cm-1. -Globulina: Observaram-se dois picos principais: 1643,064 cm-1 , 1531,212 cm-1. Pode-se concluir que a -Globulina possui folhas na sua constituio, correspondente a 1643,064 cm-1. Mioglobina: os outros dois picos observados nos espectros de FTIR correspondem s bandas: Amida A (3301,55 cm-1): elongao N-H (aminas primrias e secundrias); Amida II (1544,71 cm-1): elongao C-N e N-H bending; -Globulina: o outro pico observado corresponde banda: Amida II (1531,212 cm-1). A -Globulina permite-nos ento fazer a comparao com a mioglobina, em que na primeira protena existe sobretudo folhas e no caso da mioglobina predominante a existncia de hlices-. Dados da literatura: Observa-se, tal como nos espectros de FTIR, que a mioglobina possui maioritariamente hlices alfa na sua estrutura secundria. Pode-se tambm concluir que para a mioglobina humana existe predominantemente hlices alfa na sua constituio secundria. Observa-se, tal como nos espectros de FTIR, que a -Globulina possui maioritariamente folhas beta (Strand) na sua estrutura secundria. Concluses: Atravs da tecnica de FTIR possvel determinar a estrutura secundria e os compostos associados protena sem ser necessrio a sua cristalizao como acontece na difraco Raio-X. Constata-se que estruturalmente a mioglobina e a -Globulina diferem na percentagem de hlices alfa e folhas beta. Recorrendo tcnica de fluorescncia possvel estudar a influncia da variao de parmetros do microambiente na estrutura das protenas.

II 1. Tendo em conta os estudos efectuados sobre a fosforilao oxidativa com mitocndrios de fgado de rato, colocados num meio de tampo de fosfatos, comente os registos seguintes obtidos com um elctrodo de oxignio.

a) Comeamos por ter meio+mitocndrios, o que pode provocar um ligeiro decrscimo da concentrao de O2 se ainda existirem alguns substratos oxidveis na suspenso mitocondrial preparada; no entanto, s quando se adiciona succinato que se consegue verificar uma descida acentuada da concentrao de O2. Isto acontece porque o succinato oxidado a nvel do complexo II, sendo os electres transferidos ao longo dos restantes transportadores, reduzindo por fim o oxignio molecular, fazendo por isso baixar a sua concentrao no meio. Com a adio de ADP, este consumo vai ser acentuado pois estamos a incentivar a fosforilao oxidativa em que ADP fosforilado em ATP - ao nvel do complexo V com consequente consumo de oxignio (porque a sntese de ATP est acoplada ao transporte electrnico e consequentemente reduo de O2). A oligomicina inibe o complexo ATPsintase, o que leva inibio da respirao. A adio de ADP no produz qualquer alterao porque o complexo ATP-sintase est inibido. A adio de FCCP resulta num consumo abrupto de oxignio, uma vez que o FCCP um cido lipoflico que se difunde atravs da membrana mitocondrial produzindo poros por onde o gradiente protnico dissipado. Neste sentido, o transporte electrnico incentivado na tentativa de repor o gradiente que assim se dissipa, levando a um maior consumo de oxignio. b) No h reduo do O2 uma vez que no esto presentes os mitocndrios. Com a adio de mitocndrios. Com a adio de mitocndrios, j ocorre respirao, diminuindo a concentrao de oxignio, pelo que se observa um aumento acentuado do declive, devido adio no passo anterior de ADP, que provoca um aumento da fosforilao oxidativa que se encontra acoplada ao transporte electrnicoe por isso reduo de O2, sendo oxidados os substratos que j se encontravam na suspenso mitocondrial preparada. Com a adio de succinato, ocorre respirao, havendo por isso diminuio da concentrao de oxignio. A adio de malonato resulta na diminuio da taxa de consumo de oxignio, porque o malonato um inibidor do complexo II, pelo que deixa de haver oxidao do succinato a este nvel, diminuindo o transporte electrnico e consequentemente a reduo de O2. Esta diminuio no total, no sentido em que ainda podem provir electres do complexo I. A adio de succinato volta a fornecer substratos oxidveis (substrato do complexo II) (por acabar)

2. Suponha que tem uma suspenso de mitocndrios que no esto em respirao activa em suspenso numa soluo de tiocianato de potssio (KSCN). O objectivo desta experincia o estudo do swelling mitocondrial. a) Considerando que a membrana permevel ao io tiocianato, justifique porque razo no h swelling mitocondrial nas condies acima descritas. necessrio um transportador de K+(valinomicina) para que haja entrada do SCN- e provocar assim um equilbrio de cargas. Sem a entrada destes, no ocorre inchamento mitocondrial. b) Haver alguma alterao se se adicionar nigericina suspenso em estudo? E valinomicina? Justifique a sua resposta. Com valinomicina ocorre swelling pois um transportador de carga, transportando o K+ para o mitocndrio e o SCN- ir tambm entrar para repor a carga pois altamente permevel. Com nigericina+KSCN os mitocndrios no incham pois no h balano de cargas. Com a nigericina a entrada de catio e anio electroneutra. A entrada de protes resulta na exportao dos mesmos em troca de K+.

3. A tabela abaixo representa leituras obtidas num elctrodo de oxignio a partir de uma suspenso de cloroplastos contendo um aceitador de Hill, sujeita a forte iluminao. A temperatura do ensaio de 20C e a cmara reaccional tinha um volume de 5mL. O elctrodo foi calibrado previamente, correspondendo 70% do papel de registo a gua saturada com ar, e o 0% a gua sem oxignio, para que a escala do elctrodo permita realizar leituras em percentagem de oxignio. A concentrao de O2 em gua saturada temperatura de 20C 0,285 mmol.dm3. O contedo em clorofila da suspenso de cloroplastos usada de 2,13 microgramas/mL.

a) Durante a calibrao do elctrodo, explique de que forma obtm experimentalmente a linha correspondente a 0% de O2. b) Calcule a velocidade fotossinttica do ensaio em micromol/min.(mg clorofila)^-1. c) Escreva a equao geral da reaco que est a estudar no elctrodo de oxignio e d exemplos de aceitadores de Hill.

R:ferricianeto?