11.10.

2012

FARMACOGNOZIE GENERAL
Istoric Cuvinte cheie Surse Flora cultivat Flora spontan Culturi de celule i esuturi Obinerea produselor naturale Recoltarea Sortarea Decorticarea Stabilizarea, fermentarea Uscarea Condiionarea Ambalarea, marcarea Depozitarea i conservarea Degradrile produselor vegetale suferite n timpul conservrii Biotehnologia farmaceutic Biosinteza principiilor active

FARMACOGNOZIA
studiul complex al produselor medicinale naturale: vegetale animale folosite n: farmacie - preparate galenice: infuzie, tincturi, extracte industrie - medicamente: atropin, papaverin, digoxin, colchicin Termenul: pharmacon remediu, medicament gnosis cunoatere 1815 C. A. Seydler Analecta Pharmacognostica tiina cunoaterii i recunoaterii produselor medicamentoase 78 e.n. Dioscoride Materia medica materiale medicamentoase, substane i produse naturale

11.10.2012

ISTORIC
Antichitate: 12.000 de specii medicinale Mesopotamia tblie de lut din (Ninive) cultivau macul (2700en) menta (1200en) Egipt papirusuri - (Ebers, 1550 en): 200 plante: ricin, coriandru India: Vedele piper, arborele de stricnin China Primul tratat de farmacologie chinezesc: 365 de plante Anestezia cu plante (inhalri de mselari, cnep)

Grecia Hipocrate (460-374en): Corpus Hippocraticum 236 plante Medicina raional: rolul naturii n vindecarea bolilor, medicului revenindu-i sarcina de a ajuta natura Theophrast (372-287en) Historia Plantarum Cauzele plantelor Cercetarea plantelor printele botanicii 500 specii

Dioscoride (50-100 en) Materia Medica (De Universa Medica) 600 plante

11.10.2012

Roma Plinius cel Btrn Naturalis historia n 37 de volume Galenus (131-200, a trit la Roma) Printele Galenicii 473 medicamente vegetale

Evul Mediu perioada de destrmare a Imperiului Roman (perioad de magie i ignoran) perioada supremaiei arabe: Rhazes Avicenna Averrhoes Mesue prima farmacie: 840, Bagdad

Secolul XV (Renatere) perioada tiinific: se pun bazele chimioterapiei primul microscop Paracelsus (1493-1541, chimia aplicat n fitoterapie) quinta essentia (o mic parte din plant este activ arcanum n cantitate de 1 g n 20 kg plant) = principiu activ

11.10.2012

Secolul XVI-XVIII izolarea unor principii active acizi organici (C.W.Scheele), alcaloizi, vitamine 1753 Linn: sistemul de clasificare al plantelor (6000 plante) Genera Plantarum Species Plantarum Secolul XIX morfina (Derosne, Seturner, 1806) chinina (Pelletier, Caventou, 1820) hiosciamina (Geiger, Hess, 1833) digitalina (Nativelle, 1869)

Secolul XX: elucidarea biosintezei (izotopi radioactivi) introducerea n cultur a unor plante medicinale culturi de celule i esuturi pe medii sintetice cercetri farmacodinamice (s-au testat substanele izolate, extractul): fitocomplex

11.10.2012

n prezent: Industria farmaceutic: din plante

45% din medicamente sunt obinute din plante

Populaia globului: 80-85% remedii tradiionale (90% sunt plante) 200.000 de specii de plante medicinale i aromatice (230 frecvent) 20.000 plante cercetate de om (1100 dup alte aprecieri) 250 specii pentru izolare de substane pure

Utilizarea plantelor medicinale n Romnia

Herodot (4000en): dacii i sciii
Plante cu aciune calmant-anestezic, cicatrizant, expectorant Scrieri: Tucidide (460-396en)
Tblie dacice

Dioscoride: zeci de plante cu nume dacice Plante medicinale (alimentare) folosite de pe vremea tracilor Alium cepa, Aconitum, Hypericum, Sarothamnus, Sambucus nigra, Chelidonium, Gentiana, Verbascum, Mentha, Salvia, Thymus, Achillea, Arthemisia, Taraxacum, Pimpinella anisum, Carum carvi, Eryngium planum, Conium maculatum etc.

11.10.2012

Dovezi materiale: Dobrogea: spturi arheologice Prima carte: 1578 (Cluj) Herbarium Brbiereii foloseau plantele n tratatrea bolilor Alexandru Lpuneanu / boal de ochi Matei Basarab (1640-1652): Pravila (Carte de legi): Vraciul are voie s studieze ierburile i s descopere leacurile mpotriva otrvurilor Psaltirea Scheian: scorioara, isop tacta (gum) Lexiconul slavo-romn (1694): izma, mutar 1695: Spitalul Colea / Iai cu farmacie n care se vindeau ierburi de leac 1735: dovezi de culegere organizat a plantelor (Grigore Ghica)

1791: farmacist Singerus Peter (Sibiu): lista plantelor medicinale din Ardeal (latin, romn, german, maghiar) 1833: Societatea de Medici i Naturaliti (Iai): studierea florei i a plantelor medicinale 1863: Farmacopeea Romn ediia I: 217 droguri vegetale secolul XX: botaniti, biologi, agronomi, farmaciti, medici studierea plantelor medicinale 1904: Cluj prima staiune experimental din lume, specializat n studierea plantelor medicinale i aromatice (prof. Bela Pater) 1929: ntreprinderea Digitalis (Ortie) Adonis (Cluj), Romania (Bucureti) 1949: Plafar 1975: Staiunea de Cercetri pentru Plante Medicinale i Aromatice Fundulea

11.10.2012

Cuvinte cheie
Plant medicinal o specie vegetal al crui organ (toat planta) se utilizeaz datorit coninutului su n principii active.

Produs vegetal medicinal (produs natural medicinal, drog = uscat) organul sau o anumit parte a plantei supus unor prelucrri i uscat (rar, proaspt) care se folosete n farmacie sau industrie. Denumire (latin, binar): 1. genul sau specia (genitiv) 2. organul folosit (nominativ): radix, rhizoma, tubera, bulbus, cortex, herba, folium, flos, fructus, semen, gemmae (turiones)

Exemple:

Althaeae radix, A. folium Althaea officinalis / Malvaceae

Althaeae radix mundata

Ginseng radix Panax ginseng / Araliaceae Valerianae rhizoma cum radicibus Valeriana officinalis / Valerianaceae Colchici bulbus, C. semen Colchicum autumnale / Liliaceae Aconiti tuber Aconitum Napellus / Ranunculaceae

11.10.2012

Belladonnae folium Atropa belladonna / Solanaceae

Tagetes flos Tagetes patula / Asteraceae Carvi fructus Carum carvi / Apiaceae Frangulae cortex Rhamnus frangula / Rhamnaceae Digitalis purpureae folium Digitalis purpuraea /

Srophulariaceae
Digitalis lanatae folium Digitalis lanata /

Srophulariaceae
Saponariae rubrae radix Saponaria officinalis /

Caryophyllaceae Saponariae albae radix Gypsophilla paniculata / Caryophyllaceae

Alte denumiri: Secale cornutum scleroii de Claviceps purpurea Cynosbati fructus Rosa canina / Rosaceae Opium Papaver somniferum / Papaveraceae

Produse de metabolism: Rezinele: Benzoe Styrax benzoin / Styracaceae Uleiurile volatile: Menthae aetheroleum Uleiurile grase: Olivae oleum Gume: Gummi arabicum

11.10.2012

Principii active quinta essentia substane chimice sintetizate de organul vegetal, cu proprieti terapeutice Aciune terapeutic: o substan: arbutozida / Vitis idaeae folium grup de substane: glicozidele cardiotonice / Digitalis sp. complexul fitochimic: ulei volatil + valepotriai / Valerianae rhizoma cum radicibus

Plante aromatice conin pe lng alte substane, ulei volatil cu miros foarte aromat Aromaterapia

Produs animal: materia prim folosit pentru obinerea de extracte totale sau de principii active (hormoni, vitamine) provenit de la animale. Animale slbatice: Physeter macrocephalus (caalot - cetaceul) Gadus morrhua (cod - ulei de pete - Jecoris oleum) Animale domestice: Sus scrofa (hormoni) Ovis aries (lanolin) Insecte: Apis mellifica

11.10.2012

Clasificare (filogenetic) 1. 2. 3. 4. Thallophytae Bryophytae i Pteridophytae Gymnospermatophyta Angiospermatophyta

a. Dicotyledonatae b. Monocotyledonatae

5. Specii de animale

1. Thallophytae bacterii, alge, fungi, licheni Phaeophyta Laminaria sp. Rhodophyta Gelidium Gracilaria Chondrus crispus Gigartina mamillosa

Fungi Clavicipitaceae: Claviceps purpurea Amanitaceae: muscarina Licheni (400 de milioane de ani): Lecanora esculenta mana din Biblie Usnea ssp. acidul usnic antibiotic Cladonia sp. Cetraria sp Evernia prunastri parfumerie

10

11.10.2012

2. Bryophyta i Pteridophyta Equisetaceae Equisetum arvense mineralizant (Si), antiinflamator, diuteric Polypodiaceae Dryopteris filix-mas Phyllitis scolopendriumn (nvalnic) Lycopodiaceae Lycopodium clavatum

3. Gymnospermatophyta plante lemnoase, arbori, arbuti 10.000 specii (9200 fosile) Ginkgoaceae Ginkgo biloba Pinaceae, Cupressaceae Pinus, Cedrus, Larix, Picea, Juniperus communis, Thuja Taxaceae Taxus baccata Ephedraceae Ephedra

4. Angiospermatophyta / Dicotyledonatae 250 000 specii ieboase, arbuti, copaci Subclasa Archichlamydeae 37 ordine + 226 familii: Juglandaceae, Salicaceae, Betulaceae, Caryophylaceae, Papaveraceae, Theaceae, Rutaceae, Hamamelidaceae, Ranunculaceae, Rosaceae, Fabaceae, Malvaceae, Sterculiaceae, Berberidaceae, Rosaceae, etc Subclasa Sympetalae 11 ordine + 63 familii: Ericaceae, Styracaceae, Lamiaceae, Solanaceae, Plantaginaceae, Asteraceae, Apocynaceae, Rubiaceae, Oleaceae etc. 5. Angiospermatophyta / Monocotyledonatae embrionul are un singur cotiledon 2800 genuri, 66000 specii (ierboase) 8 ordine, 17 familii: Liliaceae, Iridaceae, Poaceae, Palmae, Zingiberaceae, Orchidaceae, Amaryllidaceae, Dioscoreaceae etc

11

11.10.2012

6. Produse animale Regnul Protozoa (Protozoare):

Plasmodium, Entamoeba

Porifera (burei, spongieri)

antimicrobian, citotoxic, antimalaric

Coelenterata (meduze, anemone, corali)

Plexaura homomalla (corali): prostaglandina A2 Sarcophyton glaucum: sarcofitoli (diterpenoide) - antitumorale

Platihelminti (viermi plai)

triesc n intestin, tractul biliar, plmni, venulele intestinului, ale tractului urogenital Trematode Schistosoma - fibroza hepatic Cestoda

Molusca: scoici, melci, sepii, caracatie

Sepia officinalis: antiacid, n paste de dini (pudra alb de coral)

Artropode
sunt animale nevertebrate, ce au membrele articulate insecte, milipede, centipede, arahnide, crustacee Coccus cacti: acid carminic Cantharis vesicatoria Apis melifica

Cordata:
Caalot, cod: vitamina A, D, acid eicosapentenoic (supliment dietetic) Bufo (broasca) erpi veninoi (vipere, cobre): Crotalus, Bothrops

Mammalia: grsime, lanolina, gelatina, mosc, insulina, hormoni, snge, ficat, catgut, vaccin, ser

12

11.10.2012

Istoric, Cuvinte cheie

Surse: flora cultivat, flora spontan, culturi de celule i esuturi

Obinerea produselor naturale Recoltarea, Sortarea, Decorticarea Stabilizarea, Fermentarea Uscarea, Condiionarea Ambalarea, Marcarea, Depozitarea i Conservarea

Biotehnologia farmaceutic Biosinteza principiilor active

SURSE DE PRODUSE NATURALE

1. Flora spontan 2. Plante de cultur 3. Culturi de celule i esuturi Glob: 800.000 specii: 10% medicinale 300.000 cormofite (10% studiate chimic, farmacologic) 175.000 talofite (alge, licheni, muchi) 70.000 se utilizeaz Index computerizat 85.000 specii 40-60% - medicamente de origine natural (80% n rile subdezvoltate) Romnia: 3500 specii vegetale superioare 900-1000 plante medicinale (300-400 n terapie) 150 din flora spontan 140160 specii utilizate n industrie

13

11.10.2012

1. Flora spontan surs ieftin i important, nu necesit efort exploatare raional pentru: Arctostaphylos uva ursi, Pinus montana, Arnica montana, Adonis vernalis Dezavantaje: producia greu de apreciat dezvoltare inegal inconveniente legate de transport

2. Flora cultivat Romnia: 1959: 14 specii cultivate n prezent: 50 specii cultivate Iniiativa: Cluj, n cadrul staiunii de profil nfiinat n 1904

14

11.10.2012

S-au cultivat: Plante din flora spontan: Atropa belladonna, Vinca minor Specii rare, ocrotite: Angelica archangelica Specii din alte zone: Solanum laciniatum

Avantajele cultivrii: dezvoltarea uniform a plantelor pe toat suprafaa momentul optim de recoltare zonarea culturilor valorificarea unor terenuri mai puin propice: nisipoase: semisrturi: cu exces de umiditate:

15

11.10.2012

combaterea eroziunii solului se evit substituirile se evit epuizarea unor specii rare Economice aplicarea msurilor i experimenelor agrotehnice aclimatizarea: din zone geografice diferite n condiii pedoclimatice asemntoare sau diferite ameliorarea: se crete calitatea produciei

Ameliorarea
realizeaz populaii vegetale, soiuri noi: se bazeaz pe variabilitate: existena sau crearea unor indivizi cu caractere

morfoanatomice diferite

natural obinut prin selecie natural sau artificial

provocat din taxoni chimici infraspecifici Chrysanthemum balsamita var. tanacetoides / carvon Chrysanthemum balsamita var. balsamita / camfor

16

11.10.2012

Metode de ameliorare
Selecia Poliploidizarea Hibridarea Mutaia Consangvinizarea

1. Selecia din taxoni naturali se bazeaz pe taxoni indivizi cu fenotip identic, dar genotip diferit Exemple: Belladonnae folium: 0,75% alcaloizi 1% Menthae folium: 2% ulei volatil 3,6% Papaveris fructus: 0,37% morfin 0,60% Lavandulae flos: 1,5% ulei volatil 6%

17

11.10.2012

2. Poliploidizarea
multiplicarea garniturii cromozomiale a celulelor somatice se asigur o cretere a coninutului n principii active urmat de selecie a. natural: Acorus calamus 2n=24 - America: 1,52% ulei volatil 3n=36 - Europa: 34% ulei volatil (10% azaron) 4n=48 - India: 56% ulei volatil (75-80% azaron) b. indus tratamente fizice i chimice

3.

Hibridarea

a. intraspecific b. interspecific rar spontan Lavandinul = Lavandula vera x L. Spica Mentha piperita (hibrid dublu) M. longifolia x M. rotundifolia = M. spicata M. spicata x M. aquatica = Mentha piperita Cinchona hibrida - C. calisaya x C. Succirubra Datura ferox x D. stramonium = hibrid (mai bogat n alcaloizi ) 4. Mutaia modificarea materialului genetic care conduce la schimbri cantitative i calitative n biosinteza principiilor active a. spontan - factori: endogeni exogeni b. provocat radiaii ionizante Solanum laciniatum (2% solasodin) / (60Co) - 3% solasodin 5. Consangvinizarea terge barierele dintre specii prin inginerie genetic: obinerea de organisme modificate genetic care sintetizeaz molecule farmacologic active, n cantiti suficiente

18

11.10.2012

Rezultatele ameliorrii: soiuri noi (cultivar) ansamblu de indivizi cultivai, care prezint caracteristici dinstinctive transmisibile prin nmulire sexuat i asexuat Tipuri de soiuri: linia descendeni provenii dintr-un singur individ reprodus sexuat clona - populaie provenit dintr-un singur individ nmulit vegetativ forma indivizi cu caracteristici fiziologice diferite

taxoni chimici indivizii unei specii identici prin caractere morfoanatomice, dar diferii prin constituienii chimici. Chrysanthemum balsamita var. tanacetoides / carvon Chrysanthemum balsamita var. balsamita / camfor

3. Culturi de celule i esuturi vegetale

surs de produse vegetale, principii active proliferarea in vitro n condiii aseptice, pe medii sintetice, a unor explante prin prelevarea din plant, fragmente de organe Scop: obinerea de noi plante identice cu planta din care s-a fcut prelevarea Se obin: Calusuri Plantule
Condiii speciale: sterile pentru Camerele de inoculare Instrumentar Vase de cultur Mediu nutritiv

19

11.10.2012

Mediu nutritiv (de cultur): inocularea explantului apa bidistilat surse organice de C surse de N sruri minerale Vitamine factori de reglare a creterii ingrediente cu rol plastic i energetic poart denumirea oamenilor de tiin: mediul Murashige-Skoog (MS), Gamborg (B5) Ex.: agar, gelatina, biogeluri Obinerea culturilor condiii foarte sterile temperatur 22-28C iluminare (0-5000 luxi) alternarea perioadei de lumin i de ntuneric (ciclu diurn) O2: prin barbotarea unui curent de aer n mediu

Culturi de calus 1. Inducerea calusului Se taie din plant (tulpin, rdcin, peiol, frunz 5 cm) Se imerseaz n alcool, n agentul sterilizant (hipoclorit de calciu) + fasonare Se taie n fragmente mai mici (0,5-1cm) = explanta Se inoculeaz pe mediu solidificat cu agar, din vasele de cultur, n diferite poziii Vasele se acoper cu folii sterile i se plaseaz n camera de vegetaie Dup 6-8 sptmni, la capetele explantelor se observ calusul = mas de celule care se divid i cresc neorganizat 2.Obinerea culturilor de calus Calusul se desprinde de pe esuturile explantului, se inoculeaz pe mediu Dup 1 lun, se dezvolt o biomas calusal de 3-4 cm diametru Biomasa se secioneaz n 4-5 poriuni, care se inoculeaz din nou 3. Inducerea suspensiilor celulare (culturilor celulare) 500 mg din calus se inoculeaz n mediu lichid, fr agar Se agit; Dup 1lun se desprind poriuni mici din calus i celule libere cultur celular primar Din 2 n 2 sptmni se inoculeaz din acele culturi suspensia veritabil: multe celule libere + agregate celulare Subcultivri i cultivri pe scar larg Se recolteaz biomasa celular: analiz de principii active

20

11.10.2012

Importan Descifrarea unor mecanisme moleculare (formarea embrionului) Identificarea enzimelor din calea de biosintez a unor metabolii secundari (alcaloizii berberinici) Obinerea: plante devirozate (rezistente la factori de mediu) plante transgenice nmulirea plantelor care nu germineaz, a celor sterile Obinerea unor cantiti mai mari de principii active Teoretic: dintr-o singur plant cultivat in vitro se poate obine un numr indefinit de indivizi asemntori cu planta din care a fost indus cultura Avantaje: substituirea metodelor clasice de cultur (nlocuirea suprafeelor agricole cu hale industriale) independena de anotimp, zone pedo-climatice creterea mai rapid valorificarea unor deeuri (melasa) stimularea activitii enzimelor care controleaz sinteza metaboliilor dorii influenarea calitativ i cantitativ a biosintezei: folosirea de precursori biosintetici: farnesol, acid mevalonic: stimularea produciei de ginsenozide n culturi de Panax ginseng inhibitori (sitosterol, hidroxilamina) inhib sinteza de fitosteroli din Panax

Aplicaii industriale Obinerea shikoninei din calusuri de Lithospermum erytrorhyzon: 533 mg/l mediu /zi la 4000 dolari/kg din plant cost 4500 dolari/kg Calusuri de Digitalis lanata: transformarea Lanatozidei A n Lanatozid C (prin grefarea unei grupri hidroxilice) n culturi de Cataranthus roseus: apariia unor noi (6) alcaloizi strini de planta productoare: epiajmalicina, desacetilkuamilina Vinblastina: culturi de celule + sintez chimic Berberina: culturi de Coptis japonica (70g/l mediu) Deliu et al.: culturi de Berberis parvifolia Valepotriai: Valeriana locusta Podofilotoxina: culturi de Podophyllum peltatum x 6 Acidul rozmarinic: culturi de Coleus blumei, Lithospermum erytrorhyzon Diosgenina: culturi de Dioscorea

21

11.10.2012

Obinerea produselor naturale vegetale Etape:

recoltare (flora cultivat) colectare (flora spontan) sortare (I) decorticare condiionare (I) stabilizare fermentare uscare condiionare, sortare (II) ambalare i marcare depozitare i conservare

1. Recoltarea
prima operaie de obinere a unui produs natural cunoaterea corect a plantelor medicinale cunoaterea prii de plant ce prezint produsul natural perioada, momentul recoltrii = coninut maxim n principii active studii de dinamic de acumulare a principiilor active Coninutul n principii active depinde de: vrst (Chinae cortex, Eucalypti folium) perioada de vegetaie: Chamomilla recutita florile ligulate sunt dispuse orizontal zona geografic (altitudine, longitudine, latitudine) ora zilei: Digitalis lanata: 11-14o

22

11.10.2012

Cnd recoltm?

organele subterane: rhizoma, radix, bulbus, tubera toamna (primvara)

prile aerine: folium, flos, herba n timpul nfloririi fructele i seminele: maturare

Recoltarea organelor subterane: rhizoma, radix, bulbus, tubera

mecanizat (n culturi) nemecanizat (sap, cazma) toamna, la sfritul perioadei de vegetaie (primvara, nainte de frunze)
plantele bienale: sfritul 1 an de vegetaie sau n primvara anului 2 plantele erbacee perene: dup 2-3 ani (rdcini nelignificate): Althaea officinalis, Atropa belladonna, Valeriana officinalis Alte specii: 4-5 ani: Rheum palmatum, Panax ginseng

23

11.10.2012

Recoltarea mugurilor foliari (gemmae, turiones) primvara, nainte de deschidere manual (Populi gemmae) tierea ramurilor de pe care se scutur, dup uscare (Betulae gemmae)
Recoltarea scoarelor (cortex) cortex - totalitatea esuturilor externe cuprinse ntre suber i cambiu, de pe ramurile tulpinilor de 3-4 ani sau de pe rdcini martie-mai se fac incizii circulare (pn la cambiu) la 20-30 cm deprtare una de aIta, se unesc printr-o incizie vertical i se desprind cu lama scoara de pe rdcini - se sacrific planta (Berberis vulgaris)

Recoltarea frunzelor
folium: sntoase, cu sau fr peiol
nainte de nflorire, la maturitate, pe timp frumos
plante bienale (Digitalis purpurea, Cynara scolymus) frunzele rozetei bazale dezvoltat n primul an de vegetaie

n timpul nfloririi - Atropa belladonna cu 2 sptmni nainte de nflorire - Convallaria majalis Mentha piperita - partea aerian, dup uscare se separ frunzele

24

11.10.2012

Recoltarea florilor (flos) boboci - Sophora japonica , Eugenia caryophyllus, Citrus aurantium
la maturitate: Chamomilla recutita, Corola: Verbascum sp., Papaver rhoeas

florile fr receptacul: Tagetes patula, Calendula officinalis

ntreaga inflorescen - 50% din flori s-au deschis: Sambucus nigra

Recoltarea prilor aeriene (herba) la nceputul nfloririi la deplina maturitate a florii prin tiere fr pri lignificate Recoltarea fructelor (fructus) imature: Citrus medica, Papaver somniferum nainte de coacere, pentru prevenirea pierderilor prin scuturare: Carum carvi, Coriandrum sativum, Foeniculum
vulgare Mature: Vaccinium myrtillus

manual sau mecanizat

Recoltarea seminelor (semen) maturitate

25

11.10.2012

Recoltarea din flora spontan (colectare) Numai de ctre specialiti Substituiri posibile: Chamomilla recutita cu Matricaria inodora !!! Accidente posibile: Plantago lanceolata cu Digitalis lanata Althaea officinalis cu Atropa belladonna Pimpinella anisum cu Conium maculatum

2. SORTAREA ndeprtarea impuritilor mecanice ndeprtarea impuritilor din plant ndeprtarea impuritilor strine de planta productoare imediat dup recoltare: se ndeprteaz vrfurile vegetative, radicelele, prile alterate Menthae herba: se pstreaz frunzele Hyperici herba: se pstreaz vrfurile nflorite Myrtilli fructus: metoda plan nclinat 3. DECORTICAREA

ndeprtarea esuturilor externe: suber + parte din parenchimul cortical mundat (1x) bismundat (2x) Althaeae radix mundata Liquiritiae radix mundata ! A nu se confunda: cu operaia de obinere a scoarelor (suber + parenchim cortical + liberian) 4. CONDIIONARE asigurarea unei forme, mrimi i aspect (pe produs uscat)

26

11.10.2012

5. STABILIZAREA

dup recoltare, ncep procesele de degradare biologic a principiilor active sau a substanelor de rezerv

Au loc reacii (catalizate de enzime) hidroliz (heterozide, eteri, esteri) oxidare polimerizare compui mai puin activi (glicozide cardiotonice primare sunt mai active dect cele secundare rezultate prin hidroliz enzimatic) compui inactivi: alcaloizii esteri prin hidroliz trec n alcamine
Prin: Coagularea / precipitarea prii proteice Ceai verde: stabilizare la temperatur ridicat

Se pot obine:

Stabilizarea = oprirea (distrugerea) activitii enzimelor

Procedee de stabilizare:

- inactivarea enzimatic cu vapori de alcool 1,25 atm,10-15 min, 80100oC (metoda Perrot-Goris) denaturare enzimatic: Cynarae folium cu alcool, la rece - inactivarea cu vapori de ap sub presiune (procedeul Arnould) - 60oC, 1h (metoda Boshart) - precipitarea enzimelor cu sulfat de amoniu (Digitalis purpurea, D. lanata - Stoll i Kreiss )

27

11.10.2012

6. FERMENTAREA

principiul activ este eliberat dup ce a suferit o fermentaie

Culoarea: Theae folium (ceai verde ceai negru fermentare la 23-250C, atmosfer umed), Vanillae fructus, Liquiritiae radix, Chinae cortex, Colae semen, Cacao semen Gustul / mirosul - Vanillae fructus taninuri catechice condensare n flobafene (roii), mai puin astringente derivaii fenolici se brunific
stabilizarea i fermentarea: operaii care se aplic numai anumitor produse imediat dup recoltare naintea uscrii pot provoca o serie de reacii prin care s rezulte un produs de calitate superioara

Se schimb

Chimic:

7. USCAREA procesul de ndepartare a apei din produsul proaspt recoltat produs vegetal uscat = siccum Procedee de uscare: natural artificial n vid Liofilizarea Prin uscare: se blocheaz: aciunea enzimelor aciunea mucegaiurilor

28

11.10.2012

Uscarea natural aer liber: soare, umbr plantele puternic mirositoare sau toxice - n compartimente separate soare: organele subterane, scoarele, fructele, seminele, florile albe umbr: frunzele, prile aeriene, florile colorate durata: 3-8 zile vara / 8-15 zile primavara i toamna 4-35 zile vara / 21-60 zile primavara i toamna
Uscarea artificial n spaii nchise (usctorii) cu dispozitive fixe sau mobile tipuri: tunel, evantai, rotative, cu rame, cu benzi rulante durata: 2-6 ore temperaturi de uscare: 30-35C,40-50C, 60-70C (rar) Avantaje: Durata<, reglarea temperaturii

Uscarea n vid n etuve de font cu pereii rezisteni + pompe de vid pentru produse cu ulei volatil Avantaj:
Proprieti neschimbate

Liofilizarea ndeprtarea apei prin congelare (-20C) obinerea de produse opoterapice conservarea unor sue de bacterii sau ciuperci

29

11.10.2012

Uscarea definiii:

Randamentul de uscare =

cantitatea de produs proaspt necesar pentru a rezulta 1 kg de produs uscat Sambuci flos 6:1 Tiliae flos 4:1
cantitatea de ap rmas n produse dup uscare contribuie la meninerea elasticitii depinde de tipul de produs este prevazut n normele de calitate, farmacopei:
10-15% pentru organe subterane, 10-12% pentru scoare, 5-14% pentru frunze, 10-13% pentru flori, 12-13% pentru partea aerian, 12-20% pentru fructe, 7- 8% pentru semine

Apa de constituie (umiditate admis sin. rezidual):

Exces de umiditate:

poate crea condiii prielnice activitaii enzimatice dezvoltrii unor microorganisme compui mai puin activi sau toxici

8. CONDIIONAREA
aducerea produsului la condiiile cerute de normele de calitate (FR X, norme interne) dup uscare unele produse vegetale devin friabile: suprafee mari de contact cu agenii externi (expuse degradrii) se aduc n ncperi cu umiditate constant (24-26%) pentru recptarea elasticitii, prin absorbia apei din atmosfer aducerea la anumite dimensiuni: prin concasare (tiere) pulverizare (concasoare, mori) prin presare (comprimare pentru reducerea volumului): Digitalis folium contusum Forme de prezentare: in toto (ntregi) concissum (tiate) pulveratum (pulverizate) cernute omogenizate n malaxoare (aparate rotative prevzute cu palete)

30

11.10.2012

9. AMBALAREA I MARCAREA
depozitarea sau livrarea ctre consumator Condiii de ambalare: frunzele, florile, pri aeriene - dimineaa, pe timp noros Ambalaje: saci de iut: rdcini, muguri, flori, frunze, fructe, semine, scoare - produse ntregi sau concise saci sau pungi de hrtie: muguri, flori, frunze, fructe, semine - produse concise, pulverizate saci de polietilen, cutii de tabl captuite cu hrtie: produsele sensibile la umiditate (Digitalis purpureae folium, Secale cornutum, gume) lzi de lemn cptuite cu hrtie: produse cu uleiuri volatile, balsamuri Capacitatea (destinaia produselor): 50 - 100 kg pentru uz industrial i depozite 10 - 100 g pentru consumul n farmacie

Se marcheaz (eticheteaz): denumirea i adresa ntreprinderii furnizoare denumirea produsului (latin i romn) numrul lotului greutatea brut i net documentul de reglementare a calitii (farmacopee, norme interne) tampila productorului semn avertizor (cap de mort)

31

11.10.2012

10. DEPOZITAREA I CONSERVAREA

n camere sau depozite special amenajate: curate, aerisite, uscate, cu umiditate constant, rcoroase, iluminate indirect, ferite de ageni duntori (roztoare, insecte) ambalajele etichetate sunt aezate pe grtare sau stelaje de lemn nu se depoziteaz n acelai loc: produsele lipsite de miros cu cele puternic mirositoare produsele anodine cu cele toxice (puternic active) nu se folosesc solveni sau substane care eman vapori cu miros dezagreabil (benzin, petrol, naftalin)

DEGRADRI ALE PRODUSELOR VEGETALE SUFERITE N TIMPUL CONSERVRII

Factori:

umiditatea temperatura lumina

mediu de reacie pentru enzime: hidrolaze (hidroliza heterozidelor, esterilor) oxidaze (oxidarea compuilor fenolici compui inactivi sau puin activi) peroxidaze oxidarea morfinei 50% n morfinon compui fenolici (catecholi, flavone) flobafene (brune, roii) Fen. poz. - oxidarea antronelor, antronolilor antrachinone (prin conservare 1 an)

Umiditatea > 14-15%

32

11.10.2012

Aspergillus
poliglucidele - medii de cultur pentru microorganisme: Aspergillus, Penicilium, Fusarium si produc I. biosinteza de substane toxice: micotoxine II. degradarea principiilor active

P.a. sensibile la umiditate

heterozide cardiotonice primare trec n secundare - mai puin active (dup 8 luni, Digitalis folium cu 10% umiditate, pierde 35-37% din activitate ) alcaloizii esteri (atropina, rezerpina, cocaina) inactivi grsimile rncezesc

Micotoxine (> 80) sunt derivai cumarinici xantonici antrachinonici sesquiterpenici

Aflatoxinele micotoxine produse de Aspergillus flavus, A. parasiticus structur cumarinic OMS: limite legale de admisibilitate n alimente: 10 g aflatoxina B1/kg pentru alimente de uz uman 20 g aflatoxina B1/kg pentru produse de uz veterinar Nu se admit n produsele vegetale i n preparatele farmaceutice Farmacopei: pentru guma arabic - 104 microorganisme/g (FRX - fr tulpini de E. coli, Salmonella)

33

11.10.2012

Degradarea principiilor active de ctre microorganisme bacterii, ciuperci pot provoca reacii de: oxidare, hidroliz, condensare, decarboxilare produi toxici CO2 + H2O Acidul melilotinic: dicumarol - anticoagulant CO2 + H2O Cumarina: acid melilotic CO2 + H2O (Pseudomonas) umbeliferon (Aspergillus)

Rutozida: cvercetol + rutinoz CO2 + H2O (Aspergillus)

Temperatura (30-40C) accelerarea proceselor enzimatice pierderea apei pierderea compuilor volatili inactive: uleiuri volatile eugenol alilsenevol Fina de mutar: dup 1 an de conservare - pierde 1635% din principiile active dup 3 ani - 42-43% din principiile active

34

11.10.2012

Lumina, aerul i umiditatea prin aciune ndelungat rncezirea acizilor grai nesaturai radicali liberi, peroxizi, care elimin peroxidul de hidrogen (oxigen activ), factori de accelerare ai altor procese degradative !!! Produsele cu grsimi: Lini semen, Sinapis semen se rennoiesc anual se conserv numai ntregi la rece ferite de lumin

BIOTEHNOLOGIA FARMACEUTIC surs de substane medicamentoase Utilizarea unor microorganisme heterotrofe (bacterii, drojdii, mucegaiuri): antibiotice / Penicillium, Bacillus, Streptomyces, Cephalosporium citostatice / Streptomyces, Fusarium, Trichoderma vitamine (provitamina A, B12, C) / mucegaiuri

35

11.10.2012

bioconversii - transformarea substanelor naturale n prezena unor microorganisme Solasodina, Diosgenina Hidrocortizona / Cunninghamella Zaharoza Dextrani / Leuconostoc mezenteroides Zaharoza Zahr invertit / Saccharomyces cerevisiae

Culturi din suspensii de celule: Biosinteza de alcaloizi: Catharantus roseus (0,3%) 1% ajmalicin Steroli: Dioscorea deltoidea 2% diosgenin Culturi de calus: Cassia tora (0,6% n frunze) 6% antrachinone Coffea arabica 1,7% cafein i teobromin Panax ginseng (4,5%) 27% ginsenozide Ammi visnaga (0,1%) 0,31% visnagin Nicotiana tabacum (2%) 3,4% nicotin

36

11.10.2012

BIOSINTEZA PRINCIPIILOR ACTIVE Biosinteza formarea substanelor organice n procesele fiziologice ale diverselor vieuitoare, esuturi, celule Metabolism fotosintez = procese biochimice ce se desfoar concomitent n plant, n funcie de necesiti Metabolism - ansamblul transformrilor chimice din fiinele vii de-a lungul existenei i n relaia lor cu mediu

Fotosinteza fenomen iniial i de prim importan n latura asimilatorie surs de materii prime pentru sintez i transformri biochimice

Etapele fotosintezei: a. Fotoliza apei: O2 n aer desfacerea H2O O2 + H+ / lumin acceptor de H+ = NADP+ (nicotinamid adenin dinucleotid fosfat) b. Fotofosforilarea: transformarea energiei luminoase n energie chimic / n clorofile i lumin ATP = acid adenozin trifosforic c. Fixarea CO2 n compui organici formarea unei molecule de hexoz 6 CO2 + 6 H2O C6H12O6 + 6O2 / h, clorofila + regenerarea ribulozo-1,5-difosfat - precursor capabil s fixeze din nou CO2 acidul 2-carboxi-3-cetopentozo-1,5-difosforic = primul compus organic

37

11.10.2012

2. Cile principale de biosintez n plante autotrofe plante autrotofe folosesc substane anorganice (CO2, H2O), pe care le transform n substane organice (capabile de fotosintez) acidul 2-carboxi-3-cetopentozo-1,5-difosforic (instabil) acid 3fosfogliceric / dup hidratare, carboxidismutaza acid 3-fosfogliceric (prima substan organic stabil) aldehida 3-fosfogliceric (defosforilare) aldehida gliceric: punct de plecare n sinteza pentru: glucide, gliceride, protide (substane fundamentale) compui aromatici, izoprenoide, amine, alcaloizi etc (substane secundare)

aldehida 3-fosfogliceric GLUCIDE prin scindarea glucozei acid 3fosfogliceric i aldehida 3fosfogliceric aldehida 3-fosfogliceric / reducere Glicerol GLICERIDE acid 3-fosfogliceric / piruvat AcCoA, acetat Acizi grai GLICERIDE acid 3-fosfogliceric / piruvat-acetat Izoprenoide (terpenoide, steroide, carotenoide) Ionii piruvat-acetat / Ciclul Krebss (oxaloacetat, fumarat, cetoglutarat) Aminoacizii (alanin, acid glutamic, acid asparagic) PROTIDE, Amine, Alcaloizi Piruvat /acetat Compui aromatici (fenilpropani, floroglucinol, etc)

Cile de biosintez la plantele autotrofe schem

38

11.10.2012

3. Substane fundamentale, substane secundare fotosinteza glucide simple alte ci biochimice toate substanele Substane fundamentale: sunt substanele primordiale pentru procesele vitale cu rol energetic: glucide lipide protide substane plastice: pectine, celuloze, lignine materiale de construcie pentru celule ergone (ageni metabolici): enzime, vitamine, hormoni, acizi nucleici, pigmeni produi intermediari de metabolism instabili Substane secundare se obin pe ci biosintetice derivate din cile de producere a substanelor fundamentale ex: alcaloizi, glicozide, amine, compui aromatici etc. Rol: plante: fiziologice, de aprare om, animale: efecte farmacologice / toxice (principii active)

4. Elucidarea biogenezei substanelor secundare

implic 2 aspecte:
aspectul fiziologic aspectul biochimic

Aspectul fiziologic
stabilirea locului (organul) n care are loc biogeneza principiilor active metoda: altoirea organului pe o specie nrudit care nu sintetizeaz principiul activ Altoirea prii aeriene de Atropa belladona pe rdcina de Solanum lycopersicum (nu produce alcaloizi tropanici)
Nu s-au sintetizat alcaloizi tropanici

rdcina de Atropa - organul de sintez a alcaloizilor

39

11.10.2012

4. Elucidarea biogenezei substanelor secundare

Aspectul biochimic
metoda: administrarea n plant a unui precursor n care s-a introdus un izotop radioactiv 14C (15N) i urmrirea izotopului n timpul procesului biogenetic Metode de administrare:
in vivo: se introduce planta cu rdcina n soluia cu precursor radioactiv se aplic soluia prin tamponare pe frunze, muguri etc. in vitro:
n culturi de esuturi, se ncorporeaz precursorul, n mediul nutritiv se dezvolt un organ de plant sau esut special dup extracia principiului activ se determin radioactivitatea gradul de radioactivitate dovedete dac precursorul a fost bine ales s-au elucidat numeroase ci de biogenez a principiilor active

Cum se formeaz principiile active ? Biosinteza: fotosintez i ci principale Biotehnologia farmaceutic surs de substane

Produse naturale

Sursa ? flora spontan, cultivat (avantaje, metode de ameliorare)

Cum ? - recoltare, sortare, decorticare, stabilizare, fermentare, uscare, condiionare, ambalare, marcare, depozitare i conservare

Alte surse ? - Culturi de celule i esuturi surs de plante i de substane

Conservarea necorespunzatoare: degradri ale produselor vegetale/principiilor active

40