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Exame de Laboratrios de Bioqumica e Biofsica Licenciatura em Bioqumica 1 poca 27 de Junho de 2006

Por favor responda s questes da 1 parte e 2 partes em folhas separadas

1 Parte
1. Suponha que possui um composto que reage com protenas dando origem a um produto corado. Como verificava se o podia utilizar para quantificar protenas? (2.0 val.) 2. Considere os resultados apresentados abaixo resultantes da anlise de uma mistura proteica na qual se encontra uma protena, protena 14, que se pretende purificar. A Colorao de Coomassie de um gel de electroforese bidimensional. B Immunoblotting da electroforese bidimensional A. B.

a) Explique sumariamente em que consiste uma electroforese bidimensional. (1.0 val.) b) De acordo com os resultados apresentados proponha um processo de purificao da protena 14 utilizando trs passos de purificao. Justifique as suas opes. (2.0 val.) c) Como justifica o aparecimento de duas bandas no immunoblotting? O que poderia fazer para confirmar as suas hipteses? (2.0 val.) 3. O diagnstico de algumas doenas (em alguns casos doenas infecciosas) feito por pesquisa de antignios no soro dos indivduos supostamente infectados usando a tcnica de ELISA. Justifique a utilizao desta tcnica neste tipo de diagnstico. (1.5 val.)

4. Um dos trabalhos prticos realizados consistiu na purificao da TTR semi-purificada produzida em E. coli usando uma coluna HiTrap em que se imobilizou um anticorpo anti-TTR. Que tipo de tcnica de isolamento foi utilizada neste trabalho? Justifique a sua utilizao apenas nesta fase da purificao. (1.5 val.)

2 Parte
5. Para a cristalizao de protenas, recorre-se frequentemente a mtodos de difuso de vapor. a) Descreva o fundamento desses mtodos. (1.5 val.) b) Explique o interesse de fazer experincias em condies de diferente solubilidade da protena. (1.0 val.) 6. Considere experincias de difraco utilizando duas grelhas quadradas G1 e G2, sendo que a distncia entre os filamentos na grelha G1 o dobro da distncia entre os filamentos na grelha G2. Para as mesmas condies experimentais, diga com qual das grelhas que se obtm o padro de difraco em que os pontos esto mais afastados. Justifique. (2.5 val.) 7. Os resultados experimentais dos estudos de cristalografia de raios-X de protenas so normalmente depositados no Protein Data Bank (PDB). a) Em que consiste a informao acessvel no PDB e qual a importncia desta base de dados no mbito da investigao em biologia estrutural? (1.0 val.) b) O RasMol e o DeepView so programas que podem utilizar informao do PDB. Faa uma anlise comparativa das suas potencialidades e limitaes (1.5 val.) 8. Descreva genericamente o processo de centrifugao diferencial para a preparao de fraces sub-celulares e indique, justificando, como pode ser avaliada a qualidade do fraccionamento obtido. (2.5 val.)