REBIOL. Vol. 29, N 1: enero - junio, 2009 Organo oficial de la Facultad de Ciencias Biolgicas. Universidad Nacional de Trujillo.

Trujillo-Per

Artculo original

Efecto antifngico del extracto acuoso de semillas del chocho, Lupinus mutabilis sobre Alternaria solani y Fusarium solani
Antifungi effect of the Lupinus mutabilis seeds on Alternaria solani and Fusarium solani
A. Yepes Ponte1, Marlene Rodriguez Espejo2, P. Enriquez Lara1, H. Zafra Pflucker1, S. Villegas Layza1, Y. Barboza Astolingon1 y P. Alvarado Castro1
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Exalumos de la Escuela AP de Ciencias Biolgicas. Universidad Nacional de Trujillo (UNT), Trujillo. Per. 2 Departamento de Ciencias Biolgicas-UNT

RESUMEN
Se evalu el efecto antifngico del extracto acuoso de semillas de Lupinus mutabilis chocho o tarwi, sobre los hongos: Alternaria solani y Fusarium solani Las semillas fueron trituradas hasta convertirlas en harina luego se elimin la concentracin de grasa con cloroformo haciendo uso de un equipo Soxhlet. Se tom 50 g de harina desengrasada y en 100 mL de agua destilada se obtuvo el extracto acuoso mediante ebullicin por 10 minutos. Luego se adicion en cajas petri en combinacin con el medio de cultivo agar papa a concentraciones de 0, 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13 mL%, Para cada concentracin se usaron tres repeticiones, los hongos se inocularon en cajas petri, a travs de una punteadura central. Al cabo de 5 das de incubacin a 25C se realiz la medida del crecimiento micelial (cm) observndose que el el efecto antifngico del extracto acuoso de semillas de Lupinus mutabilis chocho o tarwi mostr una inhibicin del crecimiento micelial e n Alternaria solani del 74,2% y en Fusarium solani del 66,86% con la concentracin de 13 mL% y a la concentracin de 1 mL% la inhibicin del crecimiento micelial alcanz el 10,33% para Fusarium solani y 14,66% en Alternaria solani Palabras clave: Lupinus mutabilis, Alternaria solani, Fusarium solani, efecto antifungico

ABSTRACT
Antifungic effect of the watery-extract of Lupinus mutabilis seeds on Alternaria solani and Fusarium solani was evaluated. For this, seeds were crashed until to obtained floor sustance; remove the grease from this with using cloroformo with the aid of Soxhlet equipe. Then, watery-extract was prepared with 50g ungreased floor mixed with 100mL of desliled water during 10min boiling. At concentration of 0, 1, 3, 5, 7, 9, 11, and 13mL% on Petri dish with cultures of fungi in agar-potato media. Petri dish, so, were incubated to environmental temperatute during five days. It was found inhibition at 74.2% in micelial growth of A. solani and 66.8% in F- solani with 13% watery-extract concentration, as well as, 10.3% for A. solani and 14.7% for F. solani when were used concentration of 1% of watery-extract Key words: Lupinus mutabilis, Alternaria solani, Fusarium solani, antifungi effect

INTRODUCCIN Como parte de la respuesta de la defensa qumica contra el dao que ocasionan las heridas y el ataque de microorganismos patgenos en las plantas superiores, se induce la sntesis y acumulacin de compuestos de bajo peso molecular, conocidos como metabolitos secundarios9. De estos, los alcaloides quinolizidinicos se caracterizan por presentar un ncleo quinolizinico y constituyen un grupo importante de compuestos naturales en la familia Fabaceae, especialmente en los gneros: Lupinus, Baptista, Thermopsis, Genista, Cytisus, Chamaecytisus, Laburnum y Calia11. En el gnero Lupinus, estos compuestos se sintetizan en los cloroplastos de las hojas y son transportados via floema a otros rganos de la planta para su almacenamiento en tejido epidmico y subepidrmico de hojas, tallos y principalmente semillas10. Como se sabe, las semillas de L. mutabilis son usadas en la alimentacin humana, ya que esta especie ocupa uno de los primeros lugares entre los alimentos nativos con elevado contenido de protenas y aceites a nivel mundial. Sin embargo, el grano requiere un tratamiento previo para su consumo, siendo necesario eliminar las sustancias antinutricionales que contiene y que le permiten a la planta disponer de defensas naturales contra el ataque de otros organismos7. L. mtabilis presenta variabilidad morfolgica y de adaptacin ecolgica en los Andes, por lo cual se ha sugerido que puede incluirse a tres variedades: chochodistribuido en el norte del Per y en el Ecuador, presenta mayor ramificacin, mayor pilosidad en hojas y tallos, algunos ecotipos se comportan como bianuales, son tardos en su crecimiento y tolerantes a la antracnosis; tarwi distribuido en el centro del Per, tiene escasa ramificacin, es medianamente tardo y algo tolerante a la antracnosis; y tauri distribuido en el altiplano de Per y Bolivia, presenta de menor tamao (1-1,40 m) que los anteriores, con un tallo principal desarrollado y es muy precoz y susceptible a la antracnosis5,6. Otras especies de Lupinus, como es el caso de L. ballianus, tambin presentan sustancias con accin antibacteriana, habiendose demostrado que posee en las hojas flavonoides y alcaloides con marcada accin antibacteriana y antifngica4. Adems de estas propiedades se ha observado que el desamargado de las semillas es utilizado por pequeos agricultores para combatir a las garrapatas en el ganado ovino y en camlidos sudamericanos, como regulador del crecimiento o fertilizante en los cultivos de maz, trigo, soya y papa1,2,3 En este informe se presentan los resultados de una investigacin que se dirigi a determinar la capacidad antifungica del extracto acuoso de las semillas de L. mutabilis, sobre los hongos fitopatgenos: Alternaria solani Soraeur y Fusarium solani Mart. MATERIAL Y MTODOS Material Biolgico. Semillas de Lupinus mutabilis chochoo tarwi adquiridas en el Mercado Mayorista de Trujillo. Trujillo. Per. Cultivos puros de Alternaria solanni y Fusarium solani proporcionados por el laboratorio de Fitopatologa de la Universidad Nacional de Trujillo, extrados previamente de Capsicum annuum pimiento (Figs. 1 y 2)

Fig 1. Monocultivos de Alternaria solani (izquierda) y Fusarium solani (derecha).

Fig. 2. Colonias en placas de Petri de Alternaria solani (izquierda) y de Fusarium solani (derecha).

Preparacin de harina de semillas de chocho desgrasadas. Las semillas fueron trituradas hasta convertirlas en harina luego se elimin la concentracin de grasa con cloroformo haciendo uso de un equipo SOXHLET12. Esto se basa en la extraccin de la grasa de cualquier sustancia mediante un disolvente orgnico (cloroformo) en forma continua8. Se prepararon 5 cartuchos cilndricos los cuales contendrn la harina de chocho y asegurados con algodn en las puntas (Fig. 3).

Fig. 3. Obtencin de cartucho de 100g de harina de semillas desengrasadas de Lupinus mutabilis.

A continuacin en el equipo soxhlet se colocaron los cartuchos ms el cloroformo que servira como disolvente contino.

Fig. 4. Proceso de desengrasado de semillas de Lupinus mutabilis usando cloroformo en el equipo SOXHLET

Al trmino de siete horas a ms se procedi a retirar los cartuchos cuando el disolvente haya tomado un color totalmente transparente y se le coloco en la estufa a secar obteniendo

el producto libre de aceites y humedad que pudieran afectar la accin de los alcaloides presentes en la muestra (Fig. 5).

Fig. 5. Proceso de obtencin de la harina de semillas de Lupinus mutabilis: Cloroformo totalmente transparente (superior izquierda), obtencin de aceite (superior derecha), secado de la harina de chocho en la estufa (inferior izquierda) y harina sin grasa (inferior derecha).

Obtencin de extracto acuoso de semillas

Para ello, primero se abri los cartuchos, los cuales contenan la harina de chocho de consistencia crocante, luego se pes 50 g de harina desgrasada por cada 100 mL de agua destilada empleada para el extracto, se procedi a hervir la mezcla por diez minutos hasta que tom una consistencia pastosa, finalmente se procedi a centrifugar por 15 minutos. El sobrenadante conseguido fue dispensado en un matraz hermticamente sellado el cual sirvi para realizar los bioensayos.

Preparacin de medio de cultivo agar papa dextrosa Se prepar 100 mL de cultivo a partir de 30 g de papa variedad Peruanita, la cual fue trozada en partes muy pequeas y colocada en un vaso de precipitacin con agua destilada hasta el hervir durante 10 minutos. Luego de lo cual se procedi a filtrar. Aparte se disolvi 3 g de Azcar blanca y 2 g de Agar por 100 mL de cultivo. Finalmente se le adicion el filtrado de papa, enrasando en un matraz a 100 mL con Agua destilada. En total se prepar 200 mL de cultivo por cada tratamiento aplicado. Dosificacin del extracto de chocho para cada tratamiento El extracto fue disuelto a las concentraciones de 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13 mL% y un testigo (cero) en placas de Petri conteniendo 100 mL de medio de cultivo agar papa dextrosa previamente esterilizado por 15 minutos en autoclave. Sembrado de fitopatgenos en las unidades experimentales Las esporas fueron inoculadas por punteadura en la parte central de las placas petri conteniendo el medio de cultivo y se colocaron en una estufa a 25C. Los tratamientos se llevaron a cabo con 3 repeticiones (Fig. 6). Medicin del dimetro de los halos de crecimiento de los fitopatgenos Cuando el micelio del hongo cubri la superficie del medio en el testigo se retir todas las cajas de la estufa y se procedi a medir el dimetro del micelio.

Fig. 6. Crecimiento de Alternaria solani en los medios de cultivo a diferente concentracin de de extracto acuoso.

El porcentaje de inhibicin fue calculado por la formula: I = [(C- T)/ C] *100 Donde:
I: es la inhibicin expresada en porcentaje. C: dimetro del micelio en la caja petri del testigo. T: dimetro del micelio en las cajas de los tratamientos.

RESULTADOS Al medir el crecimiento del dimetro del micelio de A. solani y F. solani a los cinco das de siembra se pudo apreciar un crecimiento deciduo a travs de todas las placas petri conforme fue aumentada la concentracin de extracto acuoso respecto al testigo (Tabla 1).
Tabla 1. Efecto del extracto acuoso de semillas de Lupinus mutabilis chocho sobre el crecimiento del dimetro del micelio (cm) de Alternaria solani y Fusarium solani a diferentes concentraciones.

Especie de hongo fitopatgeno Fusarium solani CDM/(cm) Alternaria solani CDM/(cm)

Concentracin delextracto en el medio de cultivo (mL%) 0 1 3 5 7 9 11 13 5.13 4.61 3.80 3.12 2.50 2.13 2.10 1.70 5.66 4.83 4.23 3.43 2.40 2.30 2.06 1.46

CDM= crecimiento del dimetro del micelio

CDM

Fig. 7. Efecto del extracto acuoso de semillas de Lupinus mutabilis chocho sobre el crecimiento del dimetro del micelio (CDM) de Alternaria solani y Fusarium solani a diferentes concentraciones (mL%).

Al obtener las medidas del dimetro del crecimiento se obtuvo tambin los porcentajes de inhibicin de crecimiento (Tabla 2)

Tabla 2. Efecto del extracto acuoso a diferentes concentraciones de semillas Lupinus mutabilis chocho sobre el porcentaje (%) de inhibicin del crecimiento del micelio de Alternaria solani y Fusarium solani.
Especie de hongo fitopatgeno Fusarium solani (%I) Alternaria solani (%I) Concentracin delextracto en el medio de cultivo (mL%) 1 3 5 7 9 11 13 10.13 25.92 39.18 51.26 58.47 59.06 66.86 14.66 25.26 39.39 57.59 59.36 63.60 74.20

% I

mL%

Fig. 7. Efecto del extracto acuoso a diferentes concentraciones de semillas Lupinus mutabilis chocho sobre el porcentaje (%) de inhibicin del crecimiento del micelio de Alternaria solani y Fusarium solani.

DISCUSIN El porcentaje de inhibicin del crecimiento que posee el extracto acuoso de semillas de Lupinus mutabilis chocho o tarwi fue de 14,66% a 74,2% para Alternaria solani, mientras que en Fusarium solani se hall desde los 10,13% hasta los 66,86% a la concentracin 1 y 13 mL de extracto acuoso/100mL de medio de cultivo, respectivamente; para ambos casos con la mayor concentracin de extracto acuoso fue aumentando el porcentaje de inhibicin de crecimiento. Al igual que este estudio, en otra investigacin12 se encontr una inhibicin del crecimiento para Alternaria solani, del 94,7%, utilizando extracto de alcaloides de semillas de Lupinus exaltatus Zuc. mucho mayor al encontrado en este caso; esto puede deberse a que la mayor concentracin de sustancias puras en el extracto alcaloideo ejerce una mejor accin conjunta, mientras que del extracto acuoso usado todas las sustancias presentes, algunas de ellas pueden interferir en el efecto antifngico. Con respecto a Fusarium sp. Zamora et al12 no encontraron inhibicin del crecimiento micelial en Fusarium oxysporum con el extracto alcaloideo de semillas de Lupinus exaltatus Zuc. De la misma forma, en Fusarium moniliforme Sheld. al incorporar al medio de cultivo semillas molidas de L. campestris y L. mutabilis Sweet1. A diferencia de nuestros resultados que presento inhibicin del 66.86%. Lo cual indica poco efecto antifngico de los extractos de las especies mencionadas sobre este hongo fitopatgeno. Esto se debi tal vez a que Fusarium solani presenta una mayor sensibilidad a las propiedades antifungicas del extracto acuoso de L. mutabilis.

CONCLUSIN El extracto acuoso de semillas L. mutabilis presenta actividad antifngica frente al crecimiento micelial de los hongos fitopatgenos: Fusarium solani y Alternaria solani. REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS
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Correspondencia: A Yepes Ponte E-mail: