COMPLEJO DE GOLGI

DICTIOSOMA
Est formada por una pila de 4-8 cisternas generalmente curvas y desprovistas de ribosomas. Est polarizado: cara cis (de entrada) est relacionada con el REG, y la cara trans (de salida) es normalmente cncava. A las cisternas se le asocian numerosas vesculas en fase de fusin o de gemacin. Hay tres tipos de cisternas. Cis, mediales y trans. Las cisternas cis y trans ms superficiales estn fenestradas y forman un retculo de tbulos y cisternas conocidos como red cis y trans del Golgi.

TRFICO DE VESCULAS ENTRE EL REG Y EL CG

Se producen vesculas de transicin (ERGIC del compartimento intermedio). La mayora de las vesculas se desplazan en sentido antergrado (REG-red cis). Otra fraccin de vesculas se mueven en sentido retrgrado (cisREG) y reciclan protenas residentes del REG. La formacin de vesuclas de transicin requiere de una cubierta de coatmeros de COPI y COPII (Coat Proteins). La CPOII se encuentra en sentido antergrado y las COPI en retrgrado.

TRFICO ANTERGRADO
La incorporacin de protenas en las vesculas est mediada por una secuencia de salida del REG. Hay protenas integrales de la membrana que tienen la secuencia de salida en la cara citoslica. El ensamblaje molecular de la cubierta de COPII se induce por la protena activada Sar1-GTP. Las protenas integrales interaccionan con las subunidades de la COPII y se concentran en la vescula de transicin. Si las protenas que van a ser transportadas no estn bien plegadas se unen a las chaperonas y se bloquea su secuencia de salida.

TRFICO RETRGRADO
Algunas protenas residentes del REG se transfieren a la red cis Golgi en vesculas transicionales de forma inespecfica. Entonces, para recuperarlas es necesario un proceso selectivo mediado por una secuencia de retencin (KDEL) de estas protenas que son reconocidas por las protenas transmembrana del CG. Entonces se producen unas vesculas de transporte retrgrado que devuelven esas protenas especficas al REG. El ensamblaje molecular de la cubierta de COPI se induce por protenas ARF: las vesculas de trfico retrgrado se fusionan con las cisternas del REG.

TRANSPORTE ENTRE CISTERNAS DEL COMPLEJO DE GOLGI

El modelo de transporte vesicular implica que las protenas se transportan entre las cisternas de Golgi en el interior de vesculas que brotan de una cisterna y se fusionan a los bordes dilatados de otra cisterna. Hay otra teora, que consisten en la comunicacin directa entre las cisternas. Esto ocurrira en el transporte de algunas protenas.

FUNCIONES DEL COMPLEJO DE GOLGI

Estn segregadas en las distintas cisternas debido a la distribucin diferencial de enzimas. Las cisternas cis, mediales y trans son de procesamiento, mientras que la red trans Golgi es un sitio de exportacin. El trfico de protenas solubles y transmembrana entre cisternas est mediado por vesculas y comunicaciones directas. Las enzimas implicadas en la glicosilacin tienen un dominio C-terminal cataltico en la cara luminal, ya que las transformacin se realizan en el interior de las cisternas. El CG frecuentemente rodea al centrosoma y participa en la nucleacin de microtbulos.

En las cisternas cis las glicoprotenas destinadas a los lisosomas sufren la fosforilacin en residuos de manosa (manosa-6-fosfato) catalizada por una fosfotransferasa. Esto indica el destino lisosmico de algunas protenas (enzimas). En las cisternas mediales se produce la adicin de N-acetilglucosamina a protenas por la enzima Nacetilglucosamina transferasa. En la cisterna trans se produce la adicin de galactosa y cido N-aceti-neuromnico (cido silico) por glicosil transferasas especficas. Se produce la sulfatacin de algunas protenas y carbohidratos mediante una sulfo-transferasas y el ensamblaje de proteoglicanos que consisten en una protena axial con cadenas laterales de glicosaminoglicanos y es un componente importante de la matriz extracelular. Esto es especialmente importante en el tejido cartilaginoso (condrocitos) y conectivo (fibroblastos). Adems se empaquetan protenas en vesculas de secrecin y pre-lisosomales. Hay algunas protenas como la albumina y la insulina que no se glicosilan y su trfico en el CG es muy rpido. A diferencia de los oligosacridos N unidos, los que se fijan a protenas por uniones O se ensamblan por completo en el complejo de Golgi.

AUTORRADIOGRAFA
La autorradiografa suministra una manera de visualizar un proceso bioqumico al permitir al investigador ubicar materiales marcados con istopos radiactivos dentro de una clula. En esta tcnica, con una delgada capa de emulsin fotogrfica se cubren cortes de tejido que contienen el istopo radiactivo, que as se expone a la radiacin que emana del tejido. Los sitios de las clulas que contienen radiactividad se manifiestan como granos plateados bajo el microscopio luego de revelar la emulsin que los cubre. Para determinar los sitios donde se sintetizan protenas secretorias, Palade y Jamieson incubaron durante un breve periodo pedazos de tejido pancretico en solucin con aminocidos radiactivos. En este periodo los aminocidos marcados fueron captados por las clulas vivientes e incorporados a las enzimas digestivas conforme se ensamblan en los ribosomas. Los tejidos se fijaron de inmediato, y las protenas sintetizadas durante la incubacin con aminocidos marcados se determinaron mediante autorradiografa. Esta tcnica revel que el retculo endoplsmico es el sitio donde se sintetizan las protenas secretorias. Para determinar la va que siguen las protenas secretorias dentro de la clula desde su sitio de sntesis hasta donde se descargan, Palade y Jamieson efectuaron un nuevo experimento. Despus de incubar el tejido por un breve periodo con aminocidos radiactivos, lo lavaron de inmediato para liberarlo del exceso de istopos y lo transfirieron a un medio que slo contena aminocidos no marcados. Los experimentos de este tipo se denominan "de seguimientode pulsos". Seguimiento indica el periodo durante el cual se expone el tejido al medio con aminocidos no marcados, tiempo durante el cual las protenas se sintetizan utilizando aminocidos no radiactivos. Cuanto ms largo el seguimiento, ms lejos viajarn las protenas elaboradas con istopos radiactivos a partir del sitio donde se sintetizaron dentro de la clula. En condiciones ideales, con esta tcnica se pueden seguir los movimientos de molculas recin sintetizadas observando la onda de material radiactivo que se desplaza a travs del citoplasma de la clula de un sitio al siguiente, en tanto concluye el proceso. Los resultados de estos experimentos, que definieron por primera vez la va biosinttica secretoria y reunieron algunos compartimientos membranosos aparentemente separados en una unidad funcional integrada nos mostraron que en no ms de una hora las protenas se encontraban almacenadas en vesculas de secrecin, habiendo pasado primero por el Aparato de Golgi para ser modificadas.

PROCESO DE SECRECIN CELULAR

Es el mecanismo de descarga al exterior de protenas de secrecin. Se produce en vesculas de secrecin que se forman en la red trans del Golgi. Hay dos tipos de secrecin: constitutiva y regulada. La secrecin constitutiva ocurre espontneamente, es decir, no depende de una seal extracelular y de manera permanente. Con este tipo de secrecin se descargan componentes de la matriz extracelular como los proteoglicanos e incorpora protenas a la membrana plasmtica. Adems renueva la membrana citoplasmtica porque la membrana vesicular se queda acoplada a ella. La secrecin regulada requiere de una seal extracelular que dispare la descarga. Las vesculas de secrecin se almacenan en las clulas. Es caracterstica de las clulas glandulares. Sus etapas son: empaquetamiento, concentracin, procesamiento, almacenamiento intracelular y exocitosis.

ETAPAS DE LA SECRECIN REGULADA

En la red trans del Golgi las protenas de secrecin (seal desconocida) se agregan y se empaquetan en vesculas cuyo contenido est muy diluido y es necesario condensarlas. Entonces, se forman vesculas de condensacin en las que se activa la bomba de protones. La acidificacin favorece la agregacin. Hay diferentes mecanismos de condensacin. Primero, se elimina parte del contenido vesicular soluble en vesculas recubiertas de clatrina y se unen mltiples molculas que van a ser secretadas por medio de protenas matriz como la cromogranina o la secretogranina lo que produce una disminucin de la osmolaridad intravesicular al haber un menor nmero de molculas osmticamente activas (salida del lquido intravesicular). Algunas vesculas de secrecin contienen una forma inactiva de la protena, denominada pre-protena, que se activa por protelisis mediante convertasas. Normalmente las pre-protenas son precursoras de hormonas o de enzimas. Su activacin consiste en cortar un fragmento de la pre-protena lo que nos deja la estructura nativa (activa) de la protena y suele darse dentro de la vescula. Las vesculas de secrecin maduras se almacenan en el citoplama a la espera de un estmulo extracelular que dispare su descarga. Las ventajas de este almacenamiento vesicular son: una gran capacidad de almacenamiento al estar condensadas; una proteccin frente a las proteasas del citosol, y una dosificaicn de la descarga, pudiendo ser vescula a vescula llamada liberacin cuntica o descarga masiva de mltiples vesculas como en las clulas cebadas.

DESCARGA POR EXOCITOSIS DE LAS VESCULAS DE SECRECIN

Las vesculas se transportan a la membrana plasmtica a lo largo de los microtbulos. Las protenas Rab (Rab3A y el efector de Rab) y SNAREv (vescula) y SNAREt (target) regulan el reconocimiento y anclaje de las vesculas de secrecin a la membrana plasmtica. En los sitios de descarga, el efector de Rab reconoce especficamente la Rab3A de la membrana vesicular, producindose la interaccin vescula-membrana. Estos efectores solo estn en la cara apical de la membrana, lo que provoca la direccionalidad de la descarga. La vescula de secrecin se ancla a la membrana por la interaccin del SNAREv con el SNAREt de la membrana. Por ello, la distribucin del efector de Rab define el cominio de la membrana celular donde se produce la descarga de la secrecin vesicular. El anclaje en la membrana se produce en respuesta al estmulo extracelular y est mediado por el incremento de Ca2+ citoslico. Esto se debe a la abertura de los canales Ca2+ de la membrana celular as como la liberacin desde el depsito del RE. La fusin de las bicapas lipdicas requiere del desplazamiento lateral de las protenas de membrana en el sitio de fusin, ya que la presencia de las protenas impedira la unin de las dos membranas. Frecuentemente se produce una depresin de la membrana en el sitio de fusin lo que facilita su unin. La fusin genera un poro para la descarga.