INTRODUO Nas ltimas dcadas cresceu o interesse por combustveis renovveis, em contraposio aos derivados do petrleo,1 de custo cada

vez mais elevado por serem prospectados em reas com acesso cada vez mais difcil e necessitando de maiores esforos tecnolgicos. No Brasil, a produo de biocombustveis surgiu como uma alternativa para diversificao da matriz energtica, contribuindo para a preservao do meio ambiente,1,2 e para diminuir a dependncia de uma fonte energtica esgotvel, o petrleo, apesar dos esforos em pesquisas de novos campos petrolferos, como a descoberta de grandes reservas na camada do pr-sal. No Brasil dois biocombustveis se destacam: o biolcool, produzido a partir da cana-de-acar, com o qual o pas detm tecnologias avanadas em toda a cadeia produtiva; e o biodiesel, introduzido na matriz energtica brasileira pela Medida Provisria n. 214, de 13/9/2004.2 Nesta norma, o biodiesel, combustvel composto de monoalquilsteres de cidos graxos de cadeia longa, conceituado como "um combustvel para motores a combusto interna com ignio por compresso, renovvel e biodegradvel, derivado de leos vegetais ou de gorduras animais, que possa substituir parcial ou totalmente o leo diesel de origem fssil".2 O biodiesel pode ser obtido por diferentes processos, dentre os quais se destaca a transesterificao de leo vegetal ou gordura com um lcool de baixo peso molecular, como etanol ou metanol, atravs de uma reao catalisada por hidrxido de potssio ou de sdio.3 Apesar do diesel de petrleo comercializado ter 5% (v/v) de biodiesel,2 este combustvel carece de mtodos de classificao de sua fonte de origem, que possa permitir um acompanhamento mais rigoroso dos padres de qualidade de produo. Como os leos so definidos pelos triacilgliceris presentes e suas propores e o mtodo padro de identificao e quantificao a cromatografia gasosa, que caro e demorado, uma alternativa vivel seria desenvolver um mtodo espectroscpico que possa ser utilizado para associar o espectro com as quantidades dos triacilgliceris e suas propores no leo. Na esteira deste raciocnio, alguns trabalhos so encontrados para reconhecimento de padres de biodiesel por seu leo de partida, sendo que os mesmos utilizam a regio do infravermelho prximo.1,4 Entretanto, medidas espectroscpicas na regio do NIR oferecem alguns inconvenientes, tais como, necessidade de correo de linha de base, custo relativamente elevado e dificuldade de aquisio de diodos emissores de luz e dos fototransistores como fotransdutores em toda a regio do NIR, dentre outros. Assim, a espectroscopia de absoro molecular na regio UV-Vis, mtodo baseado na interao da radiao eletromagntica na faixa espectral de 200 a 800 nm com a matria, apresenta-se como uma alternativa vivel para reconhecimento em padres de biodiesel por permitir construo de instrumentos mais baratos e com componentes de fcil aquisio em lojas de eletrnicos mesmo em cidades de porte mdio.5

Por outro lado, a complexidade de interpretao qualitativa dos espectros na regio UV-Vis conduz necessidade de utilizao de ferramentas quimiomtricas para reconhecimento de padres. Diversos trabalhos foram publicados utilizando tcnicas de reconhecimento de padres, dentre os quais para amostras de vinhos,6,7 carne de porco8 e leo de oliva,9 apesar da perspectiva conceitual de que os espectros na regio do visvel serem pouco discriminativos.10 As tcnicas de reconhecimento de padres podem ser divididas em duas classes: no supervisionadas e supervisionadas.11 Das tcnicas no supervisionadas, que tm a finalidade de verificar a formao natural de conjunto de amostras similares, ou agrupamentos, as de maior destaque so anlise por componentes principais (PCA - Principal Components Analysis) e anlise hierrquica de agrupamentos (HCA - Hierarchical Clusters Analysis). A tcnica HCA baseia-se na similaridade e dissimilaridade entre amostras por meio do clculo de distncia entre elas.12 A tcnica PCA baseia-se na manipulao matemtica dos dados originais para se obter novas variveis, que so combinaes lineares das variveis originais e que apresentam ortogonalidade entre si, denominadas de componentes principais (PCs). 12 Em relao aos mtodos supervisionados, que utilizam informao prvia sobre um conjunto de amostras conhecidas, a tcnica mais utilizada a modelagem suave independente de analogias entre classes (SIMCA - Soft Independent Modeling of Class Analogies), que usa PCA para cada classe definida e testa a distncia das amostras em relao a cada uma das classes, para determinar se se situa em alguma classe e em qual ou quais delas.9 Assim, neste trabalho buscou-se classificar amostras de biodiesel em termos do tipo de leo utilizado na produo de biodiesel (soja, algodo e girassol), utilizando espectrometria na regio do visvel e aplicando tcnicas de reconhecimento de padres no supervisionado e supervisionado. As tcnicas no supervisionadas utilizadas foram PCA e HCA e o mtodo supervisionado foi o SIMCA, para fazer a classificao.

PARTE EXPERIMENTAL Reagentes e amostras Para obteno das amostras de biodiesel foram utilizadas oito amostras, de marcas e lotes distintos, de leos refinados de algodo, soja, girassol, perfazendo 72 amostras. Etanol absoluto foi utilizado para promover a reao de transesterificao e como catalisador para reao foi utilizado hidrxido de potssio PA. Aps a reao de transesterificao, as amostras de biodiesel foram lavadas com gua destilada e soluo de cido clordrico 0,1 mol/L, at alcanar pH prximo de 7,0. A lavagem do biodiesel tem a finalidade de retirar impurezas, tais como, o excesso de lcool, que dificulta a separao entre as fases biodiesel/glicerina e afeta o ponto de fulgor do combustvel; glicerina, que pode formar resduos nos tanques de armazenamento e causar entupimentos em filtros e depsitos nos bicos injetores dos automveis; sais dos cidos

graxos, que reduzem o rendimento da reao e, o excesso do catalisador hidrxido de potssio, o qual pode ocasionar a formao de sais de cidos graxos.13 Instrumentos e programas computacionais As medidas espectromtricas de refletncia difusa foram realizadas em triplicata em um espectrmetro Vis/NIR FOSS XDS MasterLabTM. Selecionouse a faixa de 400 a 780 nm, com uma resoluo espectral de 0,5 nm para posterior pr-tratamento dos dados com seleo de faixa de variveis mais significativas para classificao. Os dados foram tratados com o programa computacional The Unscrambler 9.8, desde o pr-processamento de amostras e de variveis como a construo dos modelos PCA e SIMCA. O programa computacional Statistica 9.0 foi utilizado para construir o modelo HCA para verificao dos agrupamentos dos tipos de biodiesel. O programa computacional Matlab 7.11.0.584 (R2010b) foi utilizado para seleo do conjunto de classificao e de teste para construo do modelo SIMCA, utilizando o algoritmo de Kennard-Stone.

RESULTADOS E DISCUSSO Aquisies dos dados espectrais Os espectros apresentados na Figura 1a so das amostras de biodiesel de algodo, girassol e soja na regio de 400 a 780 nm. Os dados foram prprocessados por primeira derivada pelo mtodo de Savitzky-Golay, empregando um polinmio de segunda ordem e janela de 21 pontos permitindo destacar os comprimentos de onda mais discriminativos na classificao das amostras (Figura 1b). Baseada na seleo de variveis a priori das variveis mais discriminativas foi escolhida a regio de 405 a 500 nm para a construo dos algoritmos de classificao.

Modelo PCA O conjunto de treinamento para modelo PCA foi construdo com as 72 amostras de biodiesel e o conjunto de validao foi baseado no procedimento de validao cruzada completa. Esta validao interna baseia-se na retirada uma amostra por vez do conjunto de treinamento e, em seguida, testada no modelo gerado, tornando o modelo mais robusto por testar todas as amostras. A Figura 2 apresenta a distribuio de scores para as amostras de biodiesel estudadas, baseando-se em trs PC, em que possvel verificar a formao de trs agrupamentos, associados com o tipo de leo utilizado na sntese das amostras de biodiesel.

Modelo HCA O dendograma, apresentado na Figura 3, do modelo HCA foi construdo aplicando a correlao de 1-Pearson R para todas as 72 amostras de biodiesel, que determina a extenso em que valores de duas variveis so proporcionais entre si, para medida de dissimilaridades entre as amostras e a tcnica de ligao completa,complete linkage, que indica a proximidade entre os agrupamentos das amostras por meio da regra dos vizinhos mais distantes.

Os seguintes agrupamentos HCA foram obtidos atravs do uso dessa tcnica, baseando-se na distncia de ligao mxima obtida: agrupamento de algodo (distncia de ligao de 12,0%), agrupamento de girassol (distncia de ligao de 12,5%), agrupamento de soja (distncia de ligao de 11,2%), todos aproximadamente na mesma faixa de distncia de ligao. Foi possvel verificar que os agrupamentos das amostras de biodiesel se diferenciaram nas

seguintes distncias, com base na distncia de ligao mxima obtida: grupamento de soja para girassol (distncia de ligao de 33,2%), grupamentos de soja e girassol para o agrupamento de algodo (distncia de ligao de 100%). Assim, o modelo HCA construdo para todas as amostras de biodiesel corrobora os resultados apresentados no modelo PCA, verificando a presena de trs agrupamentos tambm associados com o tipo de leo utilizado na sntese das amostras de biodiesel. Modelo SIMCA Os conjuntos de treinamento dos modelos SIMCA para cada tipo de biodiesel (algodo, girassol e soja) foram construdos com 12 medidas espectrais do biodiesel derivada do leo de algodo, 16 para soja e 16 para girassol. As amostras do conjunto de teste foram selecionadas utilizando o algoritmo de Kennard-Stone no programa computacional Matlab, para evitar extrapolao do espao amostral para os espectros do conjunto de teste, sendo composto por 28 medidas espectrais, em que 6 foram do biodiesel derivado do leo de algodo, 11 para girassol e 11 para soja. Os modelos foram gerados usando validao cruzada completa, leave-one-out, e o nmero de PC para os modelos de girassol e algodo foi igual a 3 e soja 4, que foi sugerido pelo prprio software. O nmero de PC escolhidos se baseia na curva de varincia residual dos modelos, que a mdia quadrtica dos resduos de todos os componentes do modelo, sendo que para soja foi 9,45 x 10-11, girassol, 5,45 x 10-11 e algodo, 7,67 x 10-11. Nos grficos Si/S0 vs Hi dos modelos SIMCA para as amostras de biodiesel, Figura 4, possvel verificar as distncias ortogonais das amostras dos conjuntos de teste, indicando os limites para classificao dentro de cada classe, a 95% de confiana estatstica. Os grficos mostram os dois limites utilizados para classificar uma amostra a um dado modelo, em que Si/S0 a distncia relativa de amostras ao modelo por meio do desvio padro residual e o leverage (Hi) a distncia da nova amostra ao centro do modelo, que indica o nvel de influncia da amostra no modelo. Vale ressaltar que a presena de uma amostra de girassol e uma de algodo, distantes de seus grupos e apresentadas na extremidade direita superior dos grficos, apresentam a variabilidade das amostras nos modelos, no implicando, contudo, em erro de classificao dessas amostras.

Outrossim, a viabilidade em se fazer a classificao das amostras de biodiesel possvel, pois existem diferenas significativas dos cidos graxos presentes e de suas propores nos leos precursores e porque as estruturas dos steres de cidos graxos no biodiesel no so distintas dos cidos graxos dos leos quando da reao de transesterificao. Da mesma forma, as similaridades existentes entre os biodieseis de soja e girassol e as dissimilaridades entre estes e o biodiesel derivado do leo de algodo tambm esto fundamentadas na composio dos cidos graxos dos seus leos precursores, corroborando os

resultados encontrados neste trabalho. Assim, foi possvel, neste trabalho, obter um algoritmo SIMCA para classificao de biodiesel com espectroscopia de absoro molecular na regio do visvel sem erros de tipo I ou de tipo II.

CONCLUSES Neste trabalho foram classificadas, sem erros de tipo I e de tipo II, amostras de biodiesel, utilizando tcnicas de reconhecimento de padres e a espectrometria de absoro molecular na regio do visvel, baseada na diferena de composio e propores dos cidos graxos dos leos precursores, que representam quase 90% da produo nacional de biodiesel. A possibilidade de implementar esta metodologia na construo de fotmetros dedicados baratos e com componentes de fcil aquisio na classificao de biodiesel para suporte aos rgos fiscalizadores, s empresas que comercializam e aos consumidores, aponta a relevncia deste trabalho. Entretanto, a adio de corantes ou de outros aditivos coloridos e a presena de contaminantes nos leos podem proporcionar erros de classificao, falseando os resultados, que podem ser corrigidos com uma lavagem de biodiesel adequada. Por fim, a metodologia proposta neste artigo mostrou-se satisfatria para classificao de biodiesel, de forma rpida e no destrutiva, podendo ser empregada no controle de qualidade na forma de anlise do tipo screening.

AGRADECIMENTOS Ao CNPq pelas bolsas de Iniciao Tecnolgica e Industrial e pelo financiamento do projeto n: 576416/2008-8, ao Dr. E. P. de Medeiros e Embrapa Algodo pela cesso do espectrmetro.