FACTORES QUE AFECTAN EL CRECIMIENTO MICROBIANO II: Estado Fisiolgico y Edad del Cultivo.

FACTORS AFFECTING MICROBIAL GROWTH II: Physiological State and Crop Age.

OBJETIVOS Estudiar como se ve afectado el estado fisiolgico de un cultivo de microorganismo por su edad. Analizar como el tiempo de un cultivo de E. coli influye sobre la actividad enzimtica de este microorganismo. Evaluar la tasa de produccin de Indol y la tasa especfica de produccin y establecer la diferencia entre ellas.

RESULTADOS

TABLA 1. Tabla de resultado para las absorbancias de la densidad bacteriana y las absorbancias para la cuantificacin de indol a 600 y 540nm respectivamente Tiempo (min) 0 120 240 360 1440 Abs OD 600nm 0,186 0,777 0,106 0,144 0,238

Indol 10 min 0,003 0,001 0,082 0,102 0,348 0,390 0,252 0,452 0,443 0,443

indol 25 min 0,003 0,004 0,101 0,087 0,436 0,519 0,539 0,567 0,646 N.D

indol 35 min 0,006 0,004 0,030 0,050 0,267 0,195 0,588 0,479 0,980 N.D

TABLA 2. Tabla de resultados para la produccin de indol para cada edad del cultivo. Cantidad de Indol obtenido en mg/l Tiempo (min) 0 120 240 360 1440 Tubo 2 Tubo 3 Tubo 4 Tubo 5 16,6666667 15,3333333 16,6666667 17,3333333 69,3333333 82,6666667 82 72,6666667 246,666667 274,666667 305,333333 360,666667 182,666667 316 374 392,666667 310 310 445,333333 N.D Tubo 6 Tubo 7 18,6666667 17,3333333 34,6666667 48 192,666667 144,666667 406,666667 334 668 N.D

TABLA 3. Promedio de la produccin de Indol con respecto al tiempo Edad del Cultivo promedio de la produccin de Indol 10 min 25 min 35 min

E1 E2 E3 E4 E5

16 17 18 76 77,3333333 41,3333333 260,666667 333 168,666667 249,333333 383,333333 370,333333 310 445,333333 668

800 700 y = 13.902x + 150.07 600 500 400 300 200 100 0 0 5 10 15 20 y = -1.2702x + 94.526 y = 0.0789x + 15.158 25 30 35 40 y = -3.0088x + 324.32 e1 e2 e3 e4 y = 5.1632x + 213.86 e5 Linear (e1) Linear (e2) Linear (e3) Linear (e4) Linear (e5)

Figura 1. Produccin de indol en funcin del tiempo para cada edad del cultivo. TABLA 4. Tasa produccin de Indol Produccin de indol para cada cultivo Edad de cultivo Tasa de produccin de indol E1 0,0789 E2 -1,2702 E3 -3,0088 E4 5,1632 E5 13,902

TABLA 5. Tabla densidad bacteriana en la suspensin Edad del Cultivo

Densidad Bacteriana

E1 E2 E3 E4 E5

1,8542*10 7,7642*10 1,0542*10 1,4342*10 2,3742*10

TABLA 6. Tabla de tasa de produccin especifica de Indol. Edad de cultivo E1 E2 E3 E4 E5 tasa de produccin especifica de indol 4,2552*10-12 -1.6359*10-11 -2,8554*10-10 3,6*10-10 5,855*10-10

16 14 tasa de produccion de indol 12 10 8 6 4 2 0 -2 0 -4 -6 tiempo (min) 500 1000 1500 2000 Series1

Figura 2. Tasa de produccin de indol en funcin del tiempo del cultivo.

1 0.9 tasa de produccion especifica 0.8 0.7 0.6 0.5 0.4 0.3 0.2 0.1 0 0 500 1000 tiempo 1500 2000 Series1

Figura 3. Tasa especifica de produccin de indol en funcin del tiempo del cultivo.

MODELO DE CLCULOS Calcular la cantidad de Indol en mg/L obtenida en cada tubo a partir del valor de absorbancia, teniendo, en base a la curva de calibracin cuya ecuacin es: y= 0.0015x- 0.0022 Edad del Cultivo 1 (E1), Tubo 2 (ABS 0,003) donde: Y= Absorbancia (ABS) X= Cantidad de Indol en mg/L Y= 0.0015x- 0.022. 0.003= 0.0015x-0.022 0.003+0.0220/0015=x x= 16 Para el Tubo 2 en el tiempo (10min) hay 16mg/L Indol. Calcular la tasa de produccin de Indol para cada edad del cultivo (mg indol/hora), en base a la lnea de regresin lineal del grfico obtenido en la produccin de indol con respecto al tiempo.

La tasa de produccin de Indol no es ms que la pendiente de la grfica de produccin de indol vs El tiempo.

Calcular la densidad bacteriana en la suspensin, utilizando la ecuacin obtenida en la grfica de la prctica anterior, donde se relaciona absorbancia con recuento en placa en UFC/mL. Edad del Cultivo 1, ABS= 0,186 La ecuacin es: Y= 1*10x + 0.0058; donde: Y= Absorbancia (ABS) X= Densidad en UFC/mL La ABS de E1, se multiplica por el inverso de su factor de dilucin, que para sta edad, es 10. ABS= 0,186 * 10= 1,86 Remplazando la ecuacin, tenemos: Y= 1*10x + 0.0058 1,86 =1*10x + 0.0058 1,86 -0.0058 / 110=X 1,8542*10=x En la edad del cultivo 1 hay una densidad bacteriana de 1,8542*10UFC/mL}

Calcular la tasa especfica de produccin de indol.

Q indol= tasa especfica de produccin de indol

V=tasa de produccin de indol(mg indol/hora*cel) D= densidad celular (UFC/mL) Tasa especfica para la edad del cultivo 1 (E1) V= 0,0789 D=1,8542 *10UFC/mL Remplazando en la formula, tenemos: Qindol= 0,0789 /1,8542*10 = 4,2552 *10-12

ANLISIS DE RESULTADOS La tasa de produccin de Indol, se refiere a la cantidad de Indol producida por un cultivo microbiano, mientras que la tasa especifica de produccin de Indol se refiere a la cantidad de Indol producida por unidad de clula, las cuales deben contar con la capacidad enzimtica para desdoblar el triptfano. En la grfica 1 se mide la produccin parcial de indol de toda la poblacin microbiana a la vez mientras que en la grfica 2 se estima la produccin de indol por clula, sea un dato ms especfico de la produccin enzimtica de cada una de las clulas de la poblacin microbiana, Es all donde comparamos que en la grfica 1el tiempo 5 fue donde hubo la mayor produccin de indol. La tasa especifica de produccin de indol donde se visualiz las ms ptima actividad enzimtica fue en El tiempo E5, aunque se esperaba que fuera en el tiempo E2 ya que este es el tiempo en el cual se pueden atribuir la etapa de crecimiento o fase exponencial, lo que se relaciona directamente con una alta eficiencia en la actividad del microorganismo pero por errores aleatorios encontramos una variabilidad en este resultado. Adems se observa una gran disminucin de la tasa de produccin especfica en el tercer y cuarto tiempo lo que nos sugiere una baja actividad enzimtica del microorganismo en estos periodos. Respecto a la actividad enzimtica y el tiempo de exposicin al bao mara en las diferentes edades del cultivo, podemos decir que a mayor edad del cultivo, y por ende mayor densidad celular, mayor produccin de Indol. Por otro lado, se tomaron 3 tiempos como puntos de referencia para evaluar si la produccin de Indol dependa del tiempo, lo que logramos corroborar puesto que a medida que aumentaba el tiempo de exposicin, tambin lo hacia la produccin de Indol. CONCLUSIONES Al momento de cuantificar la produccin de metabolitos de un cultivo el dato ms acertado lo encontramos en la tasa de produccin especfica de indol. La tasa de produccin especfica demuestra que a mayor edad del cultivo es menos la tasa de produccin enzimtica de la poblacin. La tasa de produccin de la poblacin microbiana total siempre ser mayor que la tasa de produccin por clula, quedando claro una fuerte relacin entre ambas. La fase donde se deben realizar los diferentes estudios fisiolgicos de un microorganismo es en su fase exponencial, puesto a que es en esta donde se encuentra la mayor eficiencia de su actividad enzimtica y esta etapa la podemos notar porque es all en donde hay una mayor tasa de produccin de indol. La produccin de Indol depende de la concentracin de triptfano, la densidad celular, y por ende la cantidad de triptofanasa disponible para degradar triptfano a Indol.

BIBLIOGRAFA

1. Madigan M, Martinko J, Parker J. Brock Biologa de los microrganismos. 10ed. Pearson; 2003.