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OFICINA ESPAOLA DE PATENTES Y MARCAS

11 Nmero de publicacin: 51 Int. Cl.7: A61K

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ESPAA

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TRADUCCIN DE PATENTE EUROPEA

86 Nmero de solicitud: 00940292 .6 86 Fecha de presentacin: 31.05.2000 87 Nmero de presentacin de la solicitud: 1181030 87 Fecha de publicacin de la solicitud: 27.02.2002

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54 Ttulo: Extracto de Tanacetum parthenium.

30 Prioridad: 03.06.1999 IT MI991244

73 Titular/es: INDENA S.p.A.

Viale Ortles, 12 20139 Milano, IT

45 Fecha de publicacin de la mencin BOPI:

72 Inventor/es: Bombardelli, Ezio y

16.05.2004

Morazzoni, Paolo

45 Fecha de la publicacin del folleto de la patente:

74 Agente: Carpintero Lpez, Francisco

16.05.2004

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Aviso: En el plazo de nueve meses a contar desde la fecha de publicacin en el Boletn europeo de patentes, de
la mencin de concesin de la patente europea, cualquier persona podr oponerse ante la Ocina Europea de Patentes a la patente concedida. La oposicin deber formularse por escrito y estar motivada; slo se considerar como formulada una vez que se haya realizado el pago de la tasa de oposicin (art. 99.1 del Convenio sobre concesin de Patentes Europeas).
Venta de fascculos: Ocina Espaola de Patentes y Marcas. C/Panam, 1 28036 Madrid

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DESCRIPCIN Extracto de tanacetum parthenium.
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La presente invencin se reere a un extracto de Tanacetum parthenium sustancialmente sin -lactonas -insaturadas, y a composiciones farmacuticas y cosmticas que contienen el extracto de Tanacetum parthenium sustancialmente exento de partenlido. Antecedentes tecnolgicos

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Los extractos de Tanacetum parthenium, una planta que pertenece a la familia de las asterceas/compuestas, tambin conocida por los nombres de Altamisa, Crisanthemum, Leucanthemum, Pyrethrum parthenium o por el nombre comn de tanaceto, se han usado tradicionalmente para el tratamiento de la migraa, el vrtigo, la artritis, los trastornos menstruales, la ebre, el dolor de muelas, el dolor de estmago y las picaduras de insectos. Los extractos de Tanacetum parthenium, adems de aceites voltiles de diversa ndole (componentes monoterpenos y sesquiterpenos), avonoides, taninos, piretrina, contienen tambin terpenoides de la familia de las lactonas sesquiterpnicas conocidos con los nombres de germacranlidos, guayanlidos y eudesmanlidos. Dichos compuestos se caracterizan por tener una estructura -lactona -insaturada y comprenden, en particular, los compuestos conocidos por los nombres de partenlido, 3--hidroxipartenlido, costunlido, 3--hidroxicostunlido, artemorina, 8--hidroxiestaatina y crisantemonina. La presencia de dichas lactonas sesquiterpnicas es considerada la condicin bsica de la actividad farmacolgica de los extractos (J. Pharm. Pharmacol. 1992, 44: 391-395).

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La atencin se ha centrado, en particular, en el partenlido, que se considera el ingrediente activo fundamental del extracto, pero tambin el principal responsable de las reacciones alrgicas que pueden producirse en algunas ocasiones despus del tratamiento con los extractos de Tanacetum parthenium [Arch. Dermatol. Forsch. 1975, 251 (3): 235-44; ibdem 1976; 255 (2): 111-21; Contact Dermatitis, 1988, 38 (4): 207-8; Am. J. Contact Dermatol. 1998-9 (1): 49-50; Br. J. Dermatol. 1995, 132 (4): 543-7]. Los extractos de Tanacetum parthenium que contienen partenlido se describen en los documentos WO 94 06800; EP 0 553 658; WO 92 11857; GB 2.166.952; EP 98 041; WO 98 39018. Descripcin de la invencin

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Ahora se ha encontrado que los extractos de Tanacetum parthenium sustancialmente sin -lactonas -insaturadas, en particular sin partenlido, tienen propiedades farmacolgicas interesantes junto con una disminucin notable del riesgo de reacciones alrgicas. Por tanto, los extractos de la invencin se pueden usar convenientemente como ingredientes activos para la preparacin de composiciones farmacuticas o cosmticas orales. Sustancialmente sin -lactonas -insaturadas y sustancialmente sin partenlido signican aqu un extracto que tiene un contenido en peso de partenlido menor al 0,2%, preferiblemente menor de 0,1%, ms preferiblemente menor de 0,09% y ms preferiblemente menor de 0,07%. El extracto de la invencin se puede obtener mediante un proceso que comprende: a) la extraccin de la planta (partes areas) con acetona, alcoholes o mezclas de estos disolventes con agua;

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b) la extraccin del material de la etapa a) con hidrocarburos; c) la extraccin de la fase no hidrocarbonada con un disolvente apolar;
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d) el tratamiento del extracto con el disolvente apolar, previamente evaporado y redisuelto en una solucin acuoalcohlica, con una resina bsica fuerte; e) la elucin de la resina con alcoholes y la eliminacin de la solucin eluida;

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f) el tratamiento de la resina con soluciones alcohlicas o acuoalcohlicas de cidos, la concentracin de la solucin y la extraccin del residuo resultante con un disolvente apolar; g) la evaporacin del disolvente apolar de la etapa f) para dar un residuo que se agrega al residuo de la evaporacin del extracto hidrocarbonado de la etapa b) y a la fase acetnica o alcohlica obtenida despus de la extraccin con el disolvente apolar de la etapa c); h) la evaporacin y el secado.
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El partenlido y las otras lactonas sesquiterpnicas relacionadas se pueden eliminar puesto que la resina fuertemente bsica, sorprendentemente, no causa la apertura del anillo de lactona, que es reconocidamente sensible a la hidrlisis bsica: los componentes avnicos tienen grupos hidroxicidos y, por tanto, son retenidos por la resina, contrariamente al partenlido y los compuestos relacionados que, por consiguiente, se pueden eliminar.
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Los disolventes preferidos para las diversas etapas de extraccin se presentan a continuacin: etapa a): acetona, metanol, etanol o mezclas de los mismos con agua;
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etapa b): hexano, n-pentano, ter de petrleo, ligrona; etapa c): cloruro de metileno, cloroformo, acetato etlico, preferiblemente cloruro de metileno; etapa f): acetato etlico.

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Disolventes alcohlicos o acuoalcohlicos signica, preferiblemente, metanol o metanol con porcentajes de agua que varan entre el 10 y el 80% en volumen.
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Las resinas bsicas que pueden usarse de acuerdo con la invencin estn disponibles comercialmente, por ejemplo, con los nombres registrados Relite 2A; Relite 3A2; Dowex 2. Como alternativa, el extracto de la invencin se puede obtener partiendo de los extractos convencionales comercialmente disponibles, por tratamiento con resinas bsicas fuertes, opcionalmente extrayendo previamente con disolventes hidrocarbonados los componentes liplos que podran interferir negativamente con la resina.

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El contenido de -lactonas -insaturadas o de partenlido en el extracto nal se determina por cromatografa lquida de alta resolucin (HPLC). En la Figura anexa se muestra la curva de una HPLC tpica del extracto que se puede obtener por el proceso descrito ms arriba. El extracto de la invencin tiene propiedades farmacolgicas favorables junto con un riesgo notablemente reducido de induccin de reacciones alrgicas. La preservacin de las propiedades farmacolgicas caractersticas de los extractos convencionales de Tanacetum parthenium a pesar de la casi completa eliminacin de las lactonas sesquiterpnicas es an ms sorprendente, en vista de los informes documentados hasta la fecha, por lo que se reere a la relacin entre bioactividad y composicin de los extractos conocidos (J. Pharm. Pharmacol. 1992, 44: 391-395). Ms particularmente, los extractos de la invencin que tienen un contenido de partenlido menor a 0,2% tienen actividad antiagregante plaquetaria, antinamatoria, analgsica y antijaquecosa.

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Por tanto, la invencin tambin est relacionada con composiciones farmacuticas que contienen como ingredientes activos una cantidad ecaz del extracto de Tanacetum parthenium de la invencin en mezcla con vehculos adecuados.
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Ms particularmente, las composiciones de la invencin contendrn 10 a 500 mg de extracto y se deben administrar 3-4 veces al da, dependiendo de la prescripcin del mdico. La va de administracin preferida es la oral, pero se pueden concebir otras vas de administracin tales como la tpica y la parenteral. Las composiciones de la invencin son particularmente tiles para el tratamiento y la prolaxis de las crisis jaquecosas.

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Los extractos de la invencin pueden usarse tambin como ingredientes activos de formulaciones cosmticas orales. La invencin se describe con gran detalle en los siguientes ejemplos.
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Ejemplo 1 Preparacin del extracto

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Dos kilos de Tanacetum parthenium se extraen a 50-60C con 20 l de metanol acuoso al 70%. El extracto se concentra al vaco hasta aproximadamente 1 l y se diluye con un volumen similar de metanol. La solucin resultante se extrae con 3 x 2 litros de n-hexano. El extracto hexnico se evapora hasta la sequedad al vaco para producir aproximadamente 30 g de residuo (extracto H). La solucin acuometanlica se extrae luego con 2 x 0,5 l de cloruro de metileno. Se evapora la fase orgnica hasta la sequedad al vaco para obtener aproximadamente 70 g de residuos (extracto DCM). La fase acuometanlica (extracto HM) se deja a un lado. El extracto DCM se disuelve en 0,6 l de metanol al 90% y se trata bajo agitacin con 0,6 l de resina bsica fuerte (Relite 2A) durante tres a cuatro horas. Se ltra la suspensin al vaco y se lava la resina con aproximadamente 2 l de metanol al 90%. Se elimina la solucin metanlica que contiene partenlido y compuestos relacionados. La resina bsica se trata entonces con agitacin durante una hora con 0,6 l de metanol que contiene 65 ml de cido clorhdrico concentrado. Se ltra la resina al vaco y
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se lava con otros 2,5 l de metanol. El ltrado y los lavados se combinan, se concentran al vaco hasta aproximadamente 200 ml y se extraen con 3 x 200 ml de acetato etlico. El extracto resultante (E.A.), que contiene los componentes avnicos tanetina y otros relacionados, se evapora hasta la sequedad al vaco para obtener aproximadamente 4 g de un residuo. Los residuos de los extractos H y E.A. se combinan con el extracto HM. La solucin resultante se evapora hasta la sequedad al vaco y el residuo slido se seca al vaco a 50C hasta peso constante. Se obtienen aproximadamente 490 g del extracto de Tanacetum parthenium departenolizado con un contenido de partenlido inferior al 0,07% segn muestra el anlisis por HPLC (columna Zorbax SB C18; eluyente H2 O + 0,01% TFA; B: MeCN + 0,01% TFA; gradiente A:B:90%-10%:10%-90%; ujo 1 ml/min.). Ejemplo 2 Actividad farmacolgica
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Se ha usado el modelo experimental de estimulacin hormonal inducida por nitroglicerina en ratas, descrito en Brain Research 1995, 682: 167-181; ibdem 1995 695, 37-44 y en Neuropharmacol. 1997, 36(10); 1417-1424. La nitroglicerina (un vasodilatador comnmente utilizado para tratar algunos trastornos cardiovasculares) se puede usar como herramienta de diagnstico para el estudio del dolor migraoso, puesto que su administracin causa un ataque de tipo espontneo en los jaquecosos. La crisis jaquecosa inducida por nitroglicerina no es inmediata, sino que se retrasa algunas horas y est tpicamente asociada a los sntomas que la acompaan como las nuseas y la fotofobia. La actividad vasodilatadora de los nitratos orgnicos, incluyendo la nitroglicerina, surge del metabolismo del xido ntrico que, como se ha descrito, tambin desempea un papel como neurotransmisor de la SNC. La estimulacin neuronal activa rpidamente la transcripcin de varios protooncogenes que se han denominado genes inmediatostempranos debido a su induccin rpida y transitoria. Entre ellos, el c-fos es el ms ampliamente estudiado y la protena que codica, Fos, se transloca al ncleo donde persiste durante unas pocas horas y se puede detectar mediante un estudio inmunohistoqumico. Procedimientos experimentales

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Se usaron veinticinco ratas Sprague-Dawley macho divididas en grupos de 5 animales cada uno. Dos de estos grupos de animales (control y nitroglicerina) se trataron con inyeccin de vehculo slo (carboximetilcelulosa al 0,5%; 10 ml/kg), mientras que los otros 3 grupos se trataron por va oral durante 3 das con un extracto de Tanacetum parthenium sustancialmente sin partenlido (TPPDE) a dosis de 100 y 200 mg/kg y con extracto normal de Tanacetum parthenium (TPRE) a las mismas dosis, respectivamente. Una hora despus de la ltima administracin, todos los animales excepto los del grupo de control, se trataron por va subcutnea con 10 ml/kg de nitroglicerina.

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Cuatro horas despus de la administracin de nitroglicerina, se anestesiaron las ratas con pentobarbital sdico y se perfundieron con jador a travs de la aorta ascendente. Se extrajeron rpidamente los cerebros y se posjaron en el mismo jador durante toda la noche. Se hicieron cortes de todo el cerebro a 50 m sobre un micrtomo de corte por congelacin. Se recogieron los cortes en serie en seis pocillos que contenan solucin salina fosfato tamponada (PBS) fra y se procesaron para un estudio inmunohistoqumico como cortes en otacin libre. Los resultados se presentan en la Tabla siguiente: TABLA

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Nmero de neuronas inmunorreactivas (media SD) en el ncleo paraventricular del hipotlamo (PVH), locus coeruleus (LC) y ncleo parabranquial (PBN) 4 horas despus de la administracin de nitroglicerina Tratamiento Control Nitroglicerina TPPDE (100) + nitroglicerina TPPDE (200) + nitroglicerina TPRE (200) + nitroglicerina PVH 95,4 43,1 574,2 298,5 378,5 182,9 * 123,4 74,5** 569,7 288,3 LC 47,0 21,2 334,3 61,4 200,5 43,4 * 87,5 24,5 ** 321,2 * 49,1 PBN 27,3 15,2 231,3 89,4 140,7 64,6 * 71,6 28,6 ** 228,3 87,5

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* p < 0,03 Prueba para TPPDE (100) + nitroglicerina frente al grupo de control con nitroglicerina ** p < 0,001 Prueba para TPPDE (200) + nitroglicerina frente al grupo de control con nitroglicerina.

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REIVINDICACIONES 1. Extractos de Tanacetum parthenium que tienen un contenido de -lactonas -insaturadas inferior al 0,2% que pueden obtenerse por un proceso que comprende:
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a) la extraccin de la planta (partes areas) con acetona, alcoholes o mezclas de estos disolventes con agua; b) la extraccin del material de la etapa a) con hidrocarburos;
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c) la extraccin de la fase no hidrocarbonada con un disolvente apolar; d) el tratamiento del extracto con el disolvente apolar, previamente evaporado y redisuelto en una solucin acuoalcohlica, con una resina bsica fuerte;

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e) la elucin de la resina con alcoholes y la eliminacin de la solucin eluida; f) el tratamiento de la resina con soluciones alcohlicas o acuoalcohlicas de cidos, la concentracin de la solucin y la extraccin del residuo resultante con un disolvente apolar;

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g) la evaporacin del disolvente apolar de la etapa f) para dar un residuo que se agrega al residuo de la evaporacin del extracto hidrocarbonado de la etapa b) y a la fase de acetona o alcohol obtenida despus de la extraccin con el disolvente apolar de la etapa c); h) la evaporacin y secado.

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2. Un extracto de acuerdo con la reivindicacin 1, que tiene un contenido de partenlido inferior al 0,2%. 3. Un extracto de acuerdo con la reivindicacin 1 2 que tiene un contenido de -lactonas -insaturadas inferior al 0,1%.
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4. Composiciones farmacuticas que contienen el extracto de las reivindicaciones 1 a 3 mezclado con vehculos adecuados.
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5. Composiciones cosmticas orales que contienen como ingrediente activo los extractos de las reivindicaciones 1 a 3 mezclados con vehculos adecuados.

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NOTA INFORMATIVA: Conforme a la reserva del art. 167.2 del Convenio de Patentes Europeas (CPE) y a la Disposicin Transitoria del RD 2424/1986, de 10 de octubre, relativo a la aplicacin del Convenio de Patente Europea, las patentes europeas que designen a Espaa y solicitadas antes del 7-10-1992, no producirn ningn efecto en Espaa en la medida en que coneran proteccin a productos qumicos y farmacuticos como tales. Esta informacin no prejuzga que la patente est o no incluida en la mencionada reserva.
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