SETOR DE IMUNOLOGIA

No setor de Imunologia em um Laboratrio de Anlises Clnicas, as reaes imunoqumicas so as bases de uma grande variedade de ensaios clnicos sensveis e especficos. Neste testes, em geral, utiliza-se anticorpos como reagentes para a deteco de substncias qumicas (antgenos) de interesse. a especificidade e a alta afinidade de anticorpos para antgenos especficos, juntamente com a capacidade exclusiva dos anticorpos interligarem aos antgenos, que permitem a identificao e a dosagem de substncias especficas pelos mtodos imunolgicos. (Tietz,1996) Atualmente, os mtodos imunolgicos ampliaram sua ao para estudar os distrbios do prprio sistema imunolgico. As clulas linfides anormais podem perturbar a produo de imunoglobulinas, defeitos congnitos podem prejudicar a produo de anticorpos circulantes, a funo dos linfcitos, macrfagos, neutrfilos ou do complemento. A resposta imunolgica anormal pode causar doenas alrgicas ou auto-imunes. Assim, os mtodos imunolgicos continuam em grande desenvolvimento e novas tcnicas so frequentemente elaboradas. (MOURA, 2006) O estgio de Imunologia tem como finalidade ampliar e aprimorar os conhecimentos sobre a rea de atuao clnica imunolgica, sobre como realizar as anlises, o correto manuseio das informaes e dos reagentes fornecidos pelos kits utilizados nos testes, e inclusive a interpretao dos resultados, que muitas vezes so associados aos sintomas clnicos para a concluso de um diagnstico. As atividades foram dividas parte terica, quando foi apresentado o laboratrio, a localizao dos equipamentos, os materiais de utilizao rotineira para as anlises, procedimentos de segurana dentro do laboratrio e durante as prticas com os materiais e amostras, tambm, foram apresentadas as finalidades, os princpios e a metodologia dos testes realizados; E em parte prtica, quando foram realizados os testes a partir de amostras com a posterior obteno dos resultados finais. A seguir, esto descritos os testes imunolgicos realizados durante o perodo do estgio em Imunologia clnica.

TESTE DE CHAGAS

FINALIDADE DO TESTE Identificar a presena de anticorpos contra o Trypanosoma cruzi possveis de ser encontrados em amostras de soro sangunea. A doena de Chagas causada por um protozorio, Trypanosoma cruzi. uma infeco endmica, de evoluo crnica, e transmitida ao homem pelo inseto triatomneo. Podem ser considerados, imunologicamente, 3 estgios: agudo, latente e crnico. Na fase aguda, verificam-se febre, miocardiopatia, linfoadenopatia, hepatoesplenomegalia e parasitemia. A multiplicao intracelular dos parasitas nos msculos lisos e estriados, alm das clulas do sistema retculo endotelial, leva a formao de pseudocistos. Na fase latente no h sintomas e a doena pode evoluir para a fase crnica com sinais de miocardiopatia, degenerao das clulas ganglionares do sistema nervoso central e perifrico, hipertrofia e dilatao de certos rgos, tais como esfago e clon. Infelizmente prevalecem os altos ndices de incidncia e morbidade da doena e por isso ela se tornou um dos maiores problemas de sade pblica na Amrica Latina. (IMUNO-HAI CHAGAS, 2004).

PRINCPIO DO MTODO O teste tem por princpio a aglutinao pela reao de eritrcitos de aves estabilizados e sensibilizados com componentes antignicos do Trypanosoma cruzi altamente purificados, que entram em contato com o soro contendo anticorpos contra esses antgenos. (IMUNO-HAI CHAGAS, 2004).

TESTES DE ASLO

FINALIDADE um teste imunolgico qualitativo e semiquantitativo com a finalidade de determinar a antiestreptolisina O em soro sanguneo atravs da aglutinao de partculas de ltex sensibilizadas com Estreptolisina O. (ASLOTEST, 2010).

PRINCPIO DO MTODO

 dado pela aglutinao que ocorre quando o reagente, constitudo por uma suspenso de partculas de poliestireno sensibilizadas com Estreptolisina O, ao ser colocado em contato com soro sanguneo contendo altos nveis de anticorpos antiestreptolisina O inicia a reao antgeno anticorpo, evidenciado pela aglutinao das partculas de ltex que formam agregados facilmente visveis. (ASLOTEST, 2010).

TESTE DE -HCG

FINALIDADE O teste de -hCG tem como objetivo a determinao quantitativa da gonadotrofina corinica humana no soro ou urina (-hCG QUANTITATIVO, 2007) para a deteco da gesto e para o diagnstico de distrbios precoces da gestao. (ACCULITE CLIA MICROWELLS, 2006). O hormnio gonadotropina corinica humana (hCG) secretado pelo tecido

placentrio, desde o momento da implantao do ovcito fecundado e serve para manter o corpo lteo durante as primeiras semanas da gravidez. Sua concentrao plasmtica e urinria eleva-se dramaticamente durante a gestao normal. Porm, a hCG ou as glicoprotenas semelhantes ao hCG tambm podem ser produzidas por uma ampla variedade de tumores trofoblsticos e no trofoblsticos. (ACCULITE CLIA MICROWELLS, 2006).

PRINCPIO DO MTODO um mtodo rpido de imuno-anlise cromatogrfica para a deteco qualitativa da Gonadotropina Corinica Humana na urina ou no soro para auxiliar na deteco do incio da gravidez. Onde uma combinao de anticorpos, incluindo um anticorpo hCG monoclonal, detectam seletivamente nveis elevados de hCG. (STRIP EASY TEST, 2007). A anlise feita pela imerso da tira de teste em urina ou soro e a posterior observao da formao de linhas coloridas. A amostra percorre via capilar ao longo da membrana para reagir com o conjugado colorido. Se a amostra contiver elevados nveis do hormnio, este reage com o anticorpo especfico hCG colorido conjugado e formam uma linha colorida na regio da linhas de teste da membrana. Mas, na ausncia desta linha colorida sugere-se um resultado negativo. Como controle, uma linha colorida sempre aparecer na regio da

linha de controle indicando que um volume adequado de amostra foi acrescentado e que ocorreu absoro da membrana. (STRIP EASY TEST, 2007).

PCR LTEX

FINALIDADE O teste de PCR Ltex tem por objetivo a determinao de Protenas C-Reativas (PCR) no soro sanguneo, tambm para a monitorao de infeces ps-operatrias, controle de doenas inflamatrias e infecciosas, para o diagnstico, controle teraputico e acompanhamento de recidivas de diversas doenas, como na febre reumtica e na fase aguda da artrite reumatide. (PRC LTEX, 2009). Os ndices de Protena C Reativa encontram-se aumentados em quadros de febre reumtica, espondilite anquilosante, infarto de miocrdio, carcinomas, inflamaes agudas, artrite reumatide, necrose tecidual, infeces bacterianas e aps cirurgias. Esta protena sintetizada pelo fgado e tem a capacidade de induzir diversas reaes do sistema imune, por exemplo, ativar complemento e fagocitose. Devido a isto, considerada uma das protenas de fase aguda, tambm como um marcador sensvel na monitorao de inflamao aguda e na destruio de tecidos. (PRC LTEX, 2009).

PRINCPIO DO MTODO O princpio do teste fundamenta-se em uma reao de aglutinao das partculas de ltex inerte, em suspenso, (PRC LTEX, 2009), recobertas com Gama-globulina anti-PCR, especialmente tratadas para evitar aglutinaes inespecficas. A aglutinao ocorre quando o ltex entra em contato a uma amostra com concentrao de PCR igual ou superior a 6 mg/L. (BIO LTEX PCR, 2011).

TESE DE HEPATITE VIRAL B IgG

FINALIDADE

O teste tem o objetivo de detectar qualitativamente os anticorpos IgG para o antgeno core da hepatite B (HBc), em soro ou plasma humano. (IMMUNO COOMB II HBc IgG). O vrus da hepatite B (HBV) pertence a uma famlia de vrus de DNA, chamada Hepadnaviridae, apresentando hepatotropismo evidente e um nico meio de replicao pelo mecanismo de transcrio reversa. O viron completo ou partcula de Dane, consiste em uma molcula de DNA circular protegida por um capsdeo nuclear / antgeno de core (HBcAg), e envolvido por uma lipoprotena de envelope, que o antgeno de superfcie (HBsAg). O HBsAg tambm encontrado no soro como partculas ou filamentos esfricos, incompletos e no infecciosos. Um pequeno componente do nucleocapsdeo do HBV, o antgeno HBe (HBeAg), tambm detectvel no sangue durante a fase replicativa deste vrus. (IMMUNO COOMB II HBc IgG). O vrus da hepatite B tem uma distribuio global e est amplamente presente. Suas principais vias de transmisso so: horizontal, atravs de contaminao sexual ou parenteral; e vertical, com a transmisso congnita da me infectada para o feto. As conseqncias clnicas da infeco por HBV variam de totalmente imperceptveis, maioria dos casos, ou evolui para uma hepatite aguda com ictercia, podendo haver recuperao total dentro de seis meses aps o incio da doena. A minoria da populao infectada pode

desenvolver hepatite fulminante, freqentemente seguido de bito. J em uma proporo significativa dos pacientes adultos, o HBV pode persistir, progredindo para hepatite crnica com desenvolvimento de cirrose e hepatocarcinoma. (IMMUNO COOMB II HBc IgG). Os anticorpos IgM e IgG contra o antgeno core do vrus, aparecem durante a fase aguda da infeco por HBV. Mas, enquanto os nveis de anti-HBc IgM declinam rapidamente, os nveis de anti-HBc IgG persistem por anos. Assim, o anti-HBc IgG um indicador til para determinar uma infeco prvia com o HBV. Alm disso, o anti-HBc IgG o nico marcador HBV detectvel durante a chamada janela sorolgica da hepatite B aguda, ou seja, o perodo do desaparecimento do HBsAg, quando o anticorpo anti-HBs indicando liberao do vrus, ainda no detectvel. (IMMUNO COOMB II HBc IgG).

PRINCPIO DO MTODO um ensaio imunoenzimtico (EIA) indireto em fase slida, onde a fase slida um pente com doze projees (dentes) e cada um dos dentes esto sensibilizados em duas posies: Ponto superior imunoglobulina humana (Controle Interno) Ponto inferior HbcAg recombinante. (IMMUNO COOMB II HBc IgG).

A Placa Reveladora tem cavidades, e em cada uma contendo reagentes prontos para uso em diferentes etapas do teste, que realizado com incubao em cada etapa. Antes de iniciar o teste, amostras de soro ou plasma so pr-diludas a 1:10 e adicionadas ao diluente na primeira cavidades da Placa Reveladora e os anticorpos Anti-HBc, se presentes na amostra, iro ligar-se especificamente ao HBcAg no ponto inferior do dente do Pente. Os componentes no ligados so lavados na prxima etapa. J na etapa seguinte, os IgG anti-HBc capturados nos pontos Inferiores do dente, e a imunoglobulina humana nos pontos superiores (Controle Interno) reagiro com anticorpos anti-IgG humana marcados com fosfatase alcalina (FA). Nas prximas duas etapas, os componentes no ligados so removidos por lavagem. Na ltima etapa, a fosfatase alcalina ligada ir reagir com o substrato cromognico e os resultados so visualizados como pontos cinza azulados na superfcie dos dentes do Pente. (IMMUNO COOMB II HBc IgG). Este princpio est resumido na figura 1, a seguir.

Figura 1. Princpio do teste de hepatite viral B IgG. (Fonte: IMMUNO COOMB II HBc IgG).

TESDE DE RUBOLA IgG

FINALIDADE

O teste de rubola IgG tem por obejtivo a determinao quantitativa de anticorpos IgG para o vrus da rubola em soro ou plasma humano. O vrus da rubola encontrado principalmente em populaes humanas a sua transmisso ocorre principalmente pelo ar ou por contato direto. considerada uma infeco geralmente de manifestao benigna e autolimitante, caracterizada por erupo maculopapoular (sarampo), febre tnue e linfoadenopatia, mas tambm podem ocorrer artralgia provisria e artrite leve. (IMMUNOCOMB II RUBOLA IgM). A infeco primria por rubola contrada logo no incio da gravidez, pode resultar em danos severos ao feto levando, inclusive ao aborto. Estes danos causado pela infeco congnita s incluem anormalidades anatmicas e neuro-sensoriais srias, tais como surdez, defeitos cardacos, catarata, glaucoma, retardo mental e ainda, complicaes posteriores como o retardo no crescimento e a diabete mellitus. Por causa disto, tm-se utilizado a vacinao em massa para se reduzir a incidncia de rubola em todas as faixas etrias. Mesmo assim, de 10 a 20% dos jovens adultos ainda so suscetveis ao vrus. (IMMUNOCOMB II RUBOLA IgM). A triagem de anticorpos IgG para o vrus da rubola til para o diagnstico da doena e para a determinao do estado da imunizao. Os anticorpos para o vrus aparecem medida que a erupo diminui. Nos adultos, os anticorpos IgG geralmente, persistem por toda a vida e como consequncia, um nvel estvel de IgG anti-rubola revela uma exposio prvia ao vrus, enquanto um aumento quadruplicado ou maior diagnstico positivo para uma infeco recente. (IMMUNOCOMB II RUBOLA IgM).

PRINCPIO DO MTODO um mtodo de enzimaimunoensaio ou imunoenzimtrica em fase slida baseada no princpio de deteco qualitativa e quantitativa indireta de anticorpos IgG para rubola no soro ou plasma humano. Neste mtodo, os anticorpos IgG anti - rubola presentes na amostra ligamse aos antgenos revestidos na microplaca formando complexos antgeno-anticorpos IgG. Aps a incubao inicial, a microplaca lavada para remover os materiais no ligados. A Enzima Conjugada anti-Anticorpos IgG humanos adicionada microplaca e ento incubada novamente. Os anticorpos enzima - conjugado anti-IgG humano se ligam aos anticorpos IgG imobilizados pelos antgenos presentes. realizada nova Lavagem para remover os excedentes. Aps a realizao das etapas, a colorao produzida indica a quantidade de anticorpos IgG presentes nas amostras e so comparadas a colorao do controle positivo. (BIOLISA RUBOLA IgG, 2011). Todo o princpio do teste est simplificado na figura 3.

Figura 3. Princpio do teste de rubola IgG. (Fonte: IMMUNOCOMB II RUBOLA IgM).

TIPAGEM SANGUNEA

FINALIDADE O objetivo do teste determinar o grupo sanguneo atravs do teste de aglutinao das hemcias com Anti-A, Anti-B e Anti-AB, este ltimo facilita o reconhecimento de certos subgrupos raros e tambm serve para a confirmao do grupo sanguneo ABO. E tambm com a utilizao do Anti-D, para a possvel determinao do fator Rh. (SORO ANTI-A, ANTI- B, ANTI-AB, 2008). O sistema ABO foi determinado por Landsteiner em 1901 e representado por quatro grupos principais: A, B, A/B e O. (SORO ANTI-A, ANTI- B, ANTI-AB, 2008). Landsteiner descobriu que os glbulos vermelhos podiam ser classificados por estes quatro tipos conforme a presena ou ausncia de antgenos altamente reativos em sua superfcie. Ele tambm comprovou a existncia de anticorpos (aglutininas) para os antgenos A e B e que o soro de um indivduo no contm anticorpos para o antgeno presente em seus prprios glbulos vermelhos, mas, contra os que no possui. (ANTI-A, ANTI-B E ANTI- AB MONOCLONAL, 2000). Tudo isto demonstra a importncia da compatibilidade ABO na prtica transfusional. (ANTI-A, ANTI-B E ANTI- AB MONOCLONAL, 2000). Afinal, os anticorpos Anti-A e AntiB podem causar reaes hemolticas transfusionais srias, assim como a Doena Hemoltica do

Recm Nascido. Desta forma, h a necessidade de se testar tanto o sangue do receptor quanto do doador para a presenados antgenos A e/ou B. (SORO ANTI-A, ANTI- B, ANTI-AB, 2008).

PRINCPIO DO MTODO Os reagentes causam aglutinao direta macroscpica das hemcias que carregam os antgenos correspondentes. Assim, as hemcias que possuem o antgeno B se aglutinam quando misturadas ao reagente Anti B e tambm ao reagente Anti AB; As hemcias que possuem o antgeno A se aglutinam quando misturadas ao reagente Anti-A e tambm ao reagente Anti AB; As hemcias que possuem antgenos AB aglutinam quando misturadas aos reagentes Anti A, Anti B e Anti AB. (SORO ANTI-A, ANTI- B, ANTI-AB, 2008). A ausncia de aglutinao em para todos os reagentes demonstra ausncia de antgenos. (ANTI-A, ANTI-B E ANTI- AB MONOCLONAL, 2000). Quando houver antgenos D presentes nas hemcias, elas aglutinam quando entram em contanto com reagente Anti D. (SORO ANTI-A, ANTI- B, ANTI-AB, 2008). A tabela 1 a seguir, resume o princpio do mtodo do teste com a determinao do grupo sanguneo.

Anti A + 0 0 +

Anti B 0 + 0 +

Anti AB + + 0 +

GRUPO SANGUNEO A B

Anti D Rh + + Rh 0

Tabela 1. Determinao do grupo sanguneo pela presena de hemoaglutinao.