OBJETIVOS:

Investigar la presencia de glcidos lpidos y protenas en una sustancia problema Sugerir de que se trata

MATERIALES:
Tubos de ensayo Mechero Cucharitas Cuenta gotas Baso de Bohemia

SUSTANCIAS:
NaOH HCl CuSO4 HNO3 (acido ntrico) Reactivo de Milln Fehling C Fehling T Reactivo Barfoed Reactivo Seliwanoff Reactivo Lugol

TABLA DE RESULTADOS
REACCIN Biuret Xantoproteica Milln Lugol Fehling Barfoed Barfoed Hidrolizado Seliwanoff Seliwanoff Hidrolizado Disn RESULT ADO POSITIVO POSITIVO POSITIVO NEGATIV O POSITIVO NEGATIV O POSITIVO NEGATIV O POSITIVO NEGATIV O

TCNICA:
1- Biuret: Colocar 1mL de solucin problema en un tubo de ensayo. Agregue 20 gotas de NaOH (ac). Agite y agregue 1 o 2 gotas de CuSO 4 (ac). Observe 2- Xantoproteica: Colocar 1mL de solucin problema en un tubo de ensayo. Agrguele 2 o 3 gotas de HNO3 (ac). Caliente y agregue NaOH (ac). Observe 3- Milln: Colocar 1mL de solucin problema en un tubo de ensayo. Agrguele 1 o 2 gotas de reactivo Milln. Caliente y observe. 4- Lugol: Colocar 2mL de solucin problema en un tubo de ensayo. Agregar 2 gotas de Lugol. Observar. 5- Fehling: Preparacin del reactivo de Fehling: En un tubo de ensayo agregar 3 ml de solucin de Fehling C y 3 ml de solucin de Fehling T y calentar. Luego de unos minutos, la solucin debe mantenerse color azul para que el reactivo est preparado de manera correcta. De no ser as, repetir la preparacin de Fehling. Una vez preparado el reactivo, agregar Colocar 1mL de solucin problema. Observar. 6- Barfoed: Colocar 2mL de solucin problema en un tubo de ensayo. Agregar 3 ml del reactivo de Barfoed. Calentar. Observar. 7- Hidrlisis y Barfoed Colocar en un tubo de ensayo la solucin problema. Agregar unas gotas de cido clorhdrico, hasta asegurarse de haber obtenido un medio cido. Calentar. Colocar la solucin problema hidrolizada en otro tubo de ensayo. Agregar 3 ml del reactivo de Barfoed. Calentar. Observar. 8- Seliwanoff: Colocar 2mL de solucin problema en un tubo de ensayo. Agregar 3 ml del reactivo de Seliwanoff. Observar 9- Hidrlisis y Seliwanoff Colocar en un tubo de ensayo 2ml la solucin problema. Agregar unas gotas de cido clorhdrico, hasta asegurarse de haber obtenido un medio cido. Calentar. Colocar la solucin problema hidrolizada en otro tubo de ensayo. Agregar 3 ml del reactivo de Seliwanoff. Observar 10- Disn Colocar una pequea cantidad de soluto sobre papel filtro. Agregar 4 gotas sobre el soluto con cuentagotas limpio. Observar

MARCO TERICO:
Protena proviene de la palabra griega proteios, que significa lo primero. Son compuestos a base de carbono, hidrgeno, oxgeno, nitrgeno y generalmente azufre y fsforo. El elemento caracterstico es el nitrgeno. Todas las enzimas, algunas hormonas y muchos componentes estructurales importantes de la clula son protenas. Las molculas de protena son muy grandes y contienen miles de tomos; su estructura es extremadamente compleja. Gran parte de las protenas intracelulares son enzimas, sustancias que regulan la rapidez con que se han de tener numerosas reacciones celulares. Las molculas de protena estn formadas por componentes ms simples llamados aminocidos. Puesto que cada protena puede tener cientos de aminocidos combinados en ciertas proporciones y orden es posible una variedad prcticamente infinita de molculas de protena. Se han ideado mtodos de anlisis para reconocer la disposicin exacta de aminocidos en una molcula protenica. La insulina, hormona secretada por el pncreas y utilizada en el tratamiento de la diabetes, fue la primera protena cuya estructura se conoci. La ribononucleasa, secretada por el pncreas, fue la primera enzima de la cul se conoci el orden exacto de aminocidos. Reacciones de coloracin Las protenas estn formadas por aminocidos, unidos por enlaces peptdicos y aunque presentan propiedades fisicoqumicas y biolgicas caractersticas stas son reflejo de las de los aminocidos que las constituyen. Muchas de las reacciones coloridas que se utilizan para el anlisis de las protenas en realidad se deben a la presencia de un aminocido especfico . Fundamento terico del reactivo de Biuret: El nombre de la reaccin procede del compuesto coloreado formado por la condensacin de dos molculas de urea con eliminacin de amonaco. Esta reaccin est dada por aquellas sustancias cuyas molculas contienen dos grupos carbamino (-CO.NH) unidos directamente o a travs de un solo tomo de carbono o nitrgeno. El reactivo de Biuret contiene Cu2SO4 en solucin acuosa alcalina (gracias a la presencia de NaOH o KOH). La reaccin se basa en la formacin de un complejo de coordinacin entre los iones Cu2+ y los pares de electrones no compartidos del nitrgeno que forma parte de los enlaces peptdicos. Esta ltima reaccin provoca un cambio de coloracin: violeta prpura o violeta rosado. Debe sealarse que el color depende de la naturaleza de las protenas. Reaccin

Esta reaccin nos sirve para diferenciar las protenas y pptidos de los aminocidos y su utilidad principal es la de seguir el proceso de hidrlisis proteica, la reaccin ser negativa cuando la hidrlisis sea completa. Esta reaccin no es una reaccin caracterstica de todas las protenas , est dada solo por aquellas sustancias cuyas molculas contienen dos grupos carbamino (-CO.NH) unidos directamente o a travs de un solo tomo de carbono o nitrgeno

Fundamento terico de la reaccin Xantoproteica: Esta prueba caracteriza a los aminocidos aromticos (tirosina, fenilalanina, triptfano). Esta reaccin se debe la presencia de un grupo fenilo en la molcula proteica. Los complejos de la molcula proteica que son de importancia en esta reaccin son la tirosina y el triptfano. La fenilalanina no reacciona en las condiciones que se realiza en el laboratorio. Para esta prueba se produce la nitracin del anillo bencnico presente en los aminocidos obtenindose nitrocompuestos de color amarillo, que se vuelven anaranjado en medio fuertemente alcalino (formacin de cido picrmico o trinitrofenol). No puede realizarse esa reaccin para identificar albmina en orina, por el color anaranjado de la reaccin final. Las protenas que tienen en su composicin estos aminocidos tambin darn la reaccin. La positividad se reconoce por la aparicin de un color amarillo o verde debido a la formacin de nitrocompuestos.

Esta reaccin no es una reaccin caracterstica de todas las protenas que es debida a la formacin de un compuesto aromtico nitrado de color amarillo, cuando las protenas son tratadas con cido ntrico concentrado. La prueba da resultado positivo en aquellas protenas con aminocidos portadores de grupos bencnicos, especialmente en presencia de tirosina. Si una vez realizada la prueba se neutraliza con un lcali vira a un color anaranjado oscuro. La tirosina es uno de los 20 aminocidos que forman las protenas. Se clasifica como un aminocido no esencial en los mamferos ya que su sntesis se produce a partir de la hidroxilacin de otro aminocido: la fenilalanina. Esto se considera as siempre y cuando la dieta de los mamferos contenga un aporte adecuado de fenilalanina. Por tanto el aminocido fenilalanina s que es esencial.

Fundamento terico de la reaccin de Milln: La reaccin del Milln se debe a la presencia del grupo hidroxifenilo en la molcula proteica. Cualquier compuesto fenlico que no est sustituido en la posicin 3,5 como la tirosina, el fenol y el timol producen resultados positivos en esta reaccin. De estos compuestos, slo la tirosina est presente en las protenas, de manera que slo las protenas que tienen este aminocido ofrecen resultados positivos.

En esta prueba los compuestos mercricos en medio fuertemente cido (cido ntrico del reactivo) se condensan con el grupo fenlico formando un compuesto de color rojo ladrillo o rojizo. La prueba no es satisfactoria para soluciones que contienen sales inorgnicas en gran cantidad, ya que el mercurio del reactivo del Milln es precipitado y se vuelve negativo, razn por la cual este reactivo no se usa para medir albmina en orina.

Debe tomarse en cuenta que en el caso de que la solucin a examinar sea muy alcalina, debe ser previamente neutralizada, ya que el lcali precipitara al ion mercurio en forma de xidos amarillos. Adems, protenas como la ovoalbmina producen un precipitado blanco que progresivamente por accin del calor se torna rojo; pero las peptonas dan solamente una solucin de color rojo.

GLUCIDOS Los glcidos estn constituidos por C, H, y O (a veces tienen N, S, o P). El nombre de glcido deriva de la palabra "glucosa" que proviene del vocablo griego glykys que significa dulce, aunque solamente lo son algunos monosacridos y disacridos. Su frmula general suele ser (CH 2O)n, donde oxgeno e hidrgeno se encuentran en la misma proporcin que en el agua, de ah su nombre clsico de hidratos de carbono, aunque su composicin y propiedades no corresponde en absoluto con esta definicin. Los glcidos estn formados por unas pequeas molculas, los monosacridos. El monosacrido ms conocido es la glucosa (C 6H12O6). La unin de dos monosacridos

da lugar a un disacrido; la unin de tres, a un trisacrido, etc. Si se une una gran cantidad de monosacridos, se forma un polisacrido.

Fundamento terico del reactivo de fehling: El reactivo de Fehling, tambin conocido como Licor de Fehling, es una disolucin descubierta por el qumico alemn Hermann von Fehling y que se utiliza como reactivo para la determinacin de azcares reductores. Sirve para demostrar la presencia de glucosa, as como para detectar derivados de esta tales como la sacarosa o la fructosa. El licor de Fehling consiste en dos soluciones acuosas: Fehling C: Solucin acuosa de sulfato cprico:

- Sulfato de cobre cristalizado, 35 g; agua destilada, hasta 1.000 ml.

Fehling T: Tartrato doble de sodio y potasio Bitartrato cuprato II: Es un Ion complejo. - Sal de Seignette (Tartrato mixto de Potasio y Sodio), 150 g; solucin de hidrxido de sodio al 40%, 3; agua, hasta 1.000 ml. Se guardan separadas hasta el momento de su uso para evitar la precipitacin del hidrxido de cobre (II). El fehling da positivo cuando aparece un precipitado anaranjado. Este reactivo es necesario que est en medio bsico para poder obtener el resultado positivo.

El ensayo con el licor de Fehling se fundamenta en el poder reductor del grupo carbonilo de un aldehdo. ste se oxida a cido y reduce la sal de cobre (II) en medio alcalino a xido de cobre (I), que forma un precipitado de color rojo. Un aspecto

importante de esta reaccin es que la forma aldehdo puede detectarse fcilmente aunque exista en muy pequea cantidad. Si un azcar reduce el licor de Fehling a xido de cobre (I) rojo, se dice que es un azcar reductor.

Fundamento terico de hidrlisis: La hidrlisis de un enlace glucosdico se lleva a cabo mediante la disociacin de una molcula de agua del medio. El hidrgeno del agua se une al oxigeno del extremo de una de las molculas de azcar; el OH se une al carbono libre del otro residuo de azcar. El resultado de esta reaccin, es la liberacin de un monosacrido y el resto de la molcula que puede ser un monosacrido si se trataba de un disacrido o bien del polisacrido restante si se trataba de un polisacrido ms complejo. Rompiendo los enlaces glucosdicos.

Fundamento terico de Barfoed: Es un ensayo qumico utilizado para detectar monosacridos. Se basa en la reduccin de cobre (II) (En forma de acetato) a cobre (I) (En forma de xido), el cual

forma un precipitado color rojo ladrillo. Los disacridos tambin pueden reaccionar, pero en forma ms lenta. RCOH + 2Cu +2+ 2H2O RCOOH + Cu 2o+ 4H+ El grupo aldehdo del monosacrido que se encuentra en forma de hemiacetal se oxida a su cido carboxlico correspondiente. Muchas sustancias, entre ellas el cloruro de sodio, pueden interferir en la prueba

MONOSACARIDOS Los monosacridos o azcares simples o carboxilos son los glcidos ms sencillos, que no se hidrolizan (hidro agua- lizan rompimiento ), es decir, que no se descomponen para dar otros compuestos, conteniendo de tres a seis tomos de carbono. Su frmula emprica es (CH2O)n donde n 3. Se nombran haciendo referencia al nmero de carbonos (3-7), terminado en el sufijo -osa. La cadena carbonada de los monosacridos no est ramificada y todos los tomos de carbono menos uno contienen un grupo alcohol (-OH). El tomo de carbono restante tiene unido un grupo carbonilo (C=O). Si este grupo carbonilo est en el extremo de la cadena se trata de un grupo aldehdo (-CHO) y el monosacrido recibe el nombre de aldosa. Si el carbono carbonlico est en cualquier otra posicin, se trata de una cetona (-CO-) y el monosacrido recibe el nombre de cetosa.

DISACARIDOS Los disacridos son un tipo de glcidos formados por la condensacin (unin) de dos azcares monosacridos iguales o distintos mediante un enlace O-glucosdico (con prdida de una molcula de agua)pues se establece en forma de ter siendo un tomo de oxigeno el que une cada pareja de monosacridos, mono o dicarbonlico, que adems puede ser o en funcin del -OH hemiacetal o hemicetal. Los disacridos ms comunes son: Sacarosa: formada por la unin de una glucosa y una fructosa. A la sacarosa se le llama tambin azcar comn. No tiene poder reductor. Lactosa: formada por la unin de una glucosa y una galactosa. Es el azcar de la leche. Tiene poder reductor. El carcter reductor se da en un disacrido si uno de los monosacridos que lo forman tiene su carbono anomrico (o carbonlico) libre, es decir, si este carbono no forma parte del enlace O-glucosdico. Dicho de otra forma, si el enlace O-glucosdico es monocarbonlico el disacrido resultante ser reductor (maltosa, celobiosa, etc.), mientras que si el enlace O-glicosdico es dicarbnlico el disacrido resultante ser no reductor (sacarosa, trehalosa).

La frmula emprica de los disacridos es C 12H22O11. El enlace covalente entre dos monosacridos provoca la eliminacin de un tomo de hidrgeno de uno de los monosacridos y de un grupo hidroxilo del otro monosacrido, de forma que en conjunto podemos decir que se elimina una molcula de agua (H 2O) que se libera al medio de reaccin.

Fundamento terico del reactivo de Seliwanoff:

Es una reaccin para diferenciar cetosas de aldosas;. Est basada en la formacin de frurfural o en un derivado de ste y su posterior condensacin con el resorcinol. Este se condensa con los frufurales derivados de cetosas originando un color rojo intenso. Este fenmeno es desencadenado porque las cetosas se deshidratan a mayor velocidad que las aldosas. Cetosas: Una cetosa es un monosacrido con un grupo cetona por molcula. Con tres tomos de carbono, la dihidroxiacetona es la ms simple de todas las cetosas, y es el nico que no tiene actividad ptica. Las cetosas pueden isomerizar en aldosas cuando el grupo carbonilo se encuentra al final de la molcula. Este tipo de molculas se denominan azcares reducidos. Con el fin de determinar si un compuesto pertenece al grupo de las cetosas o de las aldosas se suele llevar a cabo una reaccin qumica de Seliwanoff. Aldosas: Una aldosa es un monosacrido (un glcido simple) cuya molcula contiene un grupo aldehdo, es decir, un carbonilo en el extremo de la misma. Su frmula qumica general es CnH2nOn (n>=3). Los carbonos se numeran desde el grupo aldehdo (el ms oxidado de la molcula) hacia abajo. Con solo 3 tomos de carbono, el gliceraldehdo es la ms simple de todas las aldosas. Las aldosas isomerizan a cetosas en la transformacin de Lobry-de Bruyn-van Ekenstein. Las aldosas difieren de las cetosas en que tienen un grupo carbonilo al final de la cadena carbonosa, mientras que el grupo carbonilo de las cetosas lo tienen en el medio. La representacin lineal, sin embargo, no es propia de las aldosas disueltas en agua u otro solvente, ya que stas se encuentran en su mayor parte (cerca del 99%), en su forma cclica, donde el grupo aldehdo forma un enlace hemiacetal con un grupo hidroxilo, generalmente el quinto o el sexto, con la consecuente eliminacin de una molcula de agua. La deteccin de aldosas en el laboratorio puede realizarse mediante el test de Seliwanoff, que si bien es para detectar cetosas, un resultado negativo indicar la presencia de aldosas en la muestra. Fundamento terico del reactivo de Lugol:

El reactivo de Lugol, contiene una mezcla de yodo (I2) y ioduro (I-). Este mtodo se usa para identificar polisacridos. El almidn en contacto con unas gotas de Reactivo de Lugol (disolucin de yodo y yoduro potsico) toma un color azul-violeta caracterstico. La coloracin producida por el Lugol se debe a que el yodo se introduce entre las espiras de la molcula de almidn. No es por tanto, una verdadera reaccin qumica, sino que se forma un compuesto de inclusin que modifica las propiedades fsicas de esta molcula, apareciendo la coloracin azul violeta.

Polisacridos: Son glcidos de alta masa molecular, de treinta mil a cuatrocientos mil millones. Estn constituidos por muchas unidades de osas por molcula, cientos o miles de ellas, unidas por enlaces glicosidicos que se pueden romper por hidrlisis en forma semejante a la tratada para los oligosaidos. Son polimeros naturales que puede considerarse como derivados de aldosas y cetosas por una reaccin de polimerizacin por condensacin. Pueden estar constituidos por un solo tipo de osas, denominndose homopolisacaridos o por varios tipos, heteropolisacaridos. Dentro de los homopolisacaridos estudiaremos al almidn.

DISCUCIN DE RESULTADOS:
Biuret dio positivo, esta reaccin detecta aquellas sustancias cuyas molculas contienen dos grupos carbamino (-CO.NH) unidos directamente o a travs de un solo tomo de carbono o nitrgeno, es decir protenas. Por lo tanto esta solucin posee protenas. Xantoproteica dio positivo, esta reaccin detecta aminocidos aromticos (tirosina, fenilalanina, triptfano). Por lo tanto esta solucin posee protenas, con aminocidos aromticos.

Milln dio positivo, esta reaccin detecta grupo hidroxifenilo. Por lo tanto esta solucin posee grupo hidroxifenilo es decir tirosina. Lugol dio negativo, esta reaccin detecta polisacridos, particularmente almidn. Por lo tanto esta solucin no posee polisacridos. Fehling dio positivo, esta reaccin detecta azucares reductores pudiendo ser estos monosacridos como disacridos. Por lo tanto esta solucin posee azucares reductores. Barfoed dio negativo, esta reaccin permite diferenciar entre monosacridos y disacridos reductores, ya que da resultado positivo solamente en monosacridos reductores. Por lo tanto esta solucin solo posee disacridos reductores. Se realiza la hidrlisis para poder obtener los monosacridos reductores. Hidrlisis y Barfoed dio positivo, por lo tanto se confirma que posee disacridos reductores, que al ser hidrolizados, se obtienen sus monosacridos componentes, los cuales reducen a Barfoed. Seliwanoff dio negativo, esta reaccin permite diferenciar aldosas de cetosas, dando positivo ante la presencia de cetosas. Esta reaccin dio negativa, porque como se pudo observar en Barfoed, la solucin posee disacridos, por lo que hay que hidrolizar. Hidrlisis y Seliwanoff dio positivo, por lo que los disacridos de la solucin poseen cetosas. Disn dio negativo, nos permite determinar si hay presencia de lpidos. Por lo tanto al no disolverse en disn, podemos afirmar que no contiene lpidos.

CONCLUCIONES:
La solucin problema esta compuesta tanto por protenas como glcidos, no siendo el caso de lpidos. Las protenas, poseen aminocidos aromticos, especficamente tirosina. En cuanto a sus glcidos podemos afirmar que esta compuesto por disacridos reductores, los cuales estn compuesto por aldosas y cetosas. Dados los resultados obtenidos, se podra afirmar que la sustancia problema puede contener leche en polvo, dados los aminocidos encontrados de protenas tpicas de la leche, y tambin posee glcidos de la leche, pudiendo ser estos la casena y la lactosa. Pero al dar negativo a la prueba de disn se tratara de leche en polvo descremada. O cualquier producto que pueda contener leche en polvo descremada, como por ejemplo helado en polvo Light.