TEMA: Preparacin de Medios de cultivo INTRODUCCIN: Justificacin: Las bacterias deben ser inoculadas en medios de cultivos de laboratorio para

caracterizar su crecimiento, hacer su identificacin y determinar sus actividades metablicas, dichos medios de cultivo proporcionan ambientes artificiales semejantes a los naturales. Muchos de los estudios de Microbiologa requieren cultivar y mantener microorganismos en el laboratorio y esto es posible si se dispone de adecuados medios de cultivo. OBJETIVO GENERAL: Adquirir prctica en el preparado de algunos medios de cultivo a partir de sus componentes individuales. OBJETIVOS ESPECFICOS: Conocer la clasificacin, preparacin, esterilizacin y distribucin de los medios de cultivo. Determinar los requerimientos mnimos para el crecimiento de microorganismos. Observar las diferencias de crecimiento en medios enriquecidos, selectivos y diferenciales. Adquirir conciencia de la importancia que tiene la correcta preparacin del medio de cultivo en la prctica microbiolgica

HIPTESIS: La preparacin adecuada de un medio de cultivo nos permite disponer de los nutrientes y condiciones necesarias para favorecer el crecimiento de los microorganismos en el laboratorio. MARCO TERICO: Un medio de cultivo es un conjunto de nutrientes, factores de crecimiento y otros componentes que crean las condiciones necesarias para el desarrollo de los microorganismos. Es decir, es un soporte que proporciona sustancias nutritivas que permitan el desarrollo y reproduccin de microorganismos. La diversidad metablica de los microorganismos es enorme, por ello, la variedad de medios de cultivo tambin lo es, no existiendo un medio de cultivo universal adecuado para todos ellos. El conocimiento de las necesidades nutritivas y fsicas de los microorganismos es fundamental para seleccionar un medio de cultivo adecuado. (Manacorda et al, 2007) Para que las bacterias crezcan adecuadamente en un medio de cultivo artificial debe reunir una serie de condiciones como son: temperatura, grado de humedad y presin de oxgeno adecuadas, as como un grado correcto de acidez o alcalinidad. Un medio de cultivo debe contener los nutrientes y factores de crecimiento necesarios y debe estar exento de todo microorganismo contaminante. (Rodriguez, 2008) En los laboratorios de microbiologa se utilizan diferentes tipos de medios de cultivo que pueden ser preparados en forma lquida o en forma slida. Usualmente para preparar un medio slido, se parte de un medio lquido al que se le aade un agente solidificante como el agar, la gelatina o la slicagel. (Gutirrez et al, 2001)

La mayora de las bacterias patgenas requieren nutrientes complejos similares en composicin a los lquidos orgnicos del cuerpo humano. Por eso, la base de muchos medios de cultivo es una infusin de extractos de carne y Peptona a la que se aadirn otros ingredientes. El agar es un elemento solidificante muy empleado para la preparacin de medios de cultivo. Se lica completamente a la temperatura del agua hirviendo y se solidifica al enfriarse a 40 grados. Con mnimas excepciones no tiene efecto sobre el crecimiento de las bacterias y no es atacado por aquellas que crecen en l. La Gelatina es otro agente solidificante pero se emplea mucho menos ya que bastantes bacterias provocan su licuacin. (Rodriguez, 2008) En los diferentes medios de cultivo se encuentran numerosos materiales de enriquecimiento como hidratos de carbono, suero, sangre completa, bilis, etc. Los hidratos de Carbono se adicionan por dos motivos fundamentales: para incrementar el valor nutritivo del medio y para detectar reacciones de fermentacin de los microorganismos que ayuden a identificarlos. El suero y la sangre completa se aaden para promover el crecimiento de los microorganismos menos resistentes. Tambin se aaden colorantes que actan como indicadores para detectar, por ejemplo, la formacin de cido o como inhibidores del crecimiento de unas bacterias y no de otras (el Rojo Fenol se usa como indicador ya que es rojo en pH bsico y amarillo en pH cido. La Violeta de Genciana se usa como inhibidor ya que impide el crecimiento de la mayoria de las bacterias Gram-positivas). (Lpez y Torres, 2006) Los medios de cultivo se pueden clasificar de acuerdo a la naturaleza de sus constituyentes en: Medios naturales o complejos: constituidos por sustancias complejas de origen animal o vegetal, las que son usualmente complementadas por la adicin de minerales y otras sustancias. En ellos no se conocen todos los componentes, ni las cantidades exactas presentes de cada uno de ellos. Medios definidos o sintticos: son los medios que tienen una composicin qumica definida cuali y cuantitativamente. Generalmente se usan en trabajos de investigacin. (Gutirrez et al, 2001)

De acuerdo al uso del medio de cultivo, stos se clasifican en: Medios de enriquecimiento: son medios lquidos que favorecen el crecimiento de un tipo de microorganismo en particular. Permiten aumentar el nmero de microorganismos de ese tipo. Usualmente contienen una o ms sustancias inhibidoras del crecimiento de los microorganismos con excepcin de los que se quieren cultivar. Medios selectivos: son parecidos a los de enriquecimiento, se diferencian por ser medios slidos y estn diseados para el aislamiento de microorganismos especficos. Medios diferenciales: son medios que contienen indicadores de productos derivados de la actividad microbiana de los microorganismos. No contienen ningn tipo de sustancia con actividad antimicrobiana. Permiten revelar caractersticas fisiolgicas de los microorganismos.(Ramos y Prez, 2003)

RESULTADOS: grfico

DISCUSIN: Las bacterias deben ser cultivadas en medios de cultivo de laboratorio para caracterizar su crecimiento, hacer su identificacin y determinar sus actividades metablicas. Un medio de cultivo es una solucin acuosa de diferentes compuestos que contiene todos los elementos indispensables que requieren los microorganismos para crecer. (Ramos y Prez, 2003) En las condiciones de laboratorio para realizar un cultivo, se debe sembrar sobre el medio de cultivo elegido las muestras en las que los microorganismos van a crecer y multiplicarse para dar colonias. Generalmente las bacterias son inoculadas o introducidas en medios lquidos (caldos) o solidificacin con agar para su propagacin y/o conservacin, as como para estudiar sus caractersticas de crecimiento. Es importante recordar que la inoculacin de los microorganismos en los medios de cultivo, siempre deber realizarse en una zona asptica (cerca del mechero), condicin que limita la presencia de microorganismos indeseables o contaminantes. En la actualidad, la mayora de los medios de cultivo se encuentran comercializados, normalmente bajo la forma de liofilizados que es preciso rehidratar. En general, la preparacin de un medio de cultivo se reduce simplemente a pesar la cantidad deseada del mismo y disolverla en agua destilada, siguiendo las instrucciones del fabricante y luego esterilizarlo. (Manacorda et al, 2007) En caso que el medio de cultivo debamos hacerlo nosotros, la preparacin de un medio de cultivo comienza por hacer un estudio de la frmula que constituye una receta que deber respetarse estrictamente. Primero se agrega agua destilada a un recipiente, luego se van incorporando todos los ingredientes de la lista en el orden en el que se encuentran. CONCLUSIONES: Un medio de cultivo es un sustrato o una solucin de nutrientes que permite el desarrollo de microorganismos, es muy importante saber prepararlos de forma ptima ya que la mayora de estudios de microbiologa requieren del cultivo de bacterias para estudiarlas. Los medios de cultivo se pueden preparar en el laboratorio a partir de cada uno de sus constituyentes bsicos, o por simple rehidratacin de productos asequibles comercialmente (medios de cultivo deshidratados). El conocimiento de las necesidades nutritivas y fsicas de los microorganismos es fundamental para seleccionar un medio de cultivo adecuado. Los requisitos que debe reunir el cultivo de un microorganismo tienden a reproducir el ambiente natural en el que se desarrollan En la preparacin de un medio de cultivo es conveniente aadir todos los ingredientes en el orden indicado y disolverlos de a uno antes de agregar el siguiente.

PREGUNTAS: Agar nutritivo: es un medio de cultivo usado normalmente como rutina para todo tipo de bacteria. Es muy til porque permanece slido incluso a relativas altas temperaturas. Adems, el crecimiento bacteriano en este agar lo hace en la superficie, por lo que se distinguen mejor las colonias pequeas. El medio preparado presenta un color mbar claro a medio ligeramente opalescente. El agar nutritivo simple est hecho de caldo de carne, peptona, agua, agar y posiblemente sal. El pH se ajusta al 7,0 y es filtrado o pasado por el autoclave para esterilizarlo. Agar sangre: es creado aadiendo sangre animal a la solucin de agar, y para algunos tipos (como el agar de chocolate), la mezcla es tratada ms para fomentar cierto tipo de crecimiento bacteriano. Recuerda a la sangre fresca o seca y se usa para cultivar una variedad de microbios. Es til porque la mayora de organismos crecern en sangre, pero tambin porque puede ayudar a determinar cmo interaccionan estos organismos con el cuerpo. El Medio preparado puede presentar un color mbar o rojo cereza cuando ha sido preparado con 5% de sangre de carnero. Agar McConkey: es un medio de cultivo especfico para bacterias gram negativas y cepas que fermenten la lactosa. Los ingredientes necesarios para este medio son los siguientes: sales biliares (medio inhspito para el crecimiento de bacterias Gram positivas, excepto Enterococcus y algunas especies de Staphylococcus), Violeta cristal colorante (Inhspito para cierto tipo de bacterias Gram-positivo), colorante rojo neutro (el cual marca microrganismos que fermenten la lactosa), lactosa y peptona. Sirve como un indicador visual de pH, distinguiendo as las bacterias gram negativas que pueden fermentar la lactosa (Lac+) y las que no pueden (Lac-). Agar EMB: se utiliza para obtener un mejor rendimiento en el aislamiento selectivo de enterobacterias y otras especies de bacilos Gram negativos. La diferenciacin entre organismos capaces de utilizar la lactosa y/o sacarosa, y aquellos que son incapaces de hacerlo, est dada por los indicadores eosina y azul de metileno; stos ejercen un efecto inhibitorio sobre muchas bacterias Gram positivas. Muchas cepas de Escherichia coli y Citrobacter spp. presentan un caracterstico brillo metlico. Las cepas que utilizan la lactosa poseen centro oscuro con periferia azulada o rosada, mientras que las que no lo hacen son incoloras. Este medio permite el crecimiento de Candida spp. como colonias rosadas y puntiformes; En este medio se obtiene adems, un buen desarrollo de especies de Salmonella y Shigella. El medio preparado presenta color prpura. Agar SIM: Es un medio semislido destinado a verificar la movilidad, produccin de indol y de sulfuro de hidrgeno en un mismo tubo. Es til para diferenciar miembros de la familia Enterobacteriaceae. El triptfano es un aminocido constituyente de muchas peptonas, y particularmente de la triptena, que puede ser oxidado por algunas bacterias para formar indol. Las cepas mviles pueden apreciarse en este medio, por la turbidez que producen alrededor de la puncin de siembra, mientras que aquellas cepas productoras de sulfhdrico se distinguen por la formacin de un precipitado negro de sulfuro de hierro a partir del tiosulfato siempre que el medio se mantenga a un pH mayor a 7.2. El medio preparado presenta color mbar.

Agar Citrato de Simmons: Medio utilizado para la diferenciacin de enterobacterias, en base a la capacidad de usar citrato como nica fuente de carbono y energa. En el medio de cultivo, el fosfato monoamnico es la nica fuente de nitrgeno y el citrato de sodio es la nica fuente de carbono. Ambos componentes son necesarios para el desarrollo bacteriano. El cloruro de sodio mantiene el balance osmtico, y el azul de bromotimol es el indicador de pH, que vira al color azul en medio alcalino. El medio de cultivo es diferencial en base a que los microorganismos capaces de utilizar citrato como nica fuente de carbono, usan sales de amonio como nica fuente de nitrgeno, con la consiguiente produccin de alcalinidad. El Medio preparado presenta color verde BIBLIOGRAFIA Manacorda A, Cuadros D, lvarez. MEDIOS DE CULTIVO. Tomo I: Microbiologa Ambiental I [en lnea]. < http://www.faciasuncoma.com.ar/Carreras/Saneamiento%20Ambiental/MicrobiologiaAmbiental/6%20 MEDIOS%20DE%20CULTIVO.pdf> [Consulta: 20/10/12] Rodrguez, F. Prcticas de Microbiologa. [en lnea]. Universidad Miguel Hernndez, Campus de San Juan. <http://egg.umh.es/frvalera/manualDePracticas.pdf> [Consulta: 20/10/12] Gutirrez, S., Garcs, A., Saravia, K. Preparacin de Medios de cultivo. [en lnea]. <http://www.ucv.ve/fileadmin/user_upload/facultad_farmacia/catedraMicro/10_Preparaci%C3%B3n_d e_medios_de_cultivo.pdf> [Consulta: 20/10/12] Lpez, L., Torres, C. Medios de Cultivo. [en lnea]. Universidad Nacional del Nordeste, facultad de Agroindustrias, Microbiologa General-Carrera Farmacia. <http://www.biologia.edu.ar/microgeneral/tp4.pdf> [Consulta: 20/10/12] Ramos, M., Prez, L. Manual de prcticas de microbiologa general. [en lnea].Universidad Autnoma Metropolitana, Unidad Iztapalapa, Departamento de Biotecnologa. <http://www.uamenlinea.uam.mx/materiales/licenciatura/diversos/AQUIAHUATL_RAMOS_MARIA_DE_ LOS_ANGELES_Manual_de_practicas_de.pdf> [Consulta: 20/10/12]