EXPERIMENTO CLAVE

Transferencia de protenas a travs de la membrana. l. Presencia de cadenas ligeras de inmunoglobulinas procesadas proteolticamente y sin procesar en ribosomas unidos a membrana procedentes de mieloma murino. Gnter Blobel y Bernhard Dobberstein Rockefeller University, Nez Cork Journal of Cell Biology, 1975, Volumen 67, pags. 835-851

Contexto Cmo se transfieren las cadenas polipeptdicas especficas a travs de las membranas adecuadas? Estudios en los aos 50 y 60 indicaban que las protenas secretadas eran sintetizadas en ribosomas unidos a membrana y que se transferan a travs de la membrana durante su sntesis. Sin embargo, esto no explicaba por qu los ribosomas implicados en la sntesis de protenas secretadas se unen a la membrana mientras que los ribosomas que sintetizan las protenas citoslicas no lo hacen. Una hiptesis para explicar esta diferencia fue sugerida por primera vez por Gnter Blobe y David Sabatini en 1971. En ese momento propusieron que: 1) los ARNm que se traducan en los ribosomas unidos a membrana contenan un conjunto caracterstico de codones justo en 3' a partir del sitio de iniciacin. 2) la traduccin de estos codones genera una secuencia caracterstica en el extremo amino-terminal de la cadena polipeptdica en crecimiento (la secuencia seal), y 3) la secuencia seal provoca la unin del ribosoma a la membrana. En 1975, Blodel y Dobberstein informaron acerca de una serie de experimentos que apoyaban esta idea. Adems, propusieron una versin algo ms detallada de esta hiptesis, en lo sucesivo llamada la hiptesis de la seal.

Experimentos Los mielomas son cnceres de linfocitos B que secretan inmunoglobulinas activamente, por lo que proporcionan un buen modelo para los estudios de protenas secretadas. Estudios previos en el laboratorio de Cesar Milstein haban demostrado que las protenas producidas por la traduccin in vitro del ARNm de la cadena ligera de las inmunoglobulinas contienen aproximadamente 20 aminocidos en su extremo aminoterminal que no estn presentes en las cadenas ligeras secretadas. Este resultado condujo a la suposicin de que estos aminocidos dirigen la unin del ribosoma a la membrana. Para comprobar esta idea, Blodel y Dobberstein investigaron la sntesis de cadenas ligeras, por ribosomas unidos a la membrana, a partir de las clulas del mieloma. Cmo era de esperar por trabajos previos, la traduccin in vitro del ARNm de las cadenas ligeras en los ribosomas libres daba lugar a una protena que era ms grande que la cadena ligera secretada (vase la figura). Por el contrario, la traduccin in vitro asociado a los ribosomas unidos a las membranas de las clulas de mieloma, daba lugar a una protena que tenia el mismo tamao que la cadena ligera secretada normal. Es ms, las cadenas ligeras sintetizadas por los ribosomas que permanecan unidos a los microsomas eran resistentes a la digestin por proteasas aadidas, lo que indicaba que las cadenas ligeras haban sido transferidas a los microsomas. Estos resultados indicaban que una secuencia seal amino-terminal es eliminada por una proteasa en los microsomas a medida que las cadenas polipeptdicas en crecimiento se transfieren a travs de la membrana. Los resultados se Interpretaron en trminos de una versin ms detallada de una hiptesis de la seal. Como expusieron Blodel y Dobberstein la caracterstica esencial de la hiptesis de la seal es la existencia de una secuencia nica de codones, localizada inmediatamente a la derecha del codn de iniciacin, que est presente slo en aquellos ARNm cuyos productos de traduccin han de ser transferidos a travs de una membrana

La traduccin in vitro del ARNm de las cadenas ligeras de las inmunoglobulinas en ribosomas libres (carril 1) da lugar a un producto que migra ms lentamente que las cadenas ligeras secretadas (carril S) en la electroforesis en gel. Por el contrario, las cadenas ligeras sintetizadas por la traduccin in vitro por ribosomas unidos a la membrana (carril 2) tienen el mismo tamao que las cadenas ligeras secretadas. Adems a los productos de la traduccin in vitro en ribosomas unidos a membrana no les afecto la digestin posterior con proteasas (carril 3), lo que indica que estaban protegidos de las pretasas por la insercin en los microsomas.

Impacto La transferencia selectiva de protenas a travs de las membranas es fundamental para el mantenimiento de los orgnulos rodeados por membrana de las clulas eucariotas. Para mantener la identidad de estos orgnulos, las protenas deben ser traslocadas especficamente a travs de las membranas apropiadas. La hiptesis de la seal proporciono la base conceptual para comprender este fenmeno. Este modelo bsico solo ha sido comprobado firmemente por la transferencia de protenas secretadas en el retculo endoplsmico, sino tambin ha proporcionado el marco para comprender el marcaje y direccin de las protenas a todos los compartimentos de la clula rodeados por membrana, y por consiguiente causando un impacto en prcticamente todas las reas de la biologa celular.

Tomado de La Clula de Cooper. Edit Marban 2002

Gnter Blobel