INFORME DE LABORATORIO

INMUNOLOGIA I

FACULTAD DE TECNOLOGIA MEDICA ESCUELA PROFESIONAL DE LABORATORIO Y ANATOMA PATOLGICA

Curso: INMUNOLOGIA I Tema: Fagocitosis Profesores: Alejandro Retamal Salazar Mirtha Hernndez Acasiete Arturo Rivas Cardenas Alumno: Mijael Edgar Guadalupe Magno Ao: Tercero

2012

GUADALUPE MAGNO MIJAEL EDGAR

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INMUNOLOGIA I

Introduccin
La fagocitosis es la respuesta natural del organismo contra sustancias extraas, siendo los macrofagos y las delulas dentriticas los primeros en detectar a un agresor. Siendo las funciones de los macrofagos; la fagocitosis, la elimacion bacteriana, el procesamiento y presentacion de antigenos, inflamacion, antivacion de la repsuesta inflamatoria y la cicatrizacion. El proceso de fagocitosis se iniciara con el reconocimineto del elelmento daino, esta funcion es relaizada por los macrofagos y neutrofilos. La ingestion viene a ser el segundo proceso donde el macrofago forma una vacuola llamada fagosoma para poder atrapar ala sustancia etraa, seguido de la opzonizacin esto se realiza para algunos germenes que no pueden ser fagocitados directamente, finalmete se da la digestin.

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Objetivos : Poder ver el proceso de la fagocitosis Conocer el modo de respuesta del organismo ante un ente extrao Materiales:
Centrifuga Estufa o bao maria a 37C Microscopio optico Laminas porta objetos Laminillas cubre objetos Pipetas pasteur Tubos de prueba de 12x75

Reactivos : Cepa de candida albicans Muestra de sangre periferica fresca (anticoagulada) Solucion salina fisiologia esteril Colorante rojo de congo 1% Colorante wright

Procedimiento: 1. Tomar la cepa de candida albicans y hacer una emulision

Preparando la emulsin de la cepa en suero fisiolgico.

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2. Colocar en un tubo 1ml de sangre y agregar 5ml de emulision de candida

En esta imagen se aprecia la combinacin de la sangre y la cndida

3. Incubar en bao maria por media hora a 37C y centrifugar a 3500rpm por 5 min.

En esta imagen se muestra el tubo, despus de estar en la estufa y el proceso de centrifugado.

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4. Tomar la capa de leucocitos de la sangre centrifugada, colocar 2 gotas en un tubo y agregar una gota de rojo de congo e incubar a 37C por 15min.

Luego de la mescla de rojo de Congo y leucocitos se pode 2 gotas en una lamina porta objetos y se cubre con una laminilla para poder ser leda

En esta imagen se aprecia la mescla de rojo de Congo y leucocitos.

Proceso de fagocitosis visto en microscopio ptico.

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Interpretacin: Se observa la precensia de los macrofagos y la candida en el proceso de fagocitocis. Proceso conseguido in vitro conseguido en el laboratorio que es muy semejante alo que ocurre en el organismo, con la presencia de monocifos y los polimorfos nucleares.

Bibliografa

http://www.ucm.es/info/saniani/troncales/inmunologia/documentostemas/TEM A%204.pdf http://www.medigraphic.com/pdfs/bioquimia/bq-2003/bq034d.pdf http://www.medigraphic.com/pdfs/facmed/un-2008/un086i.pdf Manual de laboratorio de Inmunologa UNFV

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Introduccin
El suero normal fresco contiene sustancias capaces de matar microorganismos. Estas sustancias estn presentes en mayor o menor grado en todos los sueros, y por lo tanto no son el resultado de una inmunizacin previa. Esta habilidad vara con la especie y el tipo de microorganismos, con certeza algo de esta actividad es debido a anticuerpos normales pero hay otros factores humorales tambin involucrados. Por ejemplo suero fresco no sometido a tratamiento trmico contiene una sustancia conocida como complemento la cual bajo ciertas condiciones juega un papel en la destruccin de microorganismos. Esta sustancia puede ser destruida si previamente es sometido el suero a un tratamiento trmico (56C durante 30 minutos). El propedn (una globulina presente en el plasma sanguneo) es otro ejemplo de un conocido factor humoral que contribuye a la inmunidad innata.

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Materiales:
Suero sanguneo fresco. Cepa de Escherichia Coli Tubos estriles de 13 x 100 Tubos estriles de 12x 75 Placas Petri estriles Mechero Gradilla Solucin salina fisiolgica estril Agar nutritivo o agar tripticasa de soya 500ml Centrfuga Pipetas de vidrio 1 c.c, 5 c.c , 10 c.c .

Procedimiento:
1. Tomar una muestra de sangre estrilmente.

2. Centrifugar la muestra a 3.500 r.p.m por 5 minutos.

En esta imagen se observa el proceso de centrifugacin, se coloca los tubos contrapesndolos.

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3. Decantar el suero En esta imagen se observa el proceso de decantacin, se saca solo el suero del tubo. Este proceso se realiza en esterilidad con ayuda de un mechero.

4. Tomar 2 tubos estriles y rotular de la siguiente manera: Suero sin calentar SC Suero calentado C Colocar en cada tubo 1 ml de suero.

A este tubo se calienta a 56C por espacio de 30min, lo cual ara que pierda su poder bactericida.

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5. Luego preparar la dilucin de la cepa de Escherichia Coli, tomando como patrn el tubo que tiene una concentracin bacteriana de 1 x 106 de la escala de Mc Farland en un tubo contenido 5 ml de solucin salina estril.

Estndar de Mac Farland

6. A partir de la dilucin madre se realizaran las siguientes diluciones:

0.1 ml del cultivo + 9.9 ml S.S. estril.

1 /100

1.0 ml de 1/100 + 9.0 ml de S.S estril

1/1000

1.0 ml de 1/ 1000 + 9.0 ml de S.S estril

1/10000

Posteriormente rotular los tubos estriles de la siguiente manera A1, A2, B1, B2.

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Con los tubos A y B y las diluciones hechas anteriormente realizar lo siguiente: Tubo A1 A2 B1 B2 Suero calentado : B 0.25 ml 0.25 ml Suero sin calentar: A 0.25 ml 0.25 ml Dil. Bac. 1/1000 0.25 ml 0.25 ml Dil. Bac. 1/10000 0.25 ml 0.25 ml

Incubar los tubos: A1, A2, B1, B2 en un tiempo de 1 hora a 37C

7. Despus de la incubacin cerca del mechero verter el contenido de los tubos en las placas Petri previamente rotuladas como A1, A2, B1, B2 y aadir 9.5ml del agar nutritivo licuado, mezclar y dejar que se solidifique.

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8. Llevar las placas a estufa a 37 C por 24 horas. Al da siguiente realizar el recuento de las colonias.

Conteo de las colonias:

A1 18 A2 6 B1 120 B2 480

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Conclusiones:
El poder bactericida del suero ah sido una prctica donde nos permiti reconocer la accin importante del suero en profeso de contrarrestar una infeccin gracias al a accin de el complemento, tambin identificamos que el suero pierde su poder de proteccin si lo calentamos a una temperatura de 56C por 30min. Tambin se vio que a mayor concentracin de bacteria en una dilucin va a crecer mas cantidad de colonias en una placa, quedando demostrado en las placas.

Bibliografa:
Gua de prctica Inmunologa I ftp://fmvz.uat.edu.mx/Manuales%20de%20Practicas/Inmunolog%EDa.pdf http://www.veterinaria.org/revistas/redvet/n040411/041108.pdf http://www.ucm.es/BUCM/tesis/19972000/D/1/D1042601.pdf

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