BIO 141c

El ncleo, ADN y Replicacin

Dra. Cecilia Riquelme Facultad de Ciencias Biolgicas P. Universidad Catlica de Chile

Contenidos: 1) Membrana Nuclear y Lamina nuclear 2) Poros nucleares y Transporte a travs de los poros
3) ADN, cromatina, cromosomas 4) Replicacin del ADN

La Matriz Nuclear y la Lmina Nuclear

Envoltura Nuclear
Membrana Externa
Membrana Interna

Retculo Endoplasmico

Lamina Nuclear Poro Nuclear

Figure 15-7 Essential Cell Biology ( Garland Science 2010)

Red de fibras que da soporte a membrana nuclear

Poro Nuclear

Transporte hacia dentro y fuera del Nucleo

Becker 6Ed cap 18

Microscopa Electrnica y Reconstruccin Computacional de Complejos de Poro Nuclear

BIO 141c

Ordenamiento de un Complejo de Poro Nuclear en la Envoltura Nuclear

BIO 141c

Visualizacin de la Importacin Especfica de una Protena a travs del Poro Nuclear

CITOSOL

NCLEO

BIO 141c

Difusin a travs de un Poro Nuclear

CITOSOL

NCLEO

Tamao de Protenas que entran al Ncleo por Simple Difusin

Tamao de Protenas que entran al Ncleo por Transporte Activo

10 nm es el dimetro de exclusin para pasar por difusin

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Captura de Protenas Nucleares a travs del Poro Nuclear

Protelisis Limitada
Cola Cabeza Nucleoplasmina Radioactiva Cabezas Radioactivas Colas Radioactivas Colas con Oro

Oro Coloidal

MICROINYECCIN EN EL CITOSOL DE HUEVO XENOPUS

INCUBACIN DETECCIN POR AUTORADIOGRAFIA

DETECCIN POR M.E.

Captura Nuclear

Sin Captura

Captura Nuclear

Captura al Ncleo a travs del Poro Nuclear

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La Funcin de la Seal de Localizacin Nuclear

Seal de Importacin Nuclear

Seal Mutada de Importacin Nuclear

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Algunos genomas secuenciados

35,000

EL DNA en el ncleo se encuentra empaquetado

Primer nivel de empaquetamiento del ADN

NUCLEOSOMA Octamero de histonas + 147 pb de ADN

Niveles de empaquetamiento de la cromatina

El resultado neto es: La molcula de DNA es empacada en un cromosoma mitico que es 10.000 veces mas corto en longitud

El DNA debe desempaquetarse para que ocurra transcripcin

Figure 4-54 Molecular Biology of the Cell ( Garland Science 2008)

El Nuclolo

Becker 6Ed cap 18

El Nuclolo: sitio de sntesis de los rRNA

Becker 6Ed cap 18

cidos Nucleicos
Macromolculas Orgnicas Unidad Monomrica

Nucletido
ADN y ARN Almacenamiento y transferencia de la informacin gentica

Dos tipos en la Clula

Funcin

Nucletido
4 5 3 Base Nitrogenada (A, G, C, or T)

Grupo Fosfato

CH2 O
Azcar (desoxirribosa)

6
1

N
C1

C4

C3
OH

C2

Nucletido
1. Monosacrido: Pentosa 2. Base Nitrogenada 3. 1-3 Grupo Fosfato
OOO-

Pirimidina: Citosina
O

Timina Uracilo Purinas: Adenina Guanina

O-

P
O

O-

P
O

O-

P
O

CH2OH

OH

OH

Nucletido Trifosfato

OH H

Ribosa Desoxirribosa

Nuclesido

Bases Nitrogenadas
PURINAS 1. Adenina (A) 2. Guanina (G) PIRIMIDINAS 3. Timina (T)
A or G

4. Citosina (C)

T or C

APAREAMIENTO de BASES
Enlaces puente H G C

Regla de Chargaff

PREGUNTA
Si hay un 30% Adenina, cuanta Citosina hay en una hebra de DNA?

Unin de Nucletidos: Enlace Fosfodister

El DNA es una hlice de doble cadena

Francis Crick & James Watson

No se nos ha escapado el hecho que el apareamiento especfico que hemos postulado sugiere inmediatamente un posible mecanismo de copia del material gentico. Todos los detalles de la estructura, incluyendo las condiciones necesarias en su construccin, as como las coordenadas de los tomos sern publicados en otros lugares.

Erwin Chargaff (1952) Nunca conoc a dos hombres que saban tan poco y aspiraban a tanto. ..Ellos me dijeron que queran construir una hlice, un polinucletido para competir con la hlice de Pauling. Hablaron mucho para posicionar su idea que recuerdo que escrib despus dos vendedores en busca de una hlice

Estructuras de la hlice de DNA

Replicacin del DNA es semiconservativa

1. Watson y Crick sugirieron: las dos hebras de la molcula parental se separan, y cada una funciona como molde para la sntesis de una nueva hebra complementaria
DNA molde
DNA Parental Nuevo DNA

Hebra parental

1 replicacin

2 replicacin

3 replicacin

CUANDO Y DONDE OCURRE LA REPLICACION EN EUCARIONTES?

Durante la Interfase hay duplicacin de ADN

Molecular Biology of the Cell 2008)

Origen de Replicacin y Horquillas de Replicacin

La Polimerizacin de los cidos Nucleicos es polarizada

Proteinas que participan en la Replicacion del ADN

1. HELICASA: separa doble hebra, cortando puentes de
hidrgeno

2. Single-Strand Binding Proteins (SSB): se unen

a simple hebra de DNA y ayudan a mantener las hebras separadas.

3. Topoisomerasa: enzima que relaja la molcula de DNA permitiendo una libre rotacin de la simple hebra (desenrolla).
Enzima Enzima

DNA

El inicio de la replicacin del DNA

La DNA polimerasa no puede iniciar la sntesis de una nueva hebra de DNA por s sola. Otra enzima clave: PRIMASA

3
DNA

1. La Primasa sintetiza un RNA corto

5
3
DNA

3
5

2. El RNA es extendido por la DNA polimerasa para formar el nuevo DNA

Estructura de la ADN polimerasa I

Replicacin del DNA

DNA POLIMERASA: sntesis de la nueva hebra de DNA en direccin 5 a 3.
5
3

Nucletido

DNA Polimerasa

RNA Partidor

Adicin de nucletidos por la DNA polimerasa

Cmo puede sintetizarse el DNA en ambas hebras al mismo tiempo y en direccin 5 a 3?

5'

Hebra retardada

3' 5'

Fragmentos Okazaki Hebra lder 3'

Replicacin del DNA Como se replica la hebra retardada?

Fragmentos de Okazaki : serie de fragmentos de DNA cortos en la hebra retardada.

DNA Polimerasa RNA Partidor

Fragmento de Okazaki 5

3 5

Hebra retardada

La duplicacin del DNA

Involucra la cooperacin de varias enzimas