PRACTICA # 5 EFECTO DE LA REFRIGERACION EN LA INCIDENCIA DE ENFERMEDADES DE POSTCOSECHA EN CITRICOS. PATOGENOS DEBILES.

- Penicillium sp INTRODUCCION Las prdidas postcosecha de productos hortofrutcolas debido a microorganismos durante el perodo de traslado de la huerta a la empacadora pueden ser crticas y ocurrir rpidamente; particularmente en zonas tropicales, en donde las altas temperaturas y la humedad relativa alta propician el desarrollo acelerado de dichos microorganismos. Adems, el etileno producido por las pudriciones puede promover la maduracin y senescencia prematuras de otros productos almacenados en el mismo lugar de almacenamiento y transporte, de manera que los productos sanos se pueden contaminar con los podridos. Adems de las prdidas reales debidas al desperdicio, se presenta otro tipo de prdidas si los requerimientos del mercado demandan seleccin y reempaque de productos parcialmente contaminados. El conocimiento de la cantidad de prdidas ocasionadas por cada enfermedad vegetal importante es esencial tanto para seleccionar lneas de investigacin encaminadas a solucionar problemas de gran importancia econmica como para determinar la factibilidad econmica del establecimiento de medidas de control de dichas enfermedades. El hecho de derivar y utilizar estimadores fitopatolgicos abarca tres aspectos: determinacin y ponderacin de la intensidad de la enfermedad; extrapolacin de esto ltimo en trminos de prdidas expresadas en unidades de produccin o prdidas monetarias, e interpretacin del impacto de esta prdida sobre el productor, el comerciante y el consumidor. Existe una gran variedad de tcnicas disponibles para evaluar la intensidad de las enfermedades vegetales y su extrapolacin a prdidas por enfermedad. Muchas bacterias y hongos pueden causar la pudricin en postcosecha de frutas y hortalizas. Sin embargo, es muy comn observar que el mayor nmero de prdidas postcosecha es ocasionado por microorganismos tales como especies de hongos como Alternaria, Botrytis, Diplodia, Monilinia, Penicillium, Phomopsis, Rhizopus, y Sclerotinia y de las bacterias Erwinia y Pseudomonas. Muchos de estos microorganismos son llamados patgenos dbiles debido a que slo pueden infectar al rgano vegetal si ste est daado por heridas. Algunos, como es el caso de Colletotrichum pueden penetrar la piel de rganos vegetales saludables. A menudo la relacin entre hospedante y patgeno es razonablemente especfica , por ejemplo, Penicillium digitatum pudre slo a los ctricos y Penicillium expansum pudre a las manzanas y a las peras pero no a los ctricos.

Como se mencion con anterioridad, muchos hongos que ocasionan prdidas postcosecha considerables son incapaces de penetrar a la piel intacta del producto pero lo invaden a travs de la ruptura de la piel. A menudo el dao es microscpico pero suficiente para que los patgenos presentes en la huerta y en la empacadora tengan acceso al producto. Adems el lugar de corte del tallo o pednculo es un punto por el que frecuentemente penetran los microorganismos invasores, y las pudriciones del extremo peduncular son formas importantes de prdidas postcosecha de muchas frutas y hortalizas. La infeccin postcosecha tambin puede ocurrir a travs de la penetracin directa a la piel. El factor ms importante que afecta al desarrollo de las pudriciones postcosecha de los productos hortofrutcolas es su medio ambiente. Adems de las altas temperaturas y humedad relativa el dao por fro tambin predispone a los productos de zonas tropicales y subtropicales al deterioro en postcosecha. Muchos otros factores afectan la velocidad de desarrollo de una infeccin en frutos y hortalizas. El pH del tejido vegetal acta como medio selectivo; los frutos generalmente tienen un pH por debajo de 4.5 y son enormemente propensos al ataque de hongos; en cambio muchos vegetales tienen un pH por arriba de 4.5 y, consecuentemente las pudriciones bacterianas son mucho ms comunes. El fruto en etapa de maduracin es ms susceptible al ataque de microorganismos que el fruto inmaduro, de manera que los tratamientos tales como las bajas temperaturas, los cuales disminuyen la velocidad de maduracin, tambin retardan el crecimiento de microorganismos causantes de pudriciones. Las pruebas de patogenicidad de microorganismos se obtienen siguiendo los postulados de Robert Koch: 1) Siempre se debe asociar un organismo especfico con la enfermedad. 2) Se debe aislar dicho organismo en cultivo puro de hospedante enfermo. 3) Al ser inoculado a un hospedante saludable, bajo condiciones favorables, el organismo debe producir los sntomas caractersticos de la enfermedad bajo estudio en el hospedante. 4) El organismo debe ser reaislado del hospedante involucrado artificialmente, obtenido en cultivo puro, e identificado como el que se aisl previamente.

OBJETIVO Demostrar la importancia de las heridas para la infeccin de tejidos vegetales en Penicillium spp. tomando como base los postulados de Koch.

Comparar dos temperaturas de almacenamiento, refrigeracin contra medio ambiente, con respecto al desarrollo de la enfermedad. Comparar los principales parmetros qumicos de calidad en frutos sanos y enfermos para evaluar el efecto de la enfermedad en la calidad postcosecha de frutos ctricos. MATERIALES 1 Naranja o limn infectada(o) con hongo azl (P. italicum) verde (P. digitatum). 27 Naranjas, mandarinas o limones en perfectas condiciones (sanos). 1 Paquete de pelculas plsticas (Kleen Pack , Cling Wrap, etc.). 4 Charolas de styrofoam. Papel filtro o toallas de papel. 1 cuchillo, navaja o bistur. Asas para siembra. Campana de flujo laminar. 1-2 Mecheros de Bunsen. 1 Marcador. Algodn o gasa. Exprimidor de ctricos 3 matraces de erlenmeyer de 125 mL 1 bureta de 50 mL 1 soporte con pinzas para bureta 3 pipetas volumtricas de 10 mL 1 refractmetro de mano 1 potencimetro Agua destilada Cmara de refrigeracin (7-10C) Reactivos Solucin de NaOH 0.1N 250mL Fenolftalena al 1% en etanol al 50% 10mL PROCEDIMIENTO 1) Evale los parmetros qumicos de calidad: Brix, pH y acidez titulable de la misma manera en que lo realiz en la prctica # 2 en 3 frutos completamente sanos. Estas determinaciones constituirn la evaluacin inicial (condiciones de los frutos a su llegada al laboratorio). Dicha evaluacin servir como referencia para realizar comparaciones posteriormente. NOTA: El pH del limn es muy bajo. Con el objeto de economizar la solucin de NaOH para la titulacin tome 1 mL de jugo y diluyalo al menos 20 veces (solucin 1:20 v:v). Posteriormente tome sus alcuotas y registre el nmero de veces adicionales que diluy dicha solucin para tomarlo en cuenta al reportar los resultados de este parmetro. 2) TRATAMIENTOS: Se recomienda efectuarlo en campana de flujo laminar, en medio de 2 mecheros encendidos y lavarse las manos, as como instrumentacin utilizada despus de cada inoculacin para evitar contaminaciones cruzadas. I.- Testigo: Dibuje un crculo con marcador en el ecuador de 6 frutos. Moje un algodn con agua destilada y expngalo a la superficie infectada para realizar, posteriormente, una inoculacin en el fruto sano (sin heridas) adentro del crculo marcado.

II.- Tratamiento 1.- Inocule 6 frutos con Penicillium transfiriendo segmentos de tejido infectado a la cicatrz del pednculo del fruto sano. III.- Tratamiento 2.- Inocule 6 frutos con Penicillium transfiriendo segmentos de tejido infectado a pequeos cortes superficiales en la piel del fruto sano SIN TOCAR LOS SACOS DE JUGO. IV.- Tratamiento 3.- Inocule 6 frutos con Penicillium transfiriendo segmentos de tejido infectado en pequeos cortes profundos que toquen los sacos de jugo (no importa en este caso si los rompen accidentalmente). Para todos los tratamientos y el testigo: Colque los frutos en cmaras hmedas elaboradas de la siguiente manera: Colque los frutos inoculados en charolas individuales para cada tratamiento. Colque una toalla de papel hmeda o papel filtro hmedo en la parte inferior (piso) de la charola. Cubra la charola con la pelcula plstica. Colque 3 frutos de cada tratamiento en una cmara de refrigeracin y los 3 frutos restantes de cada tratamiento se almacenarn a temperatura ambiental durante 7 das. Al cabo de 7 das retire los productos de sus respectivos lugares de almacenamiento. Determine el porcentaje de rea infectada de los frutos bajo cada tratamiento de la siguiente manera: Mida el dimetro ecuatorial del fruto y determine qu porcentaje de dicho dimetro ha sido infectado por el hongo. Lvese las manos despus de cada evaluacin. Realice determinaciones de Brix, pH y acidez titulable de los productos infectados. Compare estos resultados con las determinaciones en frutos sanos. Elabore un reporte a manera de artculo cientfico: Ttulo Resumen Introduccin (breve) Objetivos Materiales y Mtodos (muy resumido) Resultados Discusin Conclusiones Literatura Citada

BIBLIOGRAFIA Peterson, J.E. 1967. Relation of Wounds to Decay of Citrus Fruit by Penicillium spp. en: Sourcebook of Laboratory Exercises in Plant Pathology. Sourcebook Commitee of the American Phytopathological Society. W.H. Freeman and Company. U.S.A p.36.