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Eletroforese Capilar
Sonia Claudia do Nascimento de Queiroz *
sonia@cnpma.embrapa.br

Isabel Cristina Sales Fontes Jardim*

Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Qumica

Informaes do Artigo

Resumo O fenmeno denominado eletroforese definido como sendo a migrao de espcies carregadas eletricamente, que ocorre quando as mesmas so dissolvidas ou suspensas em um eletrlito, atravs do qual uma corrente eltrica aplicada [1]. Esta tcnica de separao foi desenvolvida pelo qumico Arne Tiselius para o estudo de protenas em soro [2] e por este trabalho ele ganhou o prmio Nobel em 1948. Este mtodo, denominado soluo livre, era bastante limitado devido instabilidade do aparelho, e mais significativamente, pelos efeitos de difuso e aquecimento gerados pelo campo eltrico, os quais comprometiam a resoluo (a separao) dos compostos. Estes efeitos foram minimizados com a introduo de suporte (gel ou papel) que ajudou a conter o movimento livre dos analitos, de forma que o efeito da difuso fosse diminudo. Entretanto este sistema oferecia um baixo nvel de automao, tempos de anlise longos e aps a separao a deteco era feita visualmente. A eletroforese capilar (EC) uma tcnica que foi introduzida em 1981, por Jorgenson e Lukacs [3] e tem sido aceita cada vez mais, como um importante mtodo analtico. Em sua forma mais simples a EC uma aproximao da tcnica original, descrita por Tiselius, porm emprega-se um tubo capilar, preenchido com um eletrlito, conforme o prprio nome sugere.

Histrico do Artigo
Criado em Agosto de 2001

Palavras-Chaves
Eletroforese capilar Capilares Detectores Fluxo eletroosmtico Difuso molecular

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Aplicaes A eletroforese capilar (EC) uma tcnica aplicvel na determinao de uma grande variedade de amostras, incluindo hidrocarbonetos aromticos, vitaminas hidro e lipossolveis, amino cidos, ons inorgnicos, cidos orgnicos, frmacos, catecolaminas, substncias quirais, protenas, peptdeos e muitos outros. Uma caracterstica que difere a EC das outras tcnicas a sua capacidade nica para separar macromolculas carregadas eletricamente de interesse tanto em indstrias de biotecnologia quanto
* Autor para contato

em pesquisas biolgicas. Por exemplo, o projeto Genoma Humano, que foi concludo recentemente, teve como meta obter a seqncia completa do DNA humano e para isso foi necessrio distinguir os diversos polinucleotdeos, com massas molares, por volta de 200 a 500 Daltons (Dalton = u.m.a.) que diferiam entre si por um nico nucleotdeo. Somente a EC tem resoluo suficiente para este tipo de separao. Alm disso, o DNA humano contm cerca de 3 bilhes de nucleotdeos e as altas velocidades de anlises, obtidas pela EC, permitiram que milhares de nucleotdeos fossem seqenciados em um nico dia [4].

 Instrumentao

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Geralmente o funcionamento de um equipamento de eletroforese capilar - EC (Figura 1), envolve a aplicao de alta voltagem, tipicamente 5 a 30 kV em um capilar de dimetro reduzido gerando correntes na faixa de 10 a 100 mA. O uso do capilar apresenta vrias vantagens, particularmente com respeito ao aquecimento Joule.

Figura 2 - Exemplo de um eletroferograma

Capilares
Figura 1 - Esquema de um equipamento de eletroforese capilar

A alta resistncia eltrica do capilar permite a aplicao de campos eltricos altos pois gera um aquecimento mnimo, alm disso o formato de capilar propicia uma dissipao eficiente do calor gerado.O uso de campos eltricos altos resulta em tempo de anlise curto, alta eficincia e resoluo. Na eletroforese capilar, o capilar preenchido com uma soluo tampo e suas extremidades so mergulhadas em recipientes, que contm a soluo tampo, e onde aplicado um campo eltrico, que gera uma corrente no interior do capilar. Os eletrodos so feitos de um material inerte, tal como, platina, e so tambm mergulhados na soluo para fechar o circuito. O capilar passa atravs de um detector, usualmente um detector espectrofotomtrico de absoro no UV/Vis. Uma pequena quantidade de amostra introduzida em uma das extremidades do capilar. A aplicao do campo eltrico provoca o movimento dos analitos em direo aos eletrodos. As separaes em EC so baseadas na presena de um fluxo eletricamente induzido, denominado fluxo eletroosmtico (FEO), um fenmeno eletrofortico que gera o fluxo da soluo dentro do capilar, que faz com que os solutos se movimentem em direo ao detector. Este fluxo pode reduzir significativamente o tempo de anlise ou forar um on a reverter a sua tendncia de migrao em direo a um eletrodo, pelo qual est sendo atrado, devido ao sinal de sua carga. Outros detalhes sobre o FEO sero discutidos mais adiante, em outro item. O grfico, gerado pelo detector, tempo em funo de resposta do detector denominado eletroferograma (Figura 2).
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Os capilares podem ser de vidro (para l > 280 nm), teflon (flexvel, transparente no UV, porm no pode ser usado com alta voltagem), ou slica fundida, normalmente recoberta externamente com uma camada de proteo de poliamida, que produz uma melhora na resistncia mecnica, uma vez que extremamente frgil e se quebra com facilidade. Uma pequena poro deste recobrimento removida a fim de se formar uma janela para a deteco. A janela ento alinhada ao centro ptico do detector. Os capilares so, tipicamente, de 25 a 100 cm de comprimento com 15 a 100 m de dimetro interno. Nos instrumentos disponveis comercialmente, os capilares so mantidos dentro de um dispositivo, denominado cassete, que facilita a insero no instrumento e protege a janela delicada de deteco. A superfcie interna do capilar pode ser quimicamente modificada por meio de ligao covalente com diferentes substncias. Estes recobrimentos so utilizados para uma grande variedade de propsitos, tais como, reduzir a adsoro da amostra ou mudar a carga inica da parede do capilar. O controle de temperatura ao redor do capilar muito importante para assegurar separaes reprodutveis. O controle feito geralmente por ar ou lquido refrigerante, os quais so forados a passar atravs do cassete, onde se encontra o capilar.

Introduo da amostra Na EC, diferentemente das tcnicas cromatogrficas (Cromatografia Gasosa-CG e Cromatografia Lquida

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de Alta Eficincia-CLAE), a amostra no injetada e sim introduzida no capilar pelo lado mais distante do detector [5]. Mesmo no sendo adequada a expresso injeo, este termo ser empregado neste texto por ser o mais freqentemente utilizado. Volumes tpicos de injeo so de 10 a 100 nL. O modo de injeo mais empregado em EC o denominado hidrodinmico, onde o capilar mergulhado em um frasco contendo a amostra o Figura 3 - Esquemas para a introduo de amostras qual em seguida pressurizado, submetido ao vcuo ou erguido (efeito sifo) provocando a entrada de um certo volume de Fluorescncia 10-3 amostra no capilar. -2 Uma outra alternativa obtida atravs da insero do capilar e do eletrodo no frasco da amostra seguida da aplicao de uma voltagem, sendo que solutos neutros so arrastados pelo FEO, ao passo que solutos carregados iro migrar para dentro do capilar, por causa do FEO e tambm da migrao eletrofortica. Este tipo de injeo denominado de injeo eletrocintica [6,7]. A Figura 3 mostra os esquemas para introduo de amostras.
Fluorescncia Indireta Fluorescncia Induzida por Laser 10-6 Espectrmetro de Massa Amperomtrico Condutividade 10-4 10-5 10-3 10

Fluxo Eletroosmtico A parede do capilar de slica contm grupos silanis (SiOH) os quais se ionizam (SiO- + H+) quando em contato com solues tampo com pH altos. Esta dissociao produz uma superfcie carregada negativamente. Uma camada de contra-on (ctions) ento formada prxima parede do capilar a fim de manter a eletroneutralidade. Isto forma a dupla camada e cria uma diferena de potencial muito prxima parede e este fenmeno conhecido como potencial zeta. O potencial zeta essencialmente determinado pela carga da superfcie na parede do capilar (a carga dependente do pH). Quando uma diferena de potencial (ddp) aplicada, estes ons metlicos e suas molculas associadas solvatadas com gua migram em direo ao ctodo, Figura 4. Este movimento de ons resulta no movimento das espcies em direo ao detector e pode ser considerado como um fluxo eletricamente dirigido. O Nvel do FEO altamente dependente do pH do eletrlito, uma vez que o potencial zeta governado pela ionizao dos grupos silanis (cidos) da parede do capilar. Abaixo de pH 4,

Detectores O detector mais freqentemente utilizado em EC o espectrofotomtrico de absoro no UV/Vis devido sua natureza quase universal, ou seja, pode ser aplicado na deteco de vrias classes de substncias. A maioria dos instrumentos tem tambm detectores com arranjo de diodos disponveis, o qual fornece um espectro de UV/Vis para cada substncia detectada. Os detectores alternativos esto mostrados na Tabela 1. O acoplamento de EC com espectrmetro de massas usualmente empregado para dar informaes estruturais dos analitos [5].
Tabela 1.Detectores usados em eletroforese capilar e os seus limites de deteo aproximados

Detector

Absoro no UV-Visvel

Limite de Deteo aproximado (mg L-1) 10-1 1

Absoro Indireta no UV-Visvel

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O potencial zeta gerado em todo o comprimento do capilar e portanto produz uma velocidade de fluxo uniforme sem gerar presso. Se fizermos um corte no tubo capilar, como mostrado na Figura 6, verificamos que o perfil do FEO do tipo plano (plug) e isto tem um efeito benfico, uma vez que ele no contribui diretamente para o alargamento dos picos, pois as Figura 4 - Migrao dos ons metlicos em direo ao ctodo molculas do soluto se movero em velocidades muito prximas. Esta uma grande vantagem da EC quando comparada ao perfil a ionizao dos grupos silanis pequena e o FEO no parablico (fluxo laminar) da CLAE, caracterstico do significante, enquanto que acima de pH 9 os silanis fluxo induzido por presso. A soluo em fluxo laminar ficam completamente ionizados e portanto o FEO alto move mais lentamente prximo a parede da coluna e (Figura 5). mais rapidamente no centro, resultando em diferentes velocidades do soluto ao longo da coluna. Assim, quanto maior o tempo que o soluto despender para percorrer o leito da coluna mais largo se tornar o perfil do pico.

Figura 6 - Perfil do fluxo eletroosmtico, comparado com o do fluxo pressurisado

Figura 5 - A dependncia do fluxo eletroosmtico em funo do pH

A magnitude do fluxo eletroosmtico pode ser expressa em termos de velocidade ou mobilidade segundo as equaes: V FEO = ( / )E FEO = / Em que: V FEO = velocidade do FEO; = constante dieltrica; = potencial zeta; = viscosidade; E = potencial aplicado; FEO = mobilidade do FEO. O potencial zeta tambm dependente da fora inica da soluo tampo. Um aumento da fora inica resulta na compresso da dupla camada e conseqentemente uma reduo do FEO.
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Um outro benefcio do FEO que ele gera o movimento de quase todas as espcies, apesar das cargas, na mesma direo. Sob condies normais (superfcie carregada negativamente), o fluxo do nodo para o ctodo. nions sero conduzidos em direo ao ctodo uma vez que o fluxo gerado pode ser mais que uma ordem de magnitude maior que as mobilidades eletroforticas. Assim, ctions, neutros e nions sero eletroferografados em uma mesma corrida, uma vez que eles migram na mesma direo. A Figura 2 mostra este processo. Ctions migram mais rpido, pois sofrem atrao pelo ctodo, neutros so arrastados na mesma velocidade do FEO e no so separados e nions migram mais lentamente uma vez que so atrados para o nodo, mas so arrastados pelo FEO em direo ao ctodo.

Tempo de Migrao e Mobilidade O tempo requerido para um composto migrar do incio do capilar para o ponto de deteco chamado tempo de migrao, e dado pelo quociente entre a distncia de

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A eficincia, expressa pelo nmero de pratos, N, pode ser obtida por: N = (l/)2 em que: l = comprimento efetivo do capilar. 2tot = w2/5,545 Pode, tambm, ser relacionado altura de prato, H, por: H = l/N

migrao e a velocidade. O tempo de migrao e outros parmetros experimentais podem ser usados para calcular a mobilidade aparente (a) do soluto usando: a =l / tE = lL/tV a = e + FEO em que: V = voltagem aplicada; L = comprimento total do capilar; t = tempo de migrao; E = campo eltrico; l = comprimento efetivo. Na presena do FEO, a medida da mobilidade chamada de mobilidade aparente, a. A mobilidade efetiva, e, pode ser extrada da mobilidade aparente pela medida do FEO usando um marcador neutro que move com a velocidade igual ao FEO. Exemplos de marcadores neutros incluem dimetilsulfxido e acetona. H duas medidas de comprimento no capilar, uma denominada efetiva e a outra total. O comprimento efetivo a medida do ponto de injeo at ponto de deteco. Para deteco espectroscpica on-capillary, este comprimento tipicamente de 5 a 10 cm mais curto que o comprimento total. Para deteco off-capillary, por exemplo por espectrometria de massas, os dois comprimentos so equivalentes. O conhecimento de ambos os comprimentos importante, uma vez que a mobilidade e o tempo de migrao so definidos pelo comprimento efetivo, ao passo que o campo eltrico definido pelo comprimento total.

Difuso molecular O efeito que mais contribui para o alargamento do pico causado pela difuso molecular do soluto ao passar ao longo do capilar (difuso longitudinal). Assim, a eficincia pode ser relacionada difuso molecular em termos de cromatografia, que : 2 = 2Dt = 2DlL/eV sendo: D = coeficiente de difuso do soluto. A partir das equaes anteriores, obtm-se uma expresso eletrofortica fundamental para o nmero de pratos: N = eVl/2Dl = El/2D Da equao acima, a razo para a aplicao de campo eltrico alto evidente. Isto devido ao fato que o soluto gasta menos tempo no capilar, quando campo eltrico alto aplicado, as molculas tm menos tempo para difundir. Alm disso esta equao mostra que molculas grandes, tais como protenas e DNA, as quais tm baixo coeficiente de difuso, iro exibir menos disperso que molculas pequenas. Os valores de coeficiente de difuso de algumas substncias esto listados na Tabela 2.
Tabela 2. Coeficientes de difuso de algumas substncias, em gua (25 C)

Fontes de Alargamento dos Picos A separao na eletroforese baseada nas diferenas nas mobilidades dos solutos. A diferena necessria para resolver dois solutos dependente da distncia entre os dois solutos. A disperso, alargamento do pico do soluto, resulta das diferenas na velocidade do soluto, e pode ser definida como a largura do pico na linha de base, wb. Para um pico gaussiano: wb = 4 em que: o desvio padro do pico (no tempo, comprimento ou volume).
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Substncia HCl NaCl

D x 10 -5 (cm s-1) 3,05 1,48

Glicina Citrato

1,06

0,66


Citocromo C

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0,11

Injeo da amostra Em adio difuso molecular, uma outra fonte de alargamento do pico o comprimento do volume de injeo. Um comprimento de poucos milmetros bastante significativo dado que o comprimento de um capilar pode ser de 25 cm e a janela de deteco de 0,1 mm. Uma maneira de minimizar este problema dissolver a amostra em um solvente de fora inica menor que a do tampo. Sob estas condies, o campo eltrico maior na zona da amostra que no resto do capilar. Assim os ons se movem mais rapidamente at atingirem o tampo, onde o campo eltrico menor, diminuindo portanto a velocidade. Este processo facilitado quando a amostra dissolvida em gua pura ou em uma soluo tampo diluda cerca de 10 vezes.

Hemoglobina (Humana)

0,069

O nmero de pratos pode ser determinado diretamente no eletroferograma, usando por exemplo: N = 5,54(t/w1/2)2 sendo: t = tempo de migrao; w1/2 = largura temporal do pico meia altura

Aquecimento Joule Durante a aplicao da voltagem, e portanto a passagem de corrente pelo capilar, pode ocorrer o aquecimento Joule (formao de gradiente de temperatura). Este aquecimento Joule causa a formao de correntes de conveco dentro do capilar, causando uma mistura das bandas j separadas, resultando na disperso do pico. Este efeito pode ser minimizado pela aplicao de voltagens adequadas e uso de tampo com concentrao mais baixa, aliado a um bom controle de temperatura.

Modos de Separao Hoje em dia a eletroforese um nome genrico dado para uma srie de tcnicas de separao que envolvem a aplicao de um campo eltrico em um capilar preenchido com uma soluo tampo. As bases destas separaes esto descritas a seguir [8].

Eletroforese Capilar em Soluo Livre (ECSL)

Fluxo eletroosmtico O FEO, j foi descrito anteriormente, e, em princpio, o perfil plano resulta em um benefcio, uma vez que no contribui diretamente para a disperso das zonas. Entretanto se a amostra interage com a parede do capilar, a eficincia pode ser diminuda devido deformao do perfil do pico. Para contornar este problema podem ser adicionados modificadores no tampo ou modificar quimicamente a parede do capilar. A separao de ons a forma mais simples de EC e denominada eletroforese capilar em soluo livre. Muitos compostos podem ser separados rapidamente e facilmente por esta tcnica. A separao em ECSL baseada nas diferenas nas mobilidades eletroforticas resultantes das diferentes velocidades de migraes de espcies inicas no tampo, contido dentro do capilar. O mecanismo de separao baseado nas diferenas na razo massa/carga dos solutos em um dado pH. Na ECSL espcies neutras no so separadas, porm permite a separao de ctions e nions na mesma corrida.

Deteco on-column Uma das causas do alargamento do pico em CLAE o volume morto nas conexes, desse modo picos j separados na coluna tornam-se mais dispersos, chegando ao detector mais alargados, se houver volume morto nas conexes, ocorre uma re-mistura dos picos. Isto, no ocorre em EC pois a cela de deteco localizada no prprio capilar (regio sem revestimento).
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Eletroforese Capilar em Gel (ECG)

A separao de biomolculas grandes, tais como DNA, por ECSL, s vezes muito difcil de se obter devido similaridade nas razes massa/carga. Assim ECSL muitas vezes no suficiente para separar estes tipos de substncias. Uma alternativa preencher o capilar com um gel, onde o principal mecanismo de separao est

Chemkeys - Liberdade para aprender Eletroforese Capilar com Focalizao Isoeltrica (ECFI)
Na focalizao isoeltrica capilar substncias anfteras so separadas com base em seus pontos isoeltricos (pH onde o nmero de molculas que migra para o nodo igual ao nmero de molculas que migra para o ctodo). Esta tcnica baseada na formao de um gradiente de pH, obtido pelo uso de substncias conhecidas como anflitos, que so geralmente cidos polimricos sintticos (e.g., poliaminocidos, cidos policarboxlicos ou cidos polissulfnicos). A aplicao de um campo eltrico na mistura de anflitos gera a formao de um gradiente de pH. Os anflitos so mantidos em um meio onde se usa um ctodo com pH alto, tipicamente hidrxido de sdio e um nodo com pH baixo, tipicamente cido fosfrico. As protenas, que so anfteras, iro se comportar de maneira idntica e sero focalizadas em uma dada posio ditada pelo seu ponto isoeltrico (PI). Neste tipo de separao necessrio um passo adicional, pois os solutos no podem ser detectados in situ, pois quando eles atingem o seu PI eles param de se movimentar dentro do capilar e, portanto no atingem a cela do detector. Este passo pode ser feito de diferentes maneiras. Aps a focalizao, as zonas podem ser movidas no capilar, em direo ao detector, por meio de presso, que pode ser obtida por exemplo, elevando-se uma das extremidades do capilar. Alternativamente, aps a focalizao, a corrente do sistema baixa pois somente ons OH- e H+ contribuem para a condutividade. Quando um sal, por exemplo cloreto de sdio, adicionado ao anlito (reservatrio cido) ou ao catlito, os ons cloreto iro predominar e iro aumentar a condutividade. Pelo princpio da eletroneutralidade, ons sdio podem ser trocados por prtons no tubo, gerando um gradiente desbalanceado. Isso causa a migrao dos ons em direo ao detector.

baseado nas diferenas nos tamanhos dos solutos que migram atravs dos poros do polmero. Esta tcnica denominada eletroforese capilar em gel. ons menores migram mais rapidamente enquanto que solutos maiores ficam mais tempo retidos. Alm disso, o gel serve como um meio anticonvectivo, minimizando a difuso dos solutos. Ele tambm previne a adsoro do soluto nas paredes do capilar e ajuda a eliminar a eletroosmose. Entretanto, o gel deve possuir certas caractersticas, tais como, ser estvel termicamente e ter uma faixa de tamanho de poros apropriada (dependendo das massas molares dos solutos da amostra), para poder ser um meio eletrofortico adequado. Esta tcnica est sujeita limitao de que espcies neutras no migram atravs do gel, uma vez que o FEO suprimido.

Eletrocromatografia Capilar Micelar (ECCM)

A ECCM foi inicialmente desenvolvida para a resoluo de compostos neutros, os quais no podem ser separados usando simplesmente a ECSL. As condies de separao envolvem o uso de eletrlitos contendo nveis relativamente altos de surfactantes, tal como dodecilssulfato de sdio (SDS). Acima de uma determinada concentrao, denominada de concentrao micelar crtica (CMC), as molculas de surfactante comeam a agregar-se, formando micelas. A separao baseada na partio das molculas entre a fase micelar (pseudo-fase estacionria) e o tampo aquoso. As micelas de SDS tm carga negativa e migram contra o FEO. Entretanto, o FEO suficientemente forte para forar as micelas passarem pelo detector. Espcies carregadas positivamente so retardadas pela associao com micelas carregadas negativamente, molculas neutras tm uma partio entre as fases micelar e aquosa do tampo e tm uma mobilidade intermediria, enquanto que molculas carregadas negativamente so repelidas pelas micelas. As separaes so conduzidas em pH onde h um FEO aprecivel. Solventes orgnicos e reagentes par-inicos tambm podem ser adicionados no tampo para ajustar o fator de reteno e seletividade, exatamente como em fase reversa por CLAE. ECCM especialmente til para a resoluo de solutos neutros insolveis em gua, como por exemplo os esterides.

Isotacoforese Capilar (IC)

A principal diferena entre a isotacoforese e as outras tcnicas em CE que ela realizada em um sistema de tampo descontnuo. A amostra condensada entre dois tampes diferentes, um deles possui ons com a mais alta mobilidade no sistema e denominado dianteiro, e um outro com ons com a mais baixa mobilidade no sistema, que denominado terminador.

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Vantagens e Limitaes A tcnica de eletroforese capilar possui uma srie de vantagens, tais como, rapidez, versatilidade, baixo custo por anlise, alto poder se separao (resoluo) e consumo mnimo de amostras, reagentes e solventes.

Na prtica, o reservatrio de tampo do lado mais prximo ao detector e o capilar so preenchidos com o eletrlito dianteiro, o outro reservatrio preenchido com o outro eletrlito terminador e a amostra injetada entre eles. Quando um campo eltrico aplicado, os componentes da amostra comeam a se separar em zonas de acordo com suas mobilidades. Quando um estado de equilbrio atingido, os componentes da amostra so separados em zonas que esto em contato umas com as outras, pois no h eletrlito carreador, e todas se movem na mesma velocidade. Nesta tcnica o eletroferograma obtido contm uma srie de patamares (degraus), onde cada degrau representa uma zona de um analito. Ao contrrio dos outros modos de EC, onde a quantidade de amostra presente pode ser determinada pela rea do pico, como tambm em cromatografia, a quantificao em isotacoforese est baseada principalmente na medida do comprimento da zona, que proporcional quantidade de substncia presente.

Alm disso, oferece a possibilidade de automao e deteco on-line. Entretanto esta tcnica oferece algumas limitaes, pois no adequada para a determinao de compostos volteis, no-polares e de massa molar baixa, os quais so melhores determinados por cromatografia gasosa. Tambm no muito adequada para a anlise de polmeros no inicos de massa molar alta e no to sensvel quanto a cromatografia lquida de alta eficincia.

Referncias Bibliogrficas Anlises Quantitativas e Qualitativas A anlise qualitativa feita atravs da comparao dos tempos de migrao dos padres com os tempos de migrao das substncias presentes na amostra e/ou atravs de espectros de UV/Vis (detector por arranjo de diodos) ou do espectro de massas (detector espectrmetro de massas). A quantificao das substncias, com concentraes desconhecidas, presentes na amostra, feita atravs do procedimento usual de calibrao: 1. injeo de solues dos padres de concentraes conhecidas; 2. obteno das respostas do detector para cada composto, em funo da altura, rea ou rea dividida pelo tempo de migrao; 3. construo da curva analtica (resposta do detector versus concentrao); 4. injeo das amostras; 5. obteno das respostas do detector para as amostras; 6. quantificao das substncias atravs das curvas analticas. 1. Heiger, D. N., High Performance Capillary Electrophoresis, Hewlett Packard Company, Publication Number 12-5091-6199E, 1997. 2. Tiselius, A., The Moving-Boundary Method of Studying the Electrophoresis of Proteins, Tese de Doutorado, University of Uppsala, Sucia, 1930. 3. Jorgenson, J. W.; Lukacs K. D., Zone Electrophoresis in Open-tubular Glass Cappilaries, Anal. Chem., 1981, 53:1298. 4. Skoog, D. A.; Holler, F. J.; Nieman T.A., Principes of Instrumental Analysis, Saunders College Publishing, Philadelphia, 1998. 5. Settle, F., Handbook of Instrumental Techniques for Analytical Chemistry, Prentice-Hall International Inc., New Jersey, 1997. 6. Li, S. F. Y., Capillary Electrophoresis. Principles, Practice and Applications. J Chrom Libr, 1992, 52:1.

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7. Grossman, P. D.; Colburn. J. C., Capillary Electrophoresis. Theory and Practice, Academic Press Inc., San Diego - California, 1992. 8. Tavares, M. F. M, Mecanismos de Separao em Eletroforese Capilar, Qum. Nova, 1997, 20: 493511.

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