Seccin Qumica de Alimentos y Nutricin 1.

OBJETIVO

Fecha emisin: PROCEDIMIENTO DETERMINACIN DE 04-12-2005 ACIDOS GRASOS SATURADOS, Revisin: 2 MONOINSATURADOS, POLIINSATURADOS Y ACIDOS GRASOS TRANS Fecha revisin: Mtodo Cromatografa Gaseosa (GC-FID) 19-03-2012 Pgina 1 de 8 PRT-711.02-154

Determinar el perfil de los cidos grasos, incluidos los ismeros de cidos grasos trans (AGTs) en grasas y aceites de origen vegetal y animal. 2. CAMPO DE APLICACIN Y ALCANCE

El mtodo est diseado para evaluar el perfil de cidos grasos en aceites y grasas vegetales y animales. Puede extenderse a la cuantificacin porcentual de cidos grasos individuales. 3. FUNDAMENTO

Los cidos grasos metilados de las muestras son separados y cuantificados por cromatografa gaseosa con detector FID en columna capilar de fase reversa. 4. 4.1 4.2 REFERENCIAS ISO 5509 Animal and vegetable fats and oils - Preparation of methyl esters of fatty acids. ISO 15304 Animal and vegetable fats and oils Determination of the content of trans fatty acid isomers of vegetable fats and oils Gas chromatographic method. TERMINOLOGA. cidos grasos saturados: cidos orgnicos monoenoicos, que se encuentran presentes en las grasas, raramente libres, y casi siempre esterificando al glicerol y eventualmente a otros alcoholes. Estos no poseen ninguna insaturacin (ningn doble enlace carbonocarbono). cidos grasos monoinsaturados: son aquellos cidos grasos que poseen una nica insaturacin en su esqueleto carbonado. Pueden presentar nicamente dos ismeros. cidos grasos poliinsaturados: son aquellos cidos grasos que poseen dos o ms insaturaciones en su esqueleto carbonado. Presentan un nmero de ismeros de 2n (n=nmero de insaturaciones). cidos grasos trans: cidos grasos cuya isomera corresponde, en al menos una insaturacin, a una configuracin trans.

5. 5.1

5.2 5.3

5.4

Seccin Qumica de Alimentos y Nutricin 6. 6.1 6.1.1 6.1.2 6.1.3 6.1.4 6.1.5 6.1.6 6.1.7 6.2 6.2.1 6.2.2 6.2.3 7. 7.1

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MATERIALES, INSUMOS Y EQUIPOS MATERIALES Y EQUIPOS Cromatgrafo de gases equipado con detector FID, muestreador automtico y helio como gas carrier Balanza de precisin 0.001 g Agitador orbital de tubos (vortex o multivortex). Micropipetas de 1000 L Viales de 2 mL, con septa y tapa, para automuestreador Columna capilar DB-23 fase reversa, 60 m, 0.25 mm i.d., 0.25 m de film. Tubo de ensaye de vidrio con tapa rosca de 10 mL REACTIVOS ter de petrleo p.a. Solucin de hidrxido de potasio en metanol 2 M Estndar mezcla de 37 steres metlicos de cidos grasos. DESARROLLO Preparacin de la muestra

Antes de tomar la muestra, mezclar completamente. Fundir las muestras slidas para asegurar una buena homogeneizacin, a no ms de 60 C. 7.1.1 Preparacin de los esteres metlicos: Pesar entre 100 y 500 mg de muestra en un tubo de vidrio con tapa rosca. Considere que si la muestra presenta un contenido graso bajo, use mayor cantidad de muestra. Agregar 500 L de hidrxido de potasio en metanol 2 M. Si la muestra contiene un alto porcentaje de grasas, sobre el 50%) adicione otros 500uL de KOH. Agregar 5 mL de ter de petrleo. Si adiciono 500 uL mas de hidrxido de potasio en metanol 2 M, adicionar 1 g de sulfato mono acido de sodio monohidratado y agite vigorosamente durante 1 minuto, para neutralizar exceso de lcali.

7.1.2 7.1.3 7.1.4

Seccin Qumica de Alimentos y Nutricin 7.1.5 7.1.6 7.1.7

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Agitar 2 min en vortex, reposar 1 hora. Transferir 2 mL de las porciones superficiales del tubo al vial de automuestreador. Analizar en el cromatgrafo lquido.

7.3 7.3.1

Preparacin de la muestra Condiciones cromatogrficas. -T detector: 250 C -T inyector: 250 C -Flujo gas carrier: 33 psi -Split: 1:100 -Volumen de inyeccin: 1 L -Programa de temperatura del horno: 120 C por 5 min, Aumentar la temperatura a razn de 10 C/min hasta 180 C, mantener por 30 min. Aumentar nuevamente a razn de 10 C/min hasta 210 C y mantener por 21 min. (total 65 min).

7.4 7.4.1 7.4.1.1

Expresin de resultados Identificacin Para la identificacin de los cidos grasos, hacer la relacin respecto al tiempo de retencin del cido graso C16:0 y comparar con los obtenidos para los estndares. Usar la siguiente formula: _____tr cido graso____ tr cido graso C16:0 Donde : tr = Tiempo de retencin

7.4.2 7.4.2.1

Cuantificacin Para cuantificacin de los cidos grasos trans, hacer zoom en la zona de los C18, entre los 24 a 34 min.

Seccin Qumica de Alimentos y Nutricin 7.4.2.2

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La fraccin de masa relativa de cada cido graso se calcula determinando el rea corregida del peak correspondiente dividindola por la suma de las reas corregidas de todos los peaks. El rea corregida por Peak se calcula obteniendo el factor de respuesta FID (FX) y el factor de correccin FID (fX) para cada cido graso (ver anexo adjunto). Se informa el porcentaje de rea > 0,01 del porcentaje total corregido para cada cido graso. Para el clculo de la fraccin de masa relativa, considerar la siguiente formula: wx = Ax * fx *100 % _ At

7.4.2.3

7.4.2.4

wx = masa relativa del componente x, en porcentaje por rea del Peak. Ax = rea del peak correspondiente al componente x, en unidades de rea. fx = factor de correccin para el componente x At =suma de las reas corregidas para todos los peaks, excluyendo el rea del solvente, en unidades de rea.(para el clculo del factor de correccin y factor de respuesta de FID ver anexo). 7.4.2.5 Clculo de AGTs en aceites y grasas refinadas: Calcular los ismeros trans como la suma de las fracciones de masa relativa de los esteres metlicos de C18:1 trans, C18:2 trans y C18:3 trans, El mximo de peaks posibles de encontrar son C18:1 trans (1 peak), C18:2 trans (2 peak) y C18:3 trans (4 peak). Se expresa con 2 decimales. Clculo de AGTs en Aceites y grasas parcialmente hidrogenadas: Calcular los ismeros trans como la suma de todas las fracciones de masa relativa de todos los esteres metlicos de los cidos grasos que contienen dobles enlaces con configuracin trans, relativo a la suma de los steres metlicos de todos los cidos grasos. Se expresan con 2 decimales.

7.4.2.6 7.4.2.7

Seccin Qumica de Alimentos y Nutricin 8. 8.1 REGISTROS

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Registro de Anlisis de cidos Grasos

9.

ANEXOS

Anexo N 1 PRT-711.02-154 Calculo de fraccin de masa relativa de cada componente para la determinacin de cidos grasos saturados, monoinsaturados, poliinsatrurados y cidos grasos trans mtodo cromatografa gaseosa-FID (GC-FID).

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ANEXO N 1 PRT-711.02-154 CLCULO DE FRACCIN DE MASA RELATIVA DE CADA COMPONENTE PARA LA DETERMINACIN DE CIDOS GRASOS SATURADOS, MONOINSATURADOS, POLIINSATRURADOS Y CIDOS GRASOS TRANS Mtodo para Cromatografa Gaseosa (GC-FID) La fraccin de masa relativa de cada componente se calcula a partir de la determinacin del rea corregida del peak relativo correspondiente, considerando la suma total de las reas corregidas de todos los peaks. La correccin es necesaria para compensar la respuesta del FID para cada componente. Para eso, es necesario calcular el factor de respuesta de FID y el factor de correcin de FID. Clculo del factor de respuesta del FID Calcular el factor de respuesta para cada componente segn la ecuacin: Fx =_ Mx___ (nx-1)Ac Donde: Fx = Factor de respuesta para el componente x Mx = masa molecular relativa del componente x nx = nmero de tomos de carbono del cido graso metilado del componente x Ac = masa atmica relativa del carbono (Ac = 12,01) Clculo de factor de correccin FID Calcular el factor de correccin FID para cada componente segn la ecuacin: fx= _Fx_ Fr Donde: fx = es el factor de correccin para el componente x Fx = Factor de respuesta para el componente x Fr = es el factor de respuesta para el C16:0 (Fr = 1,407)

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El factor de respuesta de FID para C16:0 (Fr = 1,407) es considerado como referencia (fx = 1,00). Todos los otros factores corregidos FID usados en los calculos son relativos a ese valor . Por ejemplo, el factor de correccin para C10:0 es 1,10. Clculo de la fraccin de masa relativa wx = Ax * fx *100 % _ At wx = masa relativa del componente x, en porcentaje por rea del Peak. Ax = rea del peak correspondiente al componente x, en unidades de rea. fx = factor de correccin para el componente x At =suma de las reas corregidas para todos los peaks, excluyendo el rea del solvente, en unidades de rea

Tabla Resumen. Factores de Respuesta FID y Factores de Correccin FID Nmero de tomos de carbono del cido graso metilado (nx-1) 4 6 8 10 11 12 13 14 14 15 15 16 16 17 17

Masa Molecular (Mx) C4:0 C6:0 C8:0 C10:0 C11:0 C12:0 C13:0 C14:0 C14:1 C15:0 C15:1 C16:0 C16:1 C17:0 C17:1 102,13 130,18 158,23 186,28 200,30 214,33 228,35 242,38 240,36 256,40 254,39 270,42 268,41 284,45 282,44

Factor de Respuesta FID (Fx) 2,13 1,81 1,65 1,55 1,52 1,49 1,46 1,44 1,43 1,42 1,41 1,41 1,40 1,39 1,38

Factor de Correccion FID (fx) 1,51 1,28 1,17 1,10 1,08 1,06 1,04 1,02 1,02 1,01 1,00 1,00 0,99 0,99 0,98

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Masa Molecular (Mx) C18:0 C18:1 C18:2 C18:3 C18:4 C20:0 C20:1 C20:2 C20:3 C20:4 C21:0 C20:5 C22:0 C22:1 C22:2 C22:5 C22:6 C23:0 C24:0 C24:1 298,47 296,46 294,45 292,43 290,42 326,52 324,51 322,50 320,48 318,47 340,55 316,45 354,57 352,56 350,55 344,50 342,49 368,60 382,62 380,61

Factor de Respuesta FID (Fx) 1,38 1,37 1,36 1,35 1,34 1,36 1,35 1,34 1,33 1,33 1,35 1,32 1,34 1,33 1,33 1,30 1,30 1,33 1,33 1,32

Factor de Correccion FID (fx) 0,98 0,97 0,97 0,96 0,95 0,97 0,96 0,95 0,95 0,94 0,96 0,94 0,95 0,95 0,94 0,93 0,92 0,95 0,94 0,94