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UNIVERSIDADE FEDERAL DE MINAS GERAIS
PROGRAMA DE PS - GRADUAO EM SANEAMENTO MEIO AMBIENTE E RECURSOS HDRICOS
SELEO DE MTODOS BIOLGICOS PARA A AVALIAO TOXICOLGICA DE EFLUENTES INDUSTRIAIS.
Carla Ferreira Rubinger
Belo Horizonte 2009
Programa de Ps - graduao em Saneamento, Meio Ambiente e Recursos Hdricos da UFMG
SELEO DE MTODOS BIOLGICOS PARA A AVALIAO TOXICOLOGIA DE EFLUENTES INDUSTRIAIS.

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Seleo de Mtodos Biolgicos para Avaliao Toxicologia de Efluentes Industriais.

Dissertao de Pesquisa apresentada ao Programa de Ps - Graduao em Saneamento, Meio Ambiente e Recursos Hdricos da Universidade Federal de Minas Gerais, como requisito obteno do ttulo de Mestre em Saneamento, Meio Ambiente e Recursos Hdricos. rea de concentrao: Meio Ambiente Linha de pesquisa: Caracterizao, Preveno e Controle da Poluio. Orientador: Prof. Dr Mnica Maria Diniz Leo
(DESA/UFMG)
Belo Horizonte 2009
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Ficha elaborada pelo Processamento Tcnico da Biblioteca da EE/UFMG

Rubinger, Carla Ferreira Seleo de mtodos biolgicos para avaliao toxicolgica de efleuentes industriais [manuscrito] / Carla Ferreira Rubinger . 2009. xiii, 90 f. , enc. : il. Orientadora: Mnica Maria Diniz Leo Dissertao (mestrado) Universidade Federal de Minas Gerais, Departamento de Engenharia Sanitria e Ambiental, Departamento de Engenharia Hidrulica e Recursos Hdricos. Bibliografia: f.: 63-71 1. Engenharia sanitria Teses. 2. Ecotoxidade - Teses. 3. Efluentes industriais Teses. 4. Meio ambiente Teses . I. Leo, Mnica Maria Diniz. II. Universidade Federal de Minas Gerais, Departamento de Engenharia Sanitria e Ambiental. III. Universidade Federal de Minas Gerais, Departamento de Engenharia Hidrulica e Recursos Hdricos. IV. Ttulo. CDU: 628.3 (043)
R896s
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A cincia exercita a capacidade, no o saber. O valor de praticar com rigor, por algum tempo, uma cincia rigorosa no est propriamente em seus resultados: pois eles sempre sero uma gota nfima, ante o mar das coisas dignas de saber. Mas isso produz um aumento de energia, de capacidade dedutiva, de tenacidade; aprende se a alcanar um fim de modo pertinente. Neste sentido valioso, em vista de tudo o que se far depois, ter sido homem de cincia. (NIETZSCHE, 1878 1886, in Humano, demasiado humano)
Dedico este trabalho de pesquisa aos meus primeiros orientadores nesta eterna busca por aprendizado, meus queridos pais Alirio e Ftima, que desde muito cedo me auxiliam nas minhas descobertas pela paixo a cincia e pelo ofcio de lecionar. Aos meus irmos Alirio e Gibran pela compreenso, amizade e amor incondicional. A minha av materna D. Mariinha por me relembrar que existncia da cincia humana diminuta frente magnitude da vida. E aquele que tem Deus como esteio no deve temer os obstculos que por ventura surjam no meio da jornada. Vocs foram e sempre sero meu refugio terno e firme a me guiar nos ladrilhos desta estrada a qual chamo de vida Perseverana sempre!
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Agradecimentos:
Deixo expressos meus sinceros agradecimentos s seguintes instituies e pessoas, sem as quais o presente trabalho teria sido impossvel: minha orientadora Dra. Mnica Maria Diniz Leo e a Professora Dra. Lisete Celina Lange, por todo o ensinamento transmitido, orientao e incentivo em todo o desenvolvimento deste trabalho; foram as incentivadoras iniciais desta proposta de dissertao e me apoiaram em diversos momentos cruciais; A professora Dra. Helene Maria Paulinyi, pesquisadora do Laboratrio de Ensaios Biolgicos do DESA / UFMG por seu desprendimento, incentivo, disponibilidade e amizade. Ao Programa de Ps-Graduao em Saneamento, Meio Ambiente e Recursos Hdricos da Universidade Federal de Minas Gerais pela oportunidade e contribuio formao cientfica e pessoal; Ao Departamento de Engenharia Sanitria e Ambiental da Universidade Federal de Minas Gerais pela receptividade, acolhida e apoio tcnico e administrativo; CAPES pelo incentivo ao desenvolvimento deste trabalho atravs de uma Bolsa de Mestrado; Aos colegas de ps-graduao, que sempre me acolheram com afeto e amizade, e me auxiliaram em problemas ligados as mais diversas ordens.
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s queridas Amigas Camila Moreira de Assis e Giselle Saraiva de Melo, sem nossas inmeras incurses pela internet e programas sociais eu teria sucumbido. Meninas Muito Obrigada por terem me resgatado! Aos queridos Amigos Alisson Bragana Silva, Betnia Salermo Lara, rika Ferreira de Abreu, Lourivaldo Lemos, Maria Eugnia Tavares, obrigado pelo incentivo aos estudos e companhia constante na Sala de Estudos do DESA. Aos queridos Amigos Anderson Duarte, Denise Felcio, Fbio Bianchetti, Filipe Dornelas, Juliana Fernandes, Magnus Caldeira, Wagner Moravia, por sua amizade e afeto. Aos Colegas e Novos Amigos Andr Rosa, Carolina Moreira, Carolina Ventura, Cludio Souza, Christiny Schuery, Cristiane Archanjo, Cynthia Fantoni, Fernanda Maria Nascimento, Fernando de Assuno, Fernando de Paula, Francisco da Fonseca, Glria Suzana de Souza, Jackson Pereira, Joo Gilberto Ribeiro, Louise Sampaio, Margarita Maria Dueas, Miriam Amaral, Paulo Gustavo de Almeida, Uende Figueiredo, Sabrina Rubinger, Wesley Lima queridos companheiros de festas (Arraial no SMARH, Fantasia, Natal, etc.) foram tantos momentos divertidos, aniversrios, casamentos, defesas e conquistas importantes! Aos meus orientadores de f, Padre Jorge Antnio de Castro e Seminarista Efferson Dionsio de Andrade, por suas oraes e desprendimento em me ouvir e aconselhar. A minha Famlia por todo o apoio ao longo deste trabalho, desta fase de tormentas e puderam compreender minhas inquietaes e ausncias. Amo muito todos vocs! E, a todos que me motivaram, para que minha fragilidade humana no me fizesse desistir, meu muito obrigado!
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RESUMO
Os mtodos biolgicos para a avaliao de toxicidade de efluentes industriais constituem importantes ferramentas na preveno, caracterizao e controle da poluio que atinge os ecossistemas aquticos. A avaliao de toxicidade realizada atravs da execuo de ensaios biolgicos diversos. O principal objetivo deste trabalho foi realizar a seleo de mtodos de ensaio biolgicos utilizados na avaliao toxicolgica de efluentes industriais. Em especial visou-se a deteco de testes padronizados utilizados para o ensaio crnico. Buscou-se a identificao de organismos-teste que pudessem ser mais eficientes na deteco da toxicidade de efluentes em nveis sub-letais ou crnicos. Dentre estes se faz destaque para os ensaios que utilizam microcrustceos Daphnia sp e Ceriodaphnia sp; e os que utilizam bactrias fotoluminescentes como Vibrio fischeri. Palavras-chave: Efluentes industriais; ecotoxicidade; ensaios crnicos.
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ABSTRACT
Biological methods for evaluation of toxicity from industrial effluents represent a important tools in the prevention, characterization and control of pollution that reaches aquatic ecosystems. The toxicity evaluation carried through the execution of diverse biological assays. The goal of this work was to integrate the existing information in a compact form as to provide new perspectives for the different toxicological methods. The main objective of this research was to carry out by survey of selection of usually performed biological methods of assay of the toxicological evaluation from industrial effluents. In special, it aimed the detection of used standardized tests for chronic assays. It searched the identification of test-organisms that could be more efficient in the detection of the toxicities of effluent at sub-lethal or chronic levels. Among these, has pointed out distinguished the assays, which deal with microcrustaceans Daphnia sp and Ceriodaphnia sp and the ones that use photoluminescence bacteria as Vibrio fischeri. Keywords: Industrial Effluents; Ecotoxicity; Chronic Assays.
SUMRIO
LISTA DE FIGURAS ............................................................................................... XIII LISTA DE TABELAS .............................................................................................. XIV LISTA DE SIGLAS E ABREVIAES .................................................................... XV 1 - INTRODUO ....................................................................................................... 1 2- OBJETIVOS ............................................................................................................ 3 2.1 - Geral 2.2 - Especficos 3 3
3 - REVISO DA LITERATURA ................................................................................. 4 3.1 - Mtodos biolgicos 3.2 - Ecotoxicologia 3.3 - Ensaios ecotoxicolgico 3.4 - Testes de toxicidade aqutica 4 4 7 8
3.4.1 - Teste de toxicidade aguda ..............................................................................................................12 3.4.2 - Teste de toxicidade crnica ............................................................................................................12
4 - METODOLOGIA .................................................................................................. 15 5 - RESULTADOS E DISCUSSO ........................................................................... 16 5.1 - Legislao e normalizao pertinente 5.2 - Seleo de mtodos de ensaio 16 24
5.2.1 - Critrios para seleo de organismos aquticos ............................................................................24 5.2.2 - Testes ecotoxicolgicos identificados ..............................................................................................26 5.2.2.1 - Organismos aquticos mais utilizados em ensaios ecotoxicolgicos .......................................28
5.3 - Mtodos de ensaio com organismos aquticos mais utilizados em testes de avaliao de toxicidade de efluentes 30
5.3.1 - Avaliao de toxicidade para algas ................................................................................................30 5.3.1.1 - Teste de inibio de crescimento algal para Chlorella vulgaris (toxicidade aguda) ...............30 5.3.1.2 - Teste toxicidade crnica por mtodo de ensaio com algas (Chorophyceae) ...........................30 5.3.1.3 - Teste de inibio do crescimento e da fluorescncia de Scenedesmus subspicatus .................31 5.3.2 - Avaliao de toxicidade para microcrustceos ..............................................................................31 5.3.2.1 - Teste de inibio da capacidade natatria de Daphnia magna...............................................31 5.3.2.2 - Teste de toxicidade aguda para Daphnia similis.....................................................................31 5.3.2.3 - Teste de toxicidade crnica para Daphnia similis...................................................................32 5.3.2.4 - Teste de avaliao da toxicidade crnica para Ceriodaphnia dubia .......................................32 5.3.3 - Avaliao de toxicidade para peixes ..............................................................................................33 5.3.3.1 - Testes de avaliao de toxicidade aguda para peixes .............................................................33 5.3.3.2 - Teste de avaliao da toxicidade crnica para peixes ............................................................33 5.3.3.3 - Teste de avaliao da bioconcentrao em peixes ..................................................................34 Programa de Ps - graduao em Saneamento, Meio Ambiente e Recursos Hdricos da UFMG
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5.3.4 - Avaliao de toxicidade para bactrias..........................................................................................35 5.3.4.1 - Teste de inibio de bioluminescncia de bactrias ................................................................35 5.3.4.2 - Teste de citotoxicidade (Teste de Ames) ..................................................................................35 5.3.4.3 - Teste de genotoxicidade (Umu teste) .......................................................................................36
5.4 - Anlises de mtodos de ensaios ecotoxicolgica de efluentes industriais 5.5 - Efluentes industriais
empregados
na
avaliao 36 39
5.5.1 - Efluente de origem mineira e metalrgica .....................................................................................41 5.5.2 - Efluentes de origem petroqumica .................................................................................................41 5.5.3 - Efluentes de origem txtil ...............................................................................................................41 5.5.4 - Efluentes de origem de papel e celulose .........................................................................................42 5.5.5 - Efluentes de origem frigorfica.......................................................................................................42 5.5.6 - Efluentes de origem curtumeira .....................................................................................................43 5.5.7 - Efluentes de origem de lixiviados de aterros sanitrios urbanos ou industriais............................43 5.5.8 - Efluentes de origem de escoamento superficial agrcola................................................................44
5.6 - Avaliao da toxicidade de efluentes industriais
44
6 - CONCLUSO ...................................................................................................... 59 7 - RECOMENDAES............................................................................................ 61 8 - REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS .................................................................... 63
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LISTA DE FIGURAS
FIGURA
3.1: PARMETROS NECESSRIOS PARA UM ESTUDO ECOTOXICOLGICO; ADAPATADO DE ZAGATTO, 2006................. 8
FIGURA 3.2: DIAGRAMA REPRESENTATIVO DOS PRINCIPAIS PROCESSOS DE INVESTIGAO ECOTOXICOLGICA EM SISTEMAS AQUTICOS. ADAPTADA DE STANDARD METHODS FOR THE EXAMINATION OF WATER AND WASTE WATER (2005). ......................................... 10
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LISTA DE TABELAS
TABELA
5.1 - MTODOS DE ENSAIO BIOLGICO PADRONIZADOS INTERNACIONALMENTE PARA AVALIAO DE TOXICIDADE DE EFLUENTES INDUSTRIAIS. ............................................................. 21 5.2 COLETNEA DE TESTES ECOTOXICOLGICOS COMERCIALIZADOS PARA BIOENSAIOS PARA AVALIAO DE ECOSSISTEMAS AQUTICOS E DE EFLUENTES COMO UM TODO ................................................................................................. 27
TABELA
TABELA 5.3 - MTODOS DE ENSAIO DE TOXICIDADE NORMALIZADO POR ENTIDADES DO BRASIL. ................................................................. 27 TABELA 5.4 - COLETNEA DE ORGANISMOSTESTE MAIS UTILIZADOS NOS BIOENSAIOS PARA AVALIAO TOXICOLGICA DE EFLUENTES INDUSTRIAIS. ............................................................. 28 TABELA 5.5: COMPARAO ENTRE OS MTODOS DE ENSAIO MAIS USUAIS NA AVALIAO TOXICOLGICA DE EFLUENTES INDUSTRIAIS. ........................................................................................................... 38 TABELA 5.6: LISTA DE TIPOLOGIAS INDUSTRIAIS E MTODOS DE ENSAIOS APLICADOS AVALIAO DE TOXICIDADE DOS EFLUENTES INDUSTRIAIS. ................................................................................... 45 TABELA 5.7: RELAO DE COMPOSTOS QUMICOS E ONS METLICOS PRESENTES EM EFLUENTES INDUSTRIAIS E TIPOS DE MTODOS DE ENSAIO UTILIZADOS PARA SUA DETECO. .... 49
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LISTA DE SIGLAS E ABREVIAES

ABNT: Associao Brasileira de Normas Tcnicas AFNOR: Association Franaise de Normalisation APHA: American Public Health Association AOX: Haleto Orgnico ASTM: American Society for Testing Materials AWWA: American Water Works Association Ca: Concentrao de substncia teste na gua CAE: Concentraes Ambientais Esperadas CAPES: Coordenao de Aperfeioamento de Pessoal de Nvel Superior CE50: Concentrao efetiva mdia CENO: Concentrao de efeito no observado CEO: Concentrao de efeito observado CETESB: Companhia Estadual de Tecnologia em Saneamento Bsico do Estado de So Paulo. CERH: Conselho Estadual de Recursos Hdricos CI50: Concentrao de inibio mdia CL: Concentrao letal CL50: Concentrao Letal mdia CONAMA: Conselho Nacional de Meio Ambiente CONSEMA: Conselho Estadual do Meio Ambiente
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COPAM: Conselho Estadual de Poltica Ambiental Cp: Concentrao de substncia teste no organismo DBO: Demanda Bioqumica de Oxignio DCA: 3,4 - dicloroanilina DDT: Dicloro Difenil Tricloroetano DESA: Departamento de Engenharia Sanitria e Ambiental DIN: Deutsches Institut fr Normung DQO: Demanda Qumica de Oxignio EEA: European Environmental Agency EOX: Hidrocarboneto Halognico ETE: Estao de Tratamento de Esgoto FATMA: Fundao do Meio Ambiente do Estado de Santa Catarina FESB CETESB: Fundo Estadual de Saneamento Bsico da Companhia Estadual de Tecnologia em Saneamento Bsico do Estado de So Paulo. GLP: Gs Liquefeito de Petrleo GT02: Grupo de toxicidade da comisso tcnica de qualidade das guas. GTZ: Deutsche Gesellschaft fr Technische Zusammenarbeit GmbH IAP: Instituto Ambiental do Paran IEMA: Instituto Estadual de Meio Ambiente e Recursos hdricos ISO: International Standard Organization LABTOX: Laboratrio de Toxicologia Ambiental da Universidade Federal de Santa Catarina xvi
MICROTOX: Toxicity Test System with Vibrio fisheri MMA: Ministrio do Meio Ambiente NBR: Norma Brasileira OCPs: Pesticidas Organoclorados OECD: Organization for Economic Co operation and Development OD: Oxignio Dissolvido P+L: Produo mais limpa PAHs: Polycyclic Aromatic Hydrocarbons PCBs: Polychlorinated biphenyls POPs: Poluentes orgnicos persistentes pH: Potencial hidrogeninico SCOPE: Scientific Comittee on Problems of the Environment SISEMA MG: Sistema Estadual de Meio Ambiente de Minas Gerais UASB: Upflow Anaerobic Sludge Blanket USEPA: United States Environmental Protection Agency VC: Valor Crnico WEF: Water Environment Federation WHG: Wasserhaushaltsgesetz
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1 - INTRODUO
A crescente preocupao do setor industrial com as exigncias de processos ecologicamente corretos e o desenvolvimento sustentvel de suas atividades levam a um questionamento cada vez mais rgido da compatibilidade dos produtos utilizados no processo fabril com o meio ambiente. As certificaes da qualidade de produo e a qualidade ambiental (p.e. ISO 9.000 e ISO 14.000), emplementadas nas empresas com o objetivo de manter a competitividade no mercado nacional e externo, exigem amplos conhecimentos dos insumos utilizados e de seus impactos ambientais (SAR (a), 2005; DANNENBERG e SAR, 2007). Dentre as maiores fontes de poluio do ambiente aqutico encontram-se os lanamentos de efluentes lquidos domsticos e industriais de estaes de tratamento de esgoto (ETE) ou o esgoto in natura, sem o devido tratamento. Muitos efluentes so extremamente complexos, do ponto de vista fsico e qumico, e so fontes de grande diversidade de poluentes para o ambiente aqutico, a estratgia mais eficiente o uso integrado de anlises fsicas, qumicas e ecotoxicolgicas para avaliao e previso do risco ambiental (BERTOLETTI, 1990; COSTAN et al., 1993; apud ZAGATTO (a), 2006). Para cada uso previsto, existe uma qualidade de gua segundo padronizao a ser exigida. O padro de qualidade da gua e efluentes exigidos est baseado em anlises laboratoriais de parmetros essencialmente fsico-qumicos. Muitas vezes esses parmetros so insuficientes, sendo que se tornaria impossvel determinao qumica de todos os componentes existentes em uma amostra de gua, por exemplo, para avaliar seu efeito potencial aos seres. Para se avaliar o impacto de certas substncias sobre a vida aqutica so necessrios ensaios complementares onde so utilizados seres vivos como bioindicadores. Ademais, a anlise qumica de efluentes laboriosa, de elevado custo e no capaz de garantir que todos os compostos txicos relevantes sejam detectados. Os testes de toxicidade empregados na anlise de efluentes visam conseguir uma indicao sobre o efeito txico da totalidade das substncias contidas nos efluentes e nos corpos d gua de maneira somatria (DANNENBERG, 1993; SAR(b), 2005).
A interao entre os mtodos de biomonitoramento, somados aos dados das variveis abiticas do sistema, proporciona um melhor diagnstico da qualidade ambiental do ecossistema em estudo, sendo que ambas as informaes so convergentes e se completam (CAIRNS e DICKSON, 1971; EXTENCE e FERGUSON, 1989). Na avaliao da qualidade da gua, por meio de anlises biolgicas, usualmente so empregados mtodos fisiolgicos que constituem na exposio dos organismos a uma amostra de gua ou sedimento, avaliando - se a intensidade do efeito produzido na sobrevivncia, crescimento e reproduo dos organismos, ou mtodos ecolgicos que partem do levantamento das comunidades presentes no corpo de gua, cuja composio permite inferir condies ambientais prevalecentes (ROBERTO e ABREU, 1991). As medidas de gerenciamento e monitoramento para a avaliao e controle dos agentes txicos presentes na gua e no sedimento so ferramentas de mitigao de impactos antrpicos nos ecossistemas aquticos. Segundo Knie e Lopes (2004), os bioensaios tm sido aplicados em diversos pases h muitos anos na rotina de rgos ambientais, no mbito do licenciamento e da fiscalizao de atividades potencialmente causadoras de poluio, bem como do monitoramento da qualidade das guas. Particularmente esto sendo mais aplicados em aes preventivas, ou seja, para estimar riscos futuros devido liberao de substncias perigosas no meio ambiente e no apenas para avaliar danos j causados. Neste sentido, a presena destes trabalhos sumamente benfica e importante, pois buscam identificar meios que permitem avaliar os efeitos de poluentes advindos do lanamento de efluentes industriais aos ecossistemas aquticos, alm de verificar a relao entre os tipos de tratamentos empregados e o grau de toxicidade dos efluentes sob a biota. Os parmetros ecotoxicolgicos, quando comparados com os qumicos so relativamente novos e, em parte, ainda desconhecidos por tomadores de decises; preciso divulg-los e demonstrar sua relevncia junto s aes preventivas e mitigadoras de impactos (KNIE e LOPES 2004). O presente trabalho prope a identificao de mtodos biolgicos existentes, bioensaios de toxicidade aguda e crnica, buscando uma comparao dos mesmos e sua aplicabilidade avaliao da qualidade de tratamentos empregados aos efluentes industriais, bem como compreender suas vantagens e limitaes.
2- OBJETIVOS
2.1 - Geral
Realizar levantamento das principais metodologias de testes de toxicidade empregadas na anlise de efluentes industriais.
2.2 - Especficos
Identificar bioensaios existentes para a avaliao de toxicidade aguda e crnica em efluentes lquidos industriais; Gerar comparaes entre os principais mtodos empregados anlise de toxicidade crnica de efluente industrial, a partir de sua aplicabilidade, contribuindo para a compilao de dados ao monitoramento ambiental.
3 - REVISO DA LITERATURA
3.1 - Mtodos biolgicos
Mtodos Biolgicos ou Bioensaios so testes que fazem uso de organismos vivos para elaborar informaes sobre o desenvolvimento e as transformaes, o efeito agudo ou crnico que uma determinada substncia qumica possa exercer sobre a matria viva. Os mtodos biolgicos podem ser divididos em trs grandes grupos de anlise: Microbiolgicos: os que se ocupam principalmente da deteco de microrganismos patognicos; Limnolgicos: fornecem informaes sobre o desenvolvimento e as transformaes em longo prazo da biocenose nos ecossistemas aquticos; Ecotoxicolgicos: revelam os efeitos agudos ou crnicos produzidos por uma ou compostos de substncias qumicas sobre organismos vivos. De acordo com Knie e Lopes (2004), por volta dos anos 50, em vrios pases, como Alemanha, Estados Unidos, Frana, Inglaterra, comearam a ser selecionados, ainda do ponto de vista ecossistmico, representantes tpicos dos grupos mais importantes da biocenose aqutica, levando em considerao os diferentes nveis trficos (dos decompositores, as bactrias; dos produtores primrios, as algas; dos consumidores primrios, os protozorios; dos consumidores entre os metazorios, os microcrustceos; e como consumidores finais, os peixes) para a realizao de bioensaios tanto em campo quanto em escala laboratorial. Ao mesmo tempo, foram desenvolvidos e continuamente aperfeioados procedimentos tcnicos e metodolgicos nesses pases, a fim de facilitar e garantir a aplicao uniforme dos ensaios e sua divulgao.
3.2 - Ecotoxicologia
A Ecotoxicologia uma cincia relativamente nova quando comparada a outras cincias, e foi reconhecida mundialmente a partir dos anos 60. O Dr. Rene Truhaut, membro da Academia de Cincias da Frana foi o criador do termo Ecotoxicologia em 1969 para definir o estudo dos efeitos adversos de substncias qumicas com o objetivo de proteger espcies naturais e populaes (TRUHAUT, 1977).
Estudos Ecotoxicolgicos compreendem de maneira geral: Estudo das emisses e entradas de poluentes no ambiente abitico, distribuio e destino nos diversos compartimentos. Estudo da entrada e destino dos poluentes nas cadeias biolgicas e suas formas de transferncia como alimento via cadeia trfica; Estudo qualitativo e quantitativo dos efeitos toxicolgicos dos poluentes ao ecossistema com conseqncias ao homem. De acordo com SCOPE (1978) a ecotoxicologia a cincia que estuda os efeitos txicos de agentes qumicos e fsicos nos organismos vivos, particularmente sobre as populaes e comunidades dentro de ecossistemas definidos; esses estudos incluem as vias de entrada e transporte dos agentes em causa e a sua interao com o ambiente. Ecotoxicologia a cincia que estuda os efeitos das substncias naturais ou sintticas sobre os organismos vivos, populaes e comunidades, animais ou vegetais, terrestres ou aquticos, que constituem a biosfera, incluindo assim a interao das substncias com o meio nos quais os organismos vivem num contexto integrado (PLAA, 1982). A ecotoxicologia, por Bertoletti (1990), o estudo do comportamento e as transformaes de agentes qumicos no ambiente, assim como seus efeitos e respostas sobre a biota. De acordo com o Fillmann e Yunes (1992), a ecotoxicologia uma cincia que estuda as modalidades de contaminao do ambiente pelos agentes poluentes naturais ou artificiais produzidos pela atividade humana, assim como seus mecanismos de ao e seus efeitos sobre o conjunto de seres vivos que povoam a biosfera. As consideraes sobre a ecotoxicologia feitas por Rand, 1995, apresentam os avanos e limitaes desta cincia tais como: Proteo s populaes e comunidades (aves, plantas, mamferos e outros organismos) aquticos e terrestres. Utilizao dos prprios animais que se pretende proteger. No utilizao dos testes para todas as espcies existentes, pois o nmero de organismos existentes maior e, conseqentemente, o grau de incerteza na extrapolao dos dados tambm maior.
A extrapolao dos dados de toxicidade mais difcil devido s variaes dos fatores ambientais (por exemplo, dureza das guas, temperatura, pH, etc.). A concentrao do agente qumico no meio (ar, gua, solo ou alimento) mais varivel. Menor quantidade de pesquisa na rea, e a maior nfase so dadas medida da concentrao do agente qumico no meio, com vistas s necessidades reguladoras, mecanismos de ao e relao estrutura / atividade. A utilizao de mtodos mais novos, alguns padronizados outros ainda em desenvolvimento. A ecotoxicologia lida com os efeitos de poluentes ambientais na sade e no meio ambiente. Poluentes ambientais so agentes relacionados em geral ao meio ambiente e podem causar efeitos adversos na sade de organismos vivos, incluindo humanos, animais e plantas. O estudo da ecotoxicologia parte da redefinio de que (i) sobrevivncia humana depende do bem estar de outras espcies e da disponibilidade de ar puro, gua e comida; (ii) qumicos antropognicos assim como os que ocorrem naturalmente podem causar efeitos prejudiciais em organismos vivos e processos ecolgicos. O estudo da ecotoxicologia, desta maneira, se refere como os poluentes ambientais, a partir de suas interaes com seres humanos, animais e plantas, influenciam a sade e bem estar destes organismos (YU, 2005). Segundo Zagatto (2006), a ecotoxicologia implica em uma viso mais ampla do que a simples avaliao de efeitos das substncias sobre os organismos. A toxicidade ou ecotoxicidade pode no ser o resultado da ao de apenas uma substncia isolada, mas da interao e magnitude de vrios agentes presentes num determinado ambiente. Assim, a avaliao ecotoxicolgica de um determinado ambiente passa pelo conhecimento das fontes de emisso dos poluentes, bem como de suas transformaes, difuses e destinos no ambiente. A ecotoxicologia uma cincia multidisciplinar que engloba vrias reas de estudo, tais como biologia, qumica (orgnica, analtica e bioqumica), anatomia, gentica, fisiologia, microbiologia, ecologia, cincias dos solos, das guas e atmosfricas, epidemiologia, estatstica e direito. Deste modo a ecotoxicologia descreve um cenrio mais elaborado de referncia. Ordena questionamentos que integram diversas variveis de qualidade ambiental, como por exemplo: Como so transformados os poluentes aps sua chegada ao meio ambiente? Como so expostos os organismos, e como se do os impactos fisiolgicos na dinmica de populaes e estruturas de comunidades? Que impactos indiretos ocorrem a um organismo no exposto
quando sua presa ou predador ou competidor afetado? Como distinguir o impacto de compostos mltiplos da ao de um nico composto? A cronologia das pesquisas ecotoxicolgicas no Brasil tem seus primrdios no trabalho de Rocha et. al. em 1971 descritos no relatrio da FESB-CETESB (1971); quando estes autores iniciaram o desenvolvimento de testes de toxicidade, utilizando a tilpia, com um efluente de uma indstria na regio do rio Atibaia (SP), local com freqentes mortandades de peixes supostamente causadas pelo lanamento de efluentes lquidos industriais com concentraes elevadas de agentes qumicos. J em termos metodolgicos, foi a partir de 1975 que se deu o desenvolvimento e a adaptao de vrios mtodos de ensaios de toxicidade aguda e crnica, de curta durao, utilizando outros grupos e espcies de organismos, dentre os quais esto presente as algas, os microcrustceos e os peixes de guas continentais e marinhas, alm de testes com sedimentos, para avaliao da poluio hdrica. Em 1987 Associao Brasileira de Normas Tcnicas - ABNT, por meio dos trabalhos desenvolvidos pelo GT02(Grupo de Toxicidade) da Comisso Tcnica de Qualidade das guas, comea a publicar suas primeiras normas relativas a testes ecotoxicolgicos com organismos aquticos. A pesquisa ecotoxicologia crescentemente revela a importncia das interaes complexas entre organismos individualmente, nas espcies, processos fisiolgicos, fatores ambientais, e multiplicidade de substncias qumicas antrpicas. Suas ferramentas incluem mtodos biolgicos, ora denominados de testes de toxicidade, tais como os ensaios para estudos de crescimento individual, mortalidade, reproduo, taxa metablica, induo enzimtica, etc.
3.3 - Ensaios ecotoxicolgico

Os testes de toxicidade para avaliar os efeitos causados (s) espcie (s) teste, consistem na exposio dos organismos aquticos representativos do ambiente a vrias concentraes de uma ou mais substncias, ou a fatores ambientais, durante um determinado perodo de tempo. Estes testes so denominados de bioensaios ou ensaios biolgicos. O uso dos testes ecotoxicolgicos integra os conceitos da ecologia, no que diz respeito diversidade e representatividade dos organismos e seu significado ecolgico nos ecossistemas,
e da toxicologia, em relao aos efeitos adversos dos poluentes sobre as comunidades biolgicas (PLAA, 1982). A observao do comportamento e das reaes de animais e plantas no contato com contaminantes da natureza levou, j no sculo XIX, a se considerar o emprego de organismos como indicadores de impactos ambientais. Naquele tempo, as primeiras aplicaes isoladas na avaliao de contaminantes por atividades industriais utilizando Daphnia sp e peixes foram bem sucedidas, por mais rudimentares que os mtodos ainda fossem (PENNY e ADAMS, 1863 apud KNIE e LOPES, 2004). A Figura 3.1, adaptada de Zagatto (2006), apresenta um esquema representativo do conjunto de parmetros necessrios para um estudo ecotoxicolgico avaliao integrada do destino e efeitos das substncias txicas no meio ambiente.
ECOTOXICOLOGIA
Fontes de emisso Diluio Transporte de poluentes
BIOTA = BIOSFERA
Risco ecotoxicolgico
Risco toxicolgico
FAUNA / FLORA
HOMEM
Figura 3.1: Parmetros necessrios para um estudo ecotoxicolgico; adapatado de Zagatto, 2006.
3.4 - Testes de toxicidade aqutica

Os ensaios de toxicidade aqutica, segundo APHA, AWWA e WEF (2005), so utilizados a uma variedade de propsitos dentre os quais incluem se: As condies ambientais do meio ambiente para a vida aqutica;
Variveis ambientais favorveis ou no favorveis tais como oxignio dissolvido (OD), potencial hidrognionico (pH), temperatura, salinidade ou turbidez; Efeitos das variveis ambientais em presena resduos txicos; A toxicidade de resduos a determinadas espcies; A sensibilidade relativa de organismos aquticos a um efluente ou a um composto e / ou substncia txica; Tipo e extenso que um tratamento de resduos necessita para alcanar os limites ou requerimentos do controle de poluio aqutica; Eficcia de mtodos de tratamento de resduos; Estimar o descarte permissivo de um efluente; Compilao dos parmetros para a qualidade de guas e padres de lanamento de efluentes. Os testes de toxicidade so classificados de acordo com a durao (curta; intermediria, e de longa durao), mtodo de adicionar a soluo teste (sistema esttico, semi-esttico e de fluxo contnuo) e propsito (monitoramento da qualidade de efluente; teste de composto isolado; toxicidade relativa; sensibilidade relativa; sabor ou odor, taxa de crescimento, etc.). Segundo DANNENBERG, 1993; so exemplos de mtodos de testes toxicolgicos aplicveis anlise de amostra de efluentes: Efeito letal para peixes (Leuciscus idus); Testes com clulas de peixes; Deteco da mobilidade de daphnias com Daphnia magna; Teste com plipos de gua doce (Hydra litoralis): critrio de avaliao de modificaes morfolgicas dos organismos teste; Inibio da emisso de luz de bactrias luminescentes. A base de dados sobre Toxicidade Aqutica pode ser resumida como o esquema apresentado na Figura 3.2, segundo APHA, AWWA e WEF (2005):
MTODO DE DERIVAO
Efeito Crnico
Efeito Agudo
End Point (mais sensvel)
CL50/CE50 (mais sensvel)
Fator de Segurana
Relao Agudo / Crnico
Critrio Definitivo
Critrio Temporrio
Processo de Reviso
Identificar Intervalos de Dados
Figura 3.2: Diagrama representativo dos principais processos de investigao ecotoxicolgica em sistemas aquticos. Adaptada de Standard Methods for the Examination of Water and Waste Water (2005).
Assim, compreendemos como mtodo de derivao o ensaio biolgico selecionado para a realizao de uma anlise. Efeito agudo o resultado de uma exposio isolada a uma substncia txica, geralmente como durao menor do que 24 horas, resultando em danos biolgicos severos ou a morte do organismo-teste. Trata se de uma resposta severa e rpida dos organismos-testes a um estmulo da substncia em anlise, que se manifesta, em geral, em um intervalo de 0 a 96 horas. Os resultados dos testes de efeito agudo so expressos em CE50 e / ou CL50, concentrao efetiva mdia ou concentrao letal mdia, isto , a concentrao da substncia em anlise, por exemplo, do efluente, que causa efeito agudo.
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A relao entre efeito agudo e efeito crnico se d a partir da CENO e da CEO. A CENO a concentrao de efeito no observado, ou seja, a maior concentrao que no causa efeito aos organismos-teste; j a CEO a concentrao de efeito observada, a menor concentrao que causa efeito estatisticamente significativo nos organismos-teste. Os critrios temporrios remetem aos efeitos observados sob os organismos-teste em um curto espao de tempo que antecedem a letalidade. A partir da interpretao dos critrios temporrios e da relao efeito agudo e efeito crnico iniciam se a tabulao de dados, a identificao das concentraes verso tempo de exposio. Assim d inicio a retro alimentao do sistema de anlise onde novos testes podem ou no ser iniciados. Caso afirmativo inicia se o processo de anlise para a identificao de efeitos crnicos aos organismos-teste. Efeito crnico um efeito adverso no organismo-teste em que sintomas repetem-se com freqncia ou desenvolvem-se lentamente por um longo perodo de tempo. interpretado pela resposta a um estmulo da substncia em anlise que continua por longo tempo, geralmente por perodos que podem abranger parte ou todo o ciclo de vida do organismo-teste. End point o estgio final aps uma reao qumica ou biolgica estar completa. Neste caso o primeiro efeito adverso observado, ou seja, o mais sensvel. O fator de segurana a interpretao das concentraes de end point e efeito crnico observado. Os critrios definitivos remetem aos efeitos observados sob os organismos-teste ao longo do tempo que culminam na alterao de crescimento, do ciclo reprodutivo, e na letalidade. Ao trmino do teste crnico faz se as inferncias a cerca da ao efetiva da substncia qumica em anlise e a biocenose. Testes de toxicidade aguda e crnica so utilizados para verificar a toxicidade de uma substncia especfica ou do efeito sinrgico de diversos poluentes identificados ou no na amostra, relacionando-se ao impacto sobre a biota do corpo receptor. (GIORDANO, 2004).
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3.4.1 - Teste de toxicidade aguda Teste de toxicidade aguda um mtodo de teste usado para determinar a concentrao de uma substncia de produzir efeito venenoso a um organismo por um curto tempo de exposio que resulta em danos biolgicos severos ou a morte (PANKRATZ, 2001). Toxicidade aguda definida por Yu (2005) como a toxicidade de um determinado material no fim de 24 horas que causa danos ou morte de dose nica ou exposio. O ensaio de toxicidade aguda pode ser definido como aquele que avalia os efeitos, em geral severos e rpidos, sofridos pelos organismos expostos ao agente qumico, em um curto perodo de tempo, geralmente de um a quatro dias (ARAGO e ARAJO, 2006). Testes de toxicidade aguda so experimentos de curta durao que proporcionam rpidas respostas na estimativa dos efeitos txicos letais de produtos qumicos sobre organismos aquticos. Seu principal objetivo determinar as concentraes letais mdias (CL50) em tempo reduzido de exposio, que geralmente varia entre 24 a 96 horas. A CL 50 definida e padronizada como a concentrao do agente txico que causa 50% de mortalidade na populao de organismos submetidos ao teste. Os testes desta natureza disponibilizam informaes bsicas para outros estudos mais criteriosos como os testes de toxicidade crnica e avaliao de risco ecotoxicolgico (LOMBARDI, 2007). Devido facilidade de execuo, curta durao e baixo custo, os ensaios de toxicidade aguda foram os primeiros a serem desenvolvidos e, portanto, constituem a base de dados ecotoxicolgicos. Segundo van Leeuwen (1988a apud Arago e Arajo, 2006), nos ensaios de toxicidade aguda usualmente os critrios de avaliao so a mortalidade e a imobilidade dos organismos-teste; sendo que no geral, observa-se a mortalidade para peixes e a imobilidade para invertebrados, isto porque so critrios de fcil determinao e tem significado biolgico e ecolgico para o ambiente. 3.4.2 - Teste de toxicidade crnica Na dcada de 1960, a necessidade de avaliar, mais acuradamente, o potencial de risco de substncias txicas biota aqutica em longo prazo proporciona o desenvolvimento de testes de toxicidade crnica.
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Um teste de toxicidade crnica compreende um mtodo de teste usado para determinar a concentrao de substncia que produza um efeito adverso em um organismo teste aps um extenso perodo de tempo (PANKRATZ, 2001). Toxicidade crnica definida por Yu (2005) como sendo a toxicidade de um determinado material em um perodo superior a 24 horas, usualmente, aps vrias semanas de exposio. Testes de toxicidade crnica so experimentos de longa durao, que visam ao estudo dos efeitos no letais nos organismos aquticos, a partir da sua exposio prolongada a concentraes sub-letais. Estes efeitos so geralmente avaliados atravs de anlises especficas (histolgicas, hematolgicas, comportamentais, etc.), utilizadas para a deteco de alteraes crnicas, tais como: distrbios fisiolgicos, deformidades em tecidos somticos e/ou gamticos, alteraes no crescimento e reproduo do organismo, dentre outras. A avaliao de risco ecotoxicolgico consiste basicamente na comparao entre as concentraes letais medias (CL50) e/ou crnicas de um determinado xenobitico para diversos grupos de organismos aquticos e as suas concentraes ambientais esperadas (CAE) (LOMBARDI, 2007). Em princpio os testes de toxicidade crnica baseavam-se na durao do ciclo de vida completo do organismo, o que implicava em ensaios muito onerosos. Fato este que levou ao desenvolvimento de novos tipos de ensaios como os que contemplavam parte do ciclo de vida ou os estgios iniciais de vida dos organismos-teste, tais como aqueles que contemplam perodos crticos da vida do organismo (embries, larvas, jovens) e conseqentemente gastam menos tempo de exposio tornando-os mais acessveis (ARAGO e ARAJO, 2006). Os ensaios de toxicidade crnica so descritos por van Leeuwen (1988b apud ARAGO e ARAJO, 2006) sob trs variaes: Testes com todo o ciclo de vida de uma espcie; Testes com parte do ciclo de vida de uma espcie, no qual geralmente se utilizam os estgios de vida mais sensveis ou crticos; Testes funcionais, nos quais so feitas medidas dos efeitos de substancias sobre vrias funes fisiolgicas dos organismos. De acordo Cooney (1995), nos testes com ciclos de vida completos os organismos-teste so expostos a diversas concentraes da substncia-teste. Os testes se iniciam com os ovos e 13
continuam at a reproduo desses organismos. Determina-se assim a faixa de concentraes da substncia que causa efeitos adversos significativos na sobrevivncia, crescimento e reproduo dos organismos comparados ao controle. Os testes com parte de vida do organismo utilizam em geral as fases de vida mais sensveis do organismo, que normalmente, so as fases iniciais do seu desenvolvimento. Estes consistem na exposio inicial de larvas ou jovens do organismo a uma srie de concentraes da substncia-teste, permitindo assim extrapolar os efeitos sobre o crescimento, sobrevivncia e reproduo dos organismos (McKIM, 1977). Os ensaios de toxicidade crnica mais difundidos mundialmente so os com Daphnia sp, com durao de 21 dias, e com Ceriodaphnia sp, de 7 dias de durao. Esse ltimo tem sido mais utilizado para avaliao de toxicidade crnica de amostras ambientais (gua e efluentes lquidos), enquanto o teste com Daphnia mais utilizado para a avaliao da toxicidade de novas formulaes qumicas (ARAGO e ARAJO, 2006).
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4 - METODOLOGIA
Esta pesquisa de natureza aplicada, abordando o problema de forma qualitativa. Para a realizao dos objetivos propostos neste projeto de pesquisa foram adotados os seguintes procedimentos: Reviso bibliogrfica dos documentos balizadores da fiscalizao ambiental de regulamentao de lanamentos de efluentes; Reviso da literatura apresentando o estado da arte dos ensaios de ecotoxicidade aplicados a efluentes industriais; Investigao de mtodos com organismos e sua aplicabilidade anlise de efluentes industriais. O estudo foi desenvolvido com base em informaes secundrias disponveis (bancos de dados oficiais, universidades, centros de pesquisas, entre outros). Um extenso levantamento bibliogrfico foi realizado para apontar as espcies e grupos de organismos testes utilizados com maior freqncia nos laboratrios, demonstrando quais espcies j foram conduzidos e aquelas que possuem potencial para estudos ecotoxicolgicos com efluentes industriais. As bases de dados utilizadas foram o Compendex on Engineering Village, Isi Web of Knowledge, Web of Science, Scopus TM e Portal CAPES. Alm disso, foram feitas visitas as bibliotecas da Escola de Engenharia, do Instituto de Cincias Biolgicas e da Biblioteca Central da Universidade Federal de Minas Gerais. Outras fontes importantes de informao bibliogrfica foram endereos eletrnicos da Agncia Europia de Meio Ambiente (EEA), da Agncia Americana de Proteo Ambiental (USEPA), da Agncia Canadense de Meio Ambiente (Environmental Canada), da Organizao para cooperao e desenvolvimento econmico (OECD) da MicroBio Tests Inc. (Blgica), do Ministrio do Meio Ambiente (MMA - Brasil), e do Sistema Estadual de Meio Ambiente (SISEMA - MG). Foram priorizados assuntos que abordavam testes agudos, testes crnicos, testes simples e eficazes para a deteco de substncias poluentes em efluentes industriais.
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5 - RESULTADOS E DISCUSSO
5.1 - Legislao e normalizao pertinente
Em decorrncia dos inmeros atos predatrios que o homem veio cometendo para com o meio ambiente, e no intuito de refrear tais atitudes, a partir das dcadas de 70, 80 e 90, os Governos passaram a se preocupar com meios legais de defesa contra a degradao ambiental. Na instncia Federal do Brasil a Lei n. 6.938, de 31 de agosto de 1981, prope consideraes para assegurar a preservao, melhoria e recuperao da qualidade ambiental atravs da racionalizao dos usos do meio ambiente, do controle e zoneamento das atividades potencialmente poluidoras e o estabelecimento de padres de qualidade ambiental. Neste contexto, dando seqncia aos esforos internacionais para a preservao ambiental, o Governo do Brasil, de forma inovadora promulgou na Constituio Federal de 1988, todo um Captulo ao Meio Ambiente, e imps como obrigao da sociedade e do prprio Estado, a preservao e defesa do Meio Ambiente. Em decorrncia da publicao da Constituio Federal de 1988, todo um aparato legal para a proteo do meio ambiente e regulamentao de atividades potencialmente poluidoras fo i iniciado. Em 8 de janeiro de 1997, a Lei n. 9.433 publicada e instituda a Poltica Nacional de Recursos Hdricos no Brasil. Nos seus artigos 9 e 10, mais especificamente, trata do enquadramento dos corpos de guas em classes, ratifica que cabe legislao ambiental estabelecer as classes de corpos de gua para proceder ao enquadramento dos recursos hdricos segundo os usos preponderantes. Deste modo, as especificaes dos limites de emisso de efluentes encontram-se na Resoluo n. 357 do Conselho Nacional de Meio Ambiente-CONAMA (BRASIL, 2005), atravs dos padres para o enquadramento de corpos receptores; j a incluso de critrios ecotoxicolgicos aparece claramente na Resoluo n. 396 do CONAMA (BRASIL, 2008) que dispe sobre a classificao e diretrizes ambientais para o enquadramento das guas subterrneas, no seu artigo 2, inciso II, que traz a definio de anlise toxicolgica remetendo ao emprego de ensaios com organismos vivos e tambm os ensaios qumicos e bioqumicos como mtodo de prevenir a poluio destes ambientes aquticos; no inciso XVII a definio de teste de toxicidade, os mtodos biolgicos para deteco da toxicidade na biota aqutica.
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Bem como no seu artigo 13, 4, explicita que as avaliaes de qualidade das guas subterrneas devem ser complementadas com anlises toxicolgicas, assim a integridade ambiental destes ecossistemas pode ser atestada mais realisticamente. O texto constitucional de 1988 d competncia legislativa da Unio, dos Estados e Municpios, quanto matria ambiental. Ela concorrente, ou seja, a competncia entre Unio e os Estados e os Municpios para legislar sobre a defesa do meio ambiente, cabendo Unio estabelecer normas gerais e aos Estados e Municpios suplementa-las. Assim as regulamentaes dos demais entes federativos so realizadas a partir das Secretarias, Fundaes ou Conselhos do Meio Ambiente, norteadas pelos critrios e ou resolues nacionais. So regulamentaes que merecem destaque as resolues dos estados de So Paulo, Santa Catarina, Rio Grande do Sul, Paran, Minas Gerais que de forma prtica e real aplicam s diretrizes normativas os conceitos de avaliao ecotoxicolgica como um dos critrios determinantes da regularizao de um efluente industrial para ser lanado nas colees hdricas. No Estado de So Paulo, o monitoramento ambiental fica a cargo da CETESB. Nesta instituio o controle ecotoxicolgico de efluentes lquidos foi implantado em meados dos anos 90. A resoluo SMA 03/2000 impulsionou o aperfeioamento deste controle e os ensaios de toxicidade passaram a ser realizados tambm em casos de mortandade de peixes, em acidentes ambientais. No estado de Santa Catarina, o emprego de anlises ecotoxicolgicas teve inicio em 1997, atravs da FATMA, no mbito do Projeto FATMA/GTZ (1997/2003). O projeto foi desenvolvido no Municpio de Joinville, maior plo industrial do Estado. Mais especificamente, a portaria n. 017 de 18 de abril de 2002 da FATMA de Santa Catarina estabelece o limite mximo de toxicidade aguda para efluentes de diferentes origens, e resolve que as substncias existentes em um efluente no podero causar ou possuir potencial causador de efeitos txicos capazes de provocar alteraes no comportamento e fisiologia dos organismos aquticos presentes no corpo receptor, bem como, descreve a necessidade de utilizao de testes ecotoxicolgicos padronizados para expressar a toxicidade de um efluente, alm de listar uma srie de limites mximos de toxicidade aguda de efluentes de diferentes
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categorias industriais para com dois tipos distintos de mtodos de ensaio ecotoxicolgicos: toxicidade aguda para Daphnia magna e toxicidade aguda para Vibrio fischeri. No Paran, os ensaios ecotoxicolgicos e monitoramento ambiental so promovidos pelo IAP. Estes ensaios so utilizados para o automonitoramento industrial, segundo a portaria IAP n019 de 10 de fevereiro de 2006; alm tambm da utilizao dos ensaios biolgicos para o monitoramento da qualidade das guas superficiais, avaliao integrada da qualidade da gua; como tambm no monitoramento de acidentes ambientais. A avaliao ecotoxicolgica no estado do Rio Grande do Sul iniciou-se 1982. J em 1984 a secretaria da Sade e Meio Ambiente realizava ensaios biolgicos para deteco de genotoxicidade, mas atravs do convnio firmado com a FEPAM e GTZ em 1992 foram implantadas quatro tcnicas voltadas a avaliao da qualidade de efluentes industriais. A resoluo de n. 128 de 24 de novembro de 2006 do CONSEMA do Rio Grande do Sul dispem sobre a fixao de padres de emisso de efluentes lquidos para fontes de emisso que lancem seus efluentes em guas superficiais no Estado do Rio Grande do Sul. Adota como princpio a necessidade de preservar a qualidade ambiental, a sade pblica e dos recursos naturais no Estado. Amplia as restries e readequar formas de controle e fiscalizao de atividades geradoras de efluentes passiveis de causar a poluio hdrica, conjugando os parmetros da Resoluo n. 357 de 17 de maro de 2005 do CONAMA e da Portaria n. 518 de 25 de maro de 2004 do Ministrio da Sade incluindo os testes ecotoxicolgicos como mtodos de deteco de novas formas de poluio e da ao acumulativa de poluentes nos ecossistemas. J a Resoluo n. 129 de 24 de novembro de 2006, tambm do CONSEMA do Rio Grande do Sul dispe sobre a definio de critrios e padres de emisso para toxicidade de efluentes lquidos lanados em guas superficiais do Estado do Rio Grande do Sul, uma forma, mas efetiva de aplicar as avaliaes de ecotoxicidade de efluentes com a qualidade de efluente, distino de tipos de efluentes, a ser lanado nas guas superficiais no territrio rio grandense. Em Minas Gerais, a Deliberao Normativa Conjunta COPAM / CERH n01 de 01 de maio de 2008, que dispe sobre a classificao dos corpos de gua e diretrizes ambientais para o seu enquadramento, bem como estabelece as condies e padres de lanamento de efluentes. Faz se meno de destaque ao Captulo V, artigo 29, pargrafos 1, 2; os quais descrevem o emprego de mtodos biolgicos para a avaliao de toxicidade de efluentes e que devem ser
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utilizados ensaios ecotoxicolgicos j padronizados e indicados pelo rgo ambiental competente para assegurar o correto lanamento de efluentes nas colees hdricas do estado. Internacionalmente a regulamentao de mtodos biolgicos para a avaliao de toxicidade de um efluente no muito clara. Ocorrem variaes de acordo com a localizao e com o grau de amadurecimento das polticas pblicas em que se encontra cada pas para com a questo ambiental. O uso de testes com organismos vivos amplamente utilizado em pases da Europa e nos Estados Unidos, tendo por base a legislao ambiental. Em geral estes pases adotam os testes que passaram por normalizao e ou padronizao de ensaios realizada por entidades e ou institutos nacionais de normalizao. Na Alemanha, por exemplo, a regulamentao do lanamento de efluentes industriais e municipais definida na WHG ( Wasserhaushaltsgesetz), a Lei do Balano de gua, a qual segue a Regulamentao Geral Administrativa para os efluentes de diferentes ramos industriais. Ela aplica - se tanto para efluentes com descarga direta no corpo receptor, quanto para efluentes com descarga indireta na rede coletora de esgotos, sendo que no ltimo caso, o efluente direcionado para uma ETE municipal para tratamento em conjunto com o esgoto domstico (SAR(b), 2005). Ensaios de toxicidade encontram-se padronizados nacional e internacionalmente por associaes ou organizaes de normalizao, como por exemplo: Associao Brasileira de Normas Tcnicas (ABNT); Associao Francesa de Normalizao (AFNOR); Sociedade Americana para Materiais e Testes (ASTM); Associao Americana Trabalhos com guas (AWWA); Instituto Alemo para Normalizao (DIN); Organizao Internacional para a Padronizao (ISO); Organizao para Cooperao e Desenvolvimento Econmico (OECD).
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O emprego da normalizao e da padronizao internacionalmente de bioensaios possibilita a aplicao uniforme dos mtodos de teste mundialmente, assegurando resultados comparveis dentre os diversos laboratrios. De acordo com Ohio EPA-Division of Surface Water (1998), o biomonitoramento destinado a avaliar um impacto ou impacto em potencial que o despejo de efluentes (esgotos) na vida aqutica utilizando mtodos biolgicos. Deste modo os pressupostos de biomonitoramento podem vir a ser definidos de duas formas: Avaliao da toxicidade de um efluente por testes toxicolgicos; Avaliao do impacto de um efluente atravs da investigao das comunidades de entorno aos pontos de lanamentos. A Tabela 5.1, a seguir, retrata os mtodos de ensaios biolgicos padronizados por entidades internacionais mais utilizados no universo acadmico.
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Tabela 5.1 - Mtodos de ensaio biolgico padronizados internacionalmente para avaliao de toxicidade de efluentes industriais.
Entidade Normalizadora Tipo de Teste Toxicidade Aguda: 2002.0 Ceriodaphnia dbia Toxicidade Aguda: 2021.0 Daphnia puplex e Daphnia magna Toxicidade Aguda: 2000.0 Pimephales promelas e Cyprinella leedsi Toxicidade Aguda: 2019.0 Oncorhynchus mykiss e Salvelinus fontinalis Toxicidade Aguda: 2007.0 Mysidopsis bahia Toxicidade Aguda: 2004.0 Cyprinodon variegatus Toxicidade Aguda: 2006.0 Menidia beryllina, Menidia menidia,e Menidia peninsulae Toxicidade Crnica: 1000.0 Pimephales promelas, sobrevivencia larval e crescimento. Toxicidade Crnica:1001.0 Pimephales promelas, sobrevivencia embriolarval e teratogenicidade. Toxicidade Crnica: 1002.0 Ceriodaphnia dubia, sobrevivencia e reproduo. Toxicidade Crnica:1003.0 Selenastrum capricornutum, crescimento. Toxicidade Crnica: 1004.0 Cyprinodon variegatus, sobrevivencia larval e crescimento. Toxicidade Crnica:1005.0 Cyprinodon variegatus, sobrevivencia embriolarval e teratogenicidade. Toxicidade Crnica: 1006.0 Menidia beryllina,sobrevivencia larval e crescimento. Toxicidade Crnica: 1007.0 Mysidopsis bahia, sobrevivencia, crescimento,e fecundidade. Toxicidade Crnica: 1008.0 Arbacia punctulata, fertilizao. Teste de Inibio do crescimento algal, espcies Desmodesmus subspicatus, Pseudokirchneriella subcapitata: OECD 201 Teste de toxicidade aguda, espcie Daphnia magna STRAUS, Daphnia pulex: OECD 202 Teste de toxicidade aguda, espcies Danio rerio, Pimephales promelas, Cyprinus carpio, Orizias latipes, Poecilia reticulata, Lepomis macrochirus, Oncorhynchus mykiss: OECD 203 Teste de toxicidade prolongada, especies Danio rerio, Pimephales promelas, Cyprinus carpio, Orizias latipes, Poecilia reticulata, Lepomis macrochirus, Oncorhynchus mykiss: OECD 204 Teste Primeiro estgio de vida, especie Danio rerio: OECD 210 Teste reproduo, espcie Daphnia magna STRAUS: OECD 211 Teste de toxicidade a curto prazo em embries de peixes, espcies Danio rerio, Oncorhynchus mykiss, Cyprinus carpio, Pimephales promelas,Orizias latipes: OECD 212 Teste de crescimento jovenil em peixes, OECD 215 Teste de toxicidade de sedimento - gua com Chinonomideos, usando sedimento cravado, OECD 218 Teste de toxicidade de sedimento - gua com Chinonomideos, usando a gua cravada, OECD 219 Continua...
USEPA
OECD
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...Continuao Entidade Normalizadora
Tipo de Teste Teste de inibio do crescimento, Lemna sp; espcies Lemna minor e Lemna gibba, OECD 221 Teste de inibio do crescimento algal, espcies Pseudokirchneriella subcapitata e Desmodesmus subspicatus, ISO8692 Teste de toxicidade Aguda, imobilizao, Daphnia sp, espcie Daphnia magna, ISO6341 Teste de toxicidade Aguda em peixes, espcies Brachydanio rerio, Pimephales promelas, Orizias latipes, Poecilia reticulata, ISO Lepomis macrochirus, ISO7346, partes 1, 2, 3. Teste de toxicidade prolongada em peixes: 14 dias, espcie Oncorhynchus mykiss, ISO10229 Teste de reproduo, Daphnia magna STRAUS, ISO10706 Teste de toxicidade a curto prazo em embries de peixes, espcie Danio rerio, ISO12890 Teste de inibio de crescimento, Lemna sp, espcie Lemna minor, ISO20079 Teste de toxicidade aguda, letalidade, em peixes, espcie Oncorhynchus mykiss. Teste de toxicidade aguda, letalidade em microcrustceos, especies Daphnia sp. Environment Canad Teste de reproduo e sobrevivncia usando cladoceros, espcie: Ceriodaphnia dubia Teste de crescimento larval e sobrevivncia usando peixes, espcie: Pimephales promelas. Teste de inibio de crescimento algal, espcie: Pseudokirchneriella subcapitata. Ensaio com algas Toxicidade aguda em Daphnia sp FDA Toxicidade crnica em Daphnia sp. Teste de toxicidade aguda em Hyalella azteca. Teste de toxicidade aguda em peixes de gua doce Teste de toxicidade a curto prazo em larvas de moluscos,8610C. Teste de toxicidade aguda para Daphnia, Daphnia magna e Daphnia pules, 8711C-1. Standard Methods(APHA) Teste de toxicidade a longo prazo com Daphnia, espcies: Daphnia magna, Daphnia pulex, 8711C-2. Teste de toxicidade aguda com Ceriodaphnia, espcie: Ceriodaphnia dubia, 8712C.1. Teste de toxicidade crnica a curto prazo com Ceriodaphnia., espcie: Ceriodaphnia dubia, 8712C.2. Continua...
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...Continuao Entidade Normalizadora
Tipo de Teste Teste de toxicidade com Misidios, curto prazo, espcies Neomysis mercedis, Americamysis almyra, 8714C-1. Teste de toxicidade com Misidios, ciclo de vida, espcies Holmesimysis costata, Americamysis bahia, Americamysis bigelowi, 8714C-2. Tetes de toxicidade com Decpodos, usando larvas ou ps larvas de carangueijos ou camares, 8740C-1 Teste de toxicidade com Decpodos, esttico, primeiros estagios de vida, 8740C-2. Teste de toxicidade com Decpodos, a longo prazo em sistemas defluxo de exposio, 8740C-3. Teste de toxicidade com Decpodos, usando larvas e ps larvas da lagosta americana, 8740C-4. Teste de toxicidade com insetos aquticos, procedimentos para Hexagenia sp, espcies Hexagenia bilineata, Hexagenia limbata, Hexagenia rigida, 8750C-3. Teste de toxicidade com insetos aquticos, procedimentos para Chironomus sp, espcies Chironomus plumosus, Chironomus attenuatus, Chironomus tetans, Chironomus californicus, 8750C-4 Teste de toxicidade aguda a curto prazo com peixes, espcie Pimephales promelas, 8921C-1. Standard Methods(APHA) Teste de toxicidade crnica a curto prazo com peixes, espcie Pimephales promelas, 8921C-2. Teste de toxicidade primeiros estagios de vida em peixes, espcie Pimephales promelas, 8921C-3. Teste de toxicidade ciclo reprodutivo de vida em peixes, espcie Pimephales promelas, 8921C-4. Teste de citotoxicidade, teste de Ames, espcie: Salmonella typhimuriu, 8030B. Teste de inibio de bioluminescncia em bactrias, Vibrio fisheri, 8050B. Teste de bioestimulao, produtividade algal, espcies: Selenastrum capricornutum, Dunaliella tertioleca, Thalassiosira pseudonana, 8111. Teste de toxicidada ao fitoplancton, espcie: Macroscystis pyrifera, 8113C. Teste de toxicidade inibio de crescimento, Lemna minor, 8211C. Teste de inibio de crescimento em ciliados, espcie Colpidium campylum, 8310B. Teste quimiosttico com ciliados, espcie Tetrahymena thermophila, 8310C. Teste de toxicidade aqutica com rotferos, espcies Brachionus calyciflorus, Brachionus rubens, Brachionus patulus, Brachionus plicatilis, Asplanchna brightwelli, Philodina roseola, Philodina acutiocornis, 8420C. Concluso
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5.2 - Seleo de mtodos de ensaio

5.2.1 - Critrios para seleo de organismos aquticos De acordo com APHA, AWWA e WEF (2005), os requerimentos mais importantes para designar um programa de testes de toxicidade so a definies dos objetivos do estudo e o estabelecimento de prticas de controle de qualidade para assegurar que os dados so de qualidade suficiente para alcanarem os objetivos pr-definidos e promover sua credibilidade. O primeiro princpio bsico na escolha de organismos-teste refere-se sensibilidade: preciso que a espcie seja bastante sensvel a uma diversidade de agentes qumicos. Esta deve ser relativamente constante, de maneira que possibilite a obteno de resultados precisos, garantindo, assim, boa exatido e reprodutibilidade dos resultados. Portanto torna-se necessrio o conhecimento prvio da biologia da espcie, como reproduo, hbitos alimentares, fisiologia e comportamento, tanto para o cultivo quanto para a realizao dos testes. Alm disso, o uso de espcies de pequeno porte e ciclo de vida no muito longo se mostra ideal aos estudos ecotoxicolgicos em laboratrio (DOMINGUES e BERTOLETTI, 2006). Bioensaios com indicadores de ciclo de vida curtos so de interesse em todas as perspectivas ecolgicas, particularmente quando testam amostras instveis como efluentes. Existem diversos seres que podem ser utilizados como bioindicadores, sendo que a fcil manipulao e a rapidez na realizao de um ensaio so pontos chave para sua aplicao principalmente no mbito de mercado. Testes de toxicidade so desejveis em avaliaes da qualidade da gua porque os mtodos analticos fsico-qumicos isolados no so suficientes para mensurar os efeitos potenciais de compostos sintticos sobre a biota. De acordo com Rand e Petroceli (1985) a espcie utilizada no teste deve ser sensvel e ecologicamente representativa do ambiente; que o teste seja o mais realstico possvel, de fcil realizao, de baixo custo; que os resultados dos ensaios sejam facilmente quantificveis atravs de interpolao grfica e anlise estatstica; que os dados obtidos sejam teis para a avaliao de risco; e que os resultados obtidos nos testes laboratoriais possam predizer, com a maior exatido possvel, os efeitos ambientais de determinado poluente. Knie e Lopes (2004) afirmam que os critrios mais usuais de seleo de testes ecotoxicolgicos envolvem a identificao de organismos que sejam, desde o ponto de vista ecossistmico, representantes tpicos dos grupos mais importantes da biocenose aqutica, 24
levando em considerao os diferentes nveis trficos. Segundo os mesmos autores, tem-se que os critrios de seleo de organismos indicadores so balizados por espcies presentes no pas ou na regio mais prxima, bem como, aspectos prticos tais como a facilidade de manejo e da cultura destes em laboratrios. Para Domingues e Bertoletti (2006), um critrio muito importante a disponibilidade de organismos. As espcies presentes em pocas restritas e em pequeno nmero devem ser desconsideradas em favor daquelas abundantes e disponveis ao longo do ano. Como os testes so realizados para avaliar o efeito de determinado poluente ao ambiente, deve-se dar preferncia a espcies autctones ou representativas do ecossistema em estudo, ou seja, a espcie deve exercer papel importante no que se refere estrutura e funcionamento das biocenoses, alm de ter, preferencialmente, importncia comercial. Os ensaios de toxicidade desenvolvidos em condies laboratoriais devem utilizar sempre espcies representativas da coluna d gua, uma vez que esses ensaios tm sido os mais utilizados em estudos para avaliao da toxicidade de substncias qumicas, efluentes e guas superficiais (ARAGO e ARAJO, 2006). No existe uma espcie que atenda a todos esses requisitos para todos os ecossistemas, no entanto, tambm se recomenda a utilizao de um gnero do fitoplancton, um do zooplancton e outro do grupo dos peixes, nveis estes representativos de qualquer ambiente aqutico (DOMINGUES e BERTOLETTI, 2006). Embora detalhes especficos dos ensaios de toxicidade com diferentes espcies de organismos possam diferir entre si, o princpio bsico para todos semelhante e requer condies ambientais especficas, como pH, temperatura, oxignio dissolvido, dureza da gua, fotoperodo, durao do teste, etc. Nos mtodos de ensaios biolgicos, os organismos-teste (peixes, microcrustceos, algas, dentre outros) so expostos a vrias concentraes da amostra a ser testada (substncia qumica, efluente, extratos aquosos) em solues contidas nos frascos-teste (por exemplo, cubas de vidro, aqurios, tubos de ensaios, bqueres, etc.), por determinado perodo de tempo. Em todos os ensaios so utilizados frascos-controle (somente com a gua de diluio), nos quais se avalia a viabilidade do lote dos organismos expostos. Aps o perodo de testes verifica (m)-se efeitos(s) da amostra sobre alguns parmetros biolgicos, como mortalidade, crescimento, reproduo, comportamento dos organismos, dentre outros. Os efeitos so 25
analisados estatisticamente e os resultados so expressos em unidades numricas, tais como concentrao letal inicial mediana (CL50), concentrao efetiva inicial mediana (CE50) e concentrao de efeito no observado (CENO) (ARAGO e ARAJO, 2006). Os critrios decisivos da escolha das mesmas espcies so, sobre tudo, as boas experincias de seu manuseio e a sua importncia na cadeia alimentar, bem como a sua ampla disseminao e fcil disponibilidade (KNIE e LOPES, 2004; APHA; AWWA e WPCF, 2005; ZAGATTO e BERTOLETTI, 2006). Assim, a seleo de tcnicas avaliadas procurou reunir o conjunto de informaes obtidas segundo o melhor desenvolvimento e o continuo aperfeioamento de processos tcnicos e metodolgicos; a facilidade e a aplicabilidade uniforme dos bioensaios e sua divulgao atravs das orientaes normalizadas e descritivas sobre os mtodos ecotoxicolgicos destinados a anlise de efluentes industriais. 5.2.2 - Testes ecotoxicolgicos identificados Os mtodos de ensaio de toxicidade normalizados por entidades de padronizao de ensaios so aqueles que apresentam maior difuso no meio cientfico, das quais se destacam a Sociedade Americana para Materiais e Testes-ASTM; o Instituto Alemo para NormalizaoDIN; a Agncia Canadense de Meio Ambiente-Environment Canada; a Organizao Internacional para Padronizao - ISO; a Organizao para cooperao e desenvolvimento econmico-OECD e a Agncia Americana de Proteo Ambiental-USEPA. Dentre os ensaios biolgicos comercializados a Tabela 5.2 apresenta um resumo dos testes ecotoxicolgicos que apresentam os melhores resultados para a deteco e quantificao da toxicidade em amostras de ecossistemas aquticos e para a avaliao de guas residurias como um todo. A Tabela 5.3 apresenta mtodos de ensaio de toxicidade normalizados por entidades de padronizao no Brasil.
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Tabela 5.2 - Coletnea de testes ecotoxicolgicos comercializados para bioensaios para avaliao de ecossistemas aquticos e de efluentes como um todo
Nvel Trfico Tipo de teste
Agudo Agudo Agudo Consumidores Agudo Agudo Agudo Agudo Agudo Decompositores Produtores Agudo Crnico curto Crnico curto Crnico curto Consumidores Decompositores Crnico curto Crnico curto
Critrio teste
Mortalidade Mortalidade Mortalidade Mortalidade Mortalidade Mortalidade Imobilidade/Mortalidade Inibio parcial motilidade Inibio da luminescncia Inibio do Crescimento Inibio do Crescimento Reprodutibilidade Mortalidade - Inibio do crescimento Inibio do Crescimento
Durao
24h 24 - 48h 24h 24h 24h 24h 24 - 48h 15 - 60min 15 - 30 min 72h 72h 48h 6 dias 24h
Organismos - teste
Brachionus calyciflorus Brachionus plicatilis Artemia salina Daphnia pulex Ceriodaphnia dubia Thamnocephalus platyurus Daphnia magna Thamnocephalus platyurus Vibrio fischeri Phaeodactylum tricornutum Pseudokirchneriella subcapitata Brachionus calyciflorus Heterocypris incongruens Tetrahymena thermophila
Fonte: adaptado de Microbio, 2007. Tabela 5.3 - Mtodos de ensaio de toxicidade normalizado por entidades do Brasil.
Entidade normalizadora Tipo de teste
NBR15088.Toxicidade aguda - Mtodo de ensaio com peixes. NBR12713. Toxicidade aguda - Mtodo de ensaio com Daphnia spp (Crustacea, Cladocera). NBR13373. Toxicidade crnica - Mtodo de ensaio com Ceriodaphnia spp (Crustacea, Cladocera).
ABNT
NBR12648. Toxicidade crnica - Mtodo de ensaio com algas (Chlorophyceae). NBR 15308. Toxicidade aguda - Mtodo de ensaio com misidceos (Crustacea). NBR15350.Toxicidade crnica de curta durao - Mtodo de ensaio com ourio-do-mar (Echinodermata: Echinoidea). NBR12716. Ensaio de toxicidade aguda com peixes - Parte III - Sistema de fluxo contnuo L5.018. Teste de toxicidade aguda com Daphnia similis Claus, 1879(Cladocera, Crustacea) L5.019. Teste de toxicidade aguda com peixes. Parte I - sistema esttico. L5.019. Teste de toxicidade aguda com peixes. Parte II - sistema semi esttico. L5.019. Teste de toxicidade aguda com peixes. Parte III - sistema de fluxo contnuo. L5.020. Teste de toxicidade com Chlorella vulgaris.
CETESB
L5.022. Avaliao de toxicidade crnica, utilizando Ceriodaphnia dubia Richard, 1894 (Cladocera, Crustcea) L5.025. gua: teste para avaliao de toxicidade aguda de cianofceas (algas azuis) L5.227. Teste de toxicidade com a bactria luminescente Vibrio fischeri: mtodo de ensaio L5.228. Teste de toxicidade aguda utilizando spirillum volutans: mtodo de ensaio. L5.250.gua do mar: teste de toxicidade crnica de curta durao com lytechinus variegatus LAMARCK, 1816 (enchinodermata: echinoidea) L5.251. gua do mar: teste de toxicidade aguda com Mysidopsis juniae Silva, 1979 (crustacea: mysidacea)
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5.2.2.1 - Organismos aquticos mais utilizados em ensaios ecotoxicolgicos Constituem se organismos-teste utilizados em mtodos de ensaios biolgicos desde os anos 50 e 60 as bactrias Pseudomonas putida e a partir do final dos anos 70, as fotobactrias Vibrio fischeri, as algas Scenedesmus subsicatus e Selenastrum capricornutum, os microcrustceos Daphnia magna e Ceriodaphnia dbia e peixes como Danio rerio, Pimephales promelas, Leuciscus idus ou Poecilia reticulata, dentre outros (KNIE e LOPES, 2004). A Tabela 5.4 representa uma coletnea de organismos - teste que so utilizados em ensaios ecotoxicolgicos de avaliao de efluentes industriais. Dentre estes organismos faz - se destaque aos que esto padronizados internacionalmente e no Brasil, alm de serem os mais citados junto s referncias pesquisadas, como as algas Chlorella vulgaris, Scenedesmus subspicatus e Pseudokirchneriella subcaptata, os microcrustceos Daphnia Similis, Daphnia magna e Ceriodaphnia dubia e Ceriodaphnia silvestrii, os peixes Danio rerio e Pimephales promelas e a bactria luminescente Vibrio Fischeri.
Tabela 5.4 - Coletnea de organismosteste mais utilizados nos bioensaios para avaliao toxicolgica de efluentes industriais.
Organismos teste usados em bioensaios de toxicidade Acanthocyclops robustus Artemia salina Asellus aquaticus Biomphalaria tenagophila Brachionus calyciflorus Brachionus plicatilis Ceriodaphnia dubia Ceriodaphnia silvestrii Chironomus riparius Chironomus riparius Chlamydomonas reinhardi Clorella sp Cnesterodon decemmaculatum Coliformes e floco bacteriano Crassostrea rhizophorae Danio rerio Daphnia ambgua Daphnia magna Daphnia pulex Daphnia similis Daphnia spinulata Enterobacter aerogenes Euglena gracilis Gammarus pulex Hyalella curvispina Hydra oligactis Lemna minor Onchorynchus mykiss Oryzias latipes Pimephales promelas Placopecten magellanicus Poecilia reticulata Pseudokirchneriella subcapitata Saccharomyces cerevisiae Salmonella typhimurium Scenedesmus quadricauda Scenedesmus subspicatus Selanastrum capricornutum Tetrahymena pyriformis Tetrahymena thermophila Thamnocephalus platyrus Vibrio fisheri Vorticella sp
Fonte: adaptado de ANKLEY et. al. 2006, BRETANO, 2006; DI MARZIO et. al. 2005; LAITANO, et.al. 2006; FARR et. al. 2004; FLOHR et.al. 2005; FRACCIO, 2006; GIRLING et.al. 2000; GUERRA, 2000; GUILHERMINO et.al., 1999; HARMEL, 2004; HARMON et.al. 2003; HARTMANN, 2004; HEMMING et.al. 2002; LAHR et.al. 2003; LANZER et.al. 2007; LEBLOND et.al. 2001; MAGRIS et.al. 2007; MARTINS et.al. 2007; MENDONA et.al. 2007; MOUNT et.al. 2000; MORRALL et.al. 2003; NETO, 2000; PANE et.al. 2003; PASCOE et.al. 2000; PEREIRA et.al. 2000; RADIX et.al. 2000; SARAKINOS et.al. 1998; SCHMITT et.al. 2005; SPONZA, 2002; TAKENAKA et.al. 2007; TOTHILL et.al. 1996; VILLEGAS et.al. 1997; ZHA et.al. 2006
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De acordo com nvel trfico algumas espcies so mais usadas em testes de toxicidade, dentre estas se destacam: Algas de gua doce: Chlorella vulgaris; Scenedesmus quadricauda; Scenedesmus subspicatus; Pseudokirchnerilla subcapitata. Algas de gua marinha: Phaeodactylum tricornutum; Asterionella japonica; Dunaliella tertiolecta; Champia parvula. Microcrustceos de gua doce: Daphnia magna; Daphnia similis; Ceriodaphnia dbia; Hyalella azteca; Hyalella meinerti. Microcrustceos de gua marinha: Mysidopsis Bahia; Mysidopsis juniae; Leptocheirus plumulosus; Tiburonella viscana; Artemia salina. Moluscos de gua marinha: Mytilus edulis; Crassostrea rhizophorae. Equinodermos: Arbacia lixula; Arbacia punctulata; Lytechinus variegatus; Peixes de gua doce: Pimephales promelas; Danio rerio; Poecilia reticulata; Oncorhynchus mykiss; Lepomis macrochirus. Peixes de gua marinha: Menidia beryllina; Menidia menidia; Cyprinodon variegatus. Insetos de gua doce: Chironomus sp; Hexagenia sp. Bactrias de gua doce: Spirillum volutans; Pseudomonas fluorescens. Salmonella typhimurium. Bactrias de gua marinha: Vibrio fischeri (anteriormente denominada Photobacterium phosphoreum).
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5.3 - Mtodos de ensaio com organismos aquticos mais utilizados em testes de avaliao de toxicidade de efluentes
5.3.1 - Avaliao de toxicidade para algas As algas em um ecossistema aqutico fazem parte do grupo de produtores primrios, os seja, so base do ciclo de vida aqutico. Participam da manuteno do equilbrio destes ambientes atravs de suas funes em ciclagem de nutrientes dos ciclos biogeoqumicos, em especial nos do carbono, oxignio, nitrognio, fsforo e silcio. Tambm fazem parte da dieta de vrios outros tipos de organismos, tanto aquticos quanto terrestres. 5.3.1.1 - Teste de inibio de crescimento algal para Chlorella vulgaris (toxicidade aguda) O objetivo deste mtodo avaliar a toxicidade de agentes qumicos sobre o crescimento de cultura mono especfica de algas. Este mtodo consiste na exposio de uma cultura de uma espcie especfica de alga a vrias concentraes do agente qumico, por um perodo de exposio de 72 horas, nas condies prescritas no mtodo. Tal procedimento permite determinar a concentrao efetiva inicial mdia CE (I)50, 72h da substncia teste. O organismo - teste, em geral, utilizado neste mtodo de ensaio a Chlorella vulgaris, uma espcie de alga verde mantida em meio L.C. Oligo, em culturas axnicas 1 e condies controladas de temperatura e luminosidade. 5.3.1.2 - Teste toxicidade crnica por mtodo de ensaio com algas ( Chorophyceae) Este teste constitui um ensaio para a avaliao da toxicidade crnica de amostras de efluentes lquidos, guas continentais superficiais ou subterrneas e substncias qumicas solveis ou dispersas em guas para as microalgas Chlorella vulgaris, Scenedesmus subspicatus e Pseudokirchneriella subcaptata, anteriormente denominada de Selenastrum capricornutum. Este mtodo permite tambm determinar se a amostra exerce um efeito algicida ou algisttico sobre as clulas. O mtodo de ensaio biolgico consiste na exposio de organismos-teste a vrias diluies da amostra, por um perodo de 96h. O efeito txico determinado pela inibio do crescimento
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Cultura axnica: constituda por uma nica espcie de microrganismo, independente do nmero de indivduos, num ambiente livre de outros microrganismos (no implica em pureza gentica).
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da biomassa de algas nos recipientes - teste comparado com o controle, sob as mesmas condies de ensaio. 5.3.1.3 - Teste de inibio do crescimento e da fluorescncia de Scenedesmus subspicatus Este ensaio de natureza crnica. Nele o efeito txico determinado a partir da comparao da reproduo das algas nas diluies-teste em relao ao controle onde no h presena da amostra. O mtodo de ensaio biolgico consiste na exposio de uma suspenso com densidade conhecida do organismo-teste, juntamente com um meio nutriente, a diversas diluies da amostra, por um perodo de 96h sob condies definidas. O efeito observado a reduo da fluorescncia das algas sob presena da substncia teste, efluente diludo. Assim, possvel determinar a concentrao efetiva inicial mdia-CE (I)50, 96h em que a substncia teste impede o desenvolvimento das algas. 5.3.2 - Avaliao de toxicidade para microcrustceos Microcrustceos aqui citados so organismos planctnicos de gua doce e salgada. Atuam como consumidores primrios entre os metazorios, alimentando se por filtrao de material orgnico particulado, principalmente algas unicelulares. 5.3.2.1 - Teste de inibio da capacidade natatria de Daphnia magna Este ensaio apresenta se como teste de toxicidade aguda. O mtodo de ensaio consiste na exposio de indivduos jovens do organismo-teste por um perodo de 24h a 48h a vrias diluies de uma amostra. O efeito txico dado a partir da verificao de efeito danoso para a capacidade natatria dos organismos, mobilidade. 5.3.2.2 - Teste de toxicidade aguda para Daphnia similis O objetivo deste mtodo de teste avaliar a toxicidade aguda de agentes qumicos para o microcrustceo Daphnia similis. Este mtodo consiste na exposio de indivduos jovens de Daphnia similis a vrias concentraes do agente qumico, por um perodo de 48 horas, nas condies prescritas. Tal procedimento permite determinar a concentrao efetiva inicial mdia-CE50, 48h, da substncia teste.
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Adota se como CE50, 48h, a concentrao nominal do agente qumico no inicio do teste, que causa efeito agudo (imobilidade) a 50% dos organismos em 48 horas de exposio, nas condies teste. Neste ensaio observa-se a motilidade dos organismos. 5.3.2.3 - Teste de toxicidade crnica para Daphnia similis O objetivo deste teste avaliar a toxicidade crnica de agentes qumicos, durante a exposio de uma gerao de Daphnia similis a diferentes concentraes das substncias-teste. Este mtodo consiste na exposio de organismos jovens de Daphnia similis a vrias concentraes do agente qumico, por um perodo de 21 dias de exposio. Durante esse tempo avalia se os efeitos da substncia teste sobre a sobrevivncia, crescimento e reproduo dos organismos teste. 5.3.2.4 - Teste de avaliao da toxicidade crnica para Ceriodaphnia dubia O objetivo deste mtodo avaliar a toxicidade crnica de agentes qumicos Ceriodaphnia dubia. Sua fundamentao se d a partir da exposio de fmeas de Ceriodaphnia dubia a vrias concentraes da substncia em estudo, por sete dias, em condies definidas de teste. Ao trmino deste perodo determina se o nmero mdio de jovens produzidos
partenogenicamente, por fmea, e o nmero de fmeas adultas sobreviventes. Os resultados incluem os efeitos cinegticos, antagnicos e aditivos de todos os componentes fsicos, qumicos e biolgicos que afetam adversamente as funes fisiolgicas e bioqumicas dos organismos testes. Adota se CENO como a concentrao de efeito no observado, ou seja, a maior concentrao nominal do agente txico que no causa efeito deletrio estatisticamente significativo na sobrevivncia e reproduo dos organismos, em sete dias de exposio, nas condies de teste; e CEO como a menor concentrao nominal do agente txico que causa efeito deletrio, estatisticamente significativo, na sobrevivncia e reproduo dos organismos, em sete dias de exposio, nas condies de teste. A mdia geomtrica dos valores de CENO e de CEO chamada de valor crnico (VC).
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5.3.3 - Avaliao de toxicidade para peixes Os peixes so animais vertebrados, aquticos de gua doce e salgada que representam consumidores de ordens diversas (primrios secundrios e tercirios). Os ensaios com peixes como organismos-teste visam em geral compreender como um toxicante afeta organismos de maior grau de estruturao como os vertebrados e como estas alteraes podem afetar ciclos mais complexos de bioconcentrao, biomagnificao bioacumulao ao longo de ecossistemas aquticos. Freqentemente peixes so utilizados como indicadores ambientais por serem organismos muito estudados, por se desenvolverem bem em cultivos de laboratrio e serem de fcil observao. 5.3.3.1 - Testes de avaliao de toxicidade aguda para peixes O objetivo deste teste avaliar a toxicidade aguda de agentes qumicos para espcies de peixes. Este mtodo consiste na exposio de peixes a vrias concentraes do agente qumico, em um sistema de fluxo contnuo, por um perodo de 96 horas de exposio, nas condies prescritas. Tal procedimento permite calcular a concentrao letal inicial mdia, CL (I) 50, 96h da substncia teste. Os organismos testes mais freqentemente utilizados so espcies autctones pertencentes famlia Characidae; as espcies Pimephales promelas e Danio rerio, Brachydanio rerio da famlia
Cyprinidae e a espcie Poecilia reticulata da famlia Poecilidae.
5.3.3.2 - Teste de avaliao da toxicidade crnica para peixes O objetivo deste teste avaliar a toxicidade crnica de agentes qumicos durante os estgios larvais de peixes. Este mtodo consiste na exposio de larvas de peixes recm eclodidas a vrias concentraes do agente txico, em sistemas de fluxo contnuo, por um perodo de 7 a 28 dias de exposio. No trmino deste perodo avaliam se os efeitos deletrios da substncia - teste sobrevivncia e ou crescimento dos organismos-teste.
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Em geral faz-se a utilizao de organismos testes pertencentes s espcies Pimephales promelas e Danio rerio, Brachydanio rerio. 5.3.3.3 - Teste de avaliao da bioconcentrao em peixes O objetivo deste teste avaliar o grau de bioconcentrao de agentes qumicos em peixes. Este mtodo consiste na exposio de espcies de peixes autctones a diferentes concentraes da substncia teste durante certo perodo de tempo. O sistema de exposio pode ser esttico, sem renovao do meio, semi-esttico; renovao peridica do meio, ou de fluxo contnuo, dependendo das caractersticas qumicas da substncia teste em estudo. Intervalos regulares de amostras de gua e de organismos testes devem ser coletados para compartilhar a assimilao da substncia pelo organismo teste at a sua acumulao mxima, que atingida no estado de equilbrio. Aps esta fase, os organismos teste devem ser transferidos para uma gua de boa qualidade, isenta da substncia teste, para avaliao do grau de depurao da substncia teste bioacumulada. A partir destes dados calculado o fator de bioacumulao no estado de equilbrio e as constantes de assimilao e depurao do agente em estudo. Entende se por bioconcentrao o aumento da concentrao do agente qumico no organismo vivo em relao concentrao do agente qumico na gua; j a assimilao, o processo de absoro do agente qumico pelo organismo teste. E depurao o processo de eliminao do agente qumico do organismo teste para o meio. O fator de bioconcentrao determinado a partir da razo entre a concentrao de substncia teste no organismo, Cp, e a concentrao da mesma na gua, Ca. Estado de equilbrio a condio na qual a concentrao da substncia teste no organismo teste constante em relao ao tempo de exposio. A este mtodo se aplica as espcies de peixes de guas continentais e marinhas. No Brasil fazse a recomendao da utilizao de espcies autctones da famlia Characidae por ser esta representante de ambientes aquticos de todo o pas (ABNT, 2004b; CETESB, 2006).
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5.3.4 - Avaliao de toxicidade para bactrias Bactrias utilizadas como organismos-teste podem ser agrupadas com decompositores dentro da cadeia trfica de ecossistemas aquticos. Atuam na degradao de sustncias orgnicas resultantes de organismos mortos ou de seus metablitos em substncias mais simples, de forma que estas possam ser facilmente reassimiladas por organismos produtores e tambm pelos consumidores do tipo filtradores. Por esta razo tornam-se bons indicadores da qualidade ambiental j que um poluente ambiental, mesmo em concentraes baixas, pode ser identificado por estes organismos e com respostas em um curto intervalo de tempo. 5.3.4.1 - Teste de inibio de bioluminescncia de bactrias O ensaio biolgico de inibio de bioluminescncia de bactrias um teste de inibio metablica que utiliza uma suspenso padronizada de bactrias luminescentes como organismo-teste sob condies padronizadas. Esta metodologia de teste proporciona um rpido, confivel e conveniente meio de determinar a toxicidade aguda. O mtodo de ensaio consiste na exposio de bactrias bioluminescentes vivas, Vibrio fischeri (anteriormente denominadas Photobacterium phosphoreum), a uma amostra teste por um perodo de 15 min 2h. O efeito txico mensurado pela medio comparativa de emisso de luz de bactrias rehidratadas e liofilizado depois da exposio a uma srie de diluies especficas de uma amostra e compara se com a luz emitida de um controle branco (p.e, clulas bacterianas em suspenso em diluente apenas). O organismo-teste (Vibrio fischeri) e equipamentos de mtodo de ensaio encontram se disponveis comercialmente. O teste de bioluminescncia bacteriana tem sido validado para uma variedade de aplicaes ambientais incluindo-se monitoramento de efluente, teste de guas subterrneas, teste de sedimentos, teste de resduos perigosos e avaliao de eficincia de procedimentos de bioremediao e em geral em processos de biomonitoramento. 5.3.4.2 - Teste de citotoxicidade (Teste de Ames) O objetivo do mtodo de ensaio biolgico conhecido como teste de citotoxicidade ou teste de Ames a deteco de efeitos txicos crnicos de um poluente ambiental sobe os organismos vivos expostos aos mesmos.
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O mtodo de ensaio consiste na exposio do organismo-teste, Salmonella typhimurium (TA1535; TA1537 ou TA97a ou TA97; TA98; e TA100), a diluies da amostra teste por um perodo de 2 a 3 dias. O efeito txico pode ser detectado por uma reduo no nmero de colnias, um clareamento ou por uma diminuio do halo de fundo, ou pelo grau de sobrevivncia de culturas tratadas. 5.3.4.3 - Teste de genotoxicidade (Umu teste) O Umu teste baseado no uso da bactria geneticamente projetada Salmonella typhimurium Ta 1535 pSK1002 (gram - negativo, enterobacteria anaerbicas facultativas). O mtodo de ensaio consiste na exposio do organismo - teste a uma amostra por um perodo de 30h (1dia de preparo e 6h de exposio). O efeito txico mensurado pela medio da atividade de -galactose nas culturas de teste comparadas com o controle.
5.4 - Anlises de mtodos de ensaios empregados na avaliao ecotoxicolgica de efluentes industriais

Mtodos de ensaio biolgicos so aplicveis aos requerimentos de monitoramento rotineiro bem como aos de pesquisas em efluentes industriais atravs da aplicao de testes de toxicidade. A uniformidade regular de procedimentos e a preciso de dados so essenciais para a validao de resultados. O uso de mtodos padronizados anteriormente descritos visa garantir uniformidade adequada, reprodutibilidade, e em geral, utilidade de resultados sem demasiada interferncia com a adaptao dos testes para as circunstncias locais. A garantia de qualidade dos procedimentos para testes de toxicidade inclui todos os aspectos do teste que afetam a qualidade do dado. Estas incluem a obteno de amostras e manuseio, a fonte e a condio dos organismos teste, ao desempenho de testes de substncias de referncia, e testes de procedimentos. Garantia de qualidade ou diretrizes de controle de qualidade so disponveis para teste de composto simples e em geral para prticas
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laboratoriais e para avaliao de efluentes em manuais de diretrizes tcnicas para conduo de testes de toxicidade aguda e crnica de curta durao com efluentes. Seja qual for o organismo teste selecionado estes devem pertencer a lotes homogneos e de mesma idade, devendo ser mantidos em aclimatao por uma semana antes do incio do teste, nas mesmas condies de gua e temperatura a serem utilizadas no experimento. A alimentao deve ser interrompida 24 horas antes do inicio do teste. Os organismos devem estar livres de doenas ou malformaes, no devendo receber tratamento contra doenas durante o teste ou nas duas semanas anteriores ao mesmo. Os mtodos de ensaios apresentados representam base de testes toxicolgicos empregados na investigao de efluentes industriais, visando regulamentao de parmetros de qualidade das guas e do lanamento de efluentes sem que os mesmos causem danos aos ecossistemas aquticos receptores. Alm disso, auxiliam no processo de pesquisa e de compreenso dos caminhos de transformao e biomagnificao de substncias qumicas ao longo da cadeia trfica e suas interaes com a biocenose. Dentre os mtodos de ensaio apresentados, a Tabela 5.5 descreve um paralelo, comparao, entre os testes empregados para a avaliao ecotoxicolgica de poluentes ambientais, tais como, efluentes industriais e seus sub-compostos de degradao presentes em ambientes aquticos. Os mtodos de ensaio de toxicidade sejam testes agudos ou crnicos, para um efluente como um todo, seguem geralmente diversos protocolos padronizados que incluem uma descrio de uso e da cultura da espcie indicada como organismo-teste. Uma espcie considerada um organismo-teste quando facilmente cultivada em laboratrio e existem extensivos dados disponveis sobre a concentrao de um toxicante e as respostas ao toxicante esto relacionadas para esta espcie.
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Tabela 5.5: Comparao entre os mtodos de ensaio mais usuais na avaliao toxicolgica de efluentes industriais.
Organismo teste Tipo Agudo Algas verdes unicelulares Crnico Crnico Agudo Microcrustceos - Daphnia sp Agudo Crnico Microcrustceos - Ceriodaphnia sp Crnico Aguda Crnico Peixes Crnico Crnico Agudo Barctrias Crnico Crnico Durao do teste 72h 96h 96h 48h 48h 21 dias 7 dias 96h 7-10 dias 14-28 dias 10-14 dias 15 min - 2h 2-3 dias 30h Varivel de resposta Taxa de crescimento especfica mdia Diminuio de fluorescncia Efeito algicda ou algisttico Mobilidade(capacidade nadatria) em 24h e 48h Imobilidade de 50% ao trmino de 48h Nmero de prole, mortalidade entre os parentais Nmero de prole paternogenica,sobrevivncia de fmeas adultas Mortalidade de 100% a menor concentrao de efeito Aparencia e comportamneto anormal Mortalidade e aparencia e comportamento anormal Choque e sobrevivncia, aparencia e comportamento anormal Diminuio de bioluminescncia Reduo do nmero de colnias, sintese de histamina Reduo do nmero de colnias, sintese de - galactose Expresso de resultados CENO CE50 CE50 CE50 CE50 CENO, Cex(50, 20, 10%) CENO CL50 CL50 CENO CENO CENO CENO, Cex(50, 20, 10%) CENO, Cex(50, 20, 10%)
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5.5 - Efluentes industriais

De acordo com a Norma Brasileira-NBR 9800/87, denomina se efluente industrial todo e qualquer despejo lquido proveniente do estabelecimento industrial, compreendendo emanaes do processo industrial, as guas de refrigerao poludas, as guas pluviais poludas e o esgotamento domstico. Os efluentes industriais apresentam uma composio complexa. Suas caractersticas fsicas, qumicas e biolgicas so variveis segundo a tipologia industrial e de acordo com o tipo processo operacional adotado na indstria; com o tipo de matria prima utilizada para fabricao de seus produtos, com a adoo de sistemas de gerenciamento de produo (por exemplo: implantao de sistema de certificao como ISO 9000 e ISO 14001); ou com a implantao de sistemas de tratamento de efluentes e programas para a reduo de resduos e ou emisses (por exemplo: aplicao de programas de produo mais limpa, P+L). Deste modo, o efluente industrial pode apresentar - se como um lquido homogneo ou como um lquido com slidos em suspenso; com ou sem colorao; de natureza orgnica ou inorgnica; de temperatura elevada ou baixa; de carter cido ou de carter bsico. A toxicidade uma propriedade inerente do agente qumico que produz efeitos danosos a um organismo quando este exposto, durante certo tempo, a determinadas concentraes (BRASIL, 1987). Toxicidade a propriedade de um material produzir um efeito danoso sobre um sistema biolgico, e o agente que produz tal efeito biolgico denominado de toxicante. Toxicantes so poluentes ambientais, entram no meio ambiente por uma variedade de rotas de muitas fontes diversas. Os poluentes ambientais introduzidos no meio ambiente podem vir de duas fontes bsicas: fontes pontuais e fontes no pontuais. Descargas de fontes pontuais incluem despejo de esgotos, efluentes industriais, de locais de disposio de resduos perigosos, e derrames acidentais. Descargas pontuais so geralmente fceis de identificar em termos de tipo, o modo de lanamento, e o total equivalente de materiais lanados. Em contraste, descargas no pontuais so muito difceis de caracterizar. Estas incluem materiais lanados por emisses atmosfricas, escoamento superficial agrcola, solos contaminados e sedimentos aquticos, e escoamentos superficial urbanos como reas de estacionamento e residenciais. Na maioria das situaes, descargas de fontes no pontuais so compostas por misturas de materiais complexos.
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Neste trabalho de investigao adotou se como efluente industrial os lquidos provenientes de instalaes industriais propriamente ditas, as guas residurias municipais que recebem efluentes industriais tratados ou no; as guas de escoamento superficiais urbanas ou agrcolas; o lixiviado produzido em aterros sanitrios urbanos ou industriais; as guas de drenagem de reas mineradas e de preenchimento de minas e caves; as solues lixiviadas de compostos orgnicos persistentes, e as amostras de gua de corpos receptores e efluentes industriais. Entre as determinaes mais comuns para se caracterizar os efluentes industriais destacam se as caractersticas fsicas (temperatura, cor, turbidez, slidos, etc.); as caractersticas qumicas (potencial hidrogeninico, pH; alcalinidade; acidez; dureza; teor de matria orgnica; presena de metais, etc.) e as caractersticas biolgicas (presena de microrganismo como bactrias, protozorios, vrus; toxicidade, etc.). A caracterizao biolgica de um efluente a partir da presena ou ausncia de toxicidade a organismos aquticos uma prtica regulamentada na Europa e em pases como o Canad e os Estados Unidos da Amrica e torna se cada vez mais usual no Brasil. Durante este estudo verificou se que esta prtica aplica-se aos mais diversos tipos de efluentes industriais e com grupos distintos de organismos-teste. Dentre a bibliografia pesquisada destacam se as seguintes tipologias industriais: Mineira e metalrgica; Petroqumica; Txtil; Papel e celulose; Frigorfica; Curtumeira; Alm destas tipologias industriais, merecem destaque os efluentes de estaes de tratamento de guas residurias municipais e efluentes de origens diversas como as guas de escoamento superficial agrcola e de lixiviados de aterros sanitrios urbanos ou industriais.
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5.5.1 - Efluente de origem mineira e metalrgica A indstria de atividade mineira e metalrgica apresenta efluentes complexos e variveis de acordo com o tipo de matria a ser explorada, beneficiada e manufaturada; fase em que se encontra a operao e o tipo de tratamento dado aos lquidos gerados ao longo do processo industrial. Os efluentes oriundos de operaes mineiras e metalrgicas contm elementos de toxicidade variada. Dentre os seus constituintes podem ser citados lquidos contendo slidos em suspenso e uma gama variada de reagentes utilizados fundamentalmente nos processos de tratamento de minrios e posteriormente no processo metalrgico dos concentrados. Alm destes, as guas de drenagem cida de lavras, constituem em grande parte lixiviados txicos por poderem apresentar metais txicos como, por exemplo, o cobre, nquel, chumbo, zinco, mercrio, alm do ferro e nions, tais como, sulfato, fosfato, arseniato, telurato, fluoreto, molibdato, cianeto. tambm comum o derrame de leos, graxas, solventes orgnicos; slidos coloidais, espumantes, surfactantes (RBIO E TESSELE, 2002). 5.5.2 - Efluentes de origem petroqumica A indstria petroqumica envolve operaes que vo desde a extrao do petrleo at o refino, com a obteno de diferentes produtos, tais como gs liquefeito de petrleo (GLP), gasolina, leo diesel, nafta petroqumica, solventes, entre outros. De acordo com o produto que se pretende obter ocorre uma variao na composio dos efluentes gerados na indstria petroqumica bem como com o tipo de instalao em que se processam tais operaes. Os efluentes da indstria petroqumica apresentam os mesmos constituintes txicos e de difcil degradao (recalcitrantes) que o petrleo e seus derivados. So caracterizados pela presena de altas concentraes de compostos orgnicos como hidrocarbonetos aromticos policclicos, hidrocarbonetos aliflicos, compostos organoclorados, surfactantes, metais txicos. Apresentam alta variao da demanda qumica de oxignio (DQO), da alcalinidade, do potencial hidrogeninico (pH) (HARTMANN, 2004). 5.5.3 - Efluentes de origem txtil No beneficiamento txtil, que compreende as operaes de purga, mercerizao, desengomagem, alvejamento e tingimento, esto presentes as etapas do processo onde 41
gerado o maior volume de efluentes lquidos, com elevada quantidade de carga contaminante dependendo do tipo de processo operacional, matria prima utilizada e do produto final. Os efluentes lquidos da indstria txtil so txicos e geralmente no biodegradveis e tambm resistentes destruio por mtodos de tratamento fsico-qumico. A no biodegradabilidade dos efluentes txteis se deve ao alto contedo de corantes, surfactantes e aditivos que geralmente so compostos orgnicos de estruturas complexas. A composio mdia dos efluentes da indstria txtil pode ser dada por: slidos totais na faixa de 1000 a 1600 mg/l; DBO, de 200 a 600 mg/l; alcalinidade total de 300 a 900 mg/l; slidos em suspenso, de 30 a 50 mg/l. Essa caracterizao do efluente apenas define as ordens de grandeza das caractersticas dos efluentes, pois a composio do efluente dependente do processo e do tipo de fibra processada (LEO et al, 2002; LEDAKOWICZ e GONERA, 1999; SOARES, 1998; FREITAS; 2002). 5.5.4 - Efluentes de origem de papel e celulose A indstria de papel e celulose possui cinco etapas caractersticas para a obteno de seus produtos: moagem da madeira (formao de cavacos), extrao da polpa de celulose, branqueamento da polpa, lavagem da polpa e acabamento (formao da folha de papel e derivados). De acordo com o tipo de fbrica ou tipo de produto que se pretende obter estas etapas sofrem variaes, portanto, alterando tambm o tipo de efluente produzido em cada uma das fases e na totalidade da instalao industrial. Os efluentes da indstria de papel e celulose apresentam grande demanda bioqumica de oxignio (DBO), demanda qumica de oxignio (DQO), compostos clorados (medidos como haletos orgnicos adsorvidos, AOX), slidos suspensos (na maioria fibras), cidos graxos, taninos, resinas cidas, ligninas e seus derivados, compostos sulfurados, fenis, dioxinas, furanos, etc. (NETO, 2002). 5.5.5 - Efluentes de origem frigorfica A indstria frigorfica ao longo de seu processamento produz grandes volumes de efluentes gerados a partir da lavagem de carcaas, remoo de peles, plos, penas; eviscerao alm daqueles gerados pela higienizao de equipamentos e utenslios. Alm disso, os efluentes sofrem alteraes de sua formao a partir da concepo de planta industrial como a
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utilizao de recirculao de guas e tipos de tratamento dado aos efluentes gerados em cada etapa do processo produtivo. Os efluentes da indstria frigorfica so caracterizados por uma variedade de componentes orgnicos biodegradveis, primariamente gorduras e protenas, presentes tanto na forma particulada quanto dissolvida, fezes, e podem conter, ainda, uma variedade de elementos minerais presentes na gua utilizada no processamento, do sistema de abastecimento e tambm oriundos dos equipamentos utilizados no processo como cobre, molibdnio, nquel, titnio e vandio. Por seu alto teor de protena, a qual responsvel pela alta concentrao de nutrientes, principalmente nitrognio, em suas diferentes formas, apresenta altas concentraes de amnia (TEIXEIRA, 2006). 5.5.6 - Efluentes de origem curtumeira A indstria curtumeira no apresenta uma uniformidade de processo, mas uma seqncia de fases para a obteno de couros e peles pode ser identificada como caracterstica no setor. Estas fases so descritas como cura ou conservao; remolho; caleiro; desencalagem; purga; piquelagem; curtimento; e ps-curtimento. Deste modo os efluentes gerados nesta tipologia industrial sofrem grandes variaes. Os efluentes da indstria curtumeira, em geral, so caracterizados pela alta carga de matria orgnica e inorgnica, originadas das peles e dos produtos qumicos adicionados durante o processo de curtimento, apresentam elevada demanda qumica de oxignio-DQO. Dentre os compostos orgnicos destaca se a presena dos taninos, e quanto aos inorgnicos presena da alta concentrao de amnia, sulfatos, sulfetos e cromo (SCHRANK, 2003). 5.5.7 - Efluentes de origem de lixiviados de aterros sanitrios urbanos ou industriais Um aterro sanitrio uma obra de engenharia que utiliza tcnicas de disposio final de resduos slidos urbanos ou industriais no solo, atravs de confinamento em camadas cobertas com material inerte, visando evitar danos ou riscos sade e segurana, minimizando os impactos ambientais. Os efluentes lquidos gerados em aterros sanitrios so constitudos por guas de chuvas que percolam o macio de resduos, o lquido gerado pela degradao dos resduos aterrados por processos fsicos, qumicos e biolgicos, o qual se denomina de chorume. O lixiviado de aterros sanitrios constitudo por guas de chuvas que percolaram o macio e o chorume.
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Apresenta elevada carga orgnica, substncias txicas e recalcitrantes, alm de alta demanda qumica de oxignio (DQO) e de amnia (BRETANO, 2006).
5.5.8 - Efluentes de origem de escoamento superficial agrcola O escoamento superficial agrcola constitudo pelas guas de chuvas que lixiviam as reas agrcolas, pelas guas residurias provenientes da aplicao de insumos e defensivos agrcolas e rega e irrigao de culturas. Os efluentes gerados por escoamento superficial agrcola so ricos em nutrientes, compostos fenlicos, compostos orgnicos persistentes, sais, etc.
5.6 - Avaliao da toxicidade de efluentes industriais

A partir dos efluentes selecionados destaca se a utilizao de mtodos de ensaio biolgicos com microcrustceos e com bactrias bioluminescentes como os mais usuais, seguido pelo predomnio de ensaios com organismos-testes j descritos pelas normas tcnicas e instrues normativas padronizadas. A Tabela 5.6 apresenta a relao mais prxima entre organismos-testes, o mtodo de ensaio e tipologia industrial a que foram analisados os efluentes quanto capacidade de toxicidade, seja ela aguda e ou crnica, a teratogenicidade e a mutagenicidade por parte dos compostos e subprodutos da degradao dos mesmos. J a Tabela 5.7 traz uma relao de compostos qumicos ou ons metlicos que constituem frequentemente, efluentes industriais e os mtodos de ensaios e organismos-testes com os quais foram submetidos para a realizao de avaliao toxicolgica.
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Tabela 5.6: Lista de tipologias industriais e mtodos de ensaios aplicados avaliao de toxicidade dos efluentes industriais.
Tipologias Industriais Mtodo de Ensaio Toxicidade Aguda Toxicidade Crnica Ind. Mineira Toxicidade Crnica Toxicidade Crnica Toxicidade Crnica Toxicidade Crnica Toxicidade Aguda Toxicidade Aguda Toxicidade Aguda Toxicidade Aguda Ind. Metalrgica Toxicidade Aguda Toxicidade Crnica Toxicidade Crnica Toxicidade Crnica Toxicidade Crnica Toxicidade Aguda Toxicidade Crnica Ind. Petroqumica Toxicidade Crnica Toxicidade Crnica Toxicidade Crnica Toxicidade Crnica Organismo teste Daphnia magna Selenastrum capricornutum Placopecten magellanicus Daphnia magna Ceriodaphnia dbia Vibrio fisheri Clorella sp Daphnia similis Daphnia magna Poecilia reticulata Enterobacter aerogenes Pseudokirchneriella subcapitata Brachionus plicatilis Daphnia magna Vibrio fisheri Daphnia magna Selenastrum capricornutum Ceriodaphnia dbia Ceriodaphnia dbia Pimephales promelas Vibrio fisbheri Referncia Pane et.al.; 2003 LeBlond,J.B. e Duffy,L.K.2001 Cranford et.al.; 1999 Pereira et.al.; 2000 Pereira et.al.; 2000 LeBlond,J.B. e Duffy,L.K.2001 Sponza, D.T.; 2002 Nieto,R.; 2000 Villegas et.al.; 1997 Sponza, D.T.; 2002 Sponza, D.T.; 2002 Randix et.al.; 2000 Guerra et.al, 2001 Randix et.al.; 2000 Randix et.al.; 2000 Flohr et.al.; 2005 Hartmann,C.C.; 2004 Hartmann,C.C.; 2004 Damato,M. e Sobrinho, P.A.; 1996 Hartmann,C.C.; 2004 Dalzell et.al.; 2002 Continua...
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Continuao... Tipologias Industriais Mtodo de Ensaio Toxicidade Aguda Toxicidade Aguda Toxicidade Aguda Toxicidade Aguda Toxicidade Aguda Toxicidade Aguda Ind. Txtil Toxicidade Aguda Toxicidade Aguda Toxicidade Aguda Toxicidade Aguda Toxicidade Aguda Toxicidade Aguda Toxicidade Crnica Toxicidade Aguda Toxicidade Aguda Toxicidade Aguda Toxicidade Aguda Toxicidade Aguda Ind. Papel e Celulose Toxicidade Aguda Toxicidade Crnica Toxicidade Crnica Toxicidade Crnica Toxicidade Crnica Toxicidade Crnica Organismo teste Vorticella sp Scenedesmus quadricauda Clorella sp Hyalella curvispina Daphnia magna Daphnia similis Daphnia spinulata Poecilia reticulata Cnesterodon decemmaculatum Enterobacter aerogenes Daphnia magna Vibrio fisheri Biomphalaria tenagophila Selenastrum capricornutum Lemna minor Ceriodaphnia dbia Daphnia similis Pimephales promelas Vibrio fisheri Selenastrum capricornutum Ceriodaphnia dbia Pimephales promelas Vibrio fisheri Vibrio fisheri Referncia Sponza, D.T.; 2002 Di Marzio et.al.; 2005 Sponza, D.T.; 2002 Di Marzio et.al.; 2005 Villegas et.al.; 1997 Nieto, R.; 2000 Di Marzio et.al.; 2005 Sponza, D.T.; 2002 Di Marzio et.al.; 2005 Sponza, D.T.; 2002 Lanzer et.al.; 2007 Wang et.al.; 2002 Lanzer et.al.; 2007 Sarakinos e Rasmussen; 1998 Mendona et.al.; 2007 Sarakinos e Rasmussen; 1998 Nieto, R.; 2000 Sarakinos e Rasmussen; 1998 Far et.al.; 2004 Sarakinos e Rasmussen; 1998 Sarakinos e Rasmussen; 1998 Sarakinos e Rasmussen; 1998 Mendona et.al.; 2007 Dalzell et.al.; 2002 Continua...
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Continuao... Tipologias Industriais Mtodo de Ensaio Toxicidade Aguda Ind. Frigorfica Toxicidade Aguda Toxicidade Aguda Toxicidade Aguda Toxicidade Aguda Toxicidade Aguda Ind. Curtumeira Toxicidade Aguda Toxicidade Aguda Toxicidade Aguda Toxicidade Crnica Toxicidade Aguda Toxicidade Aguda Ind. Alimentcia Toxicidade Aguda Toxicidade Aguda Toxicidade Aguda Toxicidade Aguda Ind. Laticnios Toxicidade Aguda Toxicidade Aguda Toxicidade Aguda Toxicidade Aguda Ind. Purificao Enzimtica Toxicidade Aguda Toxicidade Aguda Toxicidade Aguda Organismo teste Cnesterodon decemmaculatum Daphnia spinulata Hyalella curvispina Scenedesmus quadricauda Cnesterodon decemmaculatum Daphnia spinulata Hyalella curvispina Scenedesmus quadricauda Daphnia similis Vibrio fisheri Hyalella curvispina Daphnia magna Daphnia similis Daphnia spinulata Scenedesmus quadricauda Cnesterodon decemmaculatum Daphnia spinulata Hyalella curvispina Scenedesmus quadricauda Cnesterodon decemmaculatum Daphnia spinulata Hyalella curvispina Scenedesmus quadricauda Referncia Di Marzio et.al.; 2005 Di Marzio et.al.; 2005 Di Marzio et.al.; 2005 Di Marzio et.al.; 2005 Di Marzio et.al.; 2005 Di Marzio et.al.; 2005 Di Marzio et.al.; 2005 Di Marzio et.al.; 2005 Nieto, R.; 2000 Dalzell et.al.; 2002 Di Marzio et.al.; 2005 Villegas et.al.;1997 Nieto,R.; 2000 Di Marzio et.al.; 2005 Di Marzio et.al.; 2005 Di Marzio et.al.; 2005 Di Marzio et.al.; 2005 Di Marzio et.al.; 2005 Di Marzio et.al.; 2005 Di Marzio et.al.; 2005 Di Marzio et.al.; 2005 Di Marzio et.al.; 2005 Di Marzio et.al.; 2005 Continua...
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Continuao... Tipologias Industriais Mtodo de Ensaio Toxicidade Aguda Toxicidade Aguda Ind. Qumica Toxicidade Aguda Toxicidade Aguda Toxicidade Aguda Toxicidade Aguda Toxicidade Aguda Farmoqumicos Toxicidade Aguda Toxicidade Crnica Toxicidade Crnica Pintura automotiva e metalrgica Toxicidade Crnica Toxicidade Crnica Toxicidade Crnica Toxicidade Aguda Lixiviado de Aterro Sanitrio Toxicidade Crnica Toxicidade Crnica Toxicidade Aguda Toxicidade Aguda Escoamento Superficial Agrcola Toxicidade Aguda Toxicidade Crnica Toxicidade Crnica Organismo - teste Scenedesmus quadricauda Daphnia smilis Daphnia spinulata Hyalella curvispina Vibrio fisheri Cnesterodon decemmaculatum Daphnia magna Daphnia magna Vibrio fisheri Brachionus calyciflorus Daphnia magna Pseudokirchneriella subcapitata Vibrio fisheri Daphnia magna Daphnia magna Vibrio fisheri Daphnia magna Vibrio fisheri Vibrio fisheri Onchorynchus myskiss Salmonella typhimurium Nieto, R.; 2000 Di Marzio et.al.; 2005 Di Marzio et.al.; 2005 Guerra,R.;2001 Di Marzio et.al.; 2005 Wollenberger et.al.; 2000 Villegas et.al.; 1997 Dalzell et.al.; 2002 Randrix et.al.; 2000 Randrix et.al.; 2000 Randrix et.al.; 2000 Dalzell et.al.; 2002 Laitano, K.S e Matias,W.G.; 2006 Bretano,D.M.; 2006 Dalzell et.al.; 2002 Larh et.al.; 2003 Guerra, R.; 2001 Dizer et.al.; 2002 Dizer et.al.; 2002 Dizer et.al.; 2002 Concluso. Referncia Di Marzio et.al.; 2005
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Tabela 5.7: Relao de compostos qumicos e ons metlicos presentes em efluentes industriais e tipos de mtodos de ensaio utilizados para sua deteco.
Tipo Composto/on Mtodo de Ensaio Toxicidade Aguda Toxicidade Aguda Toxicidade Aguda Toxicidade Aguda Toxicidade Aguda Toxicidade Aguda Toxicidade Aguda Toxicidade Aguda Toxicidade Aguda Lindano Toxicidade Aguda Toxicidade Crnica Toxicidade Crnica Toxicidade Crnica Toxicidade Crnica Toxicidade Crnica Toxicidade Crnica Toxicidade Crnica Toxicidade Crnica Toxicidade Crnica Toxicidade Crnica Organismo - teste Chlamydomonas reinhardi Scenedesmus subspicatus Scenedesmus subspicatus Brachionus calyciflorus Eulena gracilis Tetrahymena pyriformis Tetrahymena thermophila Gammarus pulex Daphnia magna Chironomus riparius Scenedesmus subspicatus Chlamydomonas reinhardi Eulena gracilis Tetrahymena thermophila Brachionus calyciflorus Brachionus calyciflorus Gammarus pulex Gammarus pulex Chironomus riparius Chironomus riparius Referncia Pascoe et.al.; 2000 Pascoe et.al.; 2000 Girling et.al.; 2000 Pascoe et.al.; 2000 Girling et.al.; 2000 Girling et.al.; 2000 Pascoe et.al.; 2000 Pascoe et.al.; 2000 Pascoe et.al.; 2000 Pascoe et.al.; 2000 Pascoe et.al.; 2000 Pascoe et.al.; 2000 Girling et.al.; 2000 Pascoe et.al.; 2000 Girling et.al.; 2000 Pascoe et.al.; 2000 Girling et.al.; 2000 Pascoe et.al.; 2000 Pascoe et.al.; 2000 Girling et.al.; 2000 Continua...
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Continuao... Tipo de Composto/on Mtodo de Ensaio Toxicidade Aguda Toxicidade Aguda Toxicidade Aguda Toxicidade Aguda Toxicidade Aguda Toxicidade Aguda Toxicidade Aguda Toxicidade Aguda Toxicidade Aguda Atrazina Toxicidade Aguda Toxicidade Crnica Toxicidade Crnica Toxicidade Crnica Toxicidade Crnica Toxicidade Crnica Toxicidade Crnica Toxicidade Crnica Toxicidade Crnica Toxicidade Crnica Toxicidade Crnica Organismo teste Chlamydomonas reinhardi Scenedesmus subspicatus Scenedesmus subspicatus Brachionus calyciflorus Eulena gracilis Tetrahymena pyriformis Tetrahymena thermophila Gammarus pulex Daphnia magna Chironomus riparius Scenedesmus subspicatus Chlamydomonas reinhardi Eulena gracilis Tetrahymena thermophila Brachionus calyciflorus Brachionus calyciflorus Gammarus pulex Gammarus pulex Chironomus riparius Chironomus riparius Referncia Pascoe et.al.; 2000 Pascoe et.al.; 2000 Girling et.al.; 2000 Pascoe et.al.; 2000 Girling et.al.; 2000 Girling et.al.; 2000 Pascoe et.al.; 2000 Pascoe et.al.; 2000 Pascoe et.al.; 2000 Pascoe et.al.; 2000 Pascoe et.al.; 2000 Pascoe et.al.; 2000 Girling et.al.; 2000 Pascoe et.al.; 2000 Girling et.al.; 2000 Pascoe et.al.; 2000 Girling et.al.; 2000 Pascoe et.al.; 2000 Pascoe et.al.; 2000 Girling et.al.; 2000 Continua...
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Continuao... Tipo de Composto/on Mtodo de Ensaio Toxicidade Aguda Toxicidade Aguda Toxicidade Aguda Toxicidade Aguda Toxicidade Aguda Toxicidade Aguda Toxicidade Aguda Toxicidade Aguda Toxicidade Aguda Cobre Toxicidade Aguda Toxicidade Crnica Toxicidade Crnica Toxicidade Crnica Toxicidade Crnica Toxicidade Crnica Toxicidade Crnica Toxicidade Crnica Toxicidade Crnica Toxicidade Crnica Toxicidade Crnica Organismo teste Chlamydomonas reinhardi Scenedesmus subspicatus Scenedesmus subspicatus Brachionus calyciflorus Eulena gracilis Tetrahymena pyriformis Tetrahymena thermophila Gammarus pulex Daphnia magna Chironomus riparius Scenedesmus subspicatus Chlamydomonas reinhardi Eulena gracilis Tetrahymena thermophila Brachionus calyciflorus Brachionus calyciflorus Gammarus pulex Gammarus pulex Chironomus riparius Chironomus riparius Pascoe et.al.; 2000 Pascoe et.al.; 2000 Girling et.al.; 2000 Pascoe et.al.; 2000 Girling et.al.; 2000 Girling et.al.; 2000 Pascoe et.al.; 2000 Pascoe et.al.; 2000 Pascoe et.al.; 2000 Pascoe et.al.; 2000 Pascoe et.al.; 2000 Pascoe et.al.; 2000 Girling et.al.; 2000 Pascoe et.al.; 2000 Girling et.al.; 2000 Pascoe et.al.; 2000 Girling et.al.; 2000 Pascoe et.al.; 2000 Pascoe et.al.; 2000 Girling et.al.; 2000 Continua... Referncia
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Continuao... Tipo de Composto/on Mtodo de Ensaio Toxicidade Aguda Toxicidade Aguda Toxicidade Aguda Toxicidade Aguda Toxicidade Aguda Toxicidade Aguda Toxicidade Aguda Toxicidade Aguda Toxicidade Aguda Toxicidade Aguda 3-4 - Dicloroanilina(DCA) Toxicidade Crnica Toxicidade Crnica Toxicidade Crnica Toxicidade Crnica Toxicidade Crnica Toxicidade Crnica Toxicidade Crnica Toxicidade Crnica Toxicidade Crnica Toxicidade Crnica Toxicidade Crnica Toxicidade Crnica Organismo - teste Chlamydomonas reinhardi Scenedesmus subspicatus Scenedesmus subspicatus Brachionus calyciflorus Eulena gracilis Tetrahymena pyriformis Tetrahymena thermophila Gammarus pulex Daphnia magna Chironomus riparius Scenedesmus subspicatus Chlamydomonas reinhardi Eulena gracilis Tetrahymena thermophila Brachionus calyciflorus Brachionus calyciflorus Gammarus pulex Gammarus pulex Daphnia magna Daphnia magna Chironomus riparius Chironomus riparius Pascoe et.al.; 2000 Pascoe et.al.; 2000 Girling et.al.; 2000 Pascoe et.al.; 2000 Girling et.al.; 2000 Girling et.al.; 2000 Pascoe et.al.; 2000 Pascoe et.al.; 2000 Pascoe et.al.; 2000 Pascoe et.al.; 2000 Pascoe et.al.; 2000 Pascoe et.al.; 2000 Girling et.al.; 2000 Pascoe et.al.; 2000 Girling et.al.; 2000 Pascoe et.al.; 2000 Girling et.al.; 2000 Pascoe et.al.; 2000 Pascoe et.al.; 2000 Guilhermino et.al.; 1999 Pascoe et.al.; 2000 Girling et.al.; 2000 Continua... Referncia
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Continuao... Tipo de Composto/on
Mtodo de Ensaio Toxicidade Aguda Toxicidade Aguda Toxicidade Aguda Toxicidade Aguda
Organismo teste Artmia salina Brachionus calyciflorus Brachionus plicatilis Daphnia magna Daphnia magna Thamnocephalus platyurus Vibrio fisheri Chironomus riparius Vibrio fisheri Ceriodaphnia dbia Daphnia ambgua Pseudokirchneriella subcapitata Brachionus calyciflorus Daphnia magna Vibrio fisheri Brachionus calyciflorus Ceriodaphnia dbia Daphnia ambgua Daphnia magna Thamnocephalus platyurus Daphnia magna Poecilia reticulata Dpahnia magna Chironomus riparius Dabio rerio Guerra,R.; 2001 Larh et.al.; 2003 Guerra,R.; 2001 Larh et.al.; 2003 Guerra,R.; 2001 Larh et.al.; 2003 Guerra,R.; 2001 Larh et.al.; 2003 Larh et.al.; 2003 Harmon et.al.; 2003 Harmon et.al.; 2003 Randrix et.al.; 2000 Randrix et.al.; 2000 Randrix et.al.; 2000 Randrix et.al.; 2000 Lahr et.al.; 2003 Harmon et.al.; 2003 Harmon et.al.; 2003 Lahr et.al.; 2003 Lahr et.al.; 2003
Referncia
Compostos Fenlicos
Toxicidade Aguda Toxicidade Aguda Toxicidade Aguda Toxicidade Crnica Toxicidade Crnica Toxicidade Aguda Toxicidade Aguda Toxicidade Crnica Toxicidade Crnica Toxicidade Crnica Toxicidade Crnica Toxicidade Aguda Toxicidade Aguda Toxicidade Aguda Toxicidade Aguda Toxicidade Aguda Toxicidade Aguda Toxicidade Aguda Toxicidade Crnica Toxicidade Crnica Toxicidade Crnica
Surfactantes
Pesticidas e Inseticidas
Wollenberger et.al.; 2000 Fraccio, R.; 2006 Lahr et.al.; 2003 Lahr et.al.; 2003 Fraccio, R.; 2006 Continua...
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Continuao... Tipo de Composto/on Pesticidas e Inseticidas
Mtodo de Ensaio Toxicidade Crnica Toxicidade Crnica Toxicidade Aguda Toxicidade Aguda
Organismo teste Daphnia magna Vibrio fisheri Ceriodaphnia dbia Daphnia ambgua Ceriodaphnia dbia Daphnia ambgua Pimephales promelas Ceriodaphnia dbia Daphnia ambgua Ceriodaphnia dbia Daphnia ambgua Daphnia magna Ceriodaphnia dbia Danio rerio Daphnia magna Daphnia magna Daphnia pulex Pimephales promelas Cerodaphnia dbia Ceriodaphnia silvestrii Ceriodaphnia dbia Ceriodaphnia silvestrii Lahr et.al.; 2003 Harmon et.al.; 2003 Harmon et.al.; 2003 Harmon et.al.; 2003 Harmon et.al.; 2003
Referncia Guilhermino et.al.; 1999
Clorito de Sdio
Toxicidade Crnica Toxicidade Crnica Toxicidade Crnica Toxicidade Aguda Toxicidade Aguda Toxicidade Crnica Toxicidade Crnica Toxicidade Aguda Toxicidade Crnica Toxicidade Crnica
Cardoso, L. e De Luca, S.J.; 2004; Harmon et.al.; 2003 Harmon et.al.; 2003 Harmon et.al.; 2003 Harmon et.al.; 2003 Larh et.al.; 2003 Mount et.al.; 2000 Fraccio, R.; 2006 Guilhermino et.al.; 1999 Mount et.al.; 2000 Mount et.al.; 2000 Mount et.al.; 2000 Takenaka et.al.; 2007 Takenaka et.al.; 2007 Takenaka et.al.; 2007 Takenaka et.al.; 2007 Concluso
Sulfato de Cobre
Cromo
Toxicidade Crnica Toxicidade Crnica Toxicidade Crnica Toxicidade Crnica Toxicidade Aguda Toxicidade Aguda Toxicidade Crnica Toxicidade Crnica
Extrato de Cianobactrias
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Como pode ser observado atravs de estudo da Tabela 5.6 e Tabela 5.7, no h conformidade entre o universo acadmico de qual seria o melhor mtodo de ensaio a ser empregado para anlise de misturas complexas como so os efluentes industriais e sim que a mesma deva ser feita a partir de uma observao de efeitos toxicolgicos dos mesmos, em nveis crnicos, a pelo menos trs tipos distintos de organismos-teste de referncia, que, os ensaios, sejam replicveis e se possvel j padronizado. Espcies diferentes de organismos aquticos no so igualmente susceptveis para a mesma substncia qumica nem so os organismos igualmente susceptveis atravs do ciclo de vida. Alm disso, organismos da mesma espcie podem responder diferentemente ao mesmo nvel de uma substncia txica de tempos em tempos, mesmo quando todas as outras variveis so mantidas constantes (AWWA, APHA,WEF, 2005). Chapmann et al. (1990) determinaram a toxicidade crnica de efluentes de duas refinarias de petrleo para Ceriodaphnia dubia e para uma espcie de peixe, Pimephales promelas. Os autores constataram que a espcie de microcrustceo mais sensvel que a espcie de peixe. Sarakinos e Rasmussen (1998), desenvolveram estudos atravs da avaliao de toxicidade provocada por efluentes de origem da fabricao de papel e celulose a comunidade bentnica exposta aos mesmos. Testes crnicos foram realizados para algas ( Selenastrum capricornutum), cladceros (Ceriodaphnia dubia) e peixes (Pimephales promelas). Todos os testes de toxicidade demonstraram um potencial txico letal e sub-letal do efluente. Dentre estes a espcie mais sensvel a toxicidade crnica do efluente testado foi Ceriodaphnia dubia. Pascoe et.al. (2000) realizaram um estudo comparativo entre os testes de toxicidade de deteco de poluentes em guas doce e sua validao em mesocosmos de lagos e crregos. Neste trabalho foram investigados as aes do cobre, lindano (gama-hexaclorociclohexano), atrazina (2-cloro-4-etilamino-6 isopropilamino-S-triazina), DCA (3,4-dicloroanilina) como poluentes ambientais. Vrios organismos foram submetidos a distintas metodologias de teste de toxicidade desde os convencionais que avaliam as espcies isoladamente at os mais elaborados como os que avaliam as interaes entre suas espcies. Dos organismos-testes descritos nesta pesquisa a espcie Brachionus calyciflorus apresentou maior sensibilidade ao cobre, enquanto que para o lindano as larvas da espcie Chironomus riparius demonstrou se mais sensvel. Para a atrazina o teste que melhor descreveu a toxicidade foi o ensaio com Scenedesmus subspicatus e para DCA o teste com Daphnia magna.
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Um ecossistema aqutico impactado por efluente de drenagem acida de minas foi escolhido como local de teste para o desenvolvimento de protocolo para bioensaios crnicos in Situ com cladceros por Pereira et.al. (2000). Neste trabalho utilizou se dos microcrustceos Ceriodaphnia dubia e Daphnia magna como organismos-teste. A espcie que demonstrou maior sensibilidade foi Daphnia magna tanto nos testes de coluna d gua como nos de solubilizao de sedimentos. Radix et.al.(2000) publicaram um estudo comparativo de quatro testes crnicos de toxicidade usando algas (Pseudokirneriella subcapitata), bactrias (Vibrio fischeri) e invertebrados (Daphnia magna e Brachionomus calyciflorus) com compostos orgnicos e inorgnicos (metais, surfactantes e pesticidas). Nesta comparao as algas apareceram como a espcie mais sensvel apesar de dos quatro testes apresentarem uma mesma ordem de magnitude. Os autores afirmam que a utilizao de Vibrio fischeri (MICROTOX test) constitui se ainda razoavelmente imprecisos a deteco de toxicidade a organismos mais complexos, o que pode limitar o uso deste ensaio em algumas situaes. Atravs do programa de pesquisa de meio ambiente da comisso europia, Girling et.al.(2000) desenvolveram mtodos de avaliao de toxicidade de compostos qumicos e efluentes industriais a ecossistemas aquticos. Neste estudo, quatro substncias qumicas de referncia (Lindano, atrazina, 3-4 dicloroanilina e cobre) foram avaliadas toxicamente atravs dos ensaios biolgicos com Chlamidomonas reinhardi, Scenedesmus subspicatus, Euglena gracilis, Tetrahymena pyriformis, Brachionus calyciflorus, Gammarux pulex e Chironomus riparius. Os resultados apontaram que o organismo mais sensvel a ao do lindano e 3-4 dicloroanilina foram as larvas de Chironomus riparius e para a atrazina foi detectada em Chlamidomonas reinhardi seguida por Scenedesmus subspicatus. A espcie Brachionus calyciflorus apresentou maior sensibilidade ao cobre. J estudos feitos por Dalzell et.al. (2002) afirmam que o mtodo de ensaio com bactria bioluminescentes (Vibrio fischeri) como a ferramenta mais eficaz na deteco de poluentes em efluentes industriais tratados em sistemas de lodos ativados. Porm os testes de toxicidade baseados na inibio da bioluminescncia de Vibrio fischeri so usados freqentemente, por que apresenta um organismo-teste bem conhecido, bem introduzido e normalizado. Alm de oferecerem uma resposta efetiva rpida e de fcil manipulao (ARBUCKLE e ALLEMAN, 1992; TOUSSAINT et.al.1995; FARR et.al., 2004). 56
O grupo de estudos do Laboratrio de Toxicologia Ambiental (LABTOX) da Universidade Federal de Santa Catarina (UFSC) desenvolveu novos protocolos para a utilizao da espcie Daphnia magna, como organismo-teste de deteco de toxicidade para resduos slidos, de lixiviados proveniente de aterros sanitrios, e de efluentes tratados por reatores do tipo anaerbico de fluxo ascendente (UASB) como teste alternativo e de grande eficincia e de resposta rpida em relao aos mtodos de ensaio de toxicidade crnica padronizados pela ABNT com a espcie Ceriodaphnia dubia e complementar aos mtodos fsico-qumicos para a avaliao de toxicidade de resduos slidos e efluentes industriais segundo os trabalhos de FINKLER, 2002; LAITANO, 2003, FLOHR et.al. 2005; FLORH, 2007; BRETANO, 2006; E LAITANO E MATIAS, 2006. Dizer et.al.(2002) analisaram o potencial citotxico e genotxico conferida pelo despejo de diversas tipologias indstrias ao ecossistema aqutico na Alemanha por bioensaios utilizando os organismos-teste Vibrio fischeri, Salmonella typhimurium e Onchorynchus mykiss. Segundo os autores o ensaio com bactrias Salmonella typhimurium constituram se os mais sensveis. Lahr et.al.(2003) analisaram os bioensaios empregados rotineiramente na avaliao de toxicidade em sedimentos e de material particulado de copos hdricos receptores de efluentes industriais nos pases baixos. Nestes estudos os organismos-teste selecionados foram bactria Vibrio fischeri, o rotfero Brachionus calyciflorus e o crustceo Thammocephalus platyurus para teste agudo; e o crustceo Daphnia magna e a larva de inseto Chironomus riparius para teste crnico. Os poluentes detectados nesta pesquisa foram compostos de hidrocarboneto polinucleares aromticos (PAH), metais pesados (As, Cd, Cr, Cu, Hg, Pb, Ni e Zn), pesticidas organoclorados (OCP: DDT e derivados, dialdrin e compostos relacionados), bifenilpoliclorados (PCB), leo mineral contendo extratos orgnicos de hidrocarbonetos halognados (EOx). Para os testes de toxicidade aguda a espcie Thammocephalus platyurus e nos testes crnicos a espcie Daphnia magna mostraram-se mais sensveis deteco de poluentes. Hartmann (2004) realizou ensaios de toxicidade com trs espcies de organismo-teste distintas, Selenastrum capricornutum, Ceriodaphnia dubia e Pimephales promelas, para um efluente da indstria petroqumica. Os ensaios de toxicidade crnica revelaram que o efluente conferia toxicidade, mesmo com a grande maioria dos parmetros fsicos e qumicos analisados estando de acordo com os limites de lanamento de efluentes em corpos receptores. Dentre as espcies analisadas, Selenastrum capricornutum mostrou-se mais
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sensvel deteco de poluentes, mas Pimephales promelas apresentou toxicidade em concentraes mais baixas, se comparado com os outros dois organismos. Efluentes da indstria txtil e as guas de um arroio poludo, corpo receptor de efluentes industriais e de guas residurias municipais, foram avaliados quanto toxicidade por Lanzer et.al. (2007) atravs de bioensaios com os organismos-teste Biomphalaria tenagophila e Daphnia magna. O estudo previa a comprovao da toxicidade crnica destes efluentes sobre a biota aqutica. A comparao entre os dois ensaios demonstrou que o teste de desenvolvimento embrionrio de Biomphalaria tenagophila mostrou - se mais sensvel que o teste de reproduo de Daphnia magna na determinao da toxicidade crnica de misturas presentes em arroios poludos por despejos domsticos e industriais. J os ensaios de toxicidade ao corante Remazol Brilliant Blue R presente nos efluentes de origem txtil, a espcie Daphnia magna mostrou se mais sensvel. O trabalho de investigao de Martins et.al. (2007) comparou o uso de bioensaios com os organismos-teste Daphnia magna e Danio rerio para a avaliao de toxicidade de compostos qumicos e efluentes industriais a ecossistemas aquticos. Os estudos concluram que os dois bioindicadores apresentam uma sensibilidade especial a metais e pesticidas, porm que a espcie Daphnia magna apresentou maior sensibilidade a metais, pesticidas, compostos nitrogenados e solventes. Amostras de efluentes de origem na indstria txtil e na indstria metalrgica foram estudadas por Sponza (2002) atravs de protocolos de deteco de toxicidade aguda por bioensaios. Neste estudo os organismos-teste escolhidos foram Vorticella sp; Chlorella sp., Poecilia reticulata, e Enterobacter aerogenes. Todos os testes de toxicidade aguda com exceo para Vorticella sp, mostraram resultados positivos para efluentes da indstria txtil e metalrgica. A espcie mais sensvel mostrou ser a bactria Enterobacter aerogenes para ambas as tipologias industriais. Existe claramente uma tendncia a utilizar organismos-teste que estejam regulamentados e normalizados em detrimento da utilizao de espcies autctones. Dentre os organismos-teste considerados mais freqentes nas pesquisas se destacam os cladceros Daphnia magna e Ceriodaphnia dubia, seguidos pela bactria bioluminescente Vibrio fischeri. No menos expressiva a utilizao de algas como Pseudokirchneriella subcapitata e de peixes como a espcie Pimephales promelas.
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6 - CONCLUSO
Os ecossistemas aquticos recebem uma grande variedade e quantidade de poluentes, sejam esses lanados no ar, no solo ou diretamente nos corpos de gua, ocasionando em muitos casos impactos irreversveis. A presena de poluentes em ambientes aquticos leva a alterao de sua composio qumica, atingindo sua biota, proporcionando perda no habitat, na funo natural, nos usos e servios dos recursos hdricos; alm de perda de beleza cnica e afetar a sade humana. No que tange aos recursos hdricos, em especial, nos pases de baixa renda ou em desenvolvimento, o gerenciamento de resduos e de guas residurias demanda recursos muitas vezes escassos. Para tal, necessrio agregar esforos e neste sentido, o desenvolvimento de ensaios de curta durao, que visem identificar efeitos crnicos de substncias qumicas presentes em efluentes, vem contribuir ao mecanismo de gesto e sustentabilidade ambiental, uma vez que as anlises fsico-qumicas de efluentes so laboriosas, de elevado custo e no so capazes de garantir que todos os compostos txicos relevantes sejam detectados. Deste modo, o uso de bioensaios pode ser descrito como uma informao adicional anlise de toxicidade dos produtos das descargas de efluentes industriais. Os mtodos de ensaios biolgicos so procedimentos de ao preventiva, e indispensvel na estimativa de impactos ambientais, utilizados pelos rgos competentes. No h unanimidade de qual seria o melhor tipo de organismo-teste para determinado efluente e sim, qual conjunto de testes deveria ser desenvolvido para assegurar que os componentes e subprodutos da degradao de efluentes causem o menor impacto negativo possvel biota aqutica e por conseqncia ao ser humano. As pesquisas mais recentes apresentam variaes dos mtodos de ensaios padronizados como uma tentativa de ampliar o grau de seguridade dos mesmos frente s composies da biota especfica dos locais em que se pretende desenvolver determinado estudo. Existe uma tendncia para investigaes sobre as possveis aes degradantes de compostos orgnicos presentes em efluentes oriundos de estaes de tratamento de esgotos, de guas de abastecimento e de lixiviados provenientes de aterros sanitrios.
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notrio que os mtodos de ensaio que utilizam como organismos-teste as bactrias esto a cada dia mais aperfeioados e com maior preciso de respostas devido aos recentes avanos da microbiologia e da engenharia gentica. Por serem ensaios padronizados e internacionalmente descritos a mais tempo do que os demais, os testes que utilizam cladceros como os daphnideos esto mais amplamente difundidos nas pesquisas e nas regulamentaes que visam anlise de toxicidade de efluentes e substncias qumicas complexas. Ainda no se conhecem todas as aes dos componentes complexos de efluentes industriais, visto que so muito diversificados segundo o processo fabril. Deste modo, o emprego de mtodos de ensaio com organismos-teste de fundamental importncia em estudos de preveno e controle da poluio oriunda do descarte de efluentes. Tais estudos auxiliam na projeo de impactos e na delimitao de medidas mitigadoras. Alm disso, testes ecotoxicolgicos esto sendo utilizados no monitoramento dos efluentes para avaliar o tipo e a extenso que um sistema de tratamento de resduos necessita para alcanar os limites ou requerimentos do controle de poluio aqutica; a eficcia dos sistemas de tratamento aplicados aos efluentes; estimar o descarte permissivo de efluentes; a compilao dos parmetros para a qualidade de guas e padres de lanamento de efluentes.
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7 - RECOMENDAES
Na avaliao toxicolgica de efluentes industriais, os mtodos qumicos analticos devem ser suplementados por testes biolgicos. Um teste ecotoxicolgico deve permitir a avaliao do grau de periculosidade de um efluente, isto , diferenciar entre levemente txico e excessivamente txico. Aos estudos que propem a avaliao toxicolgica de ecossistemas aquticos pela ao conjunta ou isolada de um poluente ambiental recomenda-se que sejam realizados ensaios biolgicos em diferentes nveis trficos deste ecossistema. Os mtodos de ensaio biolgico, sejam quais forem os organismos-teste, necessitam de um extenso e solidificado conhecimento acerca do espcime a ser analisado, de sua manuteno em condies laboratoriais e de campo. Em relao ao tempo de resposta de um organismo-teste presena ou ausncia de ao toxicante de um efluente ou de composto qumico, recomenda-se o emprego de ensaios com bactrias, pois estas, em geral, apresentam um tempo de durao de 30 minutos a 2 dias apenas. Em relao a preciso da resposta de um organismo-teste para a deteco de toxicidade em efluentes industriais e ou de seus subcompostos esta diretamente proporcional segurana de execuo do ensaio, do real conhecimento do comportamento normal da espcie e dos efeitos antagnicos destes poluentes na biota. Em relao sensibilidade, a toxicidade de efluentes industriais e compostos qumicos complexos no h uma definio de teste padro ou espcie individualmente descrita como a mais ou menos sensvel a ao dos poluentes. Os ensaios crnicos so preferidos aos ensaios agudos, pois descrevem situaes de dano mais profundas no organismo-teste e por conseqncia os impactos que tal toxicante pode causar biocenose em que este poluente estiver inserido. No grande a diferena observada entre o Brasil e o restante do mundo quanto s espcies utilizadas nos testes ecotoxicolgicos. Essa, porm, pode ser devido s diferenas quanto biodiversidade de cada local, independentemente da localidade, de extrema importncia seguir rigorosamente todos os critrios de escolha da espcie teste. Sendo que a anlise 61
conjunta de dados obtidos em bioensaios, as proporcionadas atravs das respostas populacionais, alm das anlises qumicas de amostras ambientais, devem condizer no auxlio de uma previso de impacto e/ou estabelecimento de limites de lanamento de dados produtos nos corpos receptores. No entanto faz-se necessrio o desenvolvimento de testes com organismos tpicos da biocenose aqutica brasileira afim de melhor descrever os cenrios e possibilitar uma maior difuso dos testes de toxicidade aplicveis a analise de efluentes industriais e a deteco de novos poluentes ambientais dispersos no meio ambiente.
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8 - REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS
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LISTA DE SIGLAS E ABREVIAES

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3.3 - Ensaios ecotoxicolgico

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3.4 - Testes de toxicidade aqutica

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End Point (mais sensvel)

CL50/CE50 (mais sensvel)

Relao Agudo / Crnico

Identificar Intervalos de Dados

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...Continuao Entidade Normalizadora

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5.2 - Seleo de mtodos de ensaio

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