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TP N°03
Dosage de la bilirubine
sanguine.
Réalisée par:
• ZIDOUR Mehdi Nabil
• GHERMI Mohamed.
• CHAREF KHODJA Meriem.
• BETTAYEB Mohamed Amine.
• TAHRI Mahmoud.
I- Généralités :
La bilirubine est un pigment jaune, dont l'accumulation anormale dans le sang et les
tissus détermine un ictère (ou " jaunisse "), qui peut relever de causes très diverses.
La bilirubine intègre le bol alimentaire au niveau de l’intestin grêle, avec les autres
pigments biliaires. Elle est le principal pigment des fèces, responsable de leur couleur
jaunâtre.
Dans les globules rouges, c'est plus précisément la dégradation de l'hémoglobine qui
transforme l'hème en bilirubine.
Cette substance donne sa couleur jaune à l'urine et aux selles, ainsi qu'aux
ecchymoses.
Dans l'organisme humain normal, le taux de BNC (bilirubine non conjuguée) est
inférieur à 17 µmoles/l (10 mg).
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TP N 03 HEMATOLOGIE - DOSAGE DE LA BILIRUBINE
II-
II- Métabolisme :
1- Production de la bilirubine :
La bilirubine est le principal produit de dégradation de l'hème. La bilirubine est
formée principalement dans la rate, grâce à deux enzymes, l'hème oxygénase
(microsomale) et la biliverdine réductase (cytosolique).
3- Conjugaison hépatocytaire
La bilirubine native (ou bilirubine non conjuguée) est très peu soluble dans l'eau.
La conjugaison est donc une étape obligatoire pour que la bilirubine puisse être
excrétée dans la bile. La conjugaison se fait principalement avec l'acide
glucuronique grâce à une enzyme du réticulum endoplasmique, la bilurine
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Le cMOAT est génétiquement déficient chez les patients atteints d'un syndrome
de Dubin-Johnson. Dans ce cas, l'excrétion des acides biliaires et leur
concentration dans le sang sont normales.
III-
III- Valeurs usuelles
1- Bilirubine totale
Naissance 14 - 45 µmol /l 8 - 25 mg /l
1ière semaine 45 - 210 µmol /l 25 - 120 mg /l
2ième semaine 17 - 190 µmol /l 10 -110 mg /l
3ième semaine 10 - 50 µmol /l 6 - 30 mg /l
4ième semaine 5 - 25 µmol /l 3 - 15 mg /l
>1 mois et adulte : 5 - 17 µmol /l 3 -10 mg /l
Adulte : 2 - 5 µmol /l 1 -3 mg /l
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IV-
IV- VARIATIONS PATHOLOGIQUES : LES ICTERES
1- Ictères par excès d'apport (dits « préhépatiques »):
Principales causes :
. Syndromes hémolytiques : les plus fréquents
. Ictères par dérivation (la bilirubine se forme à partir de précurseurs de l'hème non
incorporée dans les G.R.)
Symptomatologie biologique :
. Plasma : augmentation exclusive de la bilirubine non conjuguée
. Urines : augmentation de l'urobilinogène urinaire.
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V- Dosage de la bilirubine :
1- Conditions de Prélèvement (c’est un examen d’
d’urgnece):
Prélèvement de sang veineux (en général au pli du coude), avec le garrot laissé le
moins longtemps possible.
Le tube de prélèvement peut contenir un anticoagulant de préférence l’héparine.
Il doit être conservé à l'abri de la lumière avant que le dosage ne soit effectué.
Il n'est pas indispensable d'être à jeun.
Indiquer d'éventuels traitements en cours car certains médicaments peuvent
modifier les résultats.
2- Conservation:
Les échantillons doivent être protégés d’une lumière directe car la bilirubine est
photolabile. Les échantillons peuvent être stockés réfrigérés pendant 3 jours2.
3- Intérêt clinique
Au moins quartes sortes de bilirubines coexistent dans le sérum : la bilirubine
direct (BD) correspond à la bilirubine dite mono et di-conjuguée (β et γ
Bilirubine) ainsi qu’a la fraction δ qui est liée très fortement à l’albumine ; la
bilirubine α, non conjuguée ou bilirubine indirecte, qui est transportée par
l’albumine. La bilirubine totale (BT) est la somme de ces différentes formes.
On distingue les ictères où prédomine la bilirubine indirecte (ictère hémolytique,
maladie de Biermer, Thalassémie …etc.), des ictères ou prédomine la bilirubine
directe (obstruction des voies biliaires extra ou intra-hépatique, hépatites virales
…etc.). Enfin les ictères ou les deux formes de bilirubine sont présentes sans
prédominance (cirrhose, maladie de Dublin-Johnson).
4- Principe de dosage
La plupart des méthodes actuellement utilisées pour doser la bilirubine sont basées
sur la réaction entre la bilirubine et des solutions acides sulfaniliques diazotées.
Dans des solutions aqueuses, seule la bilirubine directe (conjuguée) réagira de cette
manière. Ce réactif de la bilirubine directe utilise une méthode diazo acide. La
bilirubine conjuguée réagit avec l’acide sulfanilique diazoté pour produire une
azobilirubine acide, dont l’absorbance est proportionnelle à la concentration en
bilirubine directe de l’échantillon et peut être mesurée à 550 nm. Pour les
analyseurs bichromatiques la lecture du blanc doit se faire à 660 nm.
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5- Mode opératoire
Blanc BT Blanc BD
R3(I) µm 50 50
Echantillon
100 100 100 100
Calibration
• Bilirubine totale :
Blanc (témoin) : 0,037
Réaction : 0,115
Calcul :
[BT] = (0,155-0,037) x 19.1
[BT] = 2,253 mg/dl
• Bilirubine direct :
Blanc (témoin) :0,040
Réaction : 0,159
Calcul :
[BD] = (0,159 – 0,040) x 14
[BD] = 1,66 mg/dl
• Bilirubine indirect :
[BI] = [BT] – [BD]
[BI] = 0,593 mg/dl
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