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INDICE
1. Introduccin 2. Historia del cultivo in vitro de tejidos vegetales 3. Estudios bsicos sobre nutricin y morfognesis 4. Aplicaciones 5. Tipos de cultivo in vitro 6. La biologa de las clulas vegetales cultivadas 6.1. Iniciacin de cultivo de callo 6.2. Cultivos celulares 6.3. Manipulacin del crecimiento y diferenciacin in vitro
1. Introduccin
MEDIO AMBIENTE
Comunicacin intercelular 1. Corta distancia -plasmodesmos -sistemas de reconocimiento 2. Larga distancia -transporte xilema/floema de hormonas, metabolitos, nutrientes
Qu grado de autonoma tienen los rganos, tejidos y clulas vegetales? El inters por definir la relacin funcional de un tejido con otro y por investigar el potencial de desarrollo de las clulas aisladas de la planta intacta fue lo que dio lugar, a finales del siglo XIX, al cultivo de los tejidos vegetales
4. Aplicaciones
Propagacin industrial de plantas Micropropagacin -Cultivo de meristemos. Planta sana -Embriognesis somtica Semilla sinttica Conservacin de germoplasma Mejora de plantas Generacin de Variabilidad -Variacin somaclonal -Mutagnesis Recuperacin de embriones Cultivo de anteras y microsporas -Obtencin de haploides Cultivo de protoplastos -Hbridos somticos
5. Tipos de cultivo
Desarrollo organizado
Desarrollo in vitro de la estructura inherente al explanto
Meristemo Primordio foliar Yemas florales Frutos pequeos
Desarrollo desorganizado
Ausencia de estructuras reconocibles Nmero limitado de tipos celulares especializados, morfolgica y funcionalmente
Iniciando el cultivo
Explanto Aislamiento e incubacin Contaminacin/exudados fenlicos Medio de cultivo Subcultivo Densidad mnima de inculo
Indeterminados
Crecimiento potencialmente ilimitado (meristemo apical caulognico y radicular)
INCOMPATIBILIDAD POSTZIGTICA
Nutricin deficiente a partir del endospermo RESCATE DE EMBRIONES (EMBRYO RESCUE) -Hu and Sussex 1986
Micropropagacin
DIVISIN CELULAR
Material vegetal o Explanto Parte de la planta de crecimiento rpido o en un estadio temprano de su desarrollo: hipocotilo, hojas jvenes, embriones e inflorescencias inmaduros Prdida de capacidad con la edad del explante. -Diferencias epigenticas. Meins (1986). Cada vez existen ms evidencias de que los tejidos cultivados no son una pgina en blanco. Por el contrario, en ocasiones recuerdan de qu parte de la planta proceden y este recuerdo influye en la morfognesis y en la estabilidad gentica del cultivo
Medio de cultivo Sales minerales Vitaminas Reguladores del desarrollo (auxina/citoquinina) Habituacin= Las clulas pueden ser cultivadas en ausencia del regulador (auxina o citoquinina). Otro ejemplo de diferencias epigenticas. Explante prximo al pice caulinar. Decrece con la edad. Espontneo o inducible. Alta frecuencia (no mutacin). Fuente de carbono (sacarosa) pH=5.8 Fotoperodo
CELULAS CULTIVADAS
capa de agar
cultivo nodriza
cultivo condicionante
Tamao cel.
tiempo
x0
dx/x = udt
t0
Ln 2= utd
Atrapamiento: las clulas estn inmovilizadas en espumas o mallas preformadas o sistemas de membrana de fibra hueca.
Acetato de celulosa (fibra) Policarbonato de silicona (fibra) Poliuretano reticulado (espuma)
Separacin mecnica
Colman et al. 1979 Schwenk (1980,1981)
Separacin enzimtica
Pectinasa polygalacturonasa
Dow and Callow (1979)
Diferenciacin de plastos
Amiloplastos Cloroplatos (asociado con morfognesis)
Auxina /Citoquinina
LOS EXPERIMENTOS DE LA CAPA FINA DE Tran Thanh Van. Thin layer 1-7 capas de clulas de tallo y hoja Induccin de divisin celular y organognesis en las clulas epidrmicas (tallo, raz, floral) a) Seguimiento del desarrollo organognico a partir de una clula b) La ausencia de tejido vascular y cambium reduce el efecto materno
Patrones de organizacin
EMBRIOGENESIS Embrioide
Organognesis de tallo
Auxinas
Citoquininas
disgregable
SEEDLING