ADMET

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Manuel Pastor e Ismael Zamora manuel.pastor@upf.edu Unitat de Recerca en Informtica Biomdica Universitat Pompeu Fabra, Barcelona

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ADME(T)
Para que un frmaco ejerza su accin teraputica debe poder alcanzar el sitio de unin de su diana farmacolgica

Sitio de unin

El conjunto de procesos por los que pasa el frmaco desde que se administra hasta que llega a este sitio se suelen denominar procesos farmacocinticos o ADME

Absorcin, Distribucin, Metabolismo y Excreccin

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La terminologa ADMET tambin es muy frecuente. La T del final hace referencia a la Toxicidad

No es una terminologa recomendable. Hay una gran diferencia entre ADME y T

ADME T

Lo que el organismo le hace al frmaco Lo que el frmaco le hace al organismo

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Organizacin de este curso

Sesin 1 Introduccin al ADME Estudios farmacocinticos experimentales en diseo de frmacos

Sesin 2 Toxicidad en diseo de frmacos Prediccin computacional de propiedades farmacocinticas y toxicolgicas

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Importancia del ADME (I) en desarrollo de frmacos

La evaluacin de las propiedades farmacocinticas y la seguridad de un frmaco forma parte integral del proceso de desarrollo de un nuevo candidato

Discovery
Estudios ADME Identificacin de riesgos Priorizacin ensayos Seleccin candidatos Ensayos en animales Ensayos en humanos

Developability assesment

Ensayos preclnicos

Ensayos clnicos

Ensayos no-clnicos

NDA

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Importancia del ADME (II)

La mejora en el tratamiento de los problemas farmacocinticos en las ltimas dcadas ha disminuido el nmero de frmacos retirados del proceso de desarrollo por este motivo

Schuster et al, Curr.Pharm. Des. 11, 3545-3559 (2005)

Prentis et al Br. J. Clin. Pharmacol., 25, 387-396 (1988) Kennedy, Drug Discov. Today 2, 436-444 (1997)

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Introduccin | curvas de concentracin plasmtica

El objetivo de los estudios ADME es caracterizar la evolucin de un (candidato a) frmaco en el organismo

Normalmente interesa conocer la concentracin del compuesto en el sitio de unin. Esta concentracin es muy difcil de determinar y puede asumirse que ser parecida a la concentracin en plasma Las curvas de concentracin plasmtica frente a tiempo, obtenidas in vivo, nos dan una primera orientacin de cmo evoluciona el compuesto

Concentracin en plasma (mg/ml)

16 14 12 10 8 6 4 2 0 0 6 12 18

Dosis 500 mg (7.14mg/Kg)

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Introduccin | esquema general

Las curvas de concentracin plasmtica reflejan el resultado de mltiples mecanismos que operan a la vez
Forma oral

Excrecin

G.I.
Absorcin Metabolismo Recirculacin entero-heptica Metabolismo

Compuesto original Metabolito

Sange Hgado Protenas

Metabolismo

Sangre Protenas

R i n

Sitio de unin Sangre Protenas Tejidos/rganos Excrecin

Excrecin Inyeccin intavenosa (IV) Formas tpicas Inyeccin intramuscular

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Introduccin | esquema general

Las curvas de concentracin plasmtica reflejan el resultado de mltiples mecanismos que operan a la vez
Va oral
45 40 35 30 25 20 15
l a i p ] s n m C [ l i p a ] n s C [ m

Va intravenosa
120 100
D+E+A Distribucin

80 60 40 20 0

Eliminacin D+E

10 5 0 0 8 16 24 32 40 48

10

20

30

40

tiempo (h)

tiempo (h)

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Introduccin | ventana teraputica

La accin teraputica se obtiene solo cuando se alcanza cierta concentracin plasmtica (concentracin efectiva) A concentraciones altas comienza a aparecer efectos secundarios y toxicidad La relacin entre ambas define la ventana teraputica
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Concentracin en plasma (mg/ml)

14 12 10

Dosis 500 mg (7.14mg/Kg)

Toxicidad Ventana teraputica

8 6 4 2 0 0 6 12 18 24

Efecto teraputico

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Introduccin | ventana teraputica

Idealmente, las propiedades farmacocinticas del compuesto deben permitir mantener concentracin teraputica sin alcanzar concentraciones txicas Cuidado con la variabilidad entre individuos o debida a mltiples factores

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Concentracin en plasma (mg/ml)

14 12 10 8 6 4 2 0 0 6 12 18 24 30 36

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Conceptos bsicos | Cmax, Tmax, AUC

Conviene caracterizar algunos parmetros que caracterizan esta curva
Cmax: Mxima concentracin en plasma
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Concentracin en plasma (mg/ml)

Tmax: Tiempo que tarda en alcanzarse la Cmax Cmax AUC0-t: Area bajo la curva desde el tiempo 0 al t

14 12 10 8 6 4 2 0 0

Tmax
6 12 18

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Conceptos bsicos | aclaramiento

Aclaramiento (Clearance, CL): velocidad a la que un compuesto se elimina del cuerpo (cuanto ms alta, ms rpido se elimina). Se calcula como:

CL =

Dosis AUC 0

Cada rgano excretor (hgado, rin) tiene su propio aclaramiento

CL = CL rion + CL higado
El aclaramiento no es una constante, depende de: Peso corporal y peso del hgado Flujo sanguneo del hgado y rin Unin del compuesto a protenas plasmticas Metabolismo Transportadores Etc.

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Conceptos bsicos | semivida

Semivida (half-life. T1/2): Tiempo que tarda el compuesto en alcanzar la mitad de la concentracin mxima
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Concentracin en plasma (mg/ml)

14 12 10 8 6 4 2 0 0

Cmax

Tmax
6 12

T1/2
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Conceptos bsicos | ejemplos (I)

Aclaramiento

Semivida (h)
O O HO

Esmolol (S)

170,00

0,13

N
N
Cl

Flurazepam

9,00

0,20
F

O N

O O O N S N
O O O N

Cephalothin

6,70

0,57
O

Benazepril

12,90

0,70
O

O O O N S N N O Cl O Cl

Dicloxacillin

1,60

0,70

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Conceptos bsicos | ejemplos (II)

Aclaramiento

Semivida (h)
N

Imipramine Flunitrazepam Haloperidol Sertraline Warfarin (S)

15,00 3,50 11,80 38,00 0,06

12,00
O N O
+

15,00
N

18,00
Cl

O OH
Cl

23,00
O OH

Cl

32,00
O O

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Conceptos bsicos | biodisponibilidad

Biodisponibilidad (Bioavailability, F): Porcentaje de la dosis del compuesto que alcanza el sitio de accin. Se calcula dividiendo las AUC obtenidas mediante administracin oral e intravenosa:

F=

AUC 0 (po ) AUC 0 (IV )

.100

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Utilidad de curvas de concentracin plasmtica

El estudio de las curvas de concentracin plasmtica in vivo permiten Diagnosticar el comportamiento general del candidato, detectando caractersticas no deseables (biodisponibilidad baja, acumulacin en el organismo, semivida muy corta) Ajuste de dosis para pruebas in vivo Cintica de los procesos

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Otras pruebas en ADME

Las propiedades ADME pueden usarse usando otro tipo de pruebas En fases tempranas, puede que no se disponga del compuesto en cantidades suficientes para hacer estudios in vivo El coste/tiempo de las pruebas no es adecuado para probar muchos compuestos El objetivo puede ser estudiar en detenimiento uno de los pasos

Las propiedades ADME pueden usarse usando otro tipo de pruebas Mtodos in vitro Mtodos computacionales (in silico)

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Absorcin | BCS
Hoy en da la mayora de frmacos se administran por va oral Su biodisponibilidad depende de su solubilidad y de cmo pasen a travs de las clulas del intestino delgado La FDA ha propuesto un sistema de clasificacin dependiendo de estas dos propiedades
Biopharmaceutics classificaction system II. Permeables Poco Solubles III. Poco permeables Poco solubles I. Permeables Solubles IV. Poco permeables Solubles

Los compuestos muy permeables en el sistema GI y muy solubles no tendrn problemas de biodisponibilidad y pueden obtener un In Vivo Bioavailability Waiver

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Absorcin | membrana intestinal

La absorcin de un frmaco a travs de la mucosa del intestino delgado es un proceso complejo, en el que intervienen diversos procesos
Apical

Basolateral
Transcelular pasivo Excreccion activa Absorcin activa Metabolismo

Intercelular pasivo

Excreccin activa basolateral

Absorcin activa basolateral

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Absorcin | ensayos
Hay diversos ensayos in vitro que pueden orientar sobre algunos de los componentes de este proceso Permeabilidad transcelular pasiva: PAMPA Caco2 Transporte activo: Transporte asimtrico Caco2 Clulas transfectadas con transportadores (eg. MDCK)
Transcelular pasivo Excreccion activa Absorcin activa

Excreccin activa basolateral

Absorcin activa basolateral

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Absorcin | PAMPA
La absorcin transcelular pasiva depende sobre todo del paso del compuesto por la membrana celular de la mucosa: bicapa lipdica

En el ensayo PAMPA (Parallel Artificial Membrane Permeation Assay), se usa una membrana para simular el comportamiento de la membrana celular

Concentracin

Permeabilidad aparente

Apical Basolateral

Papp =
Tiempo

Q 1 t A C 0

Hidalgo IJ. Assessing the absorption of new pharmaceuticals. Curr Top Med Chem. 2001;1(5):385-401
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Absorcin | Caco2
En el ensayo de Caco2 se utiliza una capa de clulas inmortales (obtenidad de un adenocarcinoma del epitelio colorectal) Pros: mucho ms representativa fisiolgicamente (tienen transportadores, metabolismo, etc.) Cons: muy heterogneas, los resultados no son reproducibles.

Apical Basolateral

Concentracin

Permeabilidad aparente

Papp =
Tiempo

Q 1 t A C 0

Sun D, Yu LX, Hussain MA, Wall DA, Smith RL, Amidon GL. In vitro testing of drug absorption for drug 'developability' assessment: forming an interface between in vitro preclinical data and clinical outcome. Curr Opin Drug Discov Devel. 2004;7(1):75-85.
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Absorcin | Caco2
La prueba de Caco2 puede utilizarse para detectar cuando el transporte activo ejerce un efecto significativo El transporte no es igual en ambas direcciones
Apical Basolateral

EffluxRatio =

Papp (a b) Papp (b a)

Hay una dependencia con la concentracin

Passive Influx + Passive

Passive Efflux + Passive

Flux

[S]

Flux

[S]
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Absorcin | Caco2
Las clulas Caco2 expresan un gran nmero de transportadores que pueden afectar la permeabilidad La expresin depende de los parmetros de incubacin, resultados NO reproducibles Los resultados obtenidos con diversos protocolos experimentales no son homogneos: se usan compuestos patrn y curvas de calibracin.

Otros problemas Ausencia de moco No hay heterogeneidad celular Expresin variable de transportadores y enzimas No contienen citocromos Problemas de adsorcin al plstico etc.

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Distribucin
Una vez el compuesto es absorbido en el tracto GI llega a la sangre El compuesto, disuelto en el plasma, puede unirse a las protenas plasmticas Si la fraccin de frmaco unido no es muy alta (<90%) y las cinticas de unin y disociacin son normales, suele haber bastante frmaco para llegar al sitio de unin Cuando la fraccin de compuesto unido a protenas es muy elevada (>90%), es necesario hacer estudios especficos

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Distribucin | unin a protenas

Protenas ms relevantes Albumina: protena de unos 65kDa, con dos sitios de unin: sitio I y sitio II 1-acid glycoprotein: 40 kDa protena que une frmacos neutros y bsicos Lipoproteins: no son protenas sino agregados macromoleculares que transportan lpidos en sangre y contienen fosfolpidos, trigliceridos, protenas varias (ApoA, ApoB, ApoC and ApoE) y colesterol
fosfolpidos

colesterol triglicridos

Esquema de un Quilomicron
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Distribucin | ensayos de unin a protenas

Los ensayos de unin a protenas pueden realizarse utilizando membranas de dilisis (que no permiten paso de las protenas) en sistemas estticos o en centrfugas Se usan soluciones HSA (human serum albumin)
Membrana
H Hdrug S S A A

A tiempo infinito se obtiene el equilibrio

drug drug drug

H S A

drug H drug
S A

H S A

H S A

drug drug

Pueden ser utilizados para pruebas in vitro o ex vivo

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Distribucin | ensayos de unin a protenas

Los ensayos de unin a protenas pueden realizarse utilizando membranas de dilisis (que no permiten paso de las protenas) en sistemas estticos o en centrfugas Se usan soluciones HSA (human serum albumin)

Frmaco unido a HSA

Frmaco libre

Pueden ser utilizados para pruebas in vitro o ex vivo

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Distribucin | prediccin in silico

La afinidad de los frmacos por las protenas plasmticas tambin puede predecirse con ms o menos fortuna usando mtodos in silico de modelado molecular

Estructura de albmina humana co-cristalizada con naproxeno

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Distribucin | paso de la barrera hemato-enceflica

Cuando la diana farmacolgica se encuentra en el SNC, el frmaco debe penetrar la barrera hematoenceflica (BBB), lo que hace necesario ensayos especficos

Cerebro

Oatp2

MRP4

OAT3

metabolismo

Pgp

MRP1 MRP2 MRP4 MRP5 BCRP Oatp2Oatp3

Difusin pasiva
Adaptado de Gabriele Cruciani

Sangre

Transporte activo
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Metabolismo
La mayor parte del metabolismo se lleva a cabo en el hgado: Es el rgano encargado de detoxificacin, con gran contenido enzimtico La circulacin portal lleva los frmacos desde el intestino delgado directamente al hgado

Pueden distinguirse dos fases: Fase I. Introduccin o exposicin de un grupo funcional Fase II. Formacin de un complejo con un fragmento polar

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Metabolismo | fase I
Consiste en la introduccin o exposicin de un grupo funcional en el compuesto Las reacciones pueden ser de: N-Dealquilacin, O-Dealquilacin, Hidroxilacin, NOxidacin, S-Oxidacin, Deaminacin, Hydrlisis. Las principales enzimas encargadas involucradas son los citocromos p450 (CYP) Existen diversos subtipos de CYP con preferencia por ciertos tipos de compuestos

CYP3A4 CYP2D6 CYP2C CYP1A2 CYP2E1

Nmero de reacciones en Isis Base Reaction

database
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Metabolismo | fase II
Se forma un enlace covalente con un cido glucurnico, sufato, glutatin, aminocidos o acetato El resultado es un compuesto ms hidrosoluble, que es fcilmente excretable por va renal. Parte pasa a la bilis y puede ser reabsorbido en el intestino (recirculacin entero-heptica)

Transporte activo

Transporte pasivo

Transporte a bilis Fase I Fase II

Hgado

sangre

Rion

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Metabolismo | relevancia en desarrollo de frmacos

Los aspectos relacionados con el metabolismo tienen una gran importancia El metabolismo produce derivados que pueden ser o no activos, condicionando la cantidad de compuesto en sangre y su evolucin en el tiempo Los metabolitos pueden ser txicos y deben ser identificados Los compuestos pueden bloquear las enzimas, produciendo un tipo de toxicidad Cuando el metabolismo se produce principalmente por enzimas con gran polimorfismo, la biodisponibilidad en la poblacin puede ser heterognea

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Metabolismo | tipos de ensayos

Los ensayos relacionados con el metabolismo persiguen distintos objetivos Identificar los metabolitos Identificar las principales enzimas implicadas Tipos de experimentos: Aclaramiento in-vivo, semivida Secciones de hgado Hepatocitos (cultivos primarios, inmortalizados) Microsomas (de hgado humano, de rata) Citocromos recombinantes

Estudios con citocromos P450 (CYP): Inhibicin: IC50 y tipo (competitiva, irreversible, etc.) Velocidad del metabolismo: Vmax/km, semivida Sitio de metabolismo

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