Cromatografia circular en papel de filtro de

Extracto alcohólico de flor de granado

Antonio Quirante Candel

aquirant@yahoo.es

Introduccion

El objetivo de este trabajo es describir una experiencia de laboratorio que permite la separación
cromatográfica de algunos componentes fenólicos de un extracto alcohólico de pétalos de flores
de granado. El desarrollo cromatográfico se lleva cabo por cromatografía circular sobre papel de
filtro ordinario utilizando como eluyente una mezcla alcohol-agua-clorhídrico (48-48-4)

Procedimiento

1) Se prepara la muestra a estudiar disolviendo 5 pétalos de flores de granada 4cc. de

alcohol que contiene una gota de clorhídrico concentrado. Se tritura n los pétalos en la
disolución y se deja en maceración durante 4 minutos.
2) Se vierte en el centro de una hoja de papel filtro de 8x8 cm. aaproximadamente una
gota de la disolución anterior que debe presentar una coloración rojo-naranja intensa.
3) Desde el centro de la mancha se desarrolla el cromatograma con la disolución eluyente
anteriormente indicada, alcohol-agua-clorhídrico (48-48-4). Cuando el desarrollo
circular del cromatograma ha alcanzado 5 cm. de diámetro se considera finalizado el
proceso y se retira el contacto con el eluyente.
4) El estudio de la separación cromatográfica se lleva a cabo a través de fotografías del
mismo, bien sea con luz visible o por la fluorescencia que presente a la luz
ultravioleta.Además de las manchas observadas con este procedimiento puede
modificarse el aspecto del cromatograma recurriendo a revelados previos con reactivos
iónicos capaces de formar compuestos con polifenoles.En esta experiencia se han
utilizados iones Ca(II) y Fe(III) en medio básico como reactivos reveladores.
5) Mediante una fotorresistencia aplicada a las imágenes obtenidas se lleva a cabo una
lectura densitométrica de la intensidad de las manchas desarrolladas en cada caso, de
acuerdo con el procedimiento descrito en otro documento de este autor (1)

Resultados

A) Cromatogramas obtenidos

La figura 1 muestra las imágenes de cromatogramas obtenidos de cuatro cromatogramas

de extracto alcohólico de pétalos de flors de granada desarrollados por el procedimiento
anteriormente que difieren exclusivamente en las condiciones en que las imágenes han
sido obtenidas: 1) luz visible; 2) revelado con Fe(III)+ vapores de NH3 y luz visible;
3)imagen en luz UV por transparencia; 4)Revelado con Ca(OH)2 y luz UV por
transparencia.
Figura 1.- Imágenes de desarrollos cromatográficos circulares de 4 muestras idénticas de
extracto alcohólico de pétalos de flor de granada en distintas condiciones de obtención de la
imagen. 1) luz visible; 2) Fe(III), luz visible; 3) luz ultravioleta; 4) Revelado con Ca(OH)2,
imagen luz ultravioleta.

B) Densitometría de los cromatogramas.

De acuerdo con el punto 5 del procedimiento se ha llevado a cabo el registro obtenido de la

señal detectada por una fotorresistencia aplicada a las imágenes en monitor de los
cromatogramas obtenidos. Las gráficas que se muestran en la figura 2 muestran la respuesta de
la fotorresistencia frente a Rf para los cromatogramas 1-4.En ellas se ha señalado la
correspondencia entre la respuesta del detector y las bandas más significativas observadas en los
cromatogramas
 1 2

3 4

Figura 2.- Densitometrías de los cromatogramas 1-4 de la figura 1

C) Localización y propiedades de las bandas obtenidas

a) Rf 0-0,17: Banda correspondiente a especies no observables en el visible directamente

(cromatograma 1) aunque sí lo son en el ultravioleta (cromatograma3) y en el visible
tras reacción con Fe(III). Su ausencia en el cromatograma 4 puede ser debida a
solapamiento por la elevada intensidad del pico en Rf= 0,2 en este cromatograma.

b) Rf 0,2: Pico detectado en mayor o menor medida en todos los cromatogramas.Su

intensidad se define o eleva considerablemente en las reacciones con Fe(III) y Ca(II)
(cromatogramas 2 y 4)
 c) Rf 0,3-0,5: Banda observable directamente en luz visible de color rojo-naranja
(cromatograma 1). A la luz ultravioleta (cromatograma 3) se manifiesta con con una
fluorescencia amarilla intensa.En presencia de Fe(III) (cromatograma 2) modifica poco
su coloración con respecto al cromatograma 1, Revelado con Ca(OH)2 da una
coloración azul a la luz ultravioleta (cromatograma 4)

d) Rf 0,9-1.- Mancha poco intensa apreciable directamente con luz visible (cromatograma
1)Con luz ultravioleta se manifiesta con débil fluorescencia azul claro (cromatograma
3). La presencia de Fe(III) modifica poco su coloración. Con Ca(OH)2 en luz UV no
resulta apreciable esta banda.

e) En el intervalo de Rf 0,7-0,8 hay señales de presencia de una banda de poca intensidad

que no da una reacción destacable con ningún reactivo.

Propuestas de identificación.

A) La banda Rf = 0,3-0,5 puede deberse a sustancias antocianídicas. La bibliografía indica

al compuesto 3,5­diglucosido de  pelargonidina como cmponente más
importante de este tipo en la flor de granado (Noda Y, Kaneyuki T, Mori A,
Packer L.) (2)
B) La capacidad de reacción con Fe(III) y de formar precipitados con Ca(II) en medio
básico de las manchas de la banda Rf = 0-0,2 puede ser originada por diversos
derivados del ácido elágico.

Referencias

(1) A. Quirante Candel. Cromatografía circular en papel de filtro

http://www.scribd.com/quirante

(2) Noda Y, Antioxidant activities of pomegranate fruit extract and its

anthocyanidins: delphinidin, cyanidin, and pelargonidin.
J Agric Food Chem. 2002 Jan 2;50(1):166-71.