Extrao de DNA Vegetal: O que Estamos Realmente Ensinando em Sala de Aula?

Cludia Maria Furlan, Ana Carolina de Almeida, Cristiane Del Nero Rodrigues, Daniel Gouveia Tanigushi, Dborah Yara A. C. dos Santos, Lucimar Barbosa Motta e Fungyi Chow
Material vegetal como fonte de DNA tem sido extensamente usado em sala de aula para prticas em laboratrio. Este trabalho tem por objetivo discutir importantes aspectos relacionados a problemas prticos do isolamento e da identificao de DNA obtido de plantas durante aulas de Cincias e Biologia. Baseado em respostas de professores de educao bsica, foi detectada grande dificuldade na identificao de camadas de pectinas e o verdadeiro DNA. Vrios aspectos concernentes ao correto discernimento entre DNA e pectina so discutidos. DNA vegetal, extrao de DNA, pectinas

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Recebido em 31/07/2009, aceito em 13/10/10

Introduo

Este artigo relata a percepo na decorrente dificuldade no discernimento de pectina e DNA, aps ministrar quatro edies de um curso O dna: assunto de atualidade no de atualizao de professores, em nosso dia-a-dia extraes a partir de material vegeA mdia traz cada vez mais tal em uma das aulas prticas mais assuntos vinculados cincia, frequentes na Educao Bsica e no atraindo constantemente o interesEnsino Superior. Tambm so disse do cidado comum. No entancutidos e apontados os principais to, muitas vezes, aspectos crticos na so considerados extrao de DNA vetemas difceis de getal; os equvocos Embora contedos serem compreendina aplicao dos relacionados com DNA dos e associados protocolos de extrasejam contemplados ao nosso cotidiano. o; a confuso na no ensino fundamental, A Botnica, em parinterpretao dos mdio e superior, alunos e ticular, aparece em resultados; alm da educadores muitas vezes discusses relacioconstatao na falta no conseguem associar o nadas a Organisde contextualizao DNA a uma molcula real mos Geneticamente do termo DNA com e, muito menos, relacionar Modificados (OGM, vegetal. A finalidae compreender a sua os famosos transde deste trabalho presena nos vegetais. gnicos), proteo auxiliar e esclarecer da biodiversidade alguns aspectos do vegetal em reas de conservaprotocolo dessa to difundida expeo, desmatamento da Amaznia, rincia em sala de aula, bem como
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apresentar dados de pesquisa resultante de questionrios aplicados a educadores da educao bsica (Cincias e/ou Biologia) e do ensino superior.

reas de expanso agrcola para produo de biocombustvel, descobertas de novas substncias com ao farmacolgica ou cosmtica, entre outras notcias. Entretanto, a compreenso e o aprendizado dos conceitos botnicos abordados na escola ou na faculdade ainda apresentam alguma dificuldade em serem realmente contextualizados (Kinoshita e cols., 2006; Silva e cols., 2006), ou seja, com real implicao nas nossas atividades no dia a dia e frequentemente carecem de significado com a nossa realidade. Ricardo e cols. (2007) abordam as recentes propostas de reforma da educao bsica brasileira e a universalizao do acesso ao ensino, a interdisciplinaridade e a reviso das prticas docentes de forma que os conhecimentos aprendidos na educao bsica possam ir alm dos muros da escola. Nesse particular, o ensino de Cincias/Biologia tem o grande papel de tentar responder aos anseios da sociedade moderna, servindo de ponte entre cincia bsica e tecnologia.
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Um exemplo disso refere-se ao assunto que queremos debater aqui com o educador. De todas as molculas conhecidas, o cido desoxirribonucleico ou DNA (nome oriundo da sigla em ingls Deoxyribonucleic Acid ) uma das mais complexas de entendimento, no s para o estudante, mas tambm para leigos e alguns bilogos. A natureza qumica do material gentico, o DNA, comeou a ser desvendada em 1869, quando Johann Friederich Miescher verificou que quase todas as clulas vivas continham um ncleo, em cujo interior havia uma substncia, que Miescher denominou de nuclena. Posteriormente, por volta de 1889, Richard Altmann verificou a natureza cida da nuclena, mudando-a subsequentemente para o nome de cido nucleico. A estrutura da molcula de DNA foi concomitantemente elucidada por James Watson e Francis Crick, em 1953, consagrando a descoberta da estrutura de dupla hlice das duas longas fitas de DNA que se enrolam (Raw e cols., 2001). Essas informaes so facilmente declamadas por qualquer aluno da educao bsica, mas o conceito de DNA ainda de difcil entendimento. Embora contedos relacionados com DNA sejam contemplados no ensino fundamental, mdio e superior, alunos e educadores muitas vezes no conseguem associar o DNA a uma molcula real e, muito menos, relacionar e compreender a sua presena nos vegetais. A imagem mais recorrente entre as pessoas procede do fato de que como os vegetais no se mexem, logo no so seres vivos. Esse um dos desafios mais importantes que ns botnicos temos: desmistificar tal pressuposio e incorporar o conhecimento que plantas so de fato seres vivos.

Extrao de dna em sala de aula: dificuldade na identificao do dna

Entre as muitas modalidades didticas para um aprendizado mais eficiente que permitiria uma melhor associao entre assuntos relacionados ao DNA e vivncia
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cotidiana, experincias de extrao o que motivou o desenvolvimento de DNA a partir de material vegetal deste estudo. em sala de aula tm sido uma das Como parte de uma atividade ferramentas mais popularmente prtica de um curso de atualizao aplicada (Borges e Lima, 2007; de professores, aplicamos a aula de Bionet, 2009; Galhardo, 2009; ITQB, extrao de DNA de banana. Nesse 2009; Lomax, 2009; NCBE, 2009a; momento, fomos alertados que al2009b). guns materiais vegetais (entre eles, Segundo Borges e Lima (2007), a banana) podem no ser a melhor uma das estratgias ou procediescolha para o desenvolvimento mentos mais utilizados pelos prodessa atividade devido ao fato de fessores de Cincias/Biologia em apresentar alta concentrao de sala de aula so as aulas prticas, pectinas, um acar que extrado apontadas pelos prprios profesjuntamente com o DNA e fica mistusores como um dos melhores rerado a ele, sendo corriqueiramente cursos para um dilogo entre teoria confundido com essa molcula. e prtica. Sendo assim, testamos o protocolo Em estudo realizado por Guicom os alunos/professores usando mares e cols. (2006), de 56 prodiversos materiais vegetais (cebola, fessores entrevistados, 71% deles banana e morango) para avaliar apontam aulas prticas/experisua identificao e isolamento. mentao como a estratgia mais Ao final da extrao, verificamos adequada ao ensino de Cincias e, a grande dificuldade dos profesdestes, apenas 12% no a utilizam. sores em identificar a camada A escolha das modalidades didtiformada por DNA, apontando muicas ou estratgias, tas vezes a regio como descritas por contendo pectinas. Guimares e cols. Essa dificuldade na Ao final da extrao, (2006), envolve a interpretao dos verificamos a grande tomada de decises resultados e a idendificuldade dos com relao ao tipo tificao da pectina professores em identificar e natureza das como sendo DNA a camada formada por atividades e seu no se limita aos DNA, apontando muitas melhor momento professores da eduvezes a regio contendo de aplicao; os cao bsica, pois pectinas. recursos e espao tal equvoco parece fsico necessrios ocorrer inclusive ene disponveis; e principalmente os tre pesquisadores que tm o DNA papis destinados ao professor e como objeto de estudo e docentes aos alunos, ou seja, como os aluque lecionam em instituies de nos aprendem e como aprenderiam nvel superior. melhor. As plantas vm tornando-se Protocolos de extrao de dna candidatas apropriadas para serem vegetal: histrico, dificuldades e utilizadas na extrao de DNA em interpretaes sala de aula devido facilidade de obteno de material, praticidade na manipulao e disponibilidade de A dificuldade dos professores protocolos simples, alm de existir na interpretao do resultado final restries legais para trabalhar com e a clara identificao entre DNA e material animal em sala de aula. No pectina podem ser associadas entanto, a utilizao indiscriminada numerosa quantidade de protocodos protocolos para qualquer tipo los disponveis que no explicam de vegetal ou parte do vegetal tem claramente a distino entre ambas originado a massiva difuso de as molculas quando presentes. equvocos recorrentes do correto Analisando os protocolos de exprocedimento e na identificao do trao de DNA vegetal disponveis DNA. Erro que era cometido incluem materiais didticos e na internet, sive pelos autores deste trabalho, a grande maioria traz as etapas
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claramente descritas passo a pasde maa. Esses resultados aponem sala de aula foi inicialmente desso, porm o fato mais recorrente taram constataes preocupantes. crito utilizando como fonte a cebola, a falta de explicaes mais detaProfessores graduados pelas um vegetal que possui pequenas lhadas para orientar a interpretao diferentes instituies de ensino quantidades de pectina e que, por do resultado obtido, levando o superior e que ministram aulas de isso, no oferece problemas na inprofessor e o aluno Cincias e/ou Bioloterpretao dos resultados (NCBE, a imprecises em gia ainda apresen2009a; 2009b). Basicamente, para relao ao que retam dificuldade em extrair DNA vegetal, preciso disA partir dessas almente deveria ser afirmar ou discernir sociar o tecido da planta, romper primeiras experincias, identificado como que o material vea parede celular e as membranas textos e pginas da DNA. Aps admitir getal possui DNA. plasmtica e nuclear, remover as internet nacionais nossa prpria ignoCom isso, surge protenas e isolar o DNA. A metodofizeram suas prprias rncia em identificar um questionamenlogia simples e fcil. Requer depublicaes, tradues o DNA e diferencito: ser que estatergente lquido para desnaturar as ou adaptaes, mas lo da pectina ao mos lidando com o membranas lipdicas e gua com sal muitas vezes esquecendo longo das quatro paradigma de que para neutralizar o DNA que precipidetalhes essenciais para edies do curso vegetal no ser tar ao adicionar lcool gelado, pois a interpretao dos de atualizao de vivo e por isso no estar menos solvel em soluo resultados, simplificando professores, contem DNA? alcolica. A partir de meia cebola, drasticamente o firmamos que essa Historicamente, obtida quantidade suficiente de protocolo original e era uma dificuldamtodos simples de DNA que pode ser vista como uma omitindo detalhes sobre de tambm para a extrao e isolamennuvem branca. os materiais utilizados. maioria dos quase to de DNA de mateEntretanto, devido ao aroma 150 participantes do rial vegetal aparecedesse vegetal no ser muito agracurso. Alm disso, outra constataram primeiro em textos americanos, dvel para uma sala de aula cheia o foi que muitos tm uma sria atualmente bastante difundidos em de alunos e na procura de materiais dificuldade em associar DNA ao pginas da internet (Madden, 2003; alternativos mais macios e de fcil nosso cotidiano. NCBE, 2009a; 2009b). A partir destriturao, alguns autores sugeriram Para avaliar essas ocorrncias sas primeiras experincias, textos a aplicao desse protocolo para foram adotadas duas abordagens: e pginas da internet nacionais frutas como banana, morango e (a) aplicar dois questionrios para fizeram suas prprias publicaes, kiwi. A partir dessa iniciativa de ponderar o grau de compreenso tradues ou adaptaes (Bionet, usar outros materiais (ex. banana do conceito de DNA por professores 2009; Galhardo, 2009; ITQB, 2009), e morango), originou-se, provade Cincias e/ou Biologia, tentanmas muitas vezes esquecendo velmente, o desvirtuamento do do analisar se eles tm claro que detalhes essenciais para a interprocedimento original do protocolo, vegetais ou partes dele possuem pretao dos resuluma vez que esses DNA, e se eles saberiam diferenciar tados, simplificanfrutos so dotados Existem vrias a presena de DNA e de pectina; e do drasticamente o de grandes quantireferncias com (b) analisar diferentes protocolos de protocolo original e dades de pectinas protocolos que extrao de DNA vegetal disponveis omitindo detalhes que so extradas descrevem o na literatura e na internet para idensobre os materiais juntamente com o procedimento de tificar possveis pontos de conflito utilizados. Nesse DNA e so tambm extrao de DNA a que possam confundir o educador contexto, outra intermenos solveis em partir de uma variedade e o aluno. rogante surgiu em solues alcolicas. de materiais vegetais De 36 professores entrevistados relao utilizao Entretanto, esse fato (ex. morango, ervilha, sobre quais dos seguintes itens dessa aula prtica: no impossibilita a cebola, banana). No possuem DNA entre polpa de a simplificao dos utilizao dessas entanto, umas poucas maa, casca de banana, bagao protocolos leva os frutas ou de outros fazem aluso sobre de cana, folhas de quaresmeira educadores a ensivegetais na extrao o que realmente o e catafilo de cebola , apenas 12 nar erroneamente de DNA. Faz-se neprofessor deveria (33%) responderam corretamente o que deveria ser cessrio, ento, um apontar como DNA. questo, assinalando todos os DNA? Para tentar maior cuidado no materiais. A grande maioria, acima responder a essas momento de idende 60%, acertou ao assinalar os questes, precisamos primeiro destificar os componentes extrados. itens casca de banana e folhas de crever o protocolo e sua origem a Com a aplicao desses maquaresmeira, mas apenas 50% dos fim de contextualizar nossa reflexo. teriais, h a formao de uma fraentrevistados assinalaram catafilo Um dos procedimentos mais utio superior na fase alcolica, de de cebola e menos de 35%, polpa lizados na extrao de DNA vegetal aspecto gelatinoso, mais denso e
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com abundantes bolhas de ar. Essa de uma variedade de materiais ve39 professores de universidades pfrao usualmente apontada como getais (ex. morango, ervilha, cebola, blicas e particulares dos estados de sendo DNA, correspondendo na banana). No entanto, umas poucas So Paulo, Paran e Minas Gerais, realidade frao de pectina. Uma fazem aluso sobre o que realmente mas apenas cinco retornaram os forma fcil de distino professor deveria questionrios respondidos, sendo guir em uma extraapontar como DNA. trs os que afirmaram a utilizao o a frao corresEsses protocolos do protocolo em sala de aula. Ao Uma das maiores pondente ao DNA apresentam a receiperguntar sobre o fato do apareindagaes dos daquela de pectina ta passo a passo e cimento de uma frao de pectina professores pelo reparar na consisorientam a obserdurante a extrao, dos trs profescontedo terico e no tncia da camada var o que acontece, sores que utilizam o procedimento, como transmitir ao aluno onde ela se apresensem maiores explitodos responderam como nunca esse contedo de forma ta. O DNA precipita caes. Outros mostendo reparado na formao de uma fluente, assimilvel e com o lcool e fica tram uma fotografia camada de pectina nos diferentes associvel. na parte inferior da do resultado final da materiais extrados (banana, moranfase alcolica, logo extrao, mas ainda go e cebola). Apenas um professor acima da fase aquosa. A pectina assim sem apontar as camadas de respondeu que tem conhecimento fica na superfcie da fase alcolica, pectina e de DNA, e em alguns casos da camada de pectina, porm apresenta consistncia gelatinosa e ilustrada a frao de pectina e no no sabe diferenci-la e, portanto, abundante bolhas de ar. O DNA prea de DNA. Nesse ltimo caso, como apenas informa aos alunos que ela cipitado forma um emaranhado de a frao de pectina mais evidente, formada, sem indicar qual seja. filamentos muito finos, semelhantes a confuso acontece. Esse fato foi Mesmo na extrao com cebola, a fios de algodo, e com aspecto observado durante o curso de atudados registrados por ns mostram de nuvem. Ao tentar pescar o alizao de professores, no qual a a separao de pectina durante a DNA com uma pipeta de Pasteur maioria dos participantes apontava a extrao, sendo muito mais evidente ou basto de vidro, este gruda e camada de pectinas em banana e moapresenta aspecto de filamentos como sendo a de rango (Rodrigues e muito finos que no se desagregam, DNA. cols., 2008). Esse Neste estudo, enquanto a pectina apresenta uma Muitos desses resultado pode inpudemos perceber consistncia de geleia que goteja professores utilizam dicar o desconhecicomo um recurso e se desmancha. Para evidenciar a essa experincia mento do educador didtico apontado frao contendo pectina, possvel prtica em sala de sobre a presena pelo prprio professor, conseguir sua dissoluo mediante aula a partir de matede pectina nos dicomo o mais atrativo a adio da enzima pectinase, o rial vegetal com altos ferentes materiais, ao aluno e importante qual degrada a pectina em soluo teores de pectina. o que pode induzir na fundamentao de (Rodrigues e cols., 2009). No entanto, verifiao equvoco. Esconceitos tericos, H muito tempo no novidade camos que h uma ses resultados no pode, muitas vezes, a ocorrncia de pectina junto com grande confuso respondem nossa ser inadequado, o DNA em experimentos utilizando em identificar corpergunta de forma quando mal aplicado material vegetal nem mesmo o fato retamente a frao conclusiva, uma vez e, especialmente, mal de que esses acares possam ser de DNA obtida ao que poucos entrediscutido. confundidos com o DNA. Refernfinal do protocolo. vistados retornaram cias bibliogrficas na lngua inglesa Surgiram ento noseus questionrios, so mais frequentes em apresentar vos questionamentos: ser que o mas apontam para um possvel ressalvas quanto possibilidade educador realizou essa experincia equvoco de interpretao j no de concluses equivocadas quandurante a sua graduao? Ser que ensino superior. do protocolos so arbitrariamente os professores que formam esses Consideraes finais empregados a materiais que coneducadores cometem o mesmo tenham grandes concentraes de erro? os resultados compilados da pectinas. Para responder a essas quesnossa experincia com os profesDessa forma, ao utilizar materiais tes, foi desenvolvido um questiosores e seus relatos, de pesquisa ricos em pectinas, fundamental nrio direcionado exclusivamente a bibliogrfica e da aplicao de que o professor e os alunos saibam professores de educao superior questionrios salientam que os edudiferenciar o que realmente seria a que aplicam a experincia de extracadores apresentam a dificuldade de camada de DNA. o de DNA de material vegetal em transpor e contextualizar assuntos Existem vrias referncias com aulas de graduao. Nosso primeiro relacionados ao DNA e sua extrao, protocolos que descrevem o proceentrave foi a devoluo dos questiosem estabelecer uma ponte entre o dimento de extrao de DNA a partir nrios. Enviamos o questionrio a conhecimento cientfico trabalhado
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durante a graduao, o trabalhado em sala de aula e sua vivncia cotidiana. Dessa forma, sua dificuldade em contextualizar esse conhecimento torna essa situao um crculo vicioso no qual o aluno incorpora a dificuldade de ter uma representao mental do conceito e, dessa forma, este ser apenas definido verbal e teoricamente. Essa prtica de memorizao comum em muitas matrias da biologia e compromete a internalizao (contextualizao, associao) dos conceitos, caindo em uma rotatividade, na qual professores e alunos no so capazes de entender esse conhecimento, e menos ainda de fazer essa transposio de forma palatvel e contextualizada, ou seja, no esto conscientes do conhecimento sobre o assunto em estudo nem sabem falar sobre ele ou no so capazes de represent-lo mentalmente. Nossa proposta no a correo de protocolos, uma vez que estes se encontram bem descritos na literatura. A inteno desta pesquisa chamar a ateno para a correta identificao da fase em que se encontra o DNA precipitado, contribuindo assim para uma correta interpretao dos

resultados obtidos. Como mais uma forma de contribuir para a correta utilizao de protocolos de extrao de DNA a partir da material vegetal, disponibilizamos no site http://www. ib.usp.br/materiaisdidaticos um material de apoio, ilustrado com imagens de todo o protocolo de extrao, utilizando diferentes materiais vegetais. Ao final, esto devidamente identificadas as fraes contendo pectinas e DNA a partir de vrios materiais: cebola, banana, casca de banana, morango, folha e flor. A utilizao de aulas prticas propicia a vivncia do mtodo cientfico, redescobrindo o j conhecido pela cincia, com a participao ativa do aluno no processo de aprendizagem. Dessa forma, como etapa de primordial importncia no uso dessa modalidade didtica est a discusso dos resultados obtidos (Krasilchik, 1996). Guimares e cols. (2006), em pesquisa feita com professores da educao bsica, verificaram que aula prtica sinnimo de experimentao (laboratrio) e que 71% deles utilizam esse recurso como a estratgia mais adequada ao ensino de Cincias. Entretanto, uma das maiores indagaes dos
dia_aberto2006/Curiosidades/DNA%20 bananaA4.pdf>. Acesso em: 24 fev. 2010. KINOSHITA, L.S.; TORRES, R.B.; TAMASHIRO, J.Y. e FORNI-MARTINS, E.R. A botnica no ensino bsico: relatos de uma experincia transformadora. So Carlos: RIMA, 2006. KRASILCHIK, M. Prtica de ensino de Biologia. 4. ed. So Paulo: EDUSP , 1996. LOMAX, T.L. DNA in my food??? Disponvel em: <http://www.biotech.iastate.edu/ ppt_presentations/html/DNA_food/01. html>. Acesso em: 24 fev. 2010. MADDEN, D. Illuminating DNA. Reading, UK: National Centre for Biotechnology Education. School Science Review. v. 84, p. 36, 2003. NCBE. Discovering DNA. Disponvel em: <http://www.ncbe.reading.ac.uk/DNA50/ peadna.html>. Acesso em: 24 fev. 2010a. ______. DNA your onions? Disponvel em: <http://www.ncbe.reading.ac.uk/

professores pelo contedo terico e no como transmitir ao aluno esse contedo de forma fluente, assimilvel e associvel. Aparentemente, os educadores carecem de conhecimentos relacionados a aspectos bsicos da Botnica que so parte do contedo da educao bsica. Neste estudo, pudemos perceber como um recurso didtico apontado pelo prprio professor, como o mais atrativo ao aluno e importante na fundamentao de conceitos tericos, pode, muitas vezes, ser inadequado, quando mal aplicado e, especialmente, mal discutido.
Cludia Maria Furlan (furlancm@yahoo.com. br), doutora em Cincias Biolgicas, docente e pesquisadora do Departamento de Botnica, Instituto de Biocincias, Universidade de So Paulo (IB-USP). Ana Carolina de Almeida (anacarolusp@yahoo.com.br) bacharel em Cincias Biolgicas. Cristiane Del Nero Rodrigues (babetecris@yahoo.com.br) doutora em Cincias Biolgicas. Daniel Gouveia Tanigushi (danieltanigushi@yahoo.com.br) mestre em Cincias Biolgicas. Dborah Yara A. C. dos Santos (dyacsan@ib.usp.br), doutora em Cincias Biolgicas, docente e pesquisadora do IB-USP. Lucimar Barbosa Motta (lugalll@yahoo.com.br), doutora em Cincias Biolgicas, pesquisadora do IB-USP. Fungyi Chow7,8* (fchow@ib.usp.br), doutora em Cincias Biolgicas, docente e pesquisadora co IB-USP.

Referncias
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Abstract: Extraction of plant dna: what we are teaching in classroom? Vegetable material as DNA source has been widely used in laboratory exercises for high-school and undergrad students. This paper aims to discuss important aspects related to practical problems of both isolation and identification of DNA obtained from plants during Science and or Biology classes. Based on questionnaire answers from teachers of basic and high-school, we detected a severe difficulty related to identification of pectin layer and real DNA. Several points concerning to the correct discernment between DNA and pectin, common components extracted by traditional protocols, are discussed. Keywords: DNA extraction, plant DNA, pectins.

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