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El desafo de identificar correctamente Enterobacterias.

Mara Emilia Surez Bioq.Bacteriloga

CARACTERSTICAS
COCOBACILOS : 0,4-0,6 m x 2-3 m GRAM NEGATIVOS NO ESPORULADOS, ANAEROBIOS FACULTATIVOS, MVILES O INMVILES FERMENTAN GLUCOSA, CATALASA POSITIVOS, OXIDASA NEGATIVOS

TAXONOMA
SECCIN 5, 2da EDICIN BERGEY 41 GNEROS Y CIENTOS DE ESPECIES CLASIFICACIN POR CRITERIOS BIOQUMICOS Y ANTIGNICOS ACTUALMENTE CRITERIOS GENTICOS: HIBRIDACIN ADN, SECUENCIACIN ADN Y ARNr 16S

Familia Enterobacteriaceae
8 Tribus con los correspondientes gneros en cada una de ellas

Tribu I: ESCHERICHIEAE: Gnero I: Escherichia / Gnero II: Shigella Tribu II: EDWARSIELLEAE : Gnero I: Edwarsiella Tribu III: SALMONELLEAE: Gnero I : Salmonella Tribu IV: CITROBACTEREAE : Gnero I : Citrobacter Tribu V: KLEBSIELLEAE: Gnero I: Klebsiella / Gnero II: Enterobacter Gnero III: Hafnia/ Gnero IV: Serratia Tribu VI: PROTEEAE: Gnero I: Proteus / Gnero II: Morganella Gnero III: Providencia Tribu VII: YERSINIEAE : Gnero I : Yersinia Tribu VIII: ERWINIEAE : Gnero I: Erwinia

PODER PATGENO
ALREDEDOR DE 28 ESPECIES TIENEN IMPORTANCIA CLNICA CAUSANTES DE DIVERSOS CUADROS CLNICOS PATGENAS VERDADERAS O PRIMARIAS PATGENAS OPORTUNISTAS O POTENCIALES

TIPIFICACIN
BIOTIPIFICACIN: CARACTERES BIOQUMICOS SEROTIPIFICACIN: ANTGENOS O (SOMTICOS), K Vi (CAPSULARES) y H (FLAGELARES) SEROGRUPOS Y SEROTIPOS

TIPIFICACIN

FAGOTIPIFICACIN: DE VALOR EN Salmonella y E. coli PATRN DE RESISTENCIA A LOS ANTIMICROBIANOS GENOTIPIFICACIN MOLECULAR: GRUPOS CLONALES, etc.

Antgenos de Enterobacteriaceae
K Ag

Enterobacterias frecuentes con significacin clnica Citrobacter freundii, Citrobacter koser Enterobacter aerogenes, Enterobacter cloacae Escherchia coli Klebsiella pneumoniae, Klebsiella oxytoca Morganella morganii Proteus mirabilis, Complejo Proteus vulgars Salmonella entrica Serratia marcescens Shigella sonnei, Shigella flexneri Yersinia pestis, Yersinia enterocolitica, Yersinia pseudotuberculosis

AISLAMIENTO E IDENTIFICACIN
MEDIOS COMUNES MEDIOS SELECTIVOS/DIFERENCIALES INHIBEN CRECIMIENTO DE GRAM POSITIVAS Y OTRAS GRAM NEGATIVAS NO ENTRICAS CITRATO SDICO, EOSINA, SALES BILIARES, CRISTAL VIOLETA, etc.

AISLAMIENTO E IDENTIFICACIN
MUESTRAS EXTRAINTESTINALES (sangre, orina, material de abscesos y heridas,tracto respiratorio) Medios enriquecidos/ Cromognicos Agar Mac Conkey, EMB. MUESTRAS INTESTINALES: Selectivos- diferenciales Enriquecimiento previo

Qu medios usamos y que aspecto presentan las colonias?

Oxidasa

Qu medios usamos y que aspecto presentan las colonias?

1- Shigella 2- Grupo KES 3- E.coli

TSI

TRIBU I : ESCHERICHIEAE

Mac Conkey Sorbitol

Mac Conkey

Cmo diferenciamos Shigella de E.coli ?


Pruebas Indol Lisina decarboxilasa Ornitina decarbox. Lactosa Acetato de sodio Gas de glucosa Motilidad E.coli + (96,3) D (80,6) D (57,8) + (91,6) + (83,3) + (92) + (62,1) Shigella - + (37,8) - (0) - + (20) - (0,3) - (0) - (2,1) - (0)

RM

VP

Diferenciacin de Shigella

E.coli

Shigella

TSI

LIA Acetato

MIO

ONPG

Clasificacin Serolgica
Especie Serogrupo Serotipo

S. dysenteriae S. flexneri S. boydii S. sonnei

A B C D

1- 12 1- 6 1- 18 1

TRIBU II: EDWARDSIELLEAE


Prueba bioqumica Lactosa (fermentacin) SH2 Indol Trehalosa (fermentacin) Manitol, sacarosa (ferm) Arabinosa (fermentacin) Malonato (utilizacin) Movilidad a 37C Habitad E.tarda + + -/+ + Hombre y animales

TRIBU III:SALMONELLEAE
GNERO I: Salmonella Salmonella entrica Salmonella bongori

Salmonella enterica subesp. enterica (I)

Prueba bioqumica Lactosa (fermentacin)*** ONPG SH2 Glucosa (fermentacin)*** Rojo de Metilo* Voges Proskauer* Lisina decarboxilasa** Ornitina decarboxilasa** Arginina dehidrolasa** Urea (hidrlisis)** Malonato (utilizacin)* Citrato Simmons**

Sal.subesp.(I) + +/ con gas + + + + +

*Lectura a los 2das **Lectura hasta los 4 das ***Lectura hasta los 7 das
Servicio Enterobacterias. ANLIS.INEI. Carlos G.Malbrn 2008

Diferencias entre Salmonella subesp.enterica (I) y Proteus mirabilis


Prueba bioqumica Salmonella entrica subesp.enterica(I) + + + + Proteus mirabilis

SH2 Urea (hidrlisis) Fenilalaninadeaminasa Lisina decarboxilasa Ornitina decarboxilasa Lactosa (fermentacin) Dulcita (fermentacin) ONPG

+ + + + -

+ 90% o ms de los resultados positivos, - 90% o ms de los resultados negativos

Servicio Enterobacterias. ANLIS.INEI. Carlos G.Malbrn 2008

Diferencias entre Salmonella subesp.enterica (I) y Citrobacter freundii


Prueba bioqumica Salm entrica subesp.enterica(I) + + + + Citrobacter freundii

SH2 Urea (hidrlisis) Lisina decarboxilasa Ornitina decarboxilasa Lactosa (fermentacin) Sacarosa (fermentacin) Dulcita (fermentacin) Malonato (utilizacin) ONPG

+ d d d d d d +

+ 90% o ms de los resultados positivos, - 90% o ms de los resultados negativos, d: diferentes reacciones

Servicio Enterobacterias. ANLIS.INEI. Carlos G.Malbrn 2008

Diferencias entre Salmonella enterica subesp.enterica (I), Edwarsiella tarda y Escherichia coli SH2 +

Pruebas bioqumicas

Salmonella entrica subesp. enterica(I)

E.Tarda

E.coli SH2+

Indol Citrato Simmosns Lisina decarboxilasa Arginina dehidrolasa Manita (fermentacin) Dulcita (fermentacin) Ramnosa (fermentacin) Xylosa (fermentacin) ONPG

+ + + + + + + -

+ + -

+ + -/+ + +/+ + +

+ 90% o ms de los resultados positivos, - 90% o ms de los resultados negativos, d: diferentes reacciones
Servicio Enterobacterias. ANLIS.INEI. Carlos G.Malbrn 2008

AGAR SS

AGAR RAMBACH TSI de Salmonella LIA de Salmonella

S.Paratyphi A

S. Typhi

AGAR XLD

TRIBU IV: CITROBACTEREAE

Prueba bioqumica Movilidad

Citrobacter spp + + + + + -

Citrobacter freundii

Manitol (fermentacin) Lisina decarboxilasa ONPG Citrato de Simmons Rojo de Metilo Voges- Proskauer

Para diferenciar especies, recurrir a las siguientes pruebas: H2S Indol Malonato (fermentacin) ODC Adonitol (fermentacin) Melibiosa (fermentacin) Sacarosa Dulcitol

En cepas de Citrobacter freundii pueden ocurrir reacciones atpicas como: ONPG: - ( diferenciar con Salmonella) O clasificadas como S. arizonae por compartir los siguientes caracteres: SH2 +/ ONPG +/ y un perfil de H de carbono muy parecidos Tambin hay cepas SH2:- y Citrato: -

TRIBU V: KLEBSIELLEAE

GRUPO KES

Klebsiella

Brock Biologa de los Microorganismos 10 edic.

Pantoea agglomerans

Enterobacter aerogenes

Prueba bioqumica
Movilidad Lisina decarboxilasa

E. cloacae
+ -

E. aerogenes
+ +

Arginina dehidrolasa

Serratia marcescens

D-xylosa(-) D-manosa (+)

(+) DNAsa

(-)

Prueba bioqumica
Arabinosa (fermentacin)

Serratia marcescens
-

Serratia liquefaciens
+

Xilosa (fermentacin)

Melibiosa (fermentacin)

Rafinosa (fermentacin)

Pigmento rojo

Se han descripto cepas de S.marcescens excepcionalmente atpicas: lactosa +,o lactosa y rafinosa +, nitrato reductasa -, mucosas y V P -

Hafnia alvei

ONPG:+, Movilidad:- (37C) y +(22C), Lisina decarboxilasa:+, ODC:+,ADH:-, Lactosa :Hay cepas ONPG:- se pueden confundir con Salmonella: Citrato:-, SH2:Cepas Urea+ (5%) se pueden confundir con Yersinia enteroclotica: diferenciar con LIA:+, Sorbitol:-, Sacarosa:-

TRIBU VI: PROTEEAE

Proteus

Diferenciacin entre los gneros Proteus, Providencia y Morganella

Test Bioqumicos Citrato Ferm de D- Manosa Liquefaccin de gelatina 22C H2S en TSI Ferm myo-inositol Ornitina decarboxilasa Swarmming Hidrlisis de urea

Proteusa V + + V + +

Providenciaa + + V V

Morganellaa + V (+) +

a reacciones dentro de las 48 hs +: 90 100% de positivo (+): 75 89,9% de positivo (-) 10,1 a 25 5 de positivo -: 0 10% de positivo

OHara y col Clin Microb Rev.2004.534-546

Proteus

TRIBU VI: YERSINIEAE Gnero: Yersinia

Prueba bioqumica TSI Urea (hidrlisis a 35C,1-4 das) Lactosa (fermentacin) Fenil alanita deaminasa Rammonsa (fermentacin a 25C) VP (22-25C)

Y.enterocolitica K/A sin gas SH2 + +

Medios cromognicos- BD CHROMagar Orientation Medium


Grupo KES Grupo PMP/ Pae E.coli

CPSID3

E.coli

VITEK

Mara Emilia Surez Bioq.Bacteriloga

El desafo de identificar correctamente Enterobacterias.

Mara Emilia Surez Bioq.Bacteriloga

CARACTERSTICAS
COCOBACILOS : 0,4-0,6 m x 2-3 m GRAM NEGATIVOS NO ESPORULADOS, ANAEROBIOS FACULTATIVOS, MVILES O INMVILES FERMENTAN GLUCOSA, CATALASA POSITIVOS, OXIDASA NEGATIVOS

TAXONOMA
SECCIN 5, 2da EDICIN BERGEY 41 GNEROS Y CIENTOS DE ESPECIES CLASIFICACIN POR CRITERIOS BIOQUMICOS Y ANTIGNICOS ACTUALMENTE CRITERIOS GENTICOS: HIBRIDACIN ADN, SECUENCIACIN ADN Y ARNr 16S

Familia Enterobacteriaceae
8 Tribus con los correspondientes gneros en cada una de ellas

Tribu I: ESCHERICHIEAE: Gnero I: Escherichia / Gnero II: Shigella Tribu II: EDWARSIELLEAE : Gnero I: Edwarsiella Tribu III: SALMONELLEAE: Gnero I : Salmonella Tribu IV: CITROBACTEREAE : Gnero I : Citrobacter Tribu V: KLEBSIELLEAE: Gnero I: Klebsiella / Gnero II: Enterobacter Gnero III: Hafnia/ Gnero IV: Serratia Tribu VI: PROTEEAE: Gnero I: Proteus / Gnero II: Morganella Gnero III: Providencia Tribu VII: YERSINIEAE : Gnero I : Yersinia Tribu VIII: ERWINIEAE : Gnero I: Erwinia

PODER PATGENO
ALREDEDOR DE 28 ESPECIES TIENEN IMPORTANCIA CLNICA CAUSANTES DE DIVERSOS CUADROS CLNICOS PATGENAS VERDADERAS O PRIMARIAS PATGENAS OPORTUNISTAS O POTENCIALES

TIPIFICACIN
BIOTIPIFICACIN: CARACTERES BIOQUMICOS SEROTIPIFICACIN: ANTGENOS O (SOMTICOS), K Vi (CAPSULARES) y H (FLAGELARES) SEROGRUPOS Y SEROTIPOS

TIPIFICACIN

FAGOTIPIFICACIN: DE VALOR EN Salmonella y E. coli PATRN DE RESISTENCIA A LOS ANTIMICROBIANOS GENOTIPIFICACIN MOLECULAR: GRUPOS CLONALES, etc.

Antgenos de Enterobacteriaceae
K Ag

Enterobacterias frecuentes con significacin clnica Citrobacter freundii, Citrobacter koser Enterobacter aerogenes, Enterobacter cloacae Escherchia coli Klebsiella pneumoniae, Klebsiella oxytoca Morganella morganii Proteus mirabilis, Complejo Proteus vulgars Salmonella entrica Serratia marcescens Shigella sonnei, Shigella flexneri Yersinia pestis, Yersinia enterocolitica, Yersinia pseudotuberculosis

AISLAMIENTO E IDENTIFICACIN
MEDIOS COMUNES MEDIOS SELECTIVOS/DIFERENCIALES INHIBEN CRECIMIENTO DE GRAM POSITIVAS Y OTRAS GRAM NEGATIVAS NO ENTRICAS CITRATO SDICO, EOSINA, SALES BILIARES, CRISTAL VIOLETA, etc.

AISLAMIENTO E IDENTIFICACIN
MUESTRAS EXTRAINTESTINALES (sangre, orina, material de abscesos y heridas,tracto respiratorio) Medios enriquecidos/ Cromognicos Agar Mac Conkey, EMB. MUESTRAS INTESTINALES: Selectivos- diferenciales Enriquecimiento previo

Qu medios usamos y que aspecto presentan las colonias?

Oxidasa

Qu medios usamos y que aspecto presentan las colonias?

1- Shigella 2- Grupo KES 3- E.coli

TSI

TRIBU I : ESCHERICHIEAE

Mac Conkey Sorbitol

Mac Conkey

Cmo diferenciamos Shigella de E.coli ?


Pruebas Indol Lisina decarboxilasa Ornitina decarbox. Lactosa Acetato de sodio Gas de glucosa Motilidad E.coli + (96,3) D (80,6) D (57,8) + (91,6) + (83,3) + (92) + (62,1) Shigella - + (37,8) - (0) - + (20) - (0,3) - (0) - (2,1) - (0)

RM

VP

Diferenciacin de Shigella

E.coli

Shigella

TSI

LIA Acetato

MIO

ONPG

Clasificacin Serolgica
Especie Serogrupo Serotipo

S. dysenteriae S. flexneri S. boydii S. sonnei

A B C D

1- 12 1- 6 1- 18 1

TRIBU II: EDWARDSIELLEAE


Prueba bioqumica Lactosa (fermentacin) SH2 Indol Trehalosa (fermentacin) Manitol, sacarosa (ferm) Arabinosa (fermentacin) Malonato (utilizacin) Movilidad a 37C Habitad E.tarda + + -/+ + Hombre y animales

TRIBU III:SALMONELLEAE
GNERO I: Salmonella Salmonella entrica Salmonella bongori

Salmonella enterica subesp. enterica (I)

Prueba bioqumica Lactosa (fermentacin)*** ONPG SH2 Glucosa (fermentacin)*** Rojo de Metilo* Voges Proskauer* Lisina decarboxilasa** Ornitina decarboxilasa** Arginina dehidrolasa** Urea (hidrlisis)** Malonato (utilizacin)* Citrato Simmons**

Sal.subesp.(I) + +/ con gas + + + + +

*Lectura a los 2das **Lectura hasta los 4 das ***Lectura hasta los 7 das
Servicio Enterobacterias. ANLIS.INEI. Carlos G.Malbrn 2008

Diferencias entre Salmonella subesp.enterica (I) y Proteus mirabilis


Prueba bioqumica Salmonella entrica subesp.enterica(I) + + + + Proteus mirabilis

SH2 Urea (hidrlisis) Fenilalaninadeaminasa Lisina decarboxilasa Ornitina decarboxilasa Lactosa (fermentacin) Dulcita (fermentacin) ONPG

+ + + + -

+ 90% o ms de los resultados positivos, - 90% o ms de los resultados negativos

Servicio Enterobacterias. ANLIS.INEI. Carlos G.Malbrn 2008

Diferencias entre Salmonella subesp.enterica (I) y Citrobacter freundii


Prueba bioqumica Salm entrica subesp.enterica(I) + + + + Citrobacter freundii

SH2 Urea (hidrlisis) Lisina decarboxilasa Ornitina decarboxilasa Lactosa (fermentacin) Sacarosa (fermentacin) Dulcita (fermentacin) Malonato (utilizacin) ONPG

+ d d d d d d +

+ 90% o ms de los resultados positivos, - 90% o ms de los resultados negativos, d: diferentes reacciones

Servicio Enterobacterias. ANLIS.INEI. Carlos G.Malbrn 2008

Diferencias entre Salmonella enterica subesp.enterica (I), Edwarsiella tarda y Escherichia coli SH2 +

Pruebas bioqumicas

Salmonella entrica subesp. enterica(I)

E.Tarda

E.coli SH2+

Indol Citrato Simmosns Lisina decarboxilasa Arginina dehidrolasa Manita (fermentacin) Dulcita (fermentacin) Ramnosa (fermentacin) Xylosa (fermentacin) ONPG

+ + + + + + + -

+ + -

+ + -/+ + +/+ + +

+ 90% o ms de los resultados positivos, - 90% o ms de los resultados negativos, d: diferentes reacciones
Servicio Enterobacterias. ANLIS.INEI. Carlos G.Malbrn 2008

AGAR SS

AGAR RAMBACH TSI de Salmonella LIA de Salmonella

S.Paratyphi A

S. Typhi

AGAR XLD

TRIBU IV: CITROBACTEREAE

Prueba bioqumica Movilidad

Citrobacter spp + + + + + -

Citrobacter freundii

Manitol (fermentacin) Lisina decarboxilasa ONPG Citrato de Simmons Rojo de Metilo Voges- Proskauer

Para diferenciar especies, recurrir a las siguientes pruebas: H2S Indol Malonato (fermentacin) ODC Adonitol (fermentacin) Melibiosa (fermentacin) Sacarosa Dulcitol

En cepas de Citrobacter freundii pueden ocurrir reacciones atpicas como: ONPG: - ( diferenciar con Salmonella) O clasificadas como S. arizonae por compartir los siguientes caracteres: SH2 +/ ONPG +/ y un perfil de H de carbono muy parecidos Tambin hay cepas SH2:- y Citrato: -

TRIBU V: KLEBSIELLEAE

GRUPO KES

Klebsiella

Brock Biologa de los Microorganismos 10 edic.

Pantoea agglomerans

Enterobacter aerogenes

Prueba bioqumica
Movilidad Lisina decarboxilasa

E. cloacae
+ -

E. aerogenes
+ +

Arginina dehidrolasa

Serratia marcescens

D-xylosa(-) D-manosa (+)

(+) DNAsa

(-)

Prueba bioqumica
Arabinosa (fermentacin)

Serratia marcescens
-

Serratia liquefaciens
+

Xilosa (fermentacin)

Melibiosa (fermentacin)

Rafinosa (fermentacin)

Pigmento rojo

Se han descripto cepas de S.marcescens excepcionalmente atpicas: lactosa +,o lactosa y rafinosa +, nitrato reductasa -, mucosas y V P -

Hafnia alvei

ONPG:+, Movilidad:- (37C) y +(22C), Lisina decarboxilasa:+, ODC:+,ADH:-, Lactosa :Hay cepas ONPG:- se pueden confundir con Salmonella: Citrato:-, SH2:Cepas Urea+ (5%) se pueden confundir con Yersinia enteroclotica: diferenciar con LIA:+, Sorbitol:-, Sacarosa:-

TRIBU VI: PROTEEAE

Proteus

Diferenciacin entre los gneros Proteus, Providencia y Morganella

Test Bioqumicos Citrato Ferm de D- Manosa Liquefaccin de gelatina 22C H2S en TSI Ferm myo-inositol Ornitina decarboxilasa Swarmming Hidrlisis de urea

Proteusa V + + V + +

Providenciaa + + V V

Morganellaa + V (+) +

a reacciones dentro de las 48 hs +: 90 100% de positivo (+): 75 89,9% de positivo (-) 10,1 a 25 5 de positivo -: 0 10% de positivo

OHara y col Clin Microb Rev.2004.534-546

Proteus

TRIBU VI: YERSINIEAE Gnero: Yersinia

Prueba bioqumica TSI Urea (hidrlisis a 35C,1-4 das) Lactosa (fermentacin) Fenil alanita deaminasa Rammonsa (fermentacin a 25C) VP (22-25C)

Y.enterocolitica K/A sin gas SH2 + +

Medios cromognicos- BD CHROMagar Orientation Medium


Grupo KES Grupo PMP/ Pae E.coli

CPSID3

E.coli

VITEK

Mara Emilia Surez Bioq.Bacteriloga

El desafo de identificar correctamente Enterobacterias.

Mara Emilia Surez Bioq.Bacteriloga

CARACTERSTICAS
COCOBACILOS : 0,4-0,6 m x 2-3 m GRAM NEGATIVOS NO ESPORULADOS, ANAEROBIOS FACULTATIVOS, MVILES O INMVILES FERMENTAN GLUCOSA, CATALASA POSITIVOS, OXIDASA NEGATIVOS

TAXONOMA
SECCIN 5, 2da EDICIN BERGEY 41 GNEROS Y CIENTOS DE ESPECIES CLASIFICACIN POR CRITERIOS BIOQUMICOS Y ANTIGNICOS ACTUALMENTE CRITERIOS GENTICOS: HIBRIDACIN ADN, SECUENCIACIN ADN Y ARNr 16S

Familia Enterobacteriaceae
8 Tribus con los correspondientes gneros en cada una de ellas

Tribu I: ESCHERICHIEAE: Gnero I: Escherichia / Gnero II: Shigella Tribu II: EDWARSIELLEAE : Gnero I: Edwarsiella Tribu III: SALMONELLEAE: Gnero I : Salmonella Tribu IV: CITROBACTEREAE : Gnero I : Citrobacter Tribu V: KLEBSIELLEAE: Gnero I: Klebsiella / Gnero II: Enterobacter Gnero III: Hafnia/ Gnero IV: Serratia Tribu VI: PROTEEAE: Gnero I: Proteus / Gnero II: Morganella Gnero III: Providencia Tribu VII: YERSINIEAE : Gnero I : Yersinia Tribu VIII: ERWINIEAE : Gnero I: Erwinia

PODER PATGENO
ALREDEDOR DE 28 ESPECIES TIENEN IMPORTANCIA CLNICA CAUSANTES DE DIVERSOS CUADROS CLNICOS PATGENAS VERDADERAS O PRIMARIAS PATGENAS OPORTUNISTAS O POTENCIALES

TIPIFICACIN
BIOTIPIFICACIN: CARACTERES BIOQUMICOS SEROTIPIFICACIN: ANTGENOS O (SOMTICOS), K Vi (CAPSULARES) y H (FLAGELARES) SEROGRUPOS Y SEROTIPOS

TIPIFICACIN

FAGOTIPIFICACIN: DE VALOR EN Salmonella y E. coli PATRN DE RESISTENCIA A LOS ANTIMICROBIANOS GENOTIPIFICACIN MOLECULAR: GRUPOS CLONALES, etc.

Antgenos de Enterobacteriaceae
K Ag

Enterobacterias frecuentes con significacin clnica Citrobacter freundii, Citrobacter koser Enterobacter aerogenes, Enterobacter cloacae Escherchia coli Klebsiella pneumoniae, Klebsiella oxytoca Morganella morganii Proteus mirabilis, Complejo Proteus vulgars Salmonella entrica Serratia marcescens Shigella sonnei, Shigella flexneri Yersinia pestis, Yersinia enterocolitica, Yersinia pseudotuberculosis

AISLAMIENTO E IDENTIFICACIN
MEDIOS COMUNES MEDIOS SELECTIVOS/DIFERENCIALES INHIBEN CRECIMIENTO DE GRAM POSITIVAS Y OTRAS GRAM NEGATIVAS NO ENTRICAS CITRATO SDICO, EOSINA, SALES BILIARES, CRISTAL VIOLETA, etc.

AISLAMIENTO E IDENTIFICACIN
MUESTRAS EXTRAINTESTINALES (sangre, orina, material de abscesos y heridas,tracto respiratorio) Medios enriquecidos/ Cromognicos Agar Mac Conkey, EMB. MUESTRAS INTESTINALES: Selectivos- diferenciales Enriquecimiento previo

Qu medios usamos y que aspecto presentan las colonias?

Oxidasa

Qu medios usamos y que aspecto presentan las colonias?

1- Shigella 2- Grupo KES 3- E.coli

TSI

TRIBU I : ESCHERICHIEAE

Mac Conkey Sorbitol

Mac Conkey

Cmo diferenciamos Shigella de E.coli ?


Pruebas Indol Lisina decarboxilasa Ornitina decarbox. Lactosa Acetato de sodio Gas de glucosa Motilidad E.coli + (96,3) D (80,6) D (57,8) + (91,6) + (83,3) + (92) + (62,1) Shigella - + (37,8) - (0) - + (20) - (0,3) - (0) - (2,1) - (0)

RM

VP

Diferenciacin de Shigella

E.coli

Shigella

TSI

LIA Acetato

MIO

ONPG

Clasificacin Serolgica
Especie Serogrupo Serotipo

S. dysenteriae S. flexneri S. boydii S. sonnei

A B C D

1- 12 1- 6 1- 18 1

TRIBU II: EDWARDSIELLEAE


Prueba bioqumica Lactosa (fermentacin) SH2 Indol Trehalosa (fermentacin) Manitol, sacarosa (ferm) Arabinosa (fermentacin) Malonato (utilizacin) Movilidad a 37C Habitad E.tarda + + -/+ + Hombre y animales

TRIBU III:SALMONELLEAE
GNERO I: Salmonella Salmonella entrica Salmonella bongori

Salmonella enterica subesp. enterica (I)

Prueba bioqumica Lactosa (fermentacin)*** ONPG SH2 Glucosa (fermentacin)*** Rojo de Metilo* Voges Proskauer* Lisina decarboxilasa** Ornitina decarboxilasa** Arginina dehidrolasa** Urea (hidrlisis)** Malonato (utilizacin)* Citrato Simmons**

Sal.subesp.(I) + +/ con gas + + + + +

*Lectura a los 2das **Lectura hasta los 4 das ***Lectura hasta los 7 das
Servicio Enterobacterias. ANLIS.INEI. Carlos G.Malbrn 2008

Diferencias entre Salmonella subesp.enterica (I) y Proteus mirabilis


Prueba bioqumica Salmonella entrica subesp.enterica(I) + + + + Proteus mirabilis

SH2 Urea (hidrlisis) Fenilalaninadeaminasa Lisina decarboxilasa Ornitina decarboxilasa Lactosa (fermentacin) Dulcita (fermentacin) ONPG

+ + + + -

+ 90% o ms de los resultados positivos, - 90% o ms de los resultados negativos

Servicio Enterobacterias. ANLIS.INEI. Carlos G.Malbrn 2008

Diferencias entre Salmonella subesp.enterica (I) y Citrobacter freundii


Prueba bioqumica Salm entrica subesp.enterica(I) + + + + Citrobacter freundii

SH2 Urea (hidrlisis) Lisina decarboxilasa Ornitina decarboxilasa Lactosa (fermentacin) Sacarosa (fermentacin) Dulcita (fermentacin) Malonato (utilizacin) ONPG

+ d d d d d d +

+ 90% o ms de los resultados positivos, - 90% o ms de los resultados negativos, d: diferentes reacciones

Servicio Enterobacterias. ANLIS.INEI. Carlos G.Malbrn 2008

Diferencias entre Salmonella enterica subesp.enterica (I), Edwarsiella tarda y Escherichia coli SH2 +

Pruebas bioqumicas

Salmonella entrica subesp. enterica(I)

E.Tarda

E.coli SH2+

Indol Citrato Simmosns Lisina decarboxilasa Arginina dehidrolasa Manita (fermentacin) Dulcita (fermentacin) Ramnosa (fermentacin) Xylosa (fermentacin) ONPG

+ + + + + + + -

+ + -

+ + -/+ + +/+ + +

+ 90% o ms de los resultados positivos, - 90% o ms de los resultados negativos, d: diferentes reacciones
Servicio Enterobacterias. ANLIS.INEI. Carlos G.Malbrn 2008

AGAR SS

AGAR RAMBACH TSI de Salmonella LIA de Salmonella

S.Paratyphi A

S. Typhi

AGAR XLD

TRIBU IV: CITROBACTEREAE

Prueba bioqumica Movilidad

Citrobacter spp + + + + + -

Citrobacter freundii

Manitol (fermentacin) Lisina decarboxilasa ONPG Citrato de Simmons Rojo de Metilo Voges- Proskauer

Para diferenciar especies, recurrir a las siguientes pruebas: H2S Indol Malonato (fermentacin) ODC Adonitol (fermentacin) Melibiosa (fermentacin) Sacarosa Dulcitol

En cepas de Citrobacter freundii pueden ocurrir reacciones atpicas como: ONPG: - ( diferenciar con Salmonella) O clasificadas como S. arizonae por compartir los siguientes caracteres: SH2 +/ ONPG +/ y un perfil de H de carbono muy parecidos Tambin hay cepas SH2:- y Citrato: -

TRIBU V: KLEBSIELLEAE

GRUPO KES

Klebsiella

Brock Biologa de los Microorganismos 10 edic.

Pantoea agglomerans

Enterobacter aerogenes

Prueba bioqumica
Movilidad Lisina decarboxilasa

E. cloacae
+ -

E. aerogenes
+ +

Arginina dehidrolasa

Serratia marcescens

D-xylosa(-) D-manosa (+)

(+) DNAsa

(-)

Prueba bioqumica
Arabinosa (fermentacin)

Serratia marcescens
-

Serratia liquefaciens
+

Xilosa (fermentacin)

Melibiosa (fermentacin)

Rafinosa (fermentacin)

Pigmento rojo

Se han descripto cepas de S.marcescens excepcionalmente atpicas: lactosa +,o lactosa y rafinosa +, nitrato reductasa -, mucosas y V P -

Hafnia alvei

ONPG:+, Movilidad:- (37C) y +(22C), Lisina decarboxilasa:+, ODC:+,ADH:-, Lactosa :Hay cepas ONPG:- se pueden confundir con Salmonella: Citrato:-, SH2:Cepas Urea+ (5%) se pueden confundir con Yersinia enteroclotica: diferenciar con LIA:+, Sorbitol:-, Sacarosa:-

TRIBU VI: PROTEEAE

Proteus

Diferenciacin entre los gneros Proteus, Providencia y Morganella

Test Bioqumicos Citrato Ferm de D- Manosa Liquefaccin de gelatina 22C H2S en TSI Ferm myo-inositol Ornitina decarboxilasa Swarmming Hidrlisis de urea

Proteusa V + + V + +

Providenciaa + + V V

Morganellaa + V (+) +

a reacciones dentro de las 48 hs +: 90 100% de positivo (+): 75 89,9% de positivo (-) 10,1 a 25 5 de positivo -: 0 10% de positivo

OHara y col Clin Microb Rev.2004.534-546

Proteus

TRIBU VII: YERSINIEAE Gnero: Yersinia

Prueba bioqumica TSI Urea (hidrlisis a 35C,1-4 das) Lactosa (fermentacin) Fenil alanita deaminasa Rammonsa (fermentacin a 25C) VP (22-25C)

Y.enterocolitica K/A sin gas SH2 + +

Medios cromognicos- BD CHROMagar Orientation Medium


Grupo KES Grupo PMP/ Pae E.coli

CPSID3

E.coli

VITEK

Mara Emilia Surez Bioq.Bacteriloga

El desafo de identificar correctamente Enterobacterias.

Mara Emilia Surez Bioq.Bacteriloga

CARACTERSTICAS
COCOBACILOS : 0,4-0,6 m x 2-3 m GRAM NEGATIVOS NO ESPORULADOS, ANAEROBIOS FACULTATIVOS, MVILES O INMVILES FERMENTAN GLUCOSA, CATALASA POSITIVOS, OXIDASA NEGATIVOS

TAXONOMA
SECCIN 5, 2da EDICIN BERGEY 41 GNEROS Y CIENTOS DE ESPECIES CLASIFICACIN POR CRITERIOS BIOQUMICOS Y ANTIGNICOS ACTUALMENTE CRITERIOS GENTICOS: HIBRIDACIN ADN, SECUENCIACIN ADN Y ARNr 16S

Familia Enterobacteriaceae
8 Tribus con los correspondientes gneros en cada una de ellas

Tribu I: ESCHERICHIEAE: Gnero I: Escherichia / Gnero II: Shigella Tribu II: EDWARSIELLEAE : Gnero I: Edwarsiella Tribu III: SALMONELLEAE: Gnero I : Salmonella Tribu IV: CITROBACTEREAE : Gnero I : Citrobacter Tribu V: KLEBSIELLEAE: Gnero I: Klebsiella / Gnero II: Enterobacter Gnero III: Hafnia/ Gnero IV: Serratia Tribu VI: PROTEEAE: Gnero I: Proteus / Gnero II: Morganella Gnero III: Providencia Tribu VII: YERSINIEAE : Gnero I : Yersinia Tribu VIII: ERWINIEAE : Gnero I: Erwinia

PODER PATGENO
ALREDEDOR DE 28 ESPECIES TIENEN IMPORTANCIA CLNICA CAUSANTES DE DIVERSOS CUADROS CLNICOS PATGENAS VERDADERAS O PRIMARIAS PATGENAS OPORTUNISTAS O POTENCIALES

TIPIFICACIN
BIOTIPIFICACIN: CARACTERES BIOQUMICOS SEROTIPIFICACIN: ANTGENOS O (SOMTICOS), K Vi (CAPSULARES) y H (FLAGELARES) SEROGRUPOS Y SEROTIPOS

TIPIFICACIN

FAGOTIPIFICACIN: DE VALOR EN Salmonella y E. coli PATRN DE RESISTENCIA A LOS ANTIMICROBIANOS GENOTIPIFICACIN MOLECULAR: GRUPOS CLONALES, etc.

Antgenos de Enterobacteriaceae
K Ag

Enterobacterias frecuentes con significacin clnica Citrobacter freundii, Citrobacter koser Enterobacter aerogenes, Enterobacter cloacae Escherchia coli Klebsiella pneumoniae, Klebsiella oxytoca Morganella morganii Proteus mirabilis, Complejo Proteus vulgars Salmonella entrica Serratia marcescens Shigella sonnei, Shigella flexneri Yersinia pestis, Yersinia enterocolitica, Yersinia pseudotuberculosis

AISLAMIENTO E IDENTIFICACIN
MEDIOS COMUNES MEDIOS SELECTIVOS/DIFERENCIALES INHIBEN CRECIMIENTO DE GRAM POSITIVAS Y OTRAS GRAM NEGATIVAS NO ENTRICAS CITRATO SDICO, EOSINA, SALES BILIARES, CRISTAL VIOLETA, etc.

AISLAMIENTO E IDENTIFICACIN
MUESTRAS EXTRAINTESTINALES (sangre, orina, material de abscesos y heridas,tracto respiratorio) Medios enriquecidos/ Cromognicos Agar Mac Conkey, EMB. MUESTRAS INTESTINALES: Selectivos- diferenciales Enriquecimiento previo

Qu medios usamos y que aspecto presentan las colonias?

Oxidasa

Qu medios usamos y que aspecto presentan las colonias?

1- Shigella 2- Grupo KES 3- E.coli

TSI

TRIBU I : ESCHERICHIEAE

Mac Conkey Sorbitol

Mac Conkey

Cmo diferenciamos Shigella de E.coli ?


Pruebas Indol Lisina decarboxilasa Ornitina decarbox. Lactosa Acetato de sodio Gas de glucosa Motilidad E.coli + (96,3) D (80,6) D (57,8) + (91,6) + (83,3) + (92) + (62,1) Shigella - + (37,8) - (0) - + (20) - (0,3) - (0) - (2,1) - (0)

RM

VP

Diferenciacin de Shigella

E.coli

Shigella

TSI

LIA Acetato

MIO

ONPG

Clasificacin Serolgica
Especie Serogrupo Serotipo

S. dysenteriae S. flexneri S. boydii S. sonnei

A B C D

1- 12 1- 6 1- 18 1

TRIBU II: EDWARDSIELLEAE


Prueba bioqumica Lactosa (fermentacin) SH2 Indol Trehalosa (fermentacin) Manitol, sacarosa (ferm) Arabinosa (fermentacin) Malonato (utilizacin) Movilidad a 37C Habitad E.tarda + + -/+ + Hombre y animales

TRIBU III:SALMONELLEAE
GNERO I: Salmonella Salmonella entrica Salmonella bongori

Salmonella enterica subesp. enterica (I)

Prueba bioqumica Lactosa (fermentacin)*** ONPG SH2 Glucosa (fermentacin)*** Rojo de Metilo* Voges Proskauer* Lisina decarboxilasa** Ornitina decarboxilasa** Arginina dehidrolasa** Urea (hidrlisis)** Malonato (utilizacin)* Citrato Simmons**

Sal.subesp.(I) + +/ con gas + + + + +

*Lectura a los 2das **Lectura hasta los 4 das ***Lectura hasta los 7 das
Servicio Enterobacterias. ANLIS.INEI. Carlos G.Malbrn 2008

Diferencias entre Salmonella subesp.enterica (I) y Proteus mirabilis


Prueba bioqumica Salmonella entrica subesp.enterica(I) + + + + Proteus mirabilis

SH2 Urea (hidrlisis) Fenilalaninadeaminasa Lisina decarboxilasa Ornitina decarboxilasa Lactosa (fermentacin) Dulcita (fermentacin) ONPG

+ + + + -

+ 90% o ms de los resultados positivos, - 90% o ms de los resultados negativos

Servicio Enterobacterias. ANLIS.INEI. Carlos G.Malbrn 2008

Diferencias entre Salmonella subesp.enterica (I) y Citrobacter freundii


Prueba bioqumica Salm entrica subesp.enterica(I) + + + + Citrobacter freundii

SH2 Urea (hidrlisis) Lisina decarboxilasa Ornitina decarboxilasa Lactosa (fermentacin) Sacarosa (fermentacin) Dulcita (fermentacin) Malonato (utilizacin) ONPG

+ d d d d d d +

+ 90% o ms de los resultados positivos, - 90% o ms de los resultados negativos, d: diferentes reacciones

Servicio Enterobacterias. ANLIS.INEI. Carlos G.Malbrn 2008

Diferencias entre Salmonella enterica subesp.enterica (I), Edwarsiella tarda y Escherichia coli SH2 +

Pruebas bioqumicas

Salmonella entrica subesp. enterica(I)

E.Tarda

E.coli SH2+

Indol Citrato Simmosns Lisina decarboxilasa Arginina dehidrolasa Manita (fermentacin) Dulcita (fermentacin) Ramnosa (fermentacin) Xylosa (fermentacin) ONPG

+ + + + + + + -

+ + -

+ + -/+ + +/+ + +

+ 90% o ms de los resultados positivos, - 90% o ms de los resultados negativos, d: diferentes reacciones
Servicio Enterobacterias. ANLIS.INEI. Carlos G.Malbrn 2008

AGAR SS

AGAR RAMBACH TSI de Salmonella LIA de Salmonella

S.Paratyphi A

S. Typhi

AGAR XLD

TRIBU IV: CITROBACTEREAE

Prueba bioqumica Movilidad

Citrobacter spp + + + + + -

Citrobacter freundii

Manitol (fermentacin) Lisina decarboxilasa ONPG Citrato de Simmons Rojo de Metilo Voges- Proskauer

Para diferenciar especies, recurrir a las siguientes pruebas: H2S Indol Malonato (fermentacin) ODC Adonitol (fermentacin) Melibiosa (fermentacin) Sacarosa Dulcitol

En cepas de Citrobacter freundii pueden ocurrir reacciones atpicas como: ONPG: - ( diferenciar con Salmonella) O clasificadas como S. arizonae por compartir los siguientes caracteres: SH2 +/ ONPG +/ y un perfil de H de carbono muy parecidos Tambin hay cepas SH2:- y Citrato: -

TRIBU V: KLEBSIELLEAE

GRUPO KES

Klebsiella

Brock Biologa de los Microorganismos 10 edic.

Pantoea agglomerans

Enterobacter aerogenes

Prueba bioqumica
Movilidad Lisina decarboxilasa

E. cloacae
+ -

E. aerogenes
+ +

Arginina dehidrolasa

Serratia marcescens

D-xylosa(-) D-manosa (+)

(+) DNAsa

(-)

Prueba bioqumica
Arabinosa (fermentacin)

Serratia marcescens
-

Serratia liquefaciens
+

Xilosa (fermentacin)

Melibiosa (fermentacin)

Rafinosa (fermentacin)

Pigmento rojo

Se han descripto cepas de S.marcescens excepcionalmente atpicas: lactosa +,o lactosa y rafinosa +, nitrato reductasa -, mucosas y V P -

Hafnia alvei

ONPG:+, Movilidad:- (37C) y +(22C), Lisina decarboxilasa:+, ODC:+,ADH:-, Lactosa :Hay cepas ONPG:- se pueden confundir con Salmonella: Citrato:-, SH2:Cepas Urea+ (5%) se pueden confundir con Yersinia enteroclotica: diferenciar con LIA:+, Sorbitol:-, Sacarosa:-

TRIBU VI: PROTEEAE

Proteus

Diferenciacin entre los gneros Proteus, Providencia y Morganella

Test Bioqumicos Citrato Ferm de D- Manosa Liquefaccin de gelatina 22C H2S en TSI Ferm myo-inositol Ornitina decarboxilasa Swarmming Hidrlisis de urea

Proteusa V + + V + +

Providenciaa + + V V

Morganellaa + V (+) +

a reacciones dentro de las 48 hs +: 90 100% de positivo (+): 75 89,9% de positivo (-) 10,1 a 25 5 de positivo -: 0 10% de positivo

OHara y col Clin Microb Rev.2004.534-546

Proteus

TRIBU VII: YERSINIEAE Gnero: Yersinia

Prueba bioqumica TSI Urea (hidrlisis a 35C,1-4 das) Lactosa (fermentacin) Fenil alanita deaminasa Rammonsa (fermentacin a 25C) VP (22-25C)

Y.enterocolitica K/A sin gas SH2 + +

Medios cromognicos- BD CHROMagar Orientation Medium


Grupo KES Grupo PMP/ Pae E.coli

CPSID3

E.coli

VITEK

Mara Emilia Surez Bioq.Bacteriloga

El desafo de identificar correctamente Enterobacterias

Mara Emilia Surez Bioq.Bacteriloga

CARACTERSTICAS
COCOBACILOS : 0,4-0,6 m x 2-3 m GRAM NEGATIVOS NO ESPORULADOS, ANAEROBIOS FACULTATIVOS, MVILES O INMVILES FERMENTAN GLUCOSA, CATALASA POSITIVOS, OXIDASA NEGATIVOS

TAXONOMA
SECCIN 5, 2da EDICIN BERGEY 41 GNEROS Y CIENTOS DE ESPECIES CLASIFICACIN POR CRITERIOS BIOQUMICOS Y ANTIGNICOS ACTUALMENTE CRITERIOS GENTICOS: HIBRIDACIN ADN, SECUENCIACIN ADN Y ARNr 16S

Familia Enterobacteriaceae
8 Tribus con los correspondientes gneros en cada una de ellas

Tribu I: ESCHERICHIEAE: Gnero I: Escherichia / Gnero II: Shigella Tribu II: EDWARSIELLEAE : Gnero I: Edwarsiella Tribu III: SALMONELLEAE: Gnero I : Salmonella Tribu IV: CITROBACTEREAE : Gnero I : Citrobacter Tribu V: KLEBSIELLEAE: Gnero I: Klebsiella / Gnero II: Enterobacter Gnero III: Hafnia/ Gnero IV: Serratia Tribu VI: PROTEEAE: Gnero I: Proteus / Gnero II: Morganella Gnero III: Providencia Tribu VII: YERSINIEAE : Gnero I : Yersinia Tribu VIII: ERWINIEAE : Gnero I: Erwinia

PODER PATGENO
ALREDEDOR DE 28 ESPECIES TIENEN IMPORTANCIA CLNICA CAUSANTES DE DIVERSOS CUADROS CLNICOS PATGENAS VERDADERAS O PRIMARIAS PATGENAS OPORTUNISTAS O POTENCIALES

Enterobacterias frecuentes con significacin clnica Citrobacter freundii, Citrobacter koser Enterobacter aerogenes, Enterobacter cloacae Escherchia coli Klebsiella pneumoniae, Klebsiella oxytoca Morganella morganii Proteus mirabilis, Complejo Proteus vulgars Salmonella entrica Serratia marcescens Shigella sonnei, Shigella flexneri Yersinia pestis, Yersinia enterocolitica, Yersinia pseudotuberculosis

TIPIFICACIN
BIOTIPIFICACIN: CARACTERES BIOQUMICOS SEROTIPIFICACIN: ANTGENOS O (SOMTICOS), K Vi (CAPSULARES) y H (FLAGELARES) SEROGRUPOS Y SEROTIPOS

TIPIFICACIN

FAGOTIPIFICACIN: DE VALOR EN Salmonella y E. coli PATRN DE RESISTENCIA A LOS ANTIMICROBIANOS GENOTIPIFICACIN MOLECULAR: GRUPOS CLONALES, etc.

Antgenos de Enterobacteriaceae
K Ag

AISLAMIENTO E IDENTIFICACIN
MEDIOS COMUNES MEDIOS SELECTIVOS/DIFERENCIALES INHIBEN CRECIMIENTO DE GRAM POSITIVAS Y OTRAS GRAM NEGATIVAS NO ENTRICAS CITRATO SDICO, EOSINA, SALES BILIARES, CRISTAL VIOLETA, etc.

AISLAMIENTO E IDENTIFICACIN
MUESTRAS EXTRAINTESTINALES (sangre, orina, material de abscesos y heridas,tracto respiratorio) Medios enriquecidos/ Cromognicos Agar Mac Conkey, EMB. MUESTRAS INTESTINALES: Selectivos- diferenciales Enriquecimiento previo

Qu medios usamos y que aspecto presentan las colonias?

Oxidasa

Qu medios usamos y que aspecto presentan las colonias?

1- Shigella 2- Grupo KES 3- E.coli

TSI

TRIBU I : ESCHERICHIEAE

Mac Conkey Sorbitol

Mac Conkey

Cmo diferenciamos Shigella de E.coli ?


Pruebas Indol Lisina decarboxilasa Ornitina decarbox. Lactosa Acetato de sodio Gas de glucosa Motilidad E.coli + (96,3) D (80,6) D (57,8) + (91,6) + (83,3) + (92) + (62,1) Shigella - + (37,8) - (0) - + (20) - (0,3) - (0) - (2,1) - (0)

RM

VP

Diferenciacin de Shigella

E.coli

Shigella

TSI

LIA Acetato

MIO

ONPG

Clasificacin Serolgica
Especie Serogrupo Serotipo

S. dysenteriae S. flexneri S. boydii S. sonnei

A B C D

1- 12 1- 6 1- 18 1

TRIBU II: EDWARDSIELLEAE


Prueba bioqumica Lactosa (fermentacin) SH2 Indol Trehalosa (fermentacin) Manitol, sacarosa (ferm) Arabinosa (fermentacin) Malonato (utilizacin) Movilidad a 37C Habitad E.tarda + + -/+ + Hombre y animales

TRIBU III:SALMONELLEAE
GNERO I: Salmonella Salmonella entrica Salmonella bongori

Salmonella enterica subesp. enterica (I)

Prueba bioqumica Lactosa (fermentacin)*** ONPG SH2 Glucosa (fermentacin)*** Rojo de Metilo* Voges Proskauer* Lisina decarboxilasa** Ornitina decarboxilasa** Arginina dehidrolasa** Urea (hidrlisis)** Malonato (utilizacin)* Citrato Simmons**

Sal.subesp.(I) + +/ con gas + + + + +

*Lectura a los 2das **Lectura hasta los 4 das ***Lectura hasta los 7 das
Servicio Enterobacterias. ANLIS.INEI. Carlos G.Malbrn 2008

Diferencias entre Salmonella subesp.enterica (I) y Proteus mirabilis


Prueba bioqumica Salmonella entrica subesp.enterica(I) + + + + Proteus mirabilis

SH2 Urea (hidrlisis) Fenilalaninadeaminasa Lisina decarboxilasa Ornitina decarboxilasa Lactosa (fermentacin) Dulcita (fermentacin) ONPG

+ + + + -

+ 90% o ms de los resultados positivos, - 90% o ms de los resultados negativos

Servicio Enterobacterias. ANLIS.INEI. Carlos G.Malbrn 2008

Diferencias entre Salmonella subesp.enterica (I) y Citrobacter freundii


Prueba bioqumica Salm entrica subesp.enterica(I) + + + + Citrobacter freundii

SH2 Urea (hidrlisis) Lisina decarboxilasa Ornitina decarboxilasa Lactosa (fermentacin) Sacarosa (fermentacin) Dulcita (fermentacin) Malonato (utilizacin) ONPG

+ d d d d d d +

+ 90% o ms de los resultados positivos, - 90% o ms de los resultados negativos, d: diferentes reacciones

Servicio Enterobacterias. ANLIS.INEI. Carlos G.Malbrn 2008

Diferencias entre Salmonella enterica subesp.enterica (I), Edwarsiella tarda y Escherichia coli SH2 +

Pruebas bioqumicas

Salmonella entrica subesp. enterica(I)

E.tarda

E.coli SH2+

Indol Citrato Simmosns Lisina decarboxilasa Arginina dehidrolasa Manita (fermentacin) Dulcita (fermentacin) Ramnosa (fermentacin) Xylosa (fermentacin) ONPG

+ + + + + + + -

+ + -

+ + -/+ + +/+ + +

+ 90% o ms de los resultados positivos, - 90% o ms de los resultados negativos, d: diferentes reacciones
Servicio Enterobacterias. ANLIS.INEI. Carlos G.Malbrn 2008

AGAR SS

AGAR RAMBACH TSI de Salmonella LIA de Salmonella

S.Paratyphi A ODC + LIA -

ODC LIA +

S. Typhi

AGAR XLD

TRIBU IV: CITROBACTEREAE

Prueba bioqumica Movilidad

Citrobacter spp + + + + + -

Citrobacter freundii

Manitol (fermentacin) Lisina decarboxilasa ONPG Citrato de Simmons Rojo de Metilo Voges- Proskauer

Para diferenciar especies, recurrir a las siguientes pruebas: H2S Indol Malonato (fermentacin) ODC Adonitol (fermentacin) Melibiosa (fermentacin) Sacarosa Dulcitol

En cepas de Citrobacter freundii pueden ocurrir reacciones atpicas como: ONPG: - ( diferenciar con Salmonella) O clasificadas como S. arizonae por compartir los siguientes caracteres: SH2 +/ ONPG +/ y un perfil de H de carbono muy parecidos Tambin hay cepas SH2:- y Citrato: -

TRIBU V: KLEBSIELLEAE Gneros: KES y Hafnia

GRUPO KES

Klebsiella

Brock Biologa de los Microorganismos 10 edic.

Pantoea agglomerans

Enterobacter aerogenes

Prueba bioqumica
Movilidad Lisina decarboxilasa

E. cloacae
+ -

E. aerogenes
+ +

Arginina dehidrolasa

Serratia marcescens

D-xylosa(-) D-manosa (+)

(+) DNAsa

(-)

Prueba bioqumica
Arabinosa (fermentacin)

Serratia marcescens
-

Serratia liquefaciens
+

Xilosa (fermentacin)

Melibiosa (fermentacin)

Rafinosa (fermentacin)

Pigmento rojo

Se han descripto cepas de S.marcescens excepcionalmente atpicas: lactosa +,o lactosa y rafinosa +, nitrato reductasa -, mucosas y V P -

Hafnia alvei

ONPG:+, Movilidad:- (37C) y +(22C), Lisina decarboxilasa:+, ODC:+,ADH:-, Lactosa :Hay cepas ONPG:- se pueden confundir con Salmonella: Citrato:-, SH2:Cepas Urea+ (5%) se pueden confundir con Yersinia enteroclotica: diferenciar con LIA:+, Sorbitol:-, Sacarosa:-

TRIBU VI: PROTEEAE Gneros: Proteus, Morganella y Providencia

Proteus

Diferenciacin entre los gneros Proteus, Providencia y Morganella

Test Bioqumicos Citrato Ferm de D- Manosa Liquefaccin de gelatina 22C H2S en TSI Ferm myo-inositol Ornitina decarboxilasa Swarmming Hidrlisis de urea

Proteusa V + + V + +

Providenciaa + + V V

Morganellaa + V (+) +

a reacciones dentro de las 48 hs +: 90 100% de positivo (+): 75 89,9% de positivo (-) 10,1 a 25 5 de positivo -: 0 10% de positivo

OHara y col Clin Microb Rev.2004.534-546

Proteus

TRIBU VII: YERSINIEAE Gnero: Yersinia

Prueba bioqumica TSI Urea (hidrlisis a 35C,1-4 das) Lactosa (fermentacin) Fenil alanita deaminasa Rammonsa (fermentacin a 25C) VP (22-25C)

Y.enterocolitica K/A sin gas SH2 + +

Medios cromognicos- BD CHROMagar Orientation Medium


Grupo KES Grupo PMP/ Pae E.coli

CPSID3

E.coli

VITEK

Mara Emilia Surez Bioq.Bacteriloga

Para consultas y derivaciones Laboratorio Central de la Provincia de Crdoba Trnsito Cceres de Allende 421- 5000 Crdoba Te: 0351- 4342452 Biologa Molecular Mara Emilia Surez mevsuarez@yahoo.com.ar Cel: 0351-156347704

El desafo de identificar correctamente Enterobacterias

Mara Emilia Surez Bioq.Bacteriloga

CARACTERSTICAS
COCOBACILOS : 0,4-0,6 m x 2-3 m GRAM NEGATIVOS NO ESPORULADOS, ANAEROBIOS FACULTATIVOS, MVILES O INMVILES FERMENTAN GLUCOSA, CATALASA POSITIVOS, OXIDASA NEGATIVOS

TAXONOMA
SECCIN 5, 2da EDICIN BERGEY 41 GNEROS Y CIENTOS DE ESPECIES CLASIFICACIN POR CRITERIOS BIOQUMICOS Y ANTIGNICOS ACTUALMENTE CRITERIOS GENTICOS: HIBRIDACIN ADN, SECUENCIACIN ADN Y ARNr 16S

Familia Enterobacteriaceae
8 Tribus con los correspondientes gneros en cada una de ellas

Tribu I: ESCHERICHIEAE: Gnero I: Escherichia / Gnero II: Shigella Tribu II: EDWARSIELLEAE : Gnero I: Edwarsiella Tribu III: SALMONELLEAE: Gnero I : Salmonella Tribu IV: CITROBACTEREAE : Gnero I : Citrobacter Tribu V: KLEBSIELLEAE: Gnero I: Klebsiella / Gnero II: Enterobacter Gnero III: Hafnia/ Gnero IV: Serratia Tribu VI: PROTEEAE: Gnero I: Proteus / Gnero II: Morganella Gnero III: Providencia Tribu VII: YERSINIEAE : Gnero I : Yersinia Tribu VIII: ERWINIEAE : Gnero I: Erwinia

PODER PATGENO
ALREDEDOR DE 28 ESPECIES TIENEN IMPORTANCIA CLNICA CAUSANTES DE DIVERSOS CUADROS CLNICOS PATGENAS VERDADERAS O PRIMARIAS PATGENAS OPORTUNISTAS O POTENCIALES

Enterobacterias frecuentes con significacin clnica Citrobacter freundii, Citrobacter koser Enterobacter aerogenes, Enterobacter cloacae Escherchia coli Klebsiella pneumoniae, Klebsiella oxytoca Morganella morganii Proteus mirabilis, Complejo Proteus vulgars Salmonella entrica Serratia marcescens Shigella sonnei, Shigella flexneri Yersinia pestis, Yersinia enterocolitica, Yersinia pseudotuberculosis

TIPIFICACIN
BIOTIPIFICACIN: CARACTERES BIOQUMICOS SEROTIPIFICACIN: ANTGENOS O (SOMTICOS), K Vi (CAPSULARES) y H (FLAGELARES) SEROGRUPOS Y SEROTIPOS

TIPIFICACIN

FAGOTIPIFICACIN: DE VALOR EN Salmonella y E. coli PATRN DE RESISTENCIA A LOS ANTIMICROBIANOS GENOTIPIFICACIN MOLECULAR: GRUPOS CLONALES, etc.

Antgenos de Enterobacteriaceae
K Ag

AISLAMIENTO E IDENTIFICACIN
MEDIOS COMUNES MEDIOS SELECTIVOS/DIFERENCIALES INHIBEN CRECIMIENTO DE GRAM POSITIVAS Y OTRAS GRAM NEGATIVAS NO ENTRICAS CITRATO SDICO, EOSINA, SALES BILIARES, CRISTAL VIOLETA, etc.

AISLAMIENTO E IDENTIFICACIN
MUESTRAS EXTRAINTESTINALES (sangre, orina, material de abscesos y heridas,tracto respiratorio) Medios enriquecidos/ Cromognicos Agar Mac Conkey, EMB. MUESTRAS INTESTINALES: Selectivos- diferenciales Enriquecimiento previo

Qu medios usamos y que aspecto presentan las colonias?

Oxidasa

Qu medios usamos y que aspecto presentan las colonias?

1- Shigella 2- Grupo KES 3- E.coli

TSI

TRIBU I : ESCHERICHIEAE

Mac Conkey Sorbitol

Mac Conkey

Cmo diferenciamos Shigella de E.coli ?


Pruebas Indol Lisina decarboxilasa Ornitina decarbox. Lactosa Acetato de sodio Gas de glucosa Motilidad E.coli + (96,3) D (80,6) D (57,8) + (91,6) + (83,3) + (92) + (62,1) Shigella - + (37,8) - (0) - + (20) - (0,3) - (0) - (2,1) - (0)

RM

VP

Diferenciacin de Shigella

E.coli

Shigella

TSI

LIA Acetato

MIO

ONPG

Clasificacin Serolgica
Especie Serogrupo Serotipo

S. dysenteriae S. flexneri S. boydii S. sonnei

A B C D

1- 12 1- 6 1- 18 1

TRIBU II: EDWARDSIELLEAE


Prueba bioqumica Lactosa (fermentacin) SH2 Indol Trehalosa (fermentacin) Manitol, sacarosa (ferm) Arabinosa (fermentacin) Malonato (utilizacin) Movilidad a 37C Habitad E.tarda + + -/+ + Hombre y animales

TRIBU III:SALMONELLEAE
GNERO I: Salmonella Salmonella entrica Salmonella bongori

Salmonella enterica subesp. enterica (I)

Prueba bioqumica Lactosa (fermentacin)*** ONPG SH2 Glucosa (fermentacin)*** Rojo de Metilo* Voges Proskauer* Lisina decarboxilasa** Ornitina decarboxilasa** Arginina dehidrolasa** Urea (hidrlisis)** Malonato (utilizacin)* Citrato Simmons**

Sal.subesp.(I) + +/ con gas + + + + +

*Lectura a los 2das **Lectura hasta los 4 das ***Lectura hasta los 7 das
Servicio Enterobacterias. ANLIS.INEI. Carlos G.Malbrn 2008

Diferencias entre Salmonella subesp.enterica (I) y Proteus mirabilis


Prueba bioqumica Salmonella entrica subesp.enterica(I) + + + + Proteus mirabilis

SH2 Urea (hidrlisis) Fenilalaninadeaminasa Lisina decarboxilasa Ornitina decarboxilasa Lactosa (fermentacin) Dulcita (fermentacin) ONPG

+ + + + -

+ 90% o ms de los resultados positivos, - 90% o ms de los resultados negativos

Servicio Enterobacterias. ANLIS.INEI. Carlos G.Malbrn 2008

Diferencias entre Salmonella subesp.enterica (I) y Citrobacter freundii


Prueba bioqumica Salm entrica subesp.enterica(I) + + + + Citrobacter freundii

SH2 Urea (hidrlisis) Lisina decarboxilasa Ornitina decarboxilasa Lactosa (fermentacin) Sacarosa (fermentacin) Dulcita (fermentacin) Malonato (utilizacin) ONPG

+ d d d d d d +

+ 90% o ms de los resultados positivos, - 90% o ms de los resultados negativos, d: diferentes reacciones

Servicio Enterobacterias. ANLIS.INEI. Carlos G.Malbrn 2008

Diferencias entre Salmonella enterica subesp.enterica (I), Edwarsiella tarda y Escherichia coli SH2 +

Pruebas bioqumicas

Salmonella entrica subesp. enterica(I)

E.tarda

E.coli SH2+

Indol Citrato Simmosns Lisina decarboxilasa Arginina dehidrolasa Manita (fermentacin) Dulcita (fermentacin) Ramnosa (fermentacin) Xylosa (fermentacin) ONPG

+ + + + + + + -

+ + -

+ + -/+ + +/+ + +

+ 90% o ms de los resultados positivos, - 90% o ms de los resultados negativos, d: diferentes reacciones
Servicio Enterobacterias. ANLIS.INEI. Carlos G.Malbrn 2008

AGAR SS

AGAR RAMBACH TSI de Salmonella LIA de Salmonella

S.Paratyphi A ODC + LIA -

ODC LIA +

S. Typhi

AGAR XLD

TRIBU IV: CITROBACTEREAE

Prueba bioqumica Movilidad

Citrobacter spp + + + + + -

Citrobacter freundii

Manitol (fermentacin) Lisina decarboxilasa ONPG Citrato de Simmons Rojo de Metilo Voges- Proskauer

Para diferenciar especies, recurrir a las siguientes pruebas: H2S Indol Malonato (fermentacin) ODC Adonitol (fermentacin) Melibiosa (fermentacin) Sacarosa Dulcitol

En cepas de Citrobacter freundii pueden ocurrir reacciones atpicas como: ONPG: - ( diferenciar con Salmonella) O clasificadas como S. arizonae por compartir los siguientes caracteres: SH2 +/ ONPG +/ y un perfil de H de carbono muy parecidos Tambin hay cepas SH2:- y Citrato: -

TRIBU V: KLEBSIELLEAE Gneros: KES y Hafnia

GRUPO KES

Klebsiella

Brock Biologa de los Microorganismos 10 edic.

Pantoea agglomerans

Enterobacter aerogenes

Prueba bioqumica
Movilidad Lisina decarboxilasa

E. cloacae
+ -

E. aerogenes
+ +

Arginina dehidrolasa

Serratia marcescens

D-xylosa(-) D-manosa (+)

(+) DNAsa

(-)

Prueba bioqumica
Arabinosa (fermentacin)

Serratia marcescens
-

Serratia liquefaciens
+

Xilosa (fermentacin)

Melibiosa (fermentacin)

Rafinosa (fermentacin)

Pigmento rojo

Se han descripto cepas de S.marcescens excepcionalmente atpicas: lactosa +,o lactosa y rafinosa +, nitrato reductasa -, mucosas y V P -

Hafnia alvei

ONPG:+, Movilidad:- (37C) y +(22C), Lisina decarboxilasa:+, ODC:+,ADH:-, Lactosa :Hay cepas ONPG:- se pueden confundir con Salmonella: Citrato:-, SH2:Cepas Urea+ (5%) se pueden confundir con Yersinia enteroclotica: diferenciar con LIA:+, Sorbitol:-, Sacarosa:-

TRIBU VI: PROTEEAE Gneros: Proteus, Morganella y Providencia

Proteus

Diferenciacin entre los gneros Proteus, Providencia y Morganella

Test Bioqumicos Citrato Ferm de D- Manosa Liquefaccin de gelatina 22C H2S en TSI Ferm myo-inositol Ornitina decarboxilasa Swarmming Hidrlisis de urea

Proteusa V + + V + +

Providenciaa + + V V

Morganellaa + V (+) +

a reacciones dentro de las 48 hs +: 90 100% de positivo (+): 75 89,9% de positivo (-) 10,1 a 25 5 de positivo -: 0 10% de positivo

OHara y col Clin Microb Rev.2004.534-546

Proteus

TRIBU VII: YERSINIEAE Gnero: Yersinia

Prueba bioqumica TSI Urea (hidrlisis a 35C,1-4 das) Lactosa (fermentacin) Fenil alanita deaminasa Rammonsa (fermentacin a 25C) VP (22-25C)

Y.enterocolitica K/A sin gas SH2 + +

Medios cromognicos- BD CHROMagar Orientation Medium


Grupo KES Grupo PMP/ Pae E.coli

CPSID3

E.coli

VITEK

Mara Emilia Surez Bioq.Bacteriloga

Para consultas y derivaciones Laboratorio Central de la Provincia de Crdoba Trnsito Cceres de Allende 421- 5000 Crdoba Te: 0351- 4342452 Biologa Molecular Mara Emilia Surez mevsuarez@yahoo.com.ar Cel: 0351-156347704

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