QUMICA FARMACUTICA VERIFICAO DA INFLUNCIA DO pH NA IONIZAO E NA ABSORO DE FRMACOS.

Objetivo: verificar a influncia do pH na ionizao de frmacos de carter cido (cido acetilsaliclico), neutro (paracetamol) e bsico (p-aminofenol).
O H O C OH O O cido acetilsaliclico CH3 OH paracetamol OH p-aminofenol N CH3 H N H

1) Escreva a equao da reao cido-base entre o cido acetilsaliclico (pKa=4) e a gua. Com base na equao, preveja, qualitativamente, em que pH (cido ou bsico) a relao das concentraes de formas ionizadas e no ionizadas ser maior. 2) Escreva a equao da reao cido-base entre o p-aminofenol (pKa do cido conjugado=6) e a gua. Com base na equao, preveja, qualitativamente, em que pH (cido ou bsico) a relao das concentraes de formas ionizadas e no ionizadas ser maior. 3) Escreva a equao da reao cido-base entre o paracetamol (pKa=10) e a gua. Com base na equao, preveja, qualitativamente, em que pH (cido ou bsico) a relao das concentraes de formas ionizadas e no ionizadas ser maior. 4) Proponha uma explicao: embora tanto o paracetamol quanto o p-aminofenol possuam um N com par de eltrons livre, apenas o N do p-aminofenol tem carter bsico. 5) Deduza a expresso que permite calcular as relaes das concentraes de formas ionizadas e no ionizadas de cidos fracos, com base nos valores de pKa e do pH do meio. 6) Calcule as relaes das concentraes de formas ionizadas e no ionizadas para os 3 frmacos em pH 1 e 8 e compare com o previsto nos exerccios 1, 2 e 3. 7) Considerando que as formas ionizadas so mais hidrossolveis que as no ionizadas e que as formas no ionizadas so mais lipossolveis e mais solveis em solventes orgnicos que as ionizadas, preveja para os 3 frmacos em que pH (1 ou 8) haver maior concentrao na fase orgnica. 8) Calcule o volume de soluo de cido clordrico de concentrao 0,5 mol/L que deve ser usado na preparao de 10mL de soluo de pH=1.

9) Calcule o volume de soluo de cido clordrico R que deve ser usado na preparao de 1L de soluo de pH=1. PARTE PRTICA: seguindo o especificado na tabela abaixo, pesar as amostras de cido acetilsaliclico (AAS), paracetamol (PC) e p-aminofenol (AF) e adicionar os volumes das solues e do solvente. tubo Substncia/peso (mg) AAS (30) AAS (30) PC (20) PC (20) AF (20) AF (20) Volu. (mL) sol. Vol. (mL) sol. HCl Tampo PH=1 Na2HPO4/NaH2PO4 pH=8* 3 3 3 3 3 3 Vol. (mL) acetato de etila 3 3 3 3 3 3 Resultado (F ou f)

1 2 3 4 5 6

* misturar 1mL de soluo de NaH 2PO4 0,2 mol/L e 19 mL de soluo de Na 2HPO4 0,2 mol/L. Agitar, deixar em repouso at a separao das fases aquosa e orgnica, aplicar 2 L de cada uma das fases orgnicas em placa de slica com indicador de fluorescncia, secar e observar a placa sob luz ultra-violeta. Comparar as fluorescncias das manchas relativas ao mesmo frmaco especificando como forte (F) ou fraco (f). Interprete os resultados e compare com a previso feita no exerccio 7. Preveja para os 3 frmacos em que compartilhamento do trato gastrintestinal (estmago, pH 1 ou intestino pH 8) ocorrer a absoro.

DETERMINAO DE CONSTANTE HIDROFBICA (CONSTANTE LIPOFLICA, CONSTANTE DE HANSCH) DE SUBSTITUINTES. A atividade farmacolgica das substncias dependente de suas propriedades, fsico-qumicas: pka, ionizao, relao lipo/hidrossolubilidade, estereoqumica. As propriedades fsico-qumicas e, conseqentemente, a atividade biolgica, dependem dos efeitos dos grupos funcionais presentes na estrutura da molcula, tais como: efeitos eletrnicos, estereoqumicos e contribuio na relao hidro/lipossolubilidade. A relao estrutura qumica e atividade biolgica (REA), ou seja, a correlao entre as propriedades fsico-qumicas e atividade pode ser feita de maneira qualitativa (por exemplo; a substituio do grupo metila pelo grupo etila levou a diminuio da atividade, o que pode ser explicado pelo fato de o grupo etila apresentar maior efeito indutivo doador de eltrons; a reduo da densidade de carga positiva no tomo de N quaternrio torna mais fraca a ligao on-on com o receptor). O estudo da REA pode ser feito tambm de maneira quantitativa (REAQ, QSAR), sendo que neste caso, os efeitos dos substituintes (eletrnicos , estereoqumicos Es, de solubilidade ) so medidos e relacionados atividade por meio de modelos matemticos. QSAR possibilita explicar de forma quantitativa a relao entre a estrutura qumica e atividade, e, o mais importante, planejar modificaes moleculares de forma a se obter frmacos com vantagens sobre o prottipo. De todos os parmetros fsico-qumicos, o coeficiente de partio (P) tem sido o mais utilizado nos estudos de QSAR, uma vez que este parmetro influencia, efetivamente, nas propriedades farmacocinticas e permite avaliar a possibilidade de formao de ligaes hidrofbicas com os receptores. A contribuio dos diversos substituintes na relao lipo/hidrossolubilidade das molculas medida e denominada constante hidrofbica, ou constante lipoflica ou constante de Hansch (). Hansch e colaboradores (HANSCH,P.;MALONEY, P.P.; FUJITA, T. Nature, v.194, p.178-180, 1962) determinaram que de um substituinte X corresponde diferena dos logartimos dos coeficientes de partio leo/gua (P) de uma substncia de estrutura RX e de uma substncia RH.

= logPRX logPRX = log PRX/PRH

Significa que para se calcular o valor de , ou seja, avaliar a influncia do substituinte X no coeficiente de partio preciso determinar experimentalmente os coeficientes de partio de RH e RX. Do ponto de vista experimental a determinao do coeficiente de partio , na maioria dos casos, trabalhosa e exige o uso de mtodos sofisticados. Em 1965, BOYCE e MILBORROW (BOYCE, C.B.C.; MILBORROW, B. V. Nature, v.208, p.537-539, 1965) observaram uma correlao entre o coeficiente de partio das substncias e os respectivos valores do parmetro cromatogrfico

Rm. Estes autores encontraram que a diferena dos valores de Rm da substncia RX e RH corresponde constante hidrofbica do substituinte X ( ). O valor de Rm calculado com base no valor de Rf em cromatografia em fase reversa (fase estacionria apolar, fase mvel polar: as substncias mais apolares interagem mais efetivamente com a fase estacionria, portanto, as substncias mais apolares permanecero mais retidas, <Rf, que as mais polares, >Rf), utilizando a seguinte expresso: Rm = log (1/Rf-1) Segundo BIAGI e colaboradores (BIAGI, G. L.; BARBARO, A. M.; GUERRA, M. C. FORTI, G. C.; FRACCASSO, M. E. Journal of Medicinal Chemistry,v. 17, n.1, p. 28-33, 1974), para substncias cidas e bsicas o valor de Rm deve ser corrigido, acrescentando-se o valor da expresso log {(Ka + [H +]) / [H+]}, onde Ka a constante de acidez e [H+] a concentrao em mol/L de ons H + na fase mvel. Portanto, para cidos e bases: Rm = log (1/Rf-1) + log {(Ka + [H+]/[H+]} Assim, utilizando um mtodo simples, rpido e barato, cromatografia em camada delgada em fase reversa, possvel determinar a constante hidrofbica de uma srie de substituintes.

DETERMINAO DA CONSTANTE HIDROFBICA DE SUBSTITUINTES DE SULFONAMIDAS POR MEIO DE CROMATOGRAFIA EM CAMADA FINA EM FASE REVERSA

NH2

O S N R O H N R=H sulfanilamida 1 pKa=10,45 S R= N sulfatiazol 2 pKa=7,10 R= N R= N N sulfadiazina 4 pKa=6,15 CH3 CH3 sulfametazina=sulfadimidina 3 pka=7,70

X =log (PRX/PRH) X = constante hidrofbica do substituinte X PRX= coeficiente de partio da substncia com o substituinte X PRH = coeficiente de partio da substncia sem substituinte (com H)
RmRX RMRH = X Rm = log (1/Rf-1) + log {(Ka + [H+]) / [H+]}

PARTE PRTICA Fase estacionria; placas de slica gel impregnadas com soluo a 5% de noctanol em ter etlico. Fase mvel: soluo tampo pH 7,4 (preparada pela mistura de 50mL de soluo de fosfato bicido de potssio 0,1 mol/L e 39,5 mL de soluo de hidrxido de sdio 0,1 mol/L). A aproximadamente 1 cm da base da placa, aplicar cerca de 1 L das solues das sulfonamidas 1, 2, 3 e 4 (1mg/mL em acetona). Secar, eluir, at que a fase mvel atinja quase o topo da slica. Marcar a linha da fase mvel, secar, revelar com vapor de iodo e contornar, cuidadosamente, as manchas. Aquecer

as placas com secador de cabelo, borrifar a soluo etanlica de ninidrina a 0,3% e aquecer em estufa. Calcular os Rf de cada uma das substncias (Rf = distncia do ponto de aplicao at o centro da mancha/distncia do ponto de aplicao at a linha da fase mvel). Calcular: os valores de Rm para as 4 sulfonamidas e as constantes hidrofbicas dos substituintes presentes nas sulfonamidas 2, 3 e 4 [diferenas de Rm das sulfonamidas 2, 3 e 4 e da sulfanilamida (1)]. Com base nestes resultados, responda: a) Se voc tivesse que planejar uma modificao molecular em um frmaco de forma a torn-lo mais lipossolvel e tivesse a opo de introduzir um dos grupos funcionais ligados aos N sulfonamdicos das sulfonamidas 2, 3 e 4, qual deles voc escolheria? b) Se o desejado fosse obter um frmaco mais hidrossolvel qual dos grupos voc introduziria?

ASSUNTO: DETERMINAO DO COEFICIENTE DE PARTIO LEO/GUA DO CIDO MANDLICO.

OH OH O FM=C8 H8O3 MM=152,14 g/mol

P=[cido mandlico]fase orgnica / [cido mandlico]fase aquosa

EXPERIMENTO 1: Determinar a concentrao exata da soluo de hidrxido de sdio (aproximadamente 0,1 mol/L), seguindo a tcnica descrita na Farmacopia Brasileira IV edio para padronizao de soluo de hidrxido de sdio 1 M SV (correto, segundo a IUPAC: 1 mol/L SV), utilizando aproximadamente 0,2500g do padro primrio biftalato de potssio, pesado exatamente. EQUAO QUMICA: EXPERIMENTO 2: Transferir 15,mL de soluo de cido mandlico (aproximadamente 1g/100mL) para um erlenmeyer, adicionar gua destilada, 2 gotas de fenolftalena e titular com soluo de hidrxido de sdio padronizada at viragem. EXPERIMENTO 3: Transferir 15,0 mL de soluo de cido mandlico para um funil de separao, adicionar 10 mL de ter etlico e agitar vigorosamente (CUIDADO!). Deixar em repouso at separao das camadas, recolher a fase aquosa em um erlenmeyer, adicionar gua destilada, 2 gotas de fenolftalena e titular com soluo de hidrxido de sdio padronizada at viragem. EQUAO QUMICA: CLCULO 1: CONCENTRAO DA SOLUO DE HIDRXIDO DE SDIO (MOL/L) CLCULO 2: CONCENTRAO DE CIDO MANDLICO (g/mL) NA SOLUO ORIGINAL. CLCULO 3: CONCENTRAO DE CIDO MANDLICO (g/mL) NA SOLUO AQUOSA APS EXTRAO. CLCULO 4: CONCENTRAO DE CIDO MANDLICO (g/mL) QUE PASSOU PARA A FASE ETREA. CLCULO 5: COEFICIENTE DE PARTIO

EXERCCIOS: 1-Para se determinar o coeficiente de partio leo/gua da epinefrina (1) desenvolveram-se os seguintes experimentos:
HO N H HO OH
1

CH3

Preparam-se 5000mL de soluo de cido perclrico pela diluio de 4,2mL de soluo de cido perclrico em gua destilada. Na padronizao da soluo de cido perclrico preparada utilizando-se 100,3mg de carbonato de sdio como padro primrio foram consumidos 20,4mL da soluo de cido perclrico. Uma alquota de 20mL de soluo de epinefrina foi titulada com a soluo de cido perclrico padronizada, tendo sido consumidos 35 mL da soluo. Uma alquota de 20mL de soluo de epinefrina foi transferida para um funil de separao, adicionaram-se 20mL de clorofrmio, agitou-se, separaram-se as fases orgnicas e aquosa e titulou-se a fase com a soluo de cido perclrico padronizada. Foram consumidos 30,4 mL da soluo titulante.

a- Escreva a equao qumica da reao do cido perclrico com o carbonato de sdio. b- Escreva a equao qumica da reao entre a epinefrina e o cido perclrico. c- Calcule a concentrao terica da soluo de cido perclrico em mol/L. d- Calcule a concentrao real da soluo de cido perclrico em mol/L. e- Calcule o coeficiente de partio leo/gua da epinefrina. 2- Uma amostra de 200mg de cido ftlico (2) p.a. foi dissolvida em 50mL gua. A soluo foi transferida para um funil de separao, adicionaram-se 25mL de ter etlico, agitou-se e recolheu-se a fase aquosa em erlenmeyer. Adicionaram-se 2 gotas de soluo de fenolftalena Sl e titulou-se com soluo de hidrxido de sdio 0,036mol/L..Foram consumidos 22,0mL da soluo titulante.
COOH COOH
2

a- Escreva a equao da reao do cido ftlico com hidrxilo de sdio.

b- Calcule o coeficiente de partio leo/gua do cido ftlico.