HONGOS COMESTIBLES SHIITAKE (Lentinus edodes) Biologa de los hongos comestibles Antecedentes Los hongos son definidos como

macrofungos con un cuerpo fructfero distintivo que puede ser tanto epigeo como hipgeo (Mushworld, 2005). Constituyen un grupo diverso de organismos unicelulares o pluricelulares que se alimentan mediante la absorcin directa de nutrientes. Los alimentos se disuelven mediante enzimas que secretan los hongos; despus se absorben a travs de la fina paredde la clula y se distribuyen por difusin simple en el protoplasma. Los hongos, junto con las bacterias hetertrofas y un reducido grupo de otros organismos, constituyen los descomponedores de la bisfera, y su actividad es esencial para el continuo funcionamiento de la naturaleza. La descomposicin libera dixido de carbono (CO2) y aporta compuestos nitrogenados y otros minerales al suelo, en donde ellos pueden ser nuevamente utilizados por las plantas y eventualmente por los animales. Los hongos, equipados con un poderoso arsenal de enzimas que degradan los compuestos orgnicos, muchas veces constituyen organismos dainos para el hombre. Atacan madera, ropa, pintura, plumas, pelos, y de hecho casi cualquier sustancia. Pueden crecer sobre pan, vegetales, carne y otros productos. Algunos producen toxinas altamente venenosas. Por otra parte, muchos hongos son valiosos desde el punto de vista comercial, por ejemplo las levaduras, que son utilizadas para producir sustancias como el etanol y el dixido de carbono. Otros son de inters como fuentes de antibiticos, incluyendo la penicilina, adems de sus potenciales usos como fuente de protenas. Cabe sealar su importancia en la asociacin que presentan con otros organismos, por ejemplo las asociaciones existentes entre los hongos y las races de las plantas (micorrizas), las que juegan un rol fundamental en la nutricin y distribucin de muchas especies vegetales. Por otro lado, estn los hongos patgenos, quienes constituyen la principal causa de las enfermedades de las plantas. Cerca de 5.000 especies de hongos atacan cultivos comerciales, como tambin a la mayora de las especies silvestres. Han sido descritas aproximadamente 100.000 especies de hongos, y se estima que ms de 200.000 an esperan ser descubiertas. Los hongos no tienen una directa conexin evolutiva con las plantas y aparentemente derivaron de un grupo distinto de clulas eucariontes. Los hongos figuraban en las antiguas clasificaciones como una divisin del reino Plantas (Plantae). Se pensaba que eran plantas carentes de tallos y de hojas que, en el trascurso de su transformacin en organismos capaces de absorber su alimento, haban perdido la clorofila, y con ello, su capacidad para realizar la fotosntesis. Sin embargo, actualmente se le considera un grupo completamente separado que evolucion a partir de microorganismos flagelados sin pigmentos. Existen numerosas diferencias entre plantas y hongos, tanto a nivel macroscpico como celular. Los hongos carecen de clorofila y de tejidos vasculares especializados. Son organismos eucariticos y su nutricin es hetertrofa, es

decir, no pueden sintetizar su propio alimento como las plantas (auttrofas). Al microscopio aparecen diversas diferencias a escala celular entre hongos y plantas, como por ejemplo la presencia en los hongos de una membrana celular compuesta de quitina (en los vegetales est principalmente compuesta de celulosa, no de quitina que es propia de las clulas animales), la utilizacin de glucgeno en vez de almidn como sustancia de reserva (tambin aqu separecen ms a los animales que a las plantas), o la existencia de varios ncleos de distintaspolaridades en su ciclo reproductivo (esta caracterstica los separa definitivamente tanto de las plantas como de los animales).Proyecto u tilizacin de desechos de podas del arbolado urbano como sustrato para la produccin de hongos comestibles (Shiitake) en la comuna de La Pintana Aunque existe una importante discrepancia en la clasificacin de este reino, generalmente se le clasifica en tres rdenes: Zygomycota, Ascomycota y Basidiomycota. Estos dos ltimos son considerados hongos superiores, mientras que el primero agrupa a los hongos inferiores. La clasificacin se basa en las diferencias en sus estructuras reproductivas. Los Zygomycota poseen zygoesporas como esporas de reproduccin sexual (cigotos con una gruesa pared celular y sin asociacin a un oogonio); los Ascomycota producen ascoesporas, dentro de una estructura especial denominada ascos, mientras que los Basiomycota producen basidioesporas en un basidio. Estructura morfo-anatmica de los hongos Basidiomicetes. En general, la estructura tpica de los hongos basidiomicetes es la presentada en la Figura 1, aunque no todas estn siempre presentes, sino que dependen de la especie de hongo comestible. El conjunto de estas estructuras se denomina carpforo, cuerpo fructfero o seta. Figura 1. Estructura tpica de un hongo basidiomicete. Himenio Es la parte normalmente situada bajo el sombrero, que puede tomar distintas formas: lminas, tubos, aguijones, pliegues y poros, y cuya funcin principal es crear, desarrollar, almacenar y dispersar las esporas que generaran un nuevo ciclo en la formacin de una nueva seta. Su color es de importancia fundamental al depositarse sobre l las esporas maduras, que en grandes aglomerados, son las responsables de proporcionar los distintos colores, por los que posteriormente podrn ser clasificadas las setas de manera macroscpica. Lminas. Cuando el himenio est formado por lminas, estas proporcionan una gran superficie bajo el sombrero que permite desarrollar y liberar enormes cantidades de esporas. Es muy importante su disposicin con respecto al pie a la hora de intentar clasificar una seta. As tenemos disposicin adnada, libre, distante, escotada, decurrente, etc, de acuerdo a cmo estn adheridas a la superficie del pie. Otra de las caractersticas importantes de las lminas, es la separacin que se puede dar entre ellas. Se pueden diferenciar fundamentalmente por estar muy apretadas, separadas o muy separadas,

anastomosadas (cuando tienden a interconectarse entre ellas), o incluso bifurcadas, en forma de hoz, conforme se aproximan a los bordes del sombrero. Los bordes inferiores de las lminas tambin sirven como carcter morfolgico diferenciador, y pueden ser lisos, aserrados, ventrudos, sinuosos, redondeados, agudos, finos, gruesos, etc. Las lminas pueden ser todas iguales o tener otros tipos de lminas intercaladas entre ellas. En este caso, sus tamaos son diferentes y reciben el nombre de laminillas (ms pequeas que las lminas), y lamlulas cuando su desarrollo es incipiente y aparentan un amago de lminas. Por supuesto, estas caractersticas tienden a proporcionar mayor informacin en el reconocimiento visual de las setas y permiten contar con un nuevo criterio diferenciador entre las especies o gneros. Los poros y los tubos. Los poros son las partes o extremidades abiertas de los tubos que constituyen el himenio de los Boletos y las Poliporceas (setas sin lminas). Normalmente, los tubos estn situados bajo el sombrero y forman paquetes cilndricos dentro de los cuales estn las esporas. Los tubos y los poros pueden tomar diferentes colores. El empaquetado de los tubos genera una superficie porosa en forma esponjosa, donde la coloracin de los poros en esta masa es una caracterstica fundamental al clasificar este tipo de setas. La presin sobre los mismos puede generar cambios en la tonalidad de los poros y supone una informacin adicional muy valiosa para diferenciar especies y gneros de este tipo de setas. Tambin, tanto el tamao de los poros como la geometra de los mismos, que puede ser poligonal, alargada, circular e incluso con aspecto laminar entrelazado, es un carcter muy importante para su clasificacin. En el caso de los tubos su coloracin tambin es un carcter importante junto con la profundidad de los mismos, si bien este carcter puede variar en funcin de la madurez de la seta. Los pliegues y aguijones. Estos himenios estn presentes en mucho menor nmero que en el caso de lminas y poros, aunque, este tipo de himenios tiene la funcin principal de aumentar el rea superficial del cuerpo fructfero, y permiten una identificacin fcil de las setas. Pleo o sombrero Situado sobre el pie, ejerce la funcin de proteccin en la formacin y desarrollo de las esporas. Una caracterstica importante que permite diferenciar a las setas por el sombrero es que puede tomar diferentes aspectos, formas y colores. Algunas de las formas son: convexa, deprimida, cnica, Proyecto utilizacin de desechos de podas del arbolado urbano como sustrato para la produccin de hongos comestibles (Shiitake) en la comuna de La Pintana mamelonada, cilndrica, infundibiliforme, hemisfrica, extendida, embudada, etc. Cuando se estudia el sombrero es importante tener en cuenta, adems, la cutcula, el margen o borde y la carne. La cutcula ejerce la funcin de proteger la superficie del sombrero. Su principal caracterstica es el color, que es proporcionado por las distintas pigmentaciones que puede adquirir, si bien estas pueden variar en funcin de las condiciones

climatolgicas y del grado de crecimiento de la seta. La ornamentacin de la cutcula puede tomar formas significativas, donde las ms comunes suelen ser de tipo lisa, cuarteada, fibrilosa, escamosa, mechosa, con placas, flocosa, glabra, etc, cubriendo total o parcialmente la superficie. El margen o borde toma diferentes formas, lo que a su vez permite diferenciar las setas por esta importante caracterstica. Puede ser estriado, liso, festoneado, acanalado, apendiculado, lobulado u ondulado, enrollado, lanoso, con restos de cortina y con restos de anillo. Los aspectos antes mencionados pueden cambiar durante el desarrollo de la seta. La carne va a proporcionar a los especmenes aspectos carnoso y frgil, y su corte, al tener contacto con el aire o por ataque de reactivos especficos, permitir observar posibles variaciones en su color, lo que servir como criterio de identificacin significativo. Estpite o pie Acta como sujecin del himenio y del sombrero, aunque hay setas que pueden no tener pie o estar el mismo atrofiado; en este caso se dice que tienen aspecto ssil. Son numerosas las diferentes formas que puede adquirir el pie: delgado, atenuado, cilndrico, grueso, en forma de mazo, sinuoso, radicante, bulboso, hinchado, etc. Su color y tamao tambin sirven como criterio diferenciador junto con el aspecto de su superficie, el que puede ser liso, estriado, punteado, leonado, venoso, escamoso, escrobiculado, reticulado, etc, y si se parte o no fcilmente, si est hueco o macizo, etc. Volva La volva es un fragmento en forma de membrana procedente del velo general que envuelve la base del pie en algunas setas. Es caracterstico en los gneros Amanita y Volvaria, y en ocasiones puede desaparecer cuando la seta est madura o puede pasar desapercibida, ya que normalmente est enterrada. Su forma puede ser clave para clasificar especies dentro del gnero. La forma de la volva puede ser abierta, circuncisa, saciforme, friable, membranosa, etc. Anillo o cortina El anillo es un resto de membrana que procede de la rotura del velo parcial interno que tienen algunas de las setas, que al crecer se deposita en la parte superior del pie generando esta forma anular. Puede tomar diversas formas: aplicado, ascendente, descendente, en rueda, doble, estriado, cortiniforme, etc. La cortina est formada por una masa de fibrillas muy finas que dan lugar a una especie de velo que recubre y protege al himenio. Durante la fase de crecimiento de la seta es fcil de apreciar, tiende a desprenderse y puede desaparecer rpidamente o quedar depositado parcialmente sobre el propio pie. Es una caracterstica del gnero Cortinarius que le da el nombre. Reproduccin de los hongos Basidiomicetes Ciclo de vida natural

Los hongos se reproducen sobre todo por medio de esporas, las cuales se dispersan en un estado latente, que se interrumpe slo cuando se hallan condiciones favorables para su germinacin. Cuando estas condiciones se dan, la espora germina, surgiendo de ella una primera hifa. Las hifas crecen por alargamiento de las puntas y tambin por ramificacin. La proliferacin de hifas resultante de este crecimiento se llama micelio. Cuando el micelio se desarrolla puede llegar a formar grandes cuerpos fructferos o carpforos. El micelio puede clasificarse segn su funcin en micelio vegetativo, si se encarga de la nutricin, y en micelio reproductivo, si su funcin es la de formar rganos de reproduccin y multiplicacin. En los hongos parsitos el micelio puede crecer en la superficie del husped (micelio exgeno), o bien dentro del husped (micelio endgeno). Por ejemplo, los oidios se caracterizan por presentar un micelio exgeno, que puede visualizarse sobre el husped como una delgada capa algodonosa o aterciopelada generalmente de color blanco. En este caso, el micelio, tanto vegetativo como el reproductivo, crece en la superficie y slo pequeas prolongaciones hifales penetran en el husped, extrayendo de ste las sustancias alimenticias necesarias para el crecimiento y reproduccin del hongo. Tales prolongaciones se conocen como haustorios. Las esporas de los hongos se producen en esporangios, ya sea asexualmente o como resultado de un proceso de reproduccin sexual. Cuando estos esporangios han madurado sueltan las esporas en un nmero tan grande que puede llegar a ser de miles de millones, de las cuales solo unas pocas llegaran a desarrollarse. En este ltimo caso la produccin de esporas es precedida por la meiosis de las clulas, de la cual se originan las esporas mismas. Las esporas producidas a continuacin de la meiosis se denominan meiosporas. Como la misma especie del hongo es capaz de reproducirse tanto asexual como sexualmente, las meiosporas tienen una capacidad de resistencia que les permite sobrevivir en las condiciones ms adversas, mientras que las esporas producidas asexualmente cumplen sobre todo con el objetivo de propagar el hongo con la mxima rapidez y con la mayor extensin posible. Las esporas, que se esparcen a travs del aire, del agua o de los excrementos que evacuan los animales que las han comido (lugar extremadamente propicio para desarrollar un micelio), pueden permanecer inactivas durante varios aos, hasta que encuentran el momento propicio para germinar. Cuando llega este momento, lo harn formando el micelio. Las setas solamente se reproducen cuando las condiciones de temperatura y humedad son las ideales. Reproduccin con fines econmicos o cientficos El cultivo de los hongos se llama micocultura, y se practica por su inters econmico o cientfico. Para asegurar la conservacin, desarrollo y utilizacin de los hongos en condiciones de laboratorio, se deben utilizar medios de cultivo apropiados. Los medios de cultivo corresponden a un conjunto de sustancias que garantizan a un microorganismo los nutrientes necesarios para su conservacin, crecimiento y desarrollo. Contienen una base mineral (Ca, Mg, etc), fuente de carbono, de nitrgeno y los requerimientos fsico-qumicos adecuados dependiendo del tipo de

microorganismo a desarrollar. En el Cuadro 3 se muestra una clasificacin de los medios de cultivo segn tres criterios. Nutricin Los hongos, organismos hetertrofos, dependen de materia orgnica elaborada para poder sobrevivir. Esta materia orgnica la pueden obtener de tres formas, distinguindose tres grupos principales: 1. Hongos Parsitos: se alojan sobre algn ser vivo que los hospede, viviendo a expensas de ste sin ofrecerle ningn beneficio a cambio. Los hongos parsitos pueden producir daos de muy diversa consideracin, desde pasar inadvertidos por completo para el husped hasta causarle enfermedades graves o incluso la muerte. Pueden parasitar plantas, animales (incluido el hombre), o incluso a otros hongos. Entre estos encontramos a los hongos fitopatgenos, que causan enfermedades a plantas cultivadas, y los hongos dermatgenos, que causan enfermedades en la piel humana, entre otros subgrupos. Dentro de los primeros encontramos a las Royas, Tizones, Botrytis, los Dihuees (Cyttaria spp.), y entre los segundos se incluye a Trichophyton y Candida, entre muchos otros (Cisterna, 2003). 2. Hongos Simbiontes: viven en simbiosis con alguna especie vegetal (normalmente rboles), obteniendo ambos un beneficio mutuo. Entre stos encontramos a los micobiontes, que forman parte de los Lquenes, y a las Micorrizas, las que viven rodeando las partes ms finas de las races de los rboles, envolvindolas y alimentndose de sustancias que stas segregan llamadas exudados radiculares. Estos exudados radiculares aportan al hongo los glcidos que necesita para vivir. 3. Hongos Saprfitos (o saprobios): viven sobre materia orgnica en descomposicin, es decir sobre materia muerta (restos orgnicos de la descomposicin de plantas y animales que contiene el suelo, partes muertas de la madera de un rbol, excrementos de animales). Este grupo es muy importante en los ciclos de la mayora de los macroelementos y sustancias indispensables para la vida. Entre ellos encontramos a todos los hongos que degradan el complejo lignocelulsico que forma parte de la pared de los vegetales. Bsicamente existen dos subgrupos de hongos saprfitos: los Degradadores Primarios, que corresponde a los hongos colonizadores y que inician el proceso de degradacin, y los Degradadores Secundarios, que slo pueden acceder a sustancias orgnicas ms simples y que han sido pre-degradadas por los Degradadores Primarios (Cisterna, 2003). Taxonoma de los hongos comestibles De acuerdo con los criterios taxonmicos tradicionales, donde las caractersticas son muy variables, los determinantes para la identificacin de un hongo son:

1. El color: Existen hongos de coloracin roja, roscea, caf, blancas, etc. Es una caracterstica de suma importancia para la identificacin de hongos, ya que es un auxiliar para diferenciar especies. 2. El pleo o sombrero: Puede encontrarse gran variedad de formas como: de embudo, campanudo, plano, convexo, cilndrico, giboso, etc. Tambin existen variaciones sobre los mrgenes, que pueden ser dentados, enrollados, levantados etc. La textura de pleo puede presentar sensacin de humedad, ser mucilaginoso, aceitoso, sedoso, puede tener escamas, vellosidades, estras, pueden ser brillantes u ornamentados (cavidades, grietas, arrugas, espinas, etc.). 3. El estpite o pie: Algunos hongos pueden o no tener estpite. Cuando lo tienen puede estar ubicado justo abajo del centro del pleo, de manera lateral o excntrica, y puede presentar rizoides. La forma y la textura del estpite varia, pudiendo ser bulboso, redondo, torcido, rgido, liso, quebradizo, leoso, flexible, correoso, etc. 4. La presencia y forma de la volva, en la base del estpite, o de un anillo en la parte superior del mismo, depende de la especie. 5. Las estructuras que forman el himenio. Las lminas varan en su forma, tamao, densidad y su unin con el estpite. La presencia de dientes y poros es variable en las diferentes especies. 6. El olor y sabor del hongo: Estas caractersticas son de importancia secundaria, sin embargo, ayudan a la confirmacin de algunas especies; el olor puede ser de hongo, imperceptible, nauseabundo, a madera, a harina, etc. Caracterizacin del hongo comestible Lentinus edodes (Shiitake) El nombre Shiitake es tomado del idioma Japons, siendo Shii un tipo de rbol donde crece naturalmente y take que significa hongo. Tambin se le conoce como hongo negro del bosque y Shiang-gu (del chino, hongo con fragancia). Este hongo se caracteriza por crecer en troncos, por no tener anillo ni volva y por su consistencia subcarnosa; es de color caf pardusco o color cuero (Garca, 2003). Crece de forma silvestre sobre residuos de lignina y celulosa, como la que contienen la madera y sus derivados, y distintos tipos de bagazo, como el de caa de azcar, y residuos agrcolas. El pleo o sombrero mide entre 5 y 20 cm de ancho, es convexo o casi plano con una superficie seca y fibrosa apresada, cutcula rompindose en escamas de diversos tamaos y formas, textura blanda de color claro y pardo rojizo oscuro. Tonalidad clara o parda cerca de la cutcula, firme, correosa carnosa en estado adulto y suave en especmenes inmaduros; sabor agrio, olor ligero pero no caracterstico. Lminas blancas o plidas tornndose pardo rojizas y algunas veces manchadas por la edad; a veces con un tono avellanado y moderadamente anchas, bordes detalladamente cerrados a dentados (Garca, 2003)

El estpite o pie mide de 3 a 5 cm de largo y de 8 a 13 mm de grosor, casi igual o ensanchado hacia abajo, slido y correoso, de superficie delgada envainada por un velo delgado, que termina en la zona apical conforme la cortina se rompe; cortina hialina o pardusca (Garca, 2003). Las esporas miden 5,5 a 6,5 por 3 a 3,5 mm, de forma subcilndricas no amiloides, lisas de pared delgada. Basidios tetrasporados, pleurocistidios ninguno, trama laminar entre tejidos y no claramente distintas del contexto, conexiones en grapa presentes (Garca, 2003).La fructificacin natural de este hongo ocurre generalmente durante todo el ao si las condiciones climticas son favorables, pero de preferencia suele ocurrir en los meses de otoo y primavera. Sin embargo, si el cultivo se realiza en invernadero con condiciones controladas, la fructificacin puede ocurrir en cualquier poca del ao. Propiedades y valor nutricional. Desde tiempos remotos los hongos han sido tratados como un tipo especial de alimento. Los griegos crean que proporcionaban fuerza en las batallas, los faraones los apreciaban como una delicadeza, los romanos y los aztecas los consideraban como el alimento de los dioses y los chinos los apreciaban como un alimento saludable. El consumo de Shiitake tiene efectos benficos para el ser humano. Algunas de las propiedades medicinales de este hongo comestible son: -cncer: Este tipo de hongo posee lentinan, que es un agente anti-cancer. -infecciones: Shiitake estimula la produccin en el organismo de interfern, el cual tiene efectos anti-virus. s de los factores que causan envejecimiento en el ser humano. fibrosa de hongos que tienen quitina, sus propiedades son aumentadas por la lentinan. erial. angkok y Hawaii han demostrado experimentalmente que Shiitake previene la trombosis en las arterias coronarias. veles bajos de hidratos de carbono y la lisina previenen la formacin de azcar en la sangre El Shiitake es bajo en caloras, alto en protenas, hierro, fibra, minerales y vitaminas. Contiene vitaminas B1, B2, B6, B12 y D2, con altas cantidades de riboflavina y niacina. Definitivamente un alimento excelente con propiedades medicinales. El consumo de este hongo es una buena forma de prevenir las enfermedades y de tener buena salud, se cree que puede aumentar la longevidad y que posee propiedades afrodisiacas. El hongo Shiitake, y en general cualquier hongo comestible, se puede cultivar bsicamente sobre dos tipos de sustrato:

Naturales y artificiales. Sustratos naturales Estos sustratos corresponden principalmente a troncos y ramas en los que el hongo es inoculado directamente, sin realizarse ningn tipo de tratamiento de esterilizacin. Esto se puede realizar sin problemas porque durante la incubacin y fructificacin el cultivo se realiza manteniendo la corteza de los propios troncos, la que constituye una barrera fsica y qumica muy efectiva contra la invasin de hongos contaminantes. A pesar de lo anterior, muchos troncos se contaminan por los cortes (en la superficie transversal), sin embargo, estas contaminaciones se consideran tolerables en el cultivo, siendo posibles de controlar con el uso de desinfectantes adecuados, como el agua oxigenada. Sustratos artificiales Son, por lo general, una mezcla de distintas sustancias orgnicas e inorgnicas sobre una matriz de material lignocelulsico, que en conjunto o por separado tienen un alto valor nutritivo para un gran nmero de microorganismos y que, adems, son sustancias relativamente simples a las cuales estos microorganismos pueden acceder sin dificultad. Si estos sustratos son inoculados directamente sin que sean sometidos a un tratamiento trmico previo (esterilizacin), lo ms probable es que los microorganismos que se encuentran naturalmente en ellos, terminen invadiendo la totalidad del sustrato de cultivo a una velocidad de crecimiento mayor que el hongo que se intenta cultivar. Muchos fungicultores incautos han tratado de cultivar Pleurotus ostreatus inoculando paja de trigo humedecida y slo han conseguido una increble produccin de trigo, malezas y una no menos sorprendente coleccin de mohos. Por esto, se hace indispensable someter al sustrato a un tratamiento fsico o qumico que elimine o disminuya la carga de microorganismos contaminantes. Este tratamiento, junto con el pool de nutrientes que posee la mezcla, convierten al sustrato en una matriz altamente selecta para el crecimiento del hongo comestible que es inoculado o sembrado en este sustrato. En trminos generales, el sustrato artificial tiene una cierta relacin Carbono:Nitrgeno (C:N), pH, humedad, grado de compactacin, granulometra, etc, que permiten el rpido crecimiento vegetativo y reproductivo del hongo que es inoculado sobre o dentro de l y, estas propiedades ms las condiciones ambientales, determinan finalmente el xito del cultivo. Existen dos tipos de tratamientos trmicos, cada uno con ventajas y desventajas, los que son detallados ms adelante. Produccin de hongos comestibles Para la produccin de hongos comestibles, y en particular de Shiitake, es necesario desarrollar una serie de etapas. Dado que la obtencin de la semilla requiere de instalaciones y condiciones relativamente complejas, esta actividad debe desarrollarse en unidades

independientes que no forman parte de la unidad productora propiamente tal, siendo lo ms usual adquirirla a terceros. Para el resto del proceso productivo de hongos comestibles es indispensable contar con las instalaciones adecuadas a tales efectos, siendo usual la construccin de un invernadero que posea tres zonas bien definidas: una para realizar la inoculacin del sustrato, otra para la etapa de incubacin o colonizacin y una tercera para la etapa de fructificacin. En lo posible estas tres reas deben estar aisladas unas de otras, aunque deben estar interconectadas de modo de permitir el trnsito de una a otra slo en los casos necesarios. Obtencin de la semilla Se denomina semilla a la forma en que el micelio del hongo es inoculado en un sistema productivo, es decir, la semilla es el vehculo de transporte del micelio desde el medio de cultivo in vitro hasta el sustrato definitivo donde crecer el hongo. Para la preparacin de la semilla, se utilizan granos de cereal, siendo los ms comnmente empleados el trigo y sorgo, y tambin avena y centeno. Otra opcin es usar tarugos de madera. Obtencin de semilla en laboratorio Seleccin y preparacin del sustrato Fructificacin Inoculacin Induccin Cosecha y almacenamiento Seleccin de granos de cereales y preparacin de tarugos La seleccin de granos consiste en elegir aquellos que se encuentren limpios, de buena calidad, sinresiduos de productos qumicos o contaminados con otros hongos o insectos. Es preferible utilizar granos que provengan de siembras libres de aplicaciones de fungicidas, ya que sus residuos pueden inhibir el crecimiento del hongo. Durante el desarrollo de este proyecto se utilizaron granos de trigo y tarugos de madera. En el caso de los tarugos se recomienda emplear madera de la misma especie que la que se usar como sustrato. El tamao del tarugo utilizado en el proyecto fue de 8-10 mm de dimetro y 2,5 cm de largo, aunque pueden utilizarse otras dimensiones. Lavado y remojo En la etapa de lavado y remojo de los granos se eliminan el polvo y otras impurezas por flotacin. Esto se logra remojndolos en abundante agua y quitando las impurezas que quedan en la superficie, el procedimiento se repite las veces que sea necesario hasta que no se observen impurezas. Para el caso Seleccin de granos de cereales Lavado y remojo Preparacin de tarugos de madera Envasado en frascos Esterilizacin Enfriado Inoculacin

Incubacin Almacenaje Multiplicacin en medio de cultivo Cepa madreProyecto utilizacin de desechos de podas del arbolado urbano como sustrato para la produccin de hongos comestibles (Shiitake) en la comuna de La Pintana Tcnicas de cultivo. 20 de los tarugos, stos no se lavan pero s deben ser remojados de manera de lograr una hidratacin que luego permitir el crecimiento del hongo. A continuacin se describen los mtodos empleados para preparar el sustrato sobre el cual crecer el hongo comestible Bloques o bolsas Los mtodos modernos de cultivo de Shiitake usan como sustrato virutas y aserrn de maderas, ms un suplemento rico en nitrgeno, como el afrecho de trigo, arroz, avena, cebada, soya, etc. En nuestro pas se han logrado cultivos en mezclas de virutas de robles, raul, coihue y tepa. Otra especie interesante de utilizar es el eucalipto, con el cual tambin se producen hongos de buena calidad y se evita el tener que usar rboles nativos. En el caso del pino es posible utilizar su viruta, pero hasta cierta proporcin y complementada con otras maderas, de modo de evitar el traspaso de olores y sabores a resina hacia los hongos. En otros pases se utilizan residuos de la elaboracin de productos agrcolas, tales como cascaras de caf, tortas de oleaginosas, melaza, corontas de choclo, etc. Es comn, adems, el uso de pajas de cereales mezcladas con yeso o cal, sobre todo en fungicultores que recin se inician en el tema. En general, se puede establecer que no existe una receta nica y que el fungicultor debe experimentar la produccin con los recursos disponibles y que resulten ms econmicos. Para permitir que el hongo invada el sustrato en forma homognea es indispensable que este tenga una densidad determinada, que no impida el intercambio gaseoso entre ste y el medio ambiente inmediato. Para lograr esto, las pajas de cereales deben ser picadas hasta lograr trozos de entre 4 y 10 cm. Luego deben ser remojadas durante 24 a 48 hrs para permitir su hidratacin, alcanzando una humedad total cercana al 70%. Tiempos de remojo menores al indicado no permiten una buenahidratacin debido a la resistencia natural que tienen las pajas de cereales a absorber agua (gruesa cutcula); tampoco es recomendables tiempos mayores, ya que comienza a contaminarse con mohos (Cisternas, 2003). Una prctica habitual es dejar las pajas sumergidas en estanques de agua, o colocarlas en recipientes de gran tamao donde se les adiciona agua con la ayuda de un aspersor o simplemente con una manguera flexible. Todos los desechos agroforestales tienen una gran carga de agentes contaminantes, especialmente bacterias y hongos inferiores, lo que se debe a que estos organismos comienzan a colonizar estos sustratos para degradarlos y volver sus componentes al medio ambiente. Por lo tanto, es indispensable que los sustratos sean tratados (esterilizados o pasteurizados) previamente para eliminar estos microorganismos. Sin tratamiento lo nico que se consigue es obtener una

gran cantidad de gramneas creciendo sobre un sustrato extremadamente contaminado con mohos, bacterias y larvas de insectos. Cuando se trata de pajas de cereales, existen varios tratamientos que aseguran la eliminacin total o parcial de estos agentes contaminantes. A continuacin se har una breve descripcin de los ms utilizados en Chile. Esterilizacin: Con este tipo de procedimientos se obtiene lo que se llama una "desinfeccin total", ya que los sustratos de cultivo se someten a temperaturas cercanas a los 120 C durante 30 minutos como mnimo, siendo recomendable usar 45 minutos. Para lograr esto, se utiliza una presin de vapor de 15 psi al interior de autoclaves, actividad que debe ser desarrollada por personal entrenado. La gran ventaja de este sistema de tratamiento trmico es que se eliminan casi por completo todos los microorganismos que pueda tener el sustrato de cultivo, disminuyendo considerablemente los riesgos de contaminacin y las prdidas de sustrato durante la etapa de incubacin. Pasteurizacin en agua: la paja picada sin humedecer se coloca al interior de tambores que contengan agua a 80 C y se mantiene sumergida en ella durante una hora. Para asegurarse de mantener la temperatura constante se debe contar con un termmetro confiable y con una fuente de calor que permita aumentar o disminuir su intensidad. Este mtodo evita la prdida de nutrientes que se produce cuando se utiliza agua hirviendo (esterilizacin), sin embargo, no elimina por completo las esporas de hongos competidores. Pasteurizacin en vapor: Es un conjunto de procedimientos en los cuales los sustratos de cultivo son sometidos a temperaturas inferiores a los 100C y a presiones de vapor nunca superiores a la presin atmosfrica. El mejor ejemplo de este tipo de procedimientos es el que se realiza durante la Fase II del compostaje para la obtencin de sustratos en el cultivo del Champin de Pars (Agaricus spp.). Durante algunos das el sustrato semifermentado es colocado al interior de tneles donde paulatinamente sube la temperatura, eliminando gran cantidad de agentes contaminantes y permitiendo que aparezca una rica microflora termfila que transforma a este sustrato en un medio de crecimiento especfico para el Champin de Pars (dicho esto en forma muy resumida). Durante la Pasteurizacin se eliminan los agentes contaminantes, pero permanecen poblaciones activas de otros microorganismos que producen antagonismos con agentes patgenos y contribuyen a enriquecer nutritivamente los sustratos de cultivo. En los ltimos 8 aos se han desarrollado en Chile varios tipos de Tneles de Pasteurizacin con inyeccin de Vapor, con el fin de procesar sustratos para el cultivo del Hongo Ostra y Shiitake, los que han resultado ser ms econmicos y fciles de utilizar que los equipos para esterilizar (autoclaves). Sin embargo, estos requieren de tiempos mayores de uso, por lo que el fungicultor debe construir varios de ellos para que estos procedimientos no constituyan "cuellos de botella" en el cultivo (Cisternas, 2003). Este sistema disminuye considerablemente la carga de agentes que pueden causar contaminaciones, sin embargo, slo se recomienda para sustratos con baja suplementacin, es decir, que tienen una proporcin baja de aditivos orgnicos e inorgnicos nitrogenados y polisacridos o azcares simples. Para sustratos con alta suplementacin es recomendable esterilizar los sustratos en Autoclaves.

Troncos Los troncos o trozas deben estar a un contenido de humedad de entre 50% y 80%, por lo que, una vez recolectados, lo ideal es que sean incorporados inmediatamente al proceso. Con esto se logra que la madera llegue a esta etapa con un contenido de humedad apropiado, evitndose prdidas de humedad excesiva, dado los tiempos de exposicin y manejo entre la corta y la preparacin de los troncos. En el caso de no ser posible utilizar troncos frescos, ellos debern ser hidratados sumergindolos en agua por un perodo mnimo de 72 horas, despus de lo cual es necesario chequear el contenido de humedad hasta llegar al rango previamente indicado. En este punto es relevante el trabajo de las personas involucradas en la recoleccin, seleccin y preparacin de los troncos. Se debe tener especial cuidado con el contenido de humedad de las trozas de acuerdo a lo indicado previamente, como tambin en los siguientes aspectos: aquellos troncos que presenten forma cilndrica. dimetro aproximado de entre 10 y 15 cm y un largo de 100 cm. ortante de corteza, ni tampoco grietas o rajaduras en su superficie. Se deben dejar de lado aquellas trozas que muestren evidencias de ataque por hongos, insectos u otros patgenos, tanto en su superficie como en su interior. Una vez seleccionadas y preparadas las trozas, stas debe ser perforadas tanto en sentido longitudinal como perimetral, emplendose para ello un taladro. Las perforaciones longitudinales debern estar separadas entre s unos 10 cm, extendindose por todo el largo de la troza y a 5 cm de los extremos. Por su parte, las perforaciones perimetrales estarn separadas por una distancia de 6 cm medida como arco de circunferencia (Figura 6). Los orificios tendrn una profundidad de 2,5 cm y un dimetro de 10 mm, y deben quedar libres de cualquier residuo para evitar futuras contaminaciones. Siembra o inoculacin del sustrato La etapa de inoculacin se realiza en una sala ubicada al interior del invernadero, que ha sido diseada para mantener las mejores condiciones aspticas posibles. Concordante con esto, previo a cada inoculacin se deben limpiar con cloro, desinfectante en aerosol u otro, las superficies y el piso, asegurando un ambiente de trabajo asptico. Durante todo el proceso de inoculacin o siembra se debe trabajar con las mximas precauciones de asepsia, evitando el trnsito innecesarios de utensilios y personas, trabajando con guantes de ltex, mascarilla y desinfectando superficies cada vez que sea necesario. Siembra en bloques Para proceder a la siembra, la paja ya pasteurizada se deja enfriar de preferencia voltendola para que escape el vapor de agua atrapado, de lo contrario se condensar en ella y habr problemas por exceso de humedad.

Para ser sembrada, el contenido de humedad de la paja debe estar entre 70% y 80%. En la prctica el contenido de humedad se determina tomando un puado de ella y apretndola moderadamente, si caen gotas de agua o es notoria la humedad que queda en la mano, la paja tiene exceso de agua, en cuyo caso se debe esperar a que escurra removindola. No es recomendable sembrar con niveles de humedad mayores que los indicados, porque el hongo necesita para su desarrollo de ciertos espacios porosos, lo que permite que el intercambio de gases sea el ptimo para su crecimiento, tanto de CO2 como de oxgeno, evitando as la aparicin de organismos que pueden vivir sin oxgeno y que ocasionan pudricin del sustrato. Una prctica habitual es adicionar a la paja, antes de la siembra, una cantidad de entre 1% y 2% de carbonato de calcio (cal) o sulfato de calcio (yeso) en base al peso hmedo, con el fin de aumentar parcialmente el pH a valores de entre 6 y 6,5. Eventualmente, se pueden agregar en este momento bajas concentraciones de fungicidas especficos, para evitar la contaminacin con mohos durante la incubacin. Para sembrar, la paja debe estar a una temperatura ptima de 20 a 25 C (cuando todava est tibia). Con temperaturas mayores el micelio muere, mientras que con temperaturas demasiado bajas se retrasa el crecimiento. Una vez que la paja ha sido esterilizada o pasteurizada, sta es mezclada con la semilla del hongo (inculo) en una proporcin de entre 3% y 5% del peso hmedo de la paja. Una vez que la paja toma la humedad y la temperatura ptimas se procede a formar el bloque, para lo cual, en bolsas de polietileno de alta densidad, se coloca una capa de sustrato de 10 cm de alto seguido de una capa de semilla (lo que alcance a tomar la mano esparcindolo sobre la paja), y as sucesivamente, hasta alcanzar la altura deseada, luego de lo cual la bolsa es cerrada y compactada, etiquetndola con la fecha de siembra y colocndola en el rea de incubacin. Siembra en troncos En el caso de utilizar semilla en forma de granos de trigo, sta es introducida en las perforaciones ocupando todo el volumen de ellas. Luego son selladas con parafina slida (u otro material inerte), previamente derretida a bao mara, con el fin de impedir la entrada de microorganismos que causen contaminaciones (Figura 7). Se debe evitar dejar restos de semilla en el borde externo de las perforaciones y, en general, en la superficie del tronco, pues son potenciales focos de contaminacin. Cuando se utilizan tarugos de madera como semilla, stos se introducen en las perforaciones con la ayuda de un martillo, debiendo su tamao coincidir con el de la perforacin. Luego, stas deben ser selladas con parafina. Colonizacin o incubacin del sustrato El objetivo de la etapa de incubacin o colonizacin es proporcionar al hongo las condiciones para que invada el sustrato lo ms rpido posible. El sustrato, ya sea en forma de bloques o troncos, es llevado a la sala de incubacin del invernadero, la que cumple el rol de cmara de cultivo, permitiendo el desarrollo del hongo al

interior de l. Para ello deben permanecer en esta zona bajo las siguientes condiciones: Temperatura: el ptimo desarrollo de los hongos comestibles se logra a una temperatura de entre 24 y 28 C. Temperaturas menores provocan un retardo en el crecimiento, mientras que temperaturas mayores pueden ocasionar la muerte del micelio. Humedad: si el cultivo se realiza en bloques o bolsas plsticas, la humedad ambiental no es tan importante, ya que la bolsa mantiene la humedad requerida. Por el contrario, el cultivo en troncos requiere de un rango de humedad relativa de entre 70 y 80% para el adecuado desarrollo del micelio. Ventilacin: durante esta etapa puede ser mnima, ya que la mayora de los hongos comestibles toleran altas concentraciones de CO2. Es importante realizar perforaciones a las bolsas al 2 o 3 da despus de haber sido sembradas para permitir cierta aireacin. Esta perforacin debe ser realizada con una aguja gruesa previamente desinfectada y, de preferencia, haber sido flameada para evitar contaminaciones. La compactacin del sustrato al interior de la bolsa tiene directa incidencia con la aireacin, ya que si est muy compactado el intercambio gaseoso es muy deficiente producindose al centro una fermentacin anaerbica que elevar la temperatura del sustrato. Por el contrario, al existir poca compactacin quedarn muchas zonas con aire, disminuyendo los rendimientos del cultivo. Ya sea si el cultivo se realiza en bloques o en troncos, es necesario rotar o mover el sustrato de lugar, permitiendo una correcta aireacin y, en el caso de las bolsas, permitir el drenaje del exceso de agua. Luminosidad: durante la colonizacin el hongo no necesita luz, sino una completa oscuridad. La sala de incubacin debe estar cubierta con una malla sombreadora, lo cual evita la entrada de insectos y permite ahorrar energa. Dependiendo de la cantidad de inculo y del sustrato utilizado, la incubacin o colonizacin puede demorar de 1 a 4 meses, y su trmino se nota por el completo cubrimiento del sustrato en el caso de utilizar bloques. Para el hongo Shiitake cultivado en troncos, se ha considerado un perodo de incubacin aproximado de tres meses. Es importante sealar que durante el perodo de colonizacin los troncos deben permanecer apilados, para lo cual deben formarse castillos, de preferencia, en hileras de 5 a 10 troncos (homogneos en dimetro), perpendiculares entre s, con el objetivo de facilitar el flujo de aire entre ellos y mantener su humedad. Se debe evitar el contacto directo con el suelo. Existen otras formas de apilar los troncos en la etapa de colonizacin, las que deben ser evaluadas por los fungicultores en funcin de la disponibilidad de espacio. Al interior del invernadero, las condiciones de temperatura son mantenidas utilizando un calefactor elctrico, al cual se le incorpora un termostato fijado en 25 C. Una red de tuberas con aspersores inyectar agua al ambiente de modo de mantener la humedad relativa cercana al 80%, evitando la prdida de humedad del sustrato. Se debe evitar el trnsito innecesario al interior del invernadero manteniendo siempre las puertas cerradas, y evitar la presencia de insectos y de hierbas.

Adems, previo a la colonizacin se debe aplicar algn fungicida y herbicida al piso de la sala, asegurando un ambiente de trabajo limpio. Durante todo el proceso de colonizacin se debe trabajar con las mximas precauciones de asepsia, utilizando guantes de ltex, mascarilla y en lo posible desinfectar el ambiente cada vez que sea necesario. Durante toda esta etapa, y en especial en la primera semana, se deben inspeccionar las bolsas o troncos diariamente con el fin de comprobar un desarrollo del micelio libre de contaminacin. En los troncos es comn la aparicin de mohos en las superficies; si el rea afectada es pequea se debe limpiar con algn desinfectante convencional como el agua oxigenada, pero si las contaminaciones abarcan un rea importante, los troncos deben ser desechados de manera de evitar la proliferacin de agentes contaminantes, tal como se describi anteriormente. Si en las bolsas se observan indicios de contaminacin, stas deben ser desechadas inmediatamente. Induccin del fructificacin En esta etapa se induce la formacin de carpforos o cuerpos fructferos. Para ello se entregan estmulos al hongo, tales como cambios bruscos de luz, temperatura y aireacin, lo que desencadena un proceso irreversible de induccin de primordios que posteriormente formarn los carpforos (France, 2000). Para realizar esta etapa se debe contar en el invernadero con una sala exclusivamente destinada a la induccin, ya que las condiciones de crecimiento son distintas a las utilizadas en la etapa de colonizacin. Induccin a los bloques o bolsas: se debe producir un shock trmico bajando la temperatura a niveles de entre 7 y 10 C y se deben hacer perforaciones mayores a las bolsas o quitar la bolsa, de manera de permitir el desarrollo de los carpforos. Una tcnica utilizada es sacar las bolsas del rea de colonizacin dejndolas al aire libre por toda una noche. Induccin a los troncos: en este caso el shock trmico (golpe de fro) que induce el desarrollo de los carpforos se realiza sumergiendo los troncos en agua fra (ver Figura 9). Las condiciones apropiadas son:

Para realizar la induccin a los troncos, se utiliza un recipiente (estanque, piscina o similar) lleno de agua potable y que sea fcil de limpiar, ya que una vez terminada la induccin se elimina el agua de ste y se desinfecta para una posterior utilizacin. Durante el perodo de induccin, los troncos deben permanecer totalmente sumergidos en el agua. Los mtodos de induccin presentados no son los nicos, sin embargo, son comnmente empleados por los fungicultores debido a su bajo costo y consumo energtico. Transcurrido este perodo de tiempo, el sustrato (troncos o bloques), es llevado a la zona del invernadero destinada a la etapa de fructificacin.

Fructificacin. En bloques o bolsas: durante el perodo de fructificacin, es recomendable utilizar un sistema que permita colgar las bolsas para el desarrollo ptimo de los carpforos. En troncos: una vez finalizado el perodo de induccin, los troncos son llevados a la sala de fructificacin. En esta etapa, son ordenados de forma vertical con una inclinacin aproximada de 50, tal como se muestra en la Figura 10. Se debe evitar el contacto con el suelo. Las condiciones ambientales en las cuales se desarrolla la etapa de fructificacin son muy similares para ambos tipos de cultivo (bloques o troncos) y son las siguientes: Temperatura: entre 18 y 25 C. Humedad relativa del ambiente: entre 80% y 90%. Aireacin: es necesario que las concentraciones de CO2 sean bajas. Esto se logra manteniendo una ventilacin constante con aire externo filtrado. En el caso del uso de bolsas, si stas no se quitaron en la etapa de colonizacin se deben hacer perforaciones mayores, o ser retiradas. Luminosidad: es recomendable emplear un fotoperodo inicial de 10 horas de luz y 14 de oscuridad. Una vez que han aparecido los primeros primordios se debe aumentar el perodo de luz a 12 horas. Se debe evitar la exposicin directa al sol. La presencia de primordios puede ocurrir al 3 da luego de la induccin en el caso del cultivo en bloques, mientras que en los troncos lo usual es que se evidencien a la semana siguiente de la induccin. Si se observa que los pies de los carpforos son excesivamente largos es un indicio de que la ventilacin o la luz son insuficientes. Cosecha y envasado. Si las condiciones ambientales se mantienen constantes en la etapa de fructificacin los primeros carpforos se cosechan alrededor de los 14 das post-induccin, tiempo equivalente para el cultivo en bloques o en troncos. Los criterios de cosecha van a depender del destino de la produccin. En general, los carpforos ms pequeos son apropiados para coctelera y los ms grandes para procesamiento (France, 2003). La cosecha se realiza empleando un cuchillo previamente desinfectado. El corte se realiza lo ms prximo posible a la superficie del sustrato. Desde un punto de vista comercial, las setas de Shiitake ptimas para ser cosechadas son aquellas que presentan un sombrero con una abertura de aproximadamente una pulgada (2,5 cm), antes de que se extienda por completo su borde. Las setas son envasadas en bandejas de poliestireno, cada una con aproximadamente 100 gramos (medida comercial), las que son selladas con plstico adherente y luego etiquetadas. Las bandejas deben ser inmediatamente refrigeradas (7 C), evitndose con ello la deshidratacin de las setas. Se debe tener cuidado de desinfectar los utensilios de cosecha y evitar una excesiva manipulacin de las setas. En imprescindible el uso de guantes y mascarillas y el material de embalaje debe almacenarse en un lugar limpio.

Induccin de una nueva oleada: en el caso del cultivo en troncos, finalizada la cosecha stos son llevados nuevamente al rea de colonizacin donde deben permanecer por un perodo aproximado de tres semanas, aunque este tiempo depende del tamao de la seta que se desee obtener en la nueva cosecha. Tiempos menores generarn carpforos de menor tamao y viceversa. Cumplido el perodo en colonizacin, se procede a una nueva induccin y cosecha de acuerdo a lo indicado previamente. En el caso de los cultivos realizados en bloques o bolsas, una vez finalizada la cosecha, las bolsas son llevadas al rea de colonizacin por un perodo aproximado de 1 semana y nuevamente inducidas, mediante un shock trmico, a la fructificacin. Enfermedades y plagas El Shiitake es un hongo relativamente resistente a las plagas si es inoculado adecuadamente. Las consideraciones principales para evitar las plagas son mantener una correcta densidad de inoculacin, prevenir que los troncos se resequen y evitar el contacto con el suelo. Un adecuado espaciamiento de los puntos de inoculacin y un eficiente sistema de llenado y sellado es esencial para que el micelio colonice ptimamente el tronco. Si las perforaciones o puntos de inoculacin estn demasiado distanciadas, o si la inoculacin se retrasa, existe una alta probabilidad de que otros hongos se establezcan, inhibiendo o disminuyendo el crecimiento de Shiitake en el tronco, con el consiguiente efecto sobre la productividad. Eventualmente, pueden llegar a producirse en un mismo tronco cuerpos fructferos de algn otro hongo superior que lo haya invadido previamente, situacin que debe ser evitada desde un comienzo, desechando aquellos troncos que presenten alguna evidencia de contaminacin, siendo su uso ms comn el empleo como combustible. Es usual que an en cultivos de Shiitake bien llevados aparezcan contaminaciones superficiales, principalmente de mohos, o procesos incipientes de contaminacin bacteriana de olor nauseabundo caracterstico. En estos casos, y a menos que la contaminacin sea extensiva, los troncos contaminados pueden ser recuperados limpindolos con algn desinfectante convencional, como: agua oxigenada, polividona yodada (povidona yodada), soluciones de cloro en baja concentracin (inferior al 10%), u otro antisptico de uso externo. Eventualmente, pueden utilizarse algunos fungicidas comerciales como el benomilo, aunque en este caso se recomienda que su manipulacin y aplicacin sea realizada por personas capacitadas a tal efecto, dadas sus caractersticas txicas. El modo de operar en estos casos es, en general, humedecer un algodn con el desinfectante y aplicarlo sobre la superficie contaminada de tal manera de quitar (raspar) el foco infeccioso. Adems de quitar los residuos usualmente coloreados propios de la contaminacin, la aplicacin del desinfectante debe ser abundante con el fin de lograr que ste penetre adecuadamente en la madera. Cuando las manifestaciones de la contaminacin se evidencian en las puntas de los troncos, puede resultar una buena medida cortar las puntas e inmediatamente aplicar en la nueva cara cantidades suficientes de desinfectante. En todo caso, la prevencin de cualquier tipo de contaminacin es fundamental, para lo cual deben

mantenerse las condiciones de higiene y asepsia en cada una de las etapas del proceso productivo de acuerdo a lo indicado en prrafos precedentes.