MICROBIOLOGA

I.

INTRODUCCION:
La Microbiologa se puede definir, sobre la base de su etimologa, como la ciencia que trata de los seres vivos muy pequeos, concretamente de aquellos cuyo tamao se encuentra por debajo del poder resolutivo del ojo humano. Esto hace que el objeto de esta disciplina venga determinado por la metodologa apropiada para poner en evidencia, y poder estudiar, a los microorganismos. Precisamente, el origen tardo de la Microbiologa con relacin a otras ciencias biolgicas, y el reconocimiento de las mltiples actividades desplegadas por los microorganismos, hay que atribuirlos a la carencia, durante mucho tiempo, de los instrumentos y tcnicas pertinentes. Con la invencin del microscopio en el siglo XVII comienza el lento despegue de una nueva rama del conocimiento, inexistente hasta entonces. Durante los siguientes 150 aos su progreso se limit casi a una mera descripcin de tipos morfolgicos microbianos, y a los primeros intentos taxonmicos, que buscaron su encuadramiento en el marco de los "sistemas naturales" de los Reinos Animal y Vegetal.

II.

DESARROLLO HISTRICO:

Tras la Edad de Oro de la Bacteriologa, inaugurada por las grandes figuras de Pasteur y Koch, la Microbiologa qued durante cierto tiempo como una disciplina descriptiva y aplicada, estrechamente imbricada con la Medicina, y con un desarrollo paralelo al de la Qumica, que le aportara varios avances metodolgicos fundamentales. Sin embargo, una corriente, en principio minoritaria, dedicada a los estudios bsicos centrados con ciertas bacterias del suelo poseedoras de capacidades metablicas especiales, incluyendo el descubrimiento de las que afectan a la nutricin de las plantas, logr hacer ver la ubicuidad ecolgica y la extrema diversidad fisiolgica de los microorganismos. De esta forma, se estableca una cabeza de puente entre la Microbiologa y otras ciencias biolgicas, que lleg a su momento decisivo cuando se comprob la unidad qumica de todo el mundo vivo, y se demostr, con material y tcnicas microbiolgicas que la molcula de la herencia era el ADN. Con ello se asiste a un ntimo y frtil intercambio entre la Microbiologa, la Gentica y la Bioqumica, que se plasma en el nacimiento de la Biologa Molecular, base del espectacular auge de la Biologa desde mediados de este siglo.

III. OBJETIVOS:
Conocer los objetos de estudio de la microbiologa, reconocer los principales aportes que contribuyeron al seguimiento de esta ciencia, obtener una visin general de la materia.

IV. LA MICROSCOPIA:
El microscopio fue inventado hacia los aos 1610, por Galileo segn los italianos, o por Zacharias Janssen en 1590, en opinin de los holandeses. En 1665 aparece en la obra de William Harvey sobre la circulacin sangunea al observar al microscopio los capilares sanguneos y Robert Hooke publica su obra Micrographia. Ya en el siglo XIV, con la invencin de las primeras lentes para corregir la visin, surgi una cierta curiosidad sobre su capacidad de aumentar el tamao aparente de los objetos. En el siglo XVI surgieron algunas ideas sobre aspectos de la fsica ptica de las lentes de aumento, pero no encontraron una aplicacin inmediata. Se dice que Galileo hizo algunas observaciones "microscpicas" Invirtiendo su telescopio a partir de lentes montadas en un tubo, pero en cualquier caso est claro que no tuvieron ninguna repercusin. El descubrimiento de los microorganismos fue obra de un comerciante holands de tejidos, Antonie van Leeuwenhoek (16321723), quien en su pasin por pulir y montar lentes casi esfricas sobre placas de oro, plata o cobre, casi lleg a descuidar sus negocios. Fabric unos cuatrocientos microscopios simples, con los que lleg a obtener aumentos de casi 300 dimetros. En 1675 descubri que en una gota de agua de estanque pululaba una asombrosa variedad de pequeas criaturas a las que denomin

"animlculos". En 1683 descubre las bacterias, por lo que se considera el "padre de la Microbiologa". Durante varias dcadas Leeuwenhoek fue comunicando sus descubrimientos a la Royal Society de Londres a travs de una serie de cartas que se difundieron, en traduccin inglesa, en las "PhilosophicalTransactions". Sus magnficas dotes de observador le llevaron asimismo a describir protozoos (como Giardia, que encontr en sus propias heces), la estructura estriada del msculo, la circulacin capilar, a descubrir los espermatozoides y los glbulos rojos (por lo que tambin se le considera el fundador de la Histologa animal), as como a detallar diversos aspectos estructurales de las semillas y embriones de plantas. Leeuwenhoek se percat de la abundancia y ubicuidad de sus animlculos, observndolos en vinagre, placa dental, etc.

V.

FERMENTACION:
Un segundo factor contribuyente al nacimiento de la ciencia microbiolgica fue el establecimiento de la relacin que une ciertas transformaciones qumicas que se dan en las infusiones con el crecimiento de los grmenes en ellas existentes. Cagniard-Latour en 1836, y Schwann y Ktzing en 1837 haban sugerido que las levaduras eran las causantes de la fermentacin alcohlica por la que el azcar pasa a alcohol etlico y dixido de carbono, pero se encontraron con la crtica adversa de los grandes qumicos de la poca (Berzelius, Wohler y Liebig). Liebig, hacia 1840, haba realizado importantes confirmaciones a la "teora mineral" sobre la nutricin de las plantas, enfrentndose a la "teora del humus" sostenida por Thaer, asestando un golpe a las ideas vitalistas heredadas de Leibniz. Puesto que se consideraba a las levaduras como plantas microscpicas, se supona que los procesos de

fermentacin y putrefaccin se deban a fenmenos qumicos de descomposicin y muerte encuadrables en el marco de la teora mineral de la fisiologa vegetal. Su convencimiento de que toda actividad vital se poda explicar en trminos de qumica y fsica retras por algn tiempo la adscripcin de estos fenmenos a clulas vivas. Los agentes de la fermentacin butrica, Pasteur descubri la presencia de microorganismos que se desarrollaban en ausencia de oxgeno, lo cual desmenta la creencia de que todas las formas de vida necesitan aire para crecer. Acu los trminos aerobiosis y anaerobiosis para denominar, respectivamente, a la vida en presencia y en ausencia de oxgeno. La anaerobiosis, el mismo Pasteur comprendi las distintas implicaciones energticas subyacentes a la utilizacin de sustratos orgnicos en presencia y en ausencia de oxgeno, demostrando que, en el segundo caso el rendimiento (medido como crecimiento microbiano) era siempre menor, al no poder realizarse la degradacin total de las correspondientes sustancias. Una profundizacin en los fenmenos de fermentacin lleg cuando en 1897 Buchner obtuvo, a partir de levaduras, una preparacin enzimtica (zimasa) que era capaz de realizar la misma transformacin de "fermentacin" que las clulas vivas. Este descubrimiento, que evocaba las propuestas de Berzelius y Liebig, supuso en realidad la confluencia de los enfoques qumico y biolgico: las fermentaciones eran procesos qumicos catalizados por enzimas presentes dentro de clulas vivas, que podan ser estudiados extracelularmente. De esta forma, la Bioqumica, nacida como una rama de la qumica fisiolgica, que se vena

especializando en la enzimologa, encontr una alianza fructfera y duradera con la joven Microbiologa.

VI. AVANCES TCNICOS:

La doctrina del pleomorfismo, vigente durante buena parte del siglo XIX, mantena que los microorganismos adoptaban formas y funciones cambiantes dependiendo de las condiciones ambientales. A estas ideas se oponan frontalmente investigadores como Koch, Pasteur y Cohn, que estaban convencidos de la especificidad y constancia morfolgica y fisiolgica de cada tipo de microorganismo (monomorfismo). El pleomorfismo haba surgido como una explicacin a la gran variedad de formas y actividades que aparecan en un simple frasco de infusin, pero ya Pasteur, en sus estudios sobre la fermentacin, se haba percatado de que los cultivos que aparecan podan considerarse como una sucesin de distintas poblaciones de microorganismos predominantes, que, a resultas de sus actividades, condicionaban la ulterior composicin de la comunidad microbiana. La solucin definitiva a esta cuestin dependa, de nuevo, de un desarrollo tcnico, que a su vez iba a suministrar una de las herramientas caractersticas de la nueva ciencia: los mtodos de cultivo puro. Los primeros cultivos puros fueron obtenidos por el miclogo Brefeld, quien logr aislar esporas de hongos y cultivarlas sobre medios slidos a base de gelatina. Por su menor tamao, este mtodo se haca inviable para las bacterias, por lo que se recurri a un mtodo basado en diluciones: Lister, en 1878 realiz diluciones secuenciales de cultivos mixtos, hasta lograr muestras en las que exista una sola clula. Pero la tcnica era larga y tediosa y, adems, normalmente slo se lograban aislar clulas del tipo bacteriano ms

abundante en el cultivo original; sin embargo, el experimento sirvi para confirmar la naturaleza "particulada" de los agentes de las fermentaciones. Por aquella poca Koch buscaba con ahnco mtodos ms sencillos de cultivo puro, indispensables para proseguir sus investigaciones sobre bacterias patgenas. Primero (y quiz de forma un tanto casual) emple rodajas de patata como sustrato slido nutritivo sobre el que se podan desarrollar colonias macroscpicas de bacterias que presentaban morfologa caracterstica, que Koch interpret como resultantes del crecimiento a partir de clulas individuales. Pero enseguida recurri a compactar el tpico caldo de cultivo a partir de carne (diseado por Loeffler) aadindole gelatina (1881). El medio slido as logrado era transparente, lo que permita visualizar fcilmente los rasgos coloniales, y contena los nutrientes adecuados para el crecimiento de una amplia gama de bacterias. stas eran inoculadas en la superficie del medio con un hilo de platino pasado previamente por la llama, por la tcnica de siembra en estra. Sin embargo, la gelatina presentaba los inconvenientes de ser atacada por determinados microorganismos, y de tener un bajo punto de fusin; ambos problemas se solventaron cuando en 1882 el mdico alemn Walter Hesse, siguiendo una sugerencia de su mujer Fanny, introdujo el agar-agar (polisacrido extrado de algas rojas) como nuevo agente solidificante. El trabajo de Koch ya citado tuvo la trascendental consecuencia de derribar las ideas pleomorfistas, y supuso la primera propuesta del concepto de especie dentro del mundo bacteriano. En 1887 Petri, un ayudante de Koch, sustituy las engorrosas bandejas de vidrio cubiertas con campanas, usadas hasta entonces para los cultivos slidos, por un sistema manejable de placas de cristal planas, que se conoce como cajas de Petri.

El desarrollo de los medios selectivos y de enriquecimiento fue una consecuencia de las investigaciones llevadas a cabo por Beijerinck y Winogradsky entre 1888 y los primeros aos del siglo XX, sobre bacterias implicadas en procesos biogeoqumicos y poseedoras de caractersticas fisiolgicas distintivas (quimioauttrofas, fijadoras de nitrgeno, etc.). Estos medios, donde se aplica a pequea escala el principio de seleccin natural, se disean de forma que su composicin qumica definida favorezca slo el crecimiento de ciertos tipos fisiolgicos de microorganismos, nicos capaces de usar ciertos nutrientes del medio. Otra importante aportacin a este "perodo de cultivo" dentro del desarrollo de la Microbiologa surgi del uso de medios diferenciales, en los que se manifiesta algn rasgo bioqumico o metablico, lo que contribuye a la identificacin microbiana. Fue Wrtz quien, en 1892, introdujo el uso de indicadores de pH, incorporados en los medios, lo cual permita revelar la produccin de acidificaciones por fermentacin en ciertas bacterias. Estas influencias recprocas se plasmaron en numerosos proyectos que reflejaban la efervescencia de las ciencias naturales tras la estela de Darwin (cfr. Jahn et al., 1985). Concretamente, la industria ptica de Abb y Zeiss, que se mantena en conexin con la compaa vidriera Schott, pudo satisfacer la necesidad de Koch de perfeccionar el microscopio compuesto, introduciendo lentes acromticas y una iluminacin inferior provista de condensador. El mismo Abbe desarroll en 1878 el objetivo de inmersin en aceite. Por otro lado, la industria qumica BASF, que por aquella poca se encontraba en pleno auge de patentes de nuevos colorantes, sumistr al laboratorio de Koch una serie de derivados de anilina que tean las bacterias permitiendo su fcil visualizacin al microscopio en frotis de tejidos infectados. En 1875 Carl Weigert ti bacterias con piro carmn, un colorante que ya vena siendo

usado desde haca unos aos en estudios zoolgicos. En aos sucesivos se fueron introduciendo el azul de metileno (Koch, 1877), la fuchsina, y el violeta cristal. En 1882-1883 Ziehl y Neelsen desarrollan su mtodo de cido-alcohol resistencia para teir Mycobacterium tuberculosis. En 1884 el patlogo dans Christian Gram establece una tincin de contraste que permite distinguir dos tipos bacterianos en funcin de sus reaccin diferencial de tincin y que, como se vera mucho ms tarde, reflejaba la existencia de dos grupos de bacterias con rasgos estructurales distintivos. En 1890 Loeffler logra visualizar flagelos bacterianos por medio de su tcnica de impregnacin argntica. Como veremos ms adelante, la misma industria de colorantes alemana previa a la primera guerra mundial fue decisiva tambin para los comienzos de la quimioterapia. Estas innovaciones tcnicas (mtodos de cultivo, microscopa y tinciones) fueron fundamentales (junto con los sistemas de esterilizacin abordados en el anterior apartado) para la consolidacin de la Microbiologa como ciencia, permitiendo eliminar las grandes dosis de especulacin que hasta entonces haban predominado.

VII. CONCEPTO DE INFECCIN:

Infeccin es un trmino clnico que indica la contaminacin, con respuesta inmunolgica y dao estructural de un hospedero, causada por un microorganismo patgeno, es decir, que existe invasin con lesin tisular por esos mismos grmenes (hongos, bacterias, protozoos, virus, priones), sus productos (toxinas) o ambos a la vez.1 2 Esta infeccin puede ser local o sistmica.

Los microbios, en particular las bacterias, fueron las primeras formas de vida y colonizan a la flora y fauna desde que estas se crearon. La evolucin ha resultado en una versatilidad metablica tan grande que las bacterias pueden sobrevivir a las condiciones ms adversas. Los microorganismos pueden tener vida libre, ocupar un ambiente sin relacin metablica con el anfitrin (inquilinismo), utilizar en ocasiones las fuentes energticas del hospedero (comensalismo y saprofitismo), asociarse con el anfitrin para obtener un beneficio mutuo (simbiosis) o depender totalmente del anfitrin causando enfermedad (parasitismo). Una infeccin activa es el efecto de una lucha en la cual el organismo infectante trata de utilizar los recursos del husped para multiplicarse, a costa del mismo. El estado de la infeccin es, de manera frecuente, simplemente cuestin de las circunstancias. Casi todo organismo, en las condiciones adecuadas, puede volverse patgeno y casi ningn organismo, si est presente en pequeas cantidades y en reas bien protegidas por el sistema inmunitario del husped, puede llevar a cabo una infeccin comprometedora. Una infeccin cruzada es la transmisin de agentes infecciosos entre los pacientes y el personal en un entorno clnico. La transmisin puede ser el resultado del contacto directo, persona a persona o indirecto mediante objetos contaminados que se denominan fomites. Las etapas de las infecciones lticas y lisognicas pueden ser distintas que las de otros virus cuando atacan clulas eucariotas. Pero la mayora de los animales muestran patrones de infeccin similares a la infeccin ltica o lisognica de bacterias. Infeccin Ltica: En una infeccin, un virus penetra en una clula, hace copias de s mismo y destruye la clula. Por

ejemplo el bacterifago T4 tiene un centro de ADN dentro de una intrincada cpside de protena que se activa al contacto con una clula husped. Luego inyecta su ADN directamente dentro de la clula husped, que ya no distingue entre su ADN y el ADN del virus. Por tanto comienza a producir ARN mensajero con los genes del virus. El mARN se convierte en protenas de virus que actan como una cuadrilla de demolicin molecular y despedazan el ADN de la clula infectada, que deja de funcionar. Luego, el virus toma el material de la clula husped para hacer miles de copias de su molcula de ADN, con el que se arman nuevas partculas virales. En poco tiempo, la clula infectada sufre lisis, es decir, se rompe, y libera cientos de partculas virales que pueden infectar otras clulas. Como la clula se rompe y se destruye, el proceso se llama infeccin ltica. Infeccin lisognica: En una infeccin lisognica, un virus integra su ADN en el ADN de la clula husped y la informacin gentica viral se duplica junto con el ADN de la clula husped. A diferencia de los virus lticos, los lisognico no destruyen de inmediato al husped, si no que permanecen inactivos por un periodo prolongado. El ADN viral incorporado en el ADN de la clula husped se llama prfago. El prfago puede formar parte del ADN de la husped durante varias generaciones antes de activare. Un virus quiz no permanezca indefinidamente en forma de prfago. Al final, los diversos factores pueden activar su ADN, que entonces se desprender del ADN de la clula husped y dirigir la sntesis de nuevas partculas virales.

VIII. LAS BACTERIAS:

Las bacterias son microorganismos unicelulares que presentan un tamao de unos pocos micrmetros (entre 0,5 y 5 m, por lo general) y diversas formas incluyendo esferas (cocos), barras (bacilos) y hlices (espirilos). Las bacterias son procariotas y, por lo tanto, a diferencia de las clulas eucariotas (de animales, plantas, hongos, etc.), no tienen el ncleo definido ni presentan, en general, orgnulos membranosos internos. Generalmente poseen una pared celular compuesta de peptidoglicano. Muchas bacterias disponen de flagelos o de otros sistemas de desplazamiento y son mviles. Del estudio de las bacterias se encarga la bacteriologa, una rama de la microbiologa. Estructura de la clula bacteriana: citoplasma, DNA cromosmico y extra cromosmico, membrana celular, pared bacteriana, pared de las bacterias gram positivas, pared de las bacterias gram negativas, cpsula y glicocliz, flagelos, pili o fmbrias. Antgenos bacterianos. Formas de resistencia: esporas. Morfologa y visualizacin de las bacterias. Metabolismo bacteriano y aspectos aplicados derivados de su estudio. Divisin bacteriana. Nutricin bacteriana. Medios de cultivo: descripcin, condiciones fsico-qumicas de los cultivos bacterianos, dinmica delcrecimiento bacteriano, utilizacin de los medios de cultivo. Taxonoma bacteriana. Identificacin de las bacterias.

1) Clasificacin de las bacterias: La identificacin de las bacterias es tanto ms precisa cuanto mayor es el nmero de criterios utilizados. Esta identificacin se realiza a base de modelos, agrupados en familias y especies en la clasificacin bacteriolgica. Las bacterias se renen en 11 rdenes:

- Las eubacteriales, esfricas o bacilares, que comprenden casi todas las bacterias patgenas y las formas fottrofas. - Las pseudomonadales, orden dividido en 10 familias entre las que cabe citar las Pseudomonae y las Spirillacae. - Las espiroquetales (treponemas, leptospiras). - Las actinomicetales (micobacterias, actinomicetes). - Las rickettsiales. - Las micoplasmales. - Las clamidobacteriales. - Las hifomicrobiales. - Las beggiatoales. - Las cariofanales. - Las mixobacteriales. 2) Relacin entre la bacteria y su husped: Ciertas bacterias viven independientes e otros seres vivos. Otras son parsitas. Pueden vivir en simbiosis con su husped ayudndose mutuamente o como comensales (sin beneficio). Pueden ser patgenas, es decir, vivir de su husped. La virulencia es la aptitud de un microorganismo para multiplicarse en los tejidos de su husped (creando en ellos alteraciones). Esta virulencia puede estar atenuada (base del principio de la vacunacin) o exaltada (paso de un sujeto a otro). La virulencia puede ser fijada por liofilizacin. Parece ser funcin del husped (terreno) y del entorno (condiciones climticas). La puerta de entrada de la infeccin tiene igualmente un papel considerable en la virulencia del germen. El poder patgeno es la capacidad de un germen de implantarse en un husped y de crear en l trastornos. Est ligada a dos causas:

- La produccin de lesiones en los tejidos mediante constituyentes de la bacteria, como pueden ser enzimas que ella excreta y que atacan tejidos vecinos o productos txicos provenientes del metabolismo bacteriano. - La produccin de toxinas. Se puede tratar de toxinas proteicas (exotoxinas excretadas por la bacteria, transportadas a travs de la sangre y que actan a distancia sobre rganos sensibles) o de toxinas glicoprotenas (endotoxinas), estas ltimas actuando nicamente en el momento de la destruccin de la bacteria y pudiendo ser responsables de choques infecciosos en el curso de septicemias provocadas por grmenes gramnegativos en el momento en que la toxina es brutalmente liberada. A estas agresiones microbianas, el organismo opone reacciones defensivas ligadas a procesos de inmunidad, mientras que el conflicto husped-bacteria se traduce por manifestaciones clnicas y biolgicas de la enfermedad infecciosa. 3) Importancia de las bacterias: Existen bacterias en todos los sitios. Hemos visto el inters de su estudio para la comprensin de la fisiolgica celular, de la sntesis de protenas y de la gentica. Aunque las bacterias patgenas parecen ser las ms preocupantes, su importancia en la naturaleza es ciertamente menor. El papel de las bacterias no patgenas es fundamental. Intervienen en el ciclo del nitrgeno y del carbono, as como en los metabolismos del azufre, del fsforo y del hierro. Las bacterias de los suelos y de las aguas son indispensables para el equilibrio biolgico.

Por ltimo, las bacterias pueden ser utilizadas en las industrias alimenticias y qumicas: intervienen en la sntesis de vitaminas y de antibiticos. Las bacterias tienen, por lo tanto, un papel fundamental en los fenmenos de la vida, y todas las reas de la biologa han podido ser mejor comprendidas gracias a su estudio.

IX. LOS HONGOS:

Concepto: Los hongos son un reino de seres vivos unicelulares o pluricelulares que no forman tejidos y cuyas clulas se agrupan formando un cuerpo filamentoso muy ramificado.Los hongos tienen alimentacin hetertrofa, puesto que no pueden realizar la fotosntesis porque no tienen clorofila. Tienen digestin externa, pues vierten al exterior enzimas digestivas, sustancias proteicas que actan sobre los alimentos dividindolos en molculas sencillas, que atacan a los alimentos. Los hongos absorben los alimentos despus de digerirlos. Los hongos se presentan bajo dos formas principales: hongos filamentosos (antiguamente llamados "mohos") y hongos levaduriformes. El cuerpo de un hongo filamentoso tiene dos porciones, una reproductiva y otra vegetativa. La parte vegetativa, que es haploide y generalmente no presenta coloracin, est compuesta por filamentos llamados hifas (usualmente microscpicas); un conjunto de hifas conforma el micelio (usualmente visible). A menudo las hifas estn divididas por tabiques llamados septos.

 Reproduccin: Los hongos se reproducen sobre todo por medio de esporas, las cuales se dispersan en un estado latente, que se interrumpe slo cuando se hallan condiciones favorables para su germinacin. Cuando estas condiciones se dan, la espora germina, surgiendo de ella una primera hifa, por cuya extensin y ramificacin se va constituyendo un micelio. La velocidad de crecimiento de las hifas de un hongo es verdaderamente espectacular: en un hongo tropical llega hasta los 5 mm por minuto. Se puede decir, sin exagerar, que algunos hongos se pueden ver crecer bajo los propios ojos. Las esporas de los hongos se producen en esporangios, ya sea asexualmente o como resultado de un proceso de reproduccin sexual. En este ltimo caso la produccin de esporas es precedida por la meiosis de las clulas, de la cual se originan las esporas mismas. Las esporas producidas a continuacin de la meiosis se denominan meiosporas. Como la misma especie del hongo es capaz de reproducirse tanto asexual como sexualmente, las meiosporas tienen una capacidad de resistencia que les permite sobrevivir en las condiciones ms adversas, mientras que las esporas producidas asexualmente cumplen sobre todo con el objetivo de propagar el hongo con la mxima rapidez y extensin posible. El micelio vegetativo de los hongos, o sea el que no cumple con las funciones reproductivas, tiene un aspecto muy simple, porque no es ms que un conjunto de hifas dispuestas sin orden. La fantasa creativa de los hongos se manifiesta slo en la construccin de cuerpos fructferos, los cuales, como indica el nombre, sirven para portar los esporangios que producen las esporas.

 Clasificacin clsica de los hongos: - Hongos ameboides o mucilaginosos Mixomicotes (divisin Myxomycota) Plasmodioforomicotes (divisin Plasmodiophoromycota) - Hongos lisotrficos o absorbotrficos: Pseudohongos u eumicotes (divisin Oomycota) Quitridios (divisin Chytridiomycota) Hongos verdaderos o eumicotes (divisin Eumycota): Zigomicetes (clase Zygomycetes) Ascomicetes (clase Ascomycetes) - Hongos imperfectos (clase Deuteromycetes) Basidiomicetes (clase Basidiomycetes) Clasificacin actual de los hongos: Quitridiomicetes (divisin Chytridiomycota). Zigomicetos (divisin Zygomycota). Glomeromicetes (divisin Glomeromycota). Basidiomicetes (divisin Basidiomycota). Ascomicetes (divisin Ascomycota). Los hongos como parsitos: - Enfermedades humanas: Los hongos parsitos tambin infectan al ser humano. Un deuteromiceto puede infectar el rea de entre los dedos de los pies y causar la infeccin conocida como pie de atleta. Los hongos forman un micelio directamente en las capas exteriores de la piel. Esto produce una llaga inflamada desde la que las esporas pasan fcilmente a otras personas. Cuando los hongos infectan otras reas, como el cuero cabelludo, producen una llaga escamosa roja llamada tia. El microorganismo

Candida albicans, una levadura, puede trastornar el equilibrio interno del cuerpo humano y producir enfermedad mictica. Crece en regiones hmedas del cuerpo, sin embargo, el sistema inmunolgico y otras bacterias competidoras normalmente la controlan.

X.

LOS VIRUS:
Los virus son organismos parsitos que infectan clulas y producen viriones para difundir sus genes. La mayora de las protenas virales no tienen homlogos en las clulas modernas, en contradiccin con la visin tradicional de los virus como los ladrones de genes celulares. Esto sugiere que los genes virales bsicamente tienen su origen durante la replicacin de los genomas virales y/o fueron reclutados de linajes celulares ahora extintos. Algunas protenas virales especficas estn presentes en virus que infectan a los miembros de los tres dominios de la vida, lo que sugiere que los virus son en realidad muy antiguos. En particular, los anlisis estructurales de protenas de la cpside han revelado que al menos dos tipos de viriones se originaron de manera independiente antes que LUCA (el ltimo antepasado universal celular). Aunque varias hiptesis han sido recientemente propuestas para explicar el origen de los virus, la aparicin de viriones, como un mecanismo especfico para la difusin de genes, permanece sin explicacin. Propiedades de vida: Existen opiniones dispares sobre si los virus son una forma de vida o estructuras orgnicas que interactan con los seres vivos. Por ello algunos autores se refieren a ellos como organismos al lmite de la vida. Por una parte se asemejan a los organismos que tienen genes y evolucionan por seleccin natural, y se reproducen creando mltiples copias de s mismos para auto ensamblarse. Sin embargo, carecen

de estructura celular, lo cual es considerado la unidad bsica de la vida. Adems, los virus no tienen un metabolismo propio, y necesitan una clula hospedadora para crear nuevos productos. Por tanto, no se pueden reproducir en el exterior de una clula husped (aunque bacterias como Rickettsia y Chlamydia son considerados organismos vivos a pesar de tener la misma limitacin). Las formas de vida aceptadas utilizan la divisin celular para reproducirse, mientras que los virus aparecen de forma sbita y en gran cantidad dentro de las clulas, lo que es anlogo al crecimiento autnomo de los cristales. El auto ensamblaje de los virus dentro de las clulas tiene implicaciones para el estudio del origen de la vida, pues refuerza las hiptesis de que la vida podra haber comenzado en forma de molculas orgnicas auto ensamblantes. Estructura: Los virus presentan una amplia diversidad de formas y tamaos, llamada morfologas. Son unas 100 veces ms pequeos que las bacterias. La mayora de los virus estudiados tienen un dimetro de entre 10 y 300 nanmetros. Algunos Filovirus tienen un tamao total de hasta 1.400 nm, sin embargo, slo miden unos 80 nm de dimetro.La mayora de virus no pueden ser observados con un microscopio ptico, de manera que se utilizan microscopios electrnicos de barrido y de transmisin para visualizar partculas vricas. Para aumentar el contraste entre los virus y el trasfondo se utilizan tinciones densas en electrones. Son soluciones de sales de metales pesados como wolframio, que dispersan electrones en las regiones cubiertas por la tincin. Cuando las partculas vricas estn cubiertas por la tincin (tincin positiva), oscurecen los detalles finos.

La tincin negativa evita este problema, tiendo nicamente el trasfondo. Una partcula vrica completa, conocida como virin, consiste en un cido nucleico rodeado por una capa de proteccin proteica llamada cpside. Las cpsides estn compuestas de subunidades proteicas idnticas llamadas capsmeros. Los virus tienen un envoltorio lipdico derivado de la membrana celular del husped. La cpside est formada por protenas codificadas por el genoma vrico, y su forma es la base de la distincin morfolgica. Las subunidades proteicas codificadas por los virus se auto ensamblan para formar una cpside, generalmente necesitando la presencia del genoma viral. Sin embargo, los virus complejos codifican protenas que contribuyen a la construccin de su cpside. Las protenas asociadas con los cidos nucleicos son conocidas como nucleoprotenas, y la asociacin de protenas de la cpside vrica con cidos nucleicos vricos recibe el nombre de ncleo cpside. En general, hay cuatro tipos principales de morfologa vrica: - Helicoidal:las cpsides helicoidales se componen de un nico tipo de capsmero apilado alrededor de un eje central para formar una estructura helicoidal que puede tener una cavidad central o un tubo hueco. Esta formacin produce viriones en forma de barra o de hilo, pueden ser cortos y muy rgidos, o largos y muy flexibles. El material gentico, normalmente ARN monocatenario, pero a veces ADN monocatenario, queda unido a la hlice proteica por interacciones entre el cido nucleico con carga negativa y la carga positiva de las protenas. En general, la longitud de una cpside helicoidal est en relacin con la longitud del cido nucleico que contiene, y el dimetro depende del tamao y la distribucin de los capsmeros. El

conocido virus del mosaico del tabaco es un ejemplo de virus helicoidal. - Icosadrica:la mayora de virus que infectan los animales son icosadricos o casi-esfricos con simetra icosadrica. Un icosaedro regular es la mejor manera de formar una carcasa cerrada a partir de subunidades idnticas. El nmero mnimo requerido de capsmeros idnticos es doce, cada uno compuesto de cinco subunidades idnticas. Muchos virus, como los rotavirus, tienen ms de doce capsmeros y parecen esfricos, manteniendo esta simetra. Los pices de los capsmeros estn rodeados por otros cinco capsmeros y reciben el nombre de pentones. Las caras triangulares de stos tambin se componen de otros seis capsmeros y reciben el nombre de hexones. Ciclo de los virus: - La adhesin o adsorcin es una unin especfica entre protenas de la cpside vrica y receptores especficos de la superficie celular del husped, pero algunos bacterifagos tambin son capaces de adherirse a los flagelos, vellosidades (pili) o cpsulas presentes en la superficie de la bacteria hospedera. Para que esto suceda la bacteria debe contener el factor sexual "F" o ciertas colicinas (factores de resistencia contra agentes antimicrobianos). Los bacterifagos filamentosos con ADN de cadena sencilla se adhieren a las puntas de estos pili mientras que los bacterifagos esfricos de ARN se adhieren a los costados de stos. La especificidad de unin protena y cpside se determina por la variedad de huspedes de los virus. Por ejemplo, el VIH slo infecta linfocitos T humanos, pues su protena de superficie, gp120, puede interactuar con la CD4 y con receptores de

la superficie del linfocito T. Este mecanismo ha evolucionado para favorecer los virus que slo pueden infectar clulas en que se pueden replicar. La adhesin al receptor que puede inducir cambios en la protena de la envoltura viral que resultan en la fusin de las membranas viral y celular. - La penetracin sigue a la adhesin; los virus se introducen en la clula husped mediante endocitosis mediada por receptores o por fusin de membrana. Esto recibe a menudo el nombre de penetracin vrica. La infeccin de las clulas vegetales es diferente a la de las clulas animales. Las plantas tienen una pared celular rgida hecha de celulosa y los virus slo pueden entrar en las clulas cuando se produce un trauma en la pared celular. Los virus como el virus del mosaico del tabaco tambin pueden moverse directamente a las plantas, entre clulas, a travs de poros llamados plasmodesmos. Las bacterias, como las de las plantas, tienen una fuerte pared celular que los virus tienen que romper para infectar la clula. Algunos virus han evolucionado mecanismos para inyectar su genoma a la clula bacteriana mientras la cpside viral permanece en el exterior. - El despojo es el proceso en que la cpside vrica es degradada por enzimas virales o del husped, liberando as el cido nucleico del genoma vrico. - La replicacin implica la sntesis de ARN mensajero (ARNm) vrico en todos los virus con rasgos de ARN positivos, la sntesis de protenas vricas, el ensamblaje de protenas vricas y la replicacin del genoma viral. El proceso de replicacin es esencial para mantener la estabilidad de la informacin gentica contenida en el ADN. Esta replicacin utiliza enzimas idnticas a las involucradas en la replicacin del ADN celular y una

caracterstica comn es la presencia de estructuras circulares temporales por lo menos en algunas de dicho proceso. - Tras el ensamblaje de partculas vricas, a menudo se produce una modificacin postraduccional de las protenas vricas. En virus como el VIH, esta modificacin (a veces llamada maduracin), se produce despus de que el virus haya sido liberado de la clula husped. El ensamblaje puede producir nuevas partculas virales. Los virus pueden auto ensamblarse en un proceso similar a la cristalizacin, ya que las partculas virales, al igual que los cristales, constituyen estructuras que se encuentran en un estado mnimo de energa libre. Sin embargo, el genoma viral tambin puede especificar ciertos factores "morfo genticos" que no contribuyen directamente a formar la estructura del virin, pero son necesarios para el proceso de ensamblaje. El fenmeno de auto ensamblaje ocurre en la formacin de diversas estructuras biolgicas. - Los virus son liberados de la clula husped por lisisun proceso que mata la clula reventando su membrana. Los virus envueltos (como el VIH) son liberados de la clula husped por gemacin. Durante este proceso, el virus adquiere su envoltura, que es una parte modificada de la membrana plasmtica del husped. Tipos de virus: - Virus ADN: la replicacin del genoma de la mayora de virus ADN se produce en el ncleo de la clula. Si la clula tiene el receptor adecuado a la superficie, estos virus entran por fusin con la membrana celular o por endocitosis. La mayora de virus ADN son completamente dependientes de la maquinaria de sntesis de ADN y ARN

de la clula husped, y su maquinaria de procesamiento de ARN. El genoma vrico debe atravesar la membrana nuclear de la clula para acceder a esta maquinaria. - Virus ARN: los virus ARN son nicos porque su informacin gentica est codificada en ARN; esto quiere decir que usan el cido ribonucleico (ARN) como material gentico, o bien que en su proceso de replicacin necesita el ARN. La replicacin se suele producir en el citoplasma. Los virus ARN se pueden clasificar en unos cuatro grupos segn su modo de replicacin. La polaridad del ARN (si puede ser utilizado directamente o no para producir protenas) determina en gran medida el mecanismo de replicacin, y si el material gentico es monocatenario o bicatenario. Los virus ARN utilizan sus propias ARN replicases para crear copias de su genoma.

XI. LOS PARSITOS: PROTOZOOS Y HELMINTOS:

Que son los parsitos? Bajo la denominacin de parsitos se incluyen protozoos y helmintos. La mayora de ellos son microorganismos de vida libre, sin embargo, las especies que con mayor frecuencia resultan patgenas para el hombre son parsitos obligados y dependen de huspedes vertebrados y/o artrpodos para su supervivencia. Transmisin: los mecanismos de transmisin varan dependiendo del tipo de parsito de que se trate, podemos decir que los principales mecanismos se establecen a travs de la va fecal-oral, por transmisin sexual y mediante la picadura de un artrpodo vector.

 Protozoos: los protozoos son microorganismos simples, con estructura eucaritica, en los que todas sus funciones vitales ocurren en una sla clula. Su tamao es variable, pudiendo oscilar entre 2 y 100 m y presentar una gran variedad de formas. Muchos protozoos parsitos se transforman en un quiste, rodeado por una pared celular externa gruesa capaz de proteger al microorganismo frente a agresiones fsicas y qumicas potencialmente letales. El quiste representa la fase infectante de casi todos los protozoos y facilita la transmisin de un husped a otro. Se dividen en cuatro clases: flagelados (Tripanosoma, Tricomonas, Leishmania), amebas, esporozoos (Plasmodium, Toxoplasma) y ciliados (Balantidiumcoli).

API 20E
(Sistemas de identificacin multipruebas)
El sistema API se utiliza para la identificacin bacteriana, con una serie de pequeos depsitos denominados microtubulos y que contienen los sustratos deshidratados para diversas pruebas, los cuales se reconstituyen con la suspensin bacteriana a probar. Despus de la incubacin las reacciones se leen ya sea por el color o bien despus de agregar reactivos para la revelacin. (1)

Se tom dos colonias de salmonella typhimurim en solucin salina.

y se re suspendieron

La batera de pruebas API20E es un sistema de identificacin rpida para bacterias de la familia Enterobacteriaceae y otras bacterias Gram . Bsicamente consta de 21 test bioqumicos estandarizados y miniaturizados, y una base de datos. Este sistema presenta las ventajas de ser rpido, eficaz y de permitir realizar numerosas pruebas a la vez.

Cada tira de API 20E contiene 20 microtubos o pocillos con distintos sustratos deshidratados. Cada tubo es una prueba bioqumica distinta. La prueba nmero 21, la oxidasa, se hace de forma independiente a la tira.

Las pruebas de que consta la galeria son las siguientes: Prueba ONPG ADH LDC ODC CIT H2S URE TDA IND VP GEL GLU MAN INO SOR RHA SAC MEL AMY Reaccin / Enzimas Beta-galactosidasa Arginina deshidrolasa Lisina descarboxilasa Ornitina descarboxilasa Utilizacin del citrato Produccin de H 2 S Ureasa Triptfano desaminasa Produccin de indol Produccin de acetona (Voges-Proskauer) Gelatinasa Fermentacin/oxidacin de glucosa Fermentacin/oxidacin de manitol Fermentacin/oxidacin de inositol Fermentacin/oxidacin de sorbitol Fermentacin/oxidacin de ramnosa Fermentacin/oxidacin de sacarosa Fermentacin/oxidacin de melobiosa Fermentacin/oxidacin de amigdalina

ARA OX

Fermentacin/oxidacin de arabinosa Citocromo oxidasa

A.

A patir de una colonia bien aislada del microorganismo, hacer una suspensin en 5 mL de solucin salina (1% de NaCl) o 5 mL de agua estril.

B. Llenar con la suspensin de bacterias los tubos, no la cpula (cada pocillo tiene un tubo y una cpula, parte aerobia), de todos los pocillos.

C.

Llenar la cpula de los pocillos CIT , VP, GEL con la suspensin de bacterias.

D. Cubrir con parafina las cpulas de los pocillos ADH, LDC, ODC, URE, H2S para obtener anaerobiosis.

E. Poner la tira en su propia cmara hmeda de incubacin. Previamente poner agua en los alvolos de la cmara para proporcionar una atmsfera hmeda durante la incubacin.

F. Incubar a 37 C durante 18-24 h.

Tras la incubacin se anotan los resultados inmediatos, es decir, los que no requieren ser revelados.

Determinadas pruebas requieren ser reveladas, para el revelado se tienen que tener en cuenta dos criterios:

Si la glucosa da negativo y los test positivos son dos o menos de dos, no hay que aadir reactivos. Cuando sto ocurre se hacen otros tipos de API como el API 20NE, API OF, el API M o el API 10S para ver determinados metabolismos especiales.

Si la glucosa es positiva y/o tres o ms test son positivos se revelan los test que requieren reactivos:

TDA Aadir una gota de FeCl3 10 %. VP Aadir una gota del reactivo 1 (KOH al 40%) y una gota del reactivo 2 (C2 H5 OH). IND Aadir una gota de reactivo de Kovacs o de Dimetilamino - cinamaldehido. Oxidasa Aadir una gota del reactivo (tetrafenilendiamina) recin preparado.

INTERPRETACIN

La lectura de los resultados se lleva a cabo por comparacin de los colores de cada pocillo con los de las tablas de lectura, y anotando el resultado como positivo o negativo (ms adelante se explicar con detalle).

Prueba Reaccin / Enzimas ONPG Beta-galactosidasa ADH LDC ODC CIT Arginina deshidrolasa Lisina descarboxilasa Ornitina descarboxilasa Utilizacin del citrato

Negativo sin color amarillo amarillo amarillo verde sin precipitado

Positivo amarillo rojo o naranja rojo o naranja rojo o naranja azul oscuro o

turquesa precipitado negro rojo o naranja marrn-rojo color rosa o anillo rosa-rojo rosa-rojo difusin de pigmento amarillo amarillo

H2S URE TDA IND

Produccin de H 2 S Ureasa Triptfano desaminasa Produccin de indol Produccin de acetona (VogesProskauer) Gelatinasa

negro amarillo amarillo amarillo

VP GEL GLU MAN

sin color sin difusin

Fermentacin/oxidacin de glucosa azul o verde Fermentacin/oxidacin de manitol azul o verde

INO SOR RHA

Fermentacin/oxidacin de inositol azul o verde Fermentacin/oxidacin de sorbitol azul o verde Fermentacin/oxidacin ramnosa Fermentacin/oxidacin sacarosa Fermentacin/oxidacin melobiosa Fermentacin/oxidacin amigdalina Fermentacin/oxidacin arabinosa Citocromo oxidasa de de de de de azul o verde

amarillo amarillo amarillo

SAC

azul o verde

amarillo

MEL

azul o verde

amarillo

AMY

azul o verde

amarillo

ARA OX

azul o verde

amarillo

Del conjunto de reacciones y resultados se obtiene un perfil numrico de 7 cifras. Los pocillos estn separados en grupos de tres: en total tenemos 7 grupos de tres tubos o tripletes (el test nmero 21 corresponde al test de la oxidasa).

Para obtener el perfil numrico de 7 cifras, a cada pocillo se le dar el valor 0, 1, 2 4, de acuerdo a los siguientes criterios:

Si la reaccin es negativa se pone 0. Si la reaccin es positiva se pone: 1 si es el primer pocillo de un triplete, 2 si es el segundo, 4 si es el tercero.

Se suman los valores de cada triplete, con las sumas de los siete tripletes se obtiene un cdigo de 7 cifras.

Con este cdigo se busca en la tabla de identificacin la especie de que se trata, para realizar esta operacin hay programas informticos. Perfiles numricos. Shigella flexneri Salmonella paratyphi A Pasteurella multocida Yersinia enterocolitica

0104140 0104452 0104504 0104521

0140004 0144042 0206042 0210004 0210004 0210004 0314000 0504512 0676001 0776000 1000004 1014743 1104112 1214012 1214773 2206004 2504752 3005573 3246527 4004550 4004550 4104100 4357106 4404112 4404510 4404540 4504010 4604552 4704500 5004024 5044124

Pasteurella multocida Shigella boydii Acinetobacter calcoaceticus Achromobacter sp. Alcaligenes faecalis Alcaligenes sp. Proteus mirabilis Salmonella paratyphi A Proteus vulgaris Proteus mirabilis Pasteurella sp. Klebsiella ozaenae Shigella sonnei Yersinia pseudotuberculosis Klebsiella pneumoniae Pseudomonas aeruginosa Salmonella spp. Enterobacter cloacae Aeromonas hydrophilia Salmonella cholerasuis Salmonella typhi Salmonella gallinarun Vibrio parahemolyticus Salmonella gallinarum Salmonella cholerasuis Salmonella tiphy Salmonella pullorum Salmonella spp. Salmonella cholerasuis Pseudomonas cepacea Vibrio cholerae

5046753 5100100 5104111 5104542 5144572 5207323 5255573 5346761 5314173 5317761 5704412 5704552 6004540 6144204 6404112 6504750 6604512 6704342 6704532 6704752 7244126 7305773 7704752 7704752

Serratia odorifera Yersinia ruckeri Hafnia alvei Salmonella arizonae Escherichia coli Serratia rubidae Klebsiella oxytoca Serratia marcescens Enterobacter gergoviae Serratia marcescens Salmonella arizonae Salmonella arizonae Salmonella typhi Plesiomonas shigelloides Salmonella spp. Salmonella spp. Salmonella spp. Salmonella spp. Salmonella spp Salmonella gallinarum Aeromonas hydrophila Enterobacter cloacae Salmonella arizonae Salmonella spp.

VITEK 2- COMPACT

Este sistema ofrece la identificacin rpida, precisa microbiana y pruebas de susceptibilidad a los antibiticos para una amplia gama de organismos a partir de fuentes ambientales o productos finales. La plataforma automatizada proporciona resultados rpidos, con mayor seguridad de la operacin, mientras que la eliminacin de las operaciones manuales repetitivas. El tiempo de respuesta rpida ofrece resultados ms rpidamente que con las tcnicas manuales. La tecnologa exclusiva cuenta con software fcil de usar e intuitiva, en lnea de software resultado de la validacin, innovador formato de tarjeta y una base de datos de identificacin general. Ideal para las bacterias y la levadura de identificacin y seguimiento, las pruebas de susceptibilidad a los antibiticos y la elaboracin de informes y pruebas de control de calidad. Adecuado para productos bio farmacuticos, banco de sangre, cosmticos, nutracuticos y aplicaciones de anlisis de agua. La avanzada tecnologa de identificacin Colorimetra permite la identificacin de aislamientos ambientales de rutina. El uso de los resultados de longitudes de onda adicionales en un aumento del nmero de sustratos existentes y nuevos. Proporciona la discriminacin entre las especies de alta, baja tasa de opcin

mltiple y de las especies mal identificado, y el nmero mnimo de pruebas off-line. La base de conocimientos se desarroll a partir de 100.000 referencias y> 2.000 fenotipos descritos. El sistema permite la trazabilidad con el enlace electrnico de la identificacin de la muestra de prueba de las tarjetas con cdigo de barras. Todas las discrepancias son inmediatamente observadas y anulado. Todas las operaciones de los usuarios se registran automticamente en el registro de auditora. Tarjetas de prueba se pueden aadir en lotes mixtos de tipos de tarjetas de producto o como unidades individuales. Hasta dos unidades se pueden conectar a un sistema operativo. Tarjetas de prueba se procesan para proporcionar la seguridad del usuario con un mnimo de residuos biolgicos peligrosos. La tarjeta de prueba se llena automticamente, sellado, leer, y dispuestos en un contenedor de residuos finales.