Biorremediación

Lus Adn Rosales M.
Maestra en Ciencias en Gestin Ambiental
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I. INTRODUCCION Uno de los problemas en el contexto ambiental lo representan los residuos peligrosos que aproximadamente el 54% corresponde a derivados del petrleo. Actualmente las actividades desarrolladas para el manejo y control de residuos peligrosos son: confinamiento, reciclaje, tratamiento fsico, qumico y biolgico. En Mxico solo se realizan actividades de confinamiento y reciclaje de residuos. La reglamentacin nacional considera a los aceites usados como residuos peligrosos, debido a su contenido de hidrocarburos aromticos, de metales pesados y de otros compuestos que impactan al ambiente. Comienzo de los aos ochentas, se empez a actuar sobre los espacios contaminados el mtodo sola consistir en retirar los residuos y/o suelo contaminado a un vertedero o cubrirlos con una capa impermeable (confinamiento). Hoy se plantea la necesidad de desarrollar alternativas para solucionar de forma permanente y menos costosa el problema de los espacios contaminados (Moreno, 2004) En los ltimos aos, la mayor parte de los estudios publicados se han referido al tratamiento de espacios contaminados por compuestos derivados del petrleo, utilizando con xito la biorremediacin. Esta se basa en la accin de microorganismos sobre los agentes contaminantes. Estos procesos tienen las ventajas de requerir inversiones de capital moderado, bajo consumo de energa y ambientalmente seguros. El hongo de la pudricin blanca Pleurotus ostreatus constituye una alternativa biolgica para el tratamiento de reas contaminadas, ya que posee enzimas ligninolticas extracelulares como laccasa, lignino peroxidasa y peroxidasa dependiente del manganeso. En la naturaleza, estas enzimas degradan la lignina, y debido a su baja especificidad tales enzimas ligninolticas pueden actuar sobre molculas estructuralmente similares a la lignina, incluyendo compuestos
Lus Adn Rosales M. Maestra en Ciencias en Gestin Ambiental
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orgnicos halogenados e hidrocarburos aromticos policclicos. Adems de bioacumular diferentes metales pesados en su pared celular dada la accin adsorbente de los polisacridos que la conforman. Debido a ello, el presente trabajo prob el potencial de la cepa de P. ostreatus B4 M1 DNA de crecer en suelo contaminados con AAU, degradar benzo(a)pireno y remover Pb y Zn en estos suelos. Como una alternativa de biorremediacion o mejor dicho de micorremediacion de suelos contaminados con aceites automotrices usados u otros hidrocarburos
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II. ANTECEDENTES 2. Hidrocarburos Los hidrocarburos son compuestos formados por tomos de carbono e hidrgeno, de gran abundancia en la naturaleza, presentes principalmente en el petrleo (Crispin, 1988 y PEMEX, 1998). El numero de carbonos y su estructura qumica determina su clasificacin. Los hidrocarburos alifticos son de cadena lineal o ramificada y pueden ser saturados (alcanos) o insaturados (alquenos y alquinos). Los hidrocarburos de cadenas cclicas, pueden ser saturados (ciclo alcanos) o con uno o mas anillos bencnicos (aromticos) (Morrison y Boyd 1985). 2.1. Hidrocarburos Biognicos Estos son sintetizados por casi todas las plantas, animales terrestres y marinos, incluyendo la micro biota, bacterias, plancton marino, diatomeas, algas y plantas superiores (Bedair & Al-Saad, 1992). La sntesis de este tipo de hidrocarburos est controlada por rutas metablicas, lo cual trae como resultado mezclas de compuestos de limitada complejidad estructural relacionada directamente con la funcin biolgica especfica. 2.2. Hidrocarburos Antrpicos Son aquellos introducidos como resultado de cualquier tipo de actividad humana. Los procesos de combustin industrial contribuyen con niveles altos, debido al humo generado por carbn, combustibles fsiles y petrleo refinado, las descargas de aguas municipales, las actividades de transporte y los derrames son algunas de las principales fuentes de estos contaminantes (Bidleman et al., 1990). 2.3. Aceites Lubricantes Los aceites lubricantes estn constituidos por una base lubricante y una serie de aditivos. Dependiendo del uso del aceite, la base lubricante ser mineral
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(proveniente del petrleo crudo), sinttica o vegetal, siendo el uso mayoritario las bases lubricantes minerales. El aceite lubricante para motores tiene como funcin primordial evitar el contacto directo entre superficies con movimiento relativo, reduciendo as la friccin, calor excesivo, desgaste, ruido, golpes, vibracin, etc. Bsicamente son una mezcla de hidrocarburos parafnicos, naftenicos y aromticos obtenidos por destilacin de crudos petrolferos (aceites minerales) o por sntesis a partir de productos petroqumicos (aceites sintticos). La variacin en la proporcin de los diferentes tipos de hidrocarburos en la mezcla determina las caractersticas fsicas y qumicas de los aceites. Una alta fraccin de hidrocarburos parafnicos confiere al aceite una mayor resistencia a la oxidacin, mientras que un alto contenido de hidrocarburos aromticos favorece la estabilidad trmica. Para mejorar las caractersticas del aceite es comn aadir aditivos (Tabla 1), en proporciones de un 15 y un 25% en volumen de producto terminado estos son de distinta naturaleza y confieren al aceite propiedades especficas (Ruiz., 1991).
Tabla 1. Valores tpicos de composicin de los aceites minerales, indicando la funcin de los diferentes aditivos (Ruiz., 1991). Composicin media de un aceite lubricante Hidrocarburos totales (85 75%) Alcanos Ciclo alcanos Aromticos Aditivos (15 - 25%) Antioxidantes Detergentes Anticorrosivos Antiespumantes Ditiofosfatos, fenoles, aminas Sulfonatos, felonatos, fosfonatos Ditiofosfatos de zinc y bario, sulfonatos Siliconas, polmetros sintticos 45 - 76% 13 - 45% 10 - 30%
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2.3.1. Aceites usados Los aceites lubricantes son productos de uso masivo, siendo consumidos por el sector industrial, empresas de servicios, y transporte. Los puntos de generacin, as como los actores involucrados son muy diversos, destacndose en orden de relevancia por el volumen de generacin las estaciones de servicio y talleres de mantenimiento de vehculos y plantas industriales. En el caso de los vehculos se estima una vida til del aceite lubricante equivalente a los 5000 Km, mientras que en los usos industriales depende del uso especfico. El parque automotriz mundial genera alrededor del 65% del total de aceite usado generado, mientras que el restante 35% es de origen industrial (U.S. EPA 1991). La denominacin aceite usado comprende a los aceites de origen mineral, que durante el uso perdieron sus propiedades caractersticas, volvindose inapropiados para continuar su utilizacin con el mismo propsito. Comprenden a los aceites lubricantes de motores (de vehculos y mquinas industriales), los fluidos hidrulicos y de transmisin. Despus de su uso, el aceite lubricante adquiere concentraciones elevadas de metales pesados producto principalmente del desgaste del motor o maquinara que lubric y por contacto con combustibles. Adems, se encuentran con frecuencia solventes clorados en los aceites usados, provenientes principalmente por contaminacin durante su uso (reaccin del aceite con compuestos halogenados de los aditivos). La presencia de hidrocarburos aromticos, solventes clorados, junto con altas concentraciones de algunos metales pesados constituyen la principal preocupacin de los aceite usados (Benavente, G. 1999.). La descomposicin de los aceites de motor se debe especialmente a una reaccin de oxidacin. En todos los casos, como consecuencia de su utilizacin se degradan perdiendo las cualidades que les hacan operativos y se hace necesaria su sustitucin, generndose as un residuo que puede ser variable en cantidad y composicin, dependiendo de la procedencia. 5
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La oxidacin de los hidrocarburos en fase liquida algunas veces es una reaccin de radicales en cadena. Esta reaccin se muestra en la Figura 1.
Figura 1. Reaccin de oxidacin de hidrocarburos del aceite lubricante (Benavente, G. 1999.).
La reaccin no se inicia hasta pasado un cierto periodo de induccin el cual corresponde al intervalo necesario para la formacin de los perxidos, que actan como catalizadores, durante ste periodo la oxidacin del aceite es muy dbil. En el motor la oxidacin se produce de forma muy rpida, en particular por la elevada temperatura que alcanzan las piezas prximas a la cmara de combustin (Benavente, G. 1999.). 2.4. Impactos en la Salud y el Medio Ambiente Los aceites son considerados potencialmente peligrosos para el ambiente debido a su persistencia y su habilidad para esparcirse en grandes reas de suelo y del agua, formando un film que no permite el ingreso de oxgeno, lo que produce rpidamente una degradacin de la calidad del ambiente. En el caso de los aceites usados existe el riesgo adicional de la liberacin de los contaminantes txicos presentes como es el caso de los hidrocarburos aromticos policclicos, metales pesados y compuestos clorados (U.S. EPA 1991). Los aceite vertidos en el suelo y de su contaminacin en s, puede infiltrarse contaminado el agua subterrnea, o escurrir y ser arrastrado por el agua de lluvia y contaminar los cursos de aguas. Si no se dispone adecuadamente, el aceite automotriz usado causa graves problemas al ambiente:
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Si se arroja al suelo, ste contiene una serie de hidrocarburos, metales y aditivos que favorecen su penetracin y dispersin en el terreno, destruye el humus vegetal y acaba con la fertilidad del suelo. En el agua produce una pelcula impermeable, que impide la adecuada oxigenacin asfixiando a los seres vivos que la habitan: un litro de aceite contamina un milln de litros de agua. Asimismo, por su bajo ndice de degradacin, afecta los tratamientos biolgicos de las depuradoras de agua, llegando incluso a inhabilitarlos.
Si el aceite usado se quema, sin un tratamiento y control adecuado, emite gases txicos debido a la presencia de plomo, cloro, fsforo, azufre, entre otros. Se estima que la quema de cinco litros de aceite, contaminan, 1millon de m3 de aire, que es la cantidad de aire respirada por una persona durante tres aos (Taylor Nelson, 2001).
2.5. Metales pesados Tradicionalmente se llama metal pesado a aquel elemento metlico que presenta una densidad superior a 5g/mL., aunque para efectos prcticos en estudios medioambientales se ampla esta definicin a todos aquellos elementos metlicos o metaloides, de mayor o menor densidad, que aparecen comnmente asociados a problemas de contaminacin. Algunos de ellos son esenciales para los organismos en pequeas cantidades, como el Fe, Mn, Zn, B, Co, As, V, Cu, Ni o Mo, y se vuelven nocivos cuando se presentan en concentraciones elevadas, mientras que otros no desempean ninguna funcin biolgica y resultan altamente txicos, como el Cd, Hg y el Pb. Estos elementos tienen su origen en el substrato litolgico, apareciendo bien como elementos nativos o incorporados normalmente en las estructuras de sulfuros, silicatos, carbonatos, xidos e hidrxidos (Ortiz, I. et al. 2007).
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2.5.1. Metales pesados en suelo Son fuentes importantes de metales en suelos las cenizas y escorias de los procesos de combustin de carbn fsil o derivados del petrleo, el aporte directo procedente de actividades agrcolas (adicin de fertilizantes, pesticidas, lodos de depuradoras, composteo, etc.) y su acumulacin a partir de residuos industriales, urbanos y mineros (metalurgia, fabricacin de pinturas, barnices, disolventes, bateras, textiles, curtidos, etc.), (Ortiz, I. et al. 2007). Al hablar de contaminacin por metales hay que tener en cuenta que ms importante que el contenido total de un elemento en el suelo es la forma o especie qumica bajo la que se encuentra, es decir, su especiacin. As, la forma resultante de dicha especiacin va a influir decisivamente en su distribucin en el suelo, condicionando su solubilidad, su movilidad en el suelo y las aguas superficiales y subterrneas, su biodisponibilidad y toxicidad, por tanto, su comportamiento como contaminante potencial (Mulligan, et al., 2001). La dinmica y disponibilidad de los metales estn muy influenciadas por las condiciones fisicoqumicas del suelo en el que se encuentran, como el pH y el potencial rdox, mientras que los constituyentes orgnicos e inorgnicos del suelo son los que en gran medida condicionan los mecanismos de retencin de metales por adsorcin, formacin de complejos y precipitacin fundamentalmente. Adems, las plantas y los microorganismos (bacterias hongos y algas) del suelo tambin pueden interaccionar con los metales mediante mecanismos de extraccin, estabilizacin, bioadsorcin, bioacumulacin, biomineralizacin y biotransformacin (Lloyd and Macaskie, 2000). En cualquier caso, es importante resaltar que los metales txicos en los suelos no pueden ser destruidos sino slo neutralizados y que pequeas variaciones en las condiciones del medio edfico pueden liberar los metales anteriormente insolubilizados, por lo que es necesario realizar un seguimiento en profundidad de la distribucin de estos contaminantes en el suelo, especialmente de los ms txicos (Ortiz, I. et al. 2007).
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2.5.2. Plomo El plomo fue conocido en el mundo antiguo, al menos desde 3000 aos antes de Jesucristo. Su mena principal es un mineral negro denso caracterstico llamado galena, PbS, que fue fcil de identificar por los hombres primitivos y fciles de reducir a metal (Figura 2). Se somete simplemente a calcinacin en presencia de una cantidad limitada de aire y despus se calienta el residuo con polvo de carbn. El metal tiene un punto de fusin bajo (p.f. 328C) y fluye dejando de tras la masa de carbn e impurezas (Lloyd and Macaskie, 2000). 2PbS + 3O2 2PbO + 2SO2 PbO + C Pb + CO PbO + CO Pb + CO2
Figura 2. Reaccin de reduccin del sulfuro de plomo (Lloyd and Macaskie, 2000).
El plomo es un metal pesado, de densidad relativa 11,4 a 16C, de color azuloso, que se empaa para adquirir un color gris mate. Es flexible y se funde con facilidad. Su fusin se produce a 327,4C. Las valencias qumicas normales son 2 y 4. Es relativamente resistente al ataque de cido sulfrico y cido clorhdrico, aunque se disuelve con lentitud en cido ntrico y ante la presencia de bases nitrogenadas. El plomo es anftero, ya que forma sales de plomo de los cidos. Tiene la capacidad de formar muchas sales, xidos y compuestos rgano metlicos (Lloyd and Macaskie, 2000). Los efectos del Pb en la salud ocurren por ingestin, inhalacin y por contacto drmico y se pueden presentar a corto o largo plazo, ya que el Pb se bioacumula en algunos rganos y tejidos del organismo. Los primeros efectos se observan a concentraciones de 20 a 30g de Pb/dL de sangre, y consisten principalmente en anemia, daos en el sistema nervioso perifrico y los nervios motores. La afectacin del desarrollo psicomotriz, en la capacidad de aprendizaje y el coeficiente intelectual en nios menores de 5 aos se han observado a partir de 9
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40g/dL y en concentraciones superiores a 80g/dL puede ocurrir la muerte (Cuttini, 1994). 2.5.3. Zinc Es un metal de color blanco azulado que arde en aire con llama verde azulada. El aire seco no le ataca pero en presencia de humedad se forma una capa superficial de xido o carbonato bsico que asla al metal y lo protege de la corrosin. Reacciona con cidos no oxidantes pasando al estado de oxidacin +2 y liberando hidrgeno y puede disolverse en bases y cido actico. Es un elemento qumico esencial para las personas: interviene en el metabolismo de protenas y cidos nucleicos, estimula la actividad de aproximadamente 100 enzimas, colabora en el buen funcionamiento del sistema inmunolgico, es necesario para la cicatrizacin de las heridas, interviene en las percepciones del gusto y el olfato y en la sntesis del ADN (http://es.wikipedia.org/wiki/Cinc). La toxicidad por ingestin excesiva de zinc es rara, pero se han informado molestias gastrointestinales y diarrea despus de ingestin de bebidas que permanecieron en latas galvanizadas, o por uso de utensilios galvanizados. Con todo no se han observado pruebas de toxicidad hematolgica, heptica o renal en individuos que ingirieron hasta 12g de zinc elemental durante un periodo de 12 das. En lo que refiere a la exposicin industrial, la fiebre por humo de metal originada por la inhalacin de humos de zinc representa el efecto ms importante. Este trastorno se a relacionado a la inhalacin de humos de oxido de zinc, pero puede observar despus de la inhalacin de humos de otros metales (Klassen, C. Watkins, J. 2001). 2.6. Hidrocarburos Aromticos Policclicos Los Hidrocarburos Aromticos Policclicos (HAPs) son compuestos orgnicos formados por tres o ms anillos aromticos condensados, en donde algunos 10
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tomos de carbono son comunes a dos o tres anillos. Esta estructura se denomina tambin sistema de anillos fusionados. Los anillos pueden estar en lnea recta, angulada o racimada. Adems, el trmino hidrocarburo indica que la molcula contiene slo carbono e hidrgeno. La estructura condensada ms sencilla, formada por slo dos anillos aromticos condensados, es el naftaleno. A los anillos aromticos pueden unirse otros tipos de anillos, como los de cinco tomos de carbono o los que contienen otros tomos (oxgeno, nitrgeno o azufre) en lugar del carbono. Estos ltimos compuestos se conocen como compuestos heteroaromticos o heterocclicos y no se considerarn aqu (Rochow, E.G. 1981). La IUPAC (Unin Internacional de Qumica Pura y Aplicada) ha adoptado una nomenclatura que es la ms utilizada en la actualidad. Se han seleccionado algunos de los principales HAP y se han mantenido sus nombres vulgares. Se dibujan tantos anillos como sea posible en una lnea horizontal y el mayor nmero de los anillos sobrantes se colocan en el cuadrante superior derecho. La numeracin comienza por el primer tomo de carbono que no sea comn a dos anillos, en el anillo situado a la derecha de la primera lnea. Los siguientes tomos de carbono unidos a un hidrgeno se numeran en el sentido de las agujas del reloj. A los lados ms externos de los anillos se les asignan letras en orden alfabtico, empezando por el lado situado entre C 1 y C 2 (Rochow, E.G. 1981). Como ejemplo de la nomenclatura de los HAPs hemos tomado el benzo(a)pireno. Benzo(a) - indica que hay un anillo aromtico unido al pireno en la posicin a. Un anillo puede unirse tambin a las posiciones b, e, etc. No obstante, las posiciones a, b, h e i son equivalentes, y lo mismo ocurre con e y 1. En consecuencia, slo hay dos ismeros, benzo(a)pireno y benzo(e)pireno. (Rochow, E.G. 1981). Si los anillos bencnicos estn unidos de manera lineal, el hidrocarburo es un aceno (por ejemplo antraceno, naftaleno, tetraceno, pentaceno, etc.). Cuando los anillos bencnicos estn unidos de manera angular, su nombre finaliza en feno (por ejemplo, pentafeno) (Menzie et al., 1992).
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Los sistemas conjugados II-electrn de los HAPs son los responsables de su estabilidad qumica. Dependiendo de su carcter aromtico, los HAPs absorben luz ultravioleta y producen un espectro fluorescente caracterstico. Son solubles en muchos disolventes orgnicos, pero muy poco solubles en agua. Desde el punto de vista qumico, los HAPs reaccionan por sustitucin del hidrgeno o por adicin cuando se produce su saturacin. La mayora de los HAPs se fotooxidan, una reaccin importante para eliminarlos de la atmsfera. La reaccin de fotooxidacin ms frecuente es la formacin de endoperxidos, que pueden convertirse a quinonas. Como caracterstica comn presentan, alta estabilidad qumica, baja volatilidad, son slidos a temperatura ambiente, adems de ser la mayora de ellos lipoflicos (Castao, G. et al. 2004). Los HAPs constituyen contaminantes orgnicos relacionados con las actividades humanas. Los compuestos que ms conciernen de los hidrocarburos del petrleo y de la pirolisis de combustibles son los hidrocarburos aromticos policclicos, sus homlogos alquil y los HAPs sustituidos con sulfuro o nitrgeno, son compuestos estables y altamente txicos, algunos son potentes carcingenos y otros mutagnicos. Se ha reportado que los HAPs son producidos a partir de altas temperaturas 400 a 500C, mientras los homlogos alquil sustituidos se producen a bajas temperaturas de 100 a 150 C (Lesser., 1995). Los estudios de diversas matrices aplicables al medio ambiente, como la combustin del carbn, los gases del escape de los vehculos de motor, el aceite lubricante usado de los motores, entre otros, han demostrado que los HAPs en estas matrices son los principales responsables de su potencial carcinognico (Rodrguez. C, et al. 2002). Hay dos clases de hidrocarburos aromticos: los de bajo peso molecular que tienen de 2 a 3 anillos aromticos como el naftaleno, fluoreno, fenantreno y antraceno y derivados, y los de alto peso molecular que tienen de 4 a 7 anillos aromticos como el criseno (Figura 2). Sus caractersticas fsicas y qumicas varan de acuerdo a su peso molecular y, en consecuencia, en su distribucin y
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conducta en el ambiente, lo mismo sus efectos en los sistemas biolgicos (Menzie et al., 1992).
Figura 3. Estructura de algunos hidrocarburos aromticos policclicos (Rochow, E.G. 1981).
Su importancia est relacionada a su movilidad, debido a su peso molecular. Los HAPs de alto peso molecular son relativamente inmviles y, por ende, de baja volatilidad y solubilidad. Diecisis HAPs (naftaleno, acenaftileno, acenafteno, fluoreno, fenantreno, antraceno, fluoranteno, pireno, benzo(a)antraceno, criseno, benzo(b)fluoreno, benzo(k)fluoreno, y benzo(a)pireno, son indeno(1,2,3-cd)pireno, considerados como dibenzo(ah)antraceno benzo(ghi)perileno)
contaminantes prioritarios por U.S. EPA, la Organizacin Mundial de la Salud (OMS) y la Comunidad Econmica Europea (CEE) debido a sus efectos carcinognicos (Menzie et al., 1992).
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2.6.1. Benzo(a)pireno El benzo(a)pireno o b(a)p, es un hidrocarburo policclico aromtico potencialmente carcingeno pertenece a una clase de hidrocarburos aromticos y que comparten una estructura qumica bsica, el anillo de benceno. Son compuestos poco solubles en agua por tener propiedades hidrofbicas consistentes en 2 o ms anillos bencnicos, ya sea en forma simple o mltiple, formando cadenas o racimos (Figura 4). Esta catalogado por la Agencia internacional de Investigacin del Cncer IARC, ente de la OMC en la categora 2 que agrupa a las sustancias que poseen probada accin cancerigena en animales. La Agencia de Proteccin Ambiental y el Instituto nacional de Salud de los Estados Unidos lo catalogan dentro de las 10 sustancias ms importantes con riesgo para la salud pblica (Rodrguez. C, et al. 2002). Existe gran variedad de fuentes naturales para la formacin del benzo(a)pireno, como son los incendios forestales y la actividad volcnica por mencionar algunas. Las principales fuentes antropognicas que contribuyen a la presencia del benzo(a)pireno en el entorno son: procesos industriales, al parque automotor, calefaccin domestica, incineradores. En especial, el benzo(a)pireno es uno de los derivados de mayor factor de riesgo, tras largos periodos de exposicin, puede desencadenar desrdenes celulares produciendo cncer. Se produce por condensacin de cinco anillos de benceno durante los procesos de combustin a temperaturas de 300 a 600C (incendios forestales, carbn, petrleo, grasas), en especial cuando estos son parciales (Rodrguez. C, et al. 2002).
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Caractersticas: Es un compuesto que se presenta como un polvo cristalino cristales de color amarillento de fluorescencia amarillo verdosa bajo la luz ultravioleta (depende del solvente eluyente); con un ligero olor aromtico. Solubilidad: El benzo(a)pireno es muy soluble en solventes no polares como benceno, tolueno, xileno, ciclohexano, acetona, eter, dimetilsulfoxido, dimetilformamida. Es poco soluble en etanol, metanol e insoluble en agua. Estabilidad: El benzo(a)pireno es relativamente estable, puede ser atacado por agentes oxidantes, se puede descomponer por la luz y el oxigeno ambiental. Las soluciones de benzo(a)pireno en solventes orgnicos pueden opacarse y oxidarse progresivamente bajo la presencia de luz y el oxigeno ambiental (Rodrguez. C, et all. 2002).
Benzo(a)pireno
Nombre qumico Frmula qumica Masa molecular Nmero CAS Densidad Punto de fusin Punto de ebullicin Frmula 'SMILES' molecular simplificada
Benzo[a]pireno C20H12 252,31 g/mol CAS=50-32-8 1,24 g/cm3 179 C 495 C c1\cc2\cc/cc3ccc4cc5ccccc5c1c4c23
Figura 4. Caractersticas del benzo(a)pireno (Rodrguez. C, et al. 2002).
El organismo humano tiene hasta tres barreras de defensa frente a estas sustancias potencialmente carcingenas.
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La primera es el metabolismo destoxificador, mediante reacciones hepticas de oxidacin y conjugacin; la segunda, la epxido hidrolasa, la superxido dismutasa catalasa y la vitamina E, y en tercer lugar, si esta barrera tampoco funciona, el organismo se defiende con una reparacin del enlace. Dicho de un modo sencillo, se corta un trozo de ADN y se sintetiza de nuevo (Menzie et al., 1992). 2.6.2. Benzo(a)antraceno El benzo(a)antraceno o b(a)a, est catalogado por la IARC, ente de la OMS en la categora 2 que agrupa a las sustancias que poseen probada accin cancerigena en humanos, aunque su potencia toxica es menor a la del b(a)p. Los estudios realizados indican que este compuesto es el hidrocarburo policiclico que se encuentra en mayor porcentaje que los dems. La exposicin crnica a este compuesto condiciona la formacin de tumores a nivel pulmonar, drmico y renal en animales, almacenndose principalmente en el tejido lipdico (Menzie et al., 1992). La exposicin pblica a este compuesto generalmente se da mediante contacto drmico e inhalacin de las emisiones industriales y vehiculares. Se almacena con facilidad en los alimentos ricos en grasas, as como tambin en el agua (Menzie et al., 1992). . Caractersticas:
El benzo(a)antraceno se presenta como escamas incoloras (esta caractersticas depende del solvente eluyente), es soluble en etanol, tolueno, acetona, benceno, y ter etlico, poco soluble en agua. Presenta una fluorescencia verde amarillenta, ya sea en solucin o en su forma cristalina (Rodrguez. C, et all. 2002). Se produce por condensacin de cuatro anillos de benceno durante los procesos de combustin incompleta (Figura 5).
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Lus Adn Rosales M. Maestra en Ciencias en Gestin Ambiental Benzo(a)antraceno
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Nombre qumico Frmula qumica Masa molecular Densidad Punto de fusin Punto de ebullicin Frmula 'SMILES' molecular simplificada
Benzo[a]antraceno C18H12 228.30 g/mol 11.35 g/cm3 160 C 400 C c1\cc2\cc/cc3ccc4cc5ccccc4c1c3c21
Figura 5. Estructura qumica Benzo(a)antraceno (Rodrguez. C, et al. 2002).
2.7. Legislacin ambiental en materia de residuos peligrosos En Mxico existe un gran nmero de sitios contaminados, principalmente con hidrocarburos del petrleo. Generado en los ltimos aos el inters de las instituciones gubernamentales y privadas por la remediacin de estos sitios. El conocimiento del tipo de contaminacin y su concentracin es fundamental para establecer las condiciones del sitio, el riesgo que representa y la seleccin de posibles tecnologas de recuperacin (Arce. O, et al., 2004). Los lmites de limpieza para hidrocarburos en suelos y aguas dependern de los criterios o normas vigentes en Mxico. 2.7.1. Planes de manejo de Aceites Usados La Ley General para la Prevencin y Gestin Integral de los Residuos. Establece, en su capitulo ll. Articulo 31, a los aceites usados como residuos peligrosos, sujetos a planes de manejo, en la norma oficial mexicana correspondiente.
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El
proyecto
de
Norma
NOM-101-ECOL-1996
sobre
los
requisitos
especificaciones para el manejo de lubricantes usados, establece las siguientes condiciones: La prohibicin de todo tipo de vertido de lubricantes usados, sus residuos y subproductos derivados de su tratamiento, en cualquier cuerpo de agua superficial o subterrneo, zonas de mar territorial, sistemas de drenaje y alcantarillado o descargas de aguas residuales. La prohibicin de su depsito o vertido directo sobre el suelo o cualquier superficie del territorio nacional, al igual que cualquier tipo de incineracin a cielo abierto o en instalaciones no autorizadas por la autoridad ambiental. La obligacin por parte del pequeo generador (que genera un volumen menor o igual a 1,000 litros por mes), de llevar una bitcora de control de adquisicin de aceites nuevos y de generacin de aceites usados. 2.7.2. Legislacin ambiental en materia de suelos contaminados La Ley General de Equilibrio Ecolgico y Proteccin al ambiente LGEEPA establece los siguientes aspectos para atender la contaminacin del suelo en los siguientes artculos: Art. 134. Menciona los criterios de la prevencin y control de la contaminacin; prrafo I. Corresponde al estado y la sociedad prevenir la contaminacin del suelo. II. Deben controlarse los residuos en tanto que constituyen la principal fuente de contaminacin del suelo; IV. Se establece que en los suelos contaminados por la presencia de materiales o residuos peligrosos, debern llevarse a cabo acciones necesarias para recuperar o restablecer sus condiciones, de tal manera que puedan ser utilizados en cualquier tipo de actividad prevista por el programa o de ordenamiento ecolgico que resulte aplicable Art. 136. Los residuos que se acumulen o puedan acumularse y se depositen o infiltren en los suelos debern reunir las condiciones necesarias para prevenir o 18
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evitar: I. Contaminacin del suelo, II Las alteraciones nocivas en el proceso biolgico de los suelos; III. Las alteraciones en el suelo que perjudiquen su aprovechamiento, uso o explotacin y; IV. Riesgos y problemas de salud. Art. 139. Toda descarga, depsito o infiltracin de sustancias o materiales contaminantes en los suelos se sujetar a lo que disponga esta ley, la ley de Aguas Nacionales, sus disposiciones reglamentarias y las Normas Oficiales Mexicanas. Art. 140. La generacin, manejo y disposicin final de los residuos de lenta degradacin deber sujetarse a lo que establezcan las Normas Oficiales Mexicanas que al respecto expida la Secretara, en coordinacin con la Secretara de Comercio y Fomento Industrial. 2.7.3. Normatividad nacional en materia de suelos contaminados El Programa Nacional de Medio Ambiente y Recursos Naturales 2001-2006, tiene como primer objetivo detener y revertir la contaminacin de los recursos naturales, agua, aire y suelo, con el propsito de garantizar su conservacin para las generaciones futuras. 2.7.3.1. Norma Oficial Mexicana NOM-138-SEMARNAT/SS-2003. Los derrames de hidrocarburos, por las sustancias que involucran, pueden poner en peligro los lugares donde se producen, la integridad de los ecosistemas, as como la preservacin de los recursos naturales. Cuando un derrame de hidrocarburos permanece sin ser atendido puede causar daos constantes y crecientes al suelo y a otros recursos naturales. La falta de especificaciones ambientales para la restauracin de suelos contaminados por derrames de hidrocarburos constituye uno de los principales factores de incertidumbre sobre la efectividad de los resultados de la remediacin.
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Ante la situacin descrita, el 20 de agosto de 2002 se public en el Diario Oficial de la Federacin, la Norma Oficial Mexicana de Emergencia: Lmites mximos permisibles de contaminacin en suelos por hidrocarburos, caracterizacin del sitio y procedimientos para la remediacin, la cual fue prorrogada por seis meses ms, el 20 de febrero de 2003. Con el propsito de dar certidumbre en las acciones de caracterizacin y remediacin a los causantes de la contaminacin he tenido a bien expedir la presente Norma Oficial Mexicana. 2.7.3.2. Norma Oficial Mexicana NOM-147- SEMARNAT/SSA1-2004. El desarrollo de actividades econmicas de manera no sustentable, han contribuido a la emisin de compuestos potencialmente txicos que bajo ciertas condiciones, pueden tener efectos nocivos a la salud de la poblacin y afectaciones al equilibrio ecolgico y al ambiente. Las formas de produccin utilizadas en el pasado y la escasez de especificaciones ambientales en materia de suelos han generado la aparicin de sitios contaminados, los que se han constituido en pasivos ambientales y causando la incertidumbre de los particulares en cuanto a las acciones que se debern llevar a cabo para remediar un sitio. De acuerdo a las datos presentados en el informe 1995-2000 de la PROFEPA, en Mxico ser tienen identificados 61 sitios contaminados por elementos que se incluyen en la presente Norma, por lo que es necesario la emisin de la misma para dar claridad y certeza jurdica a los particulares que requieran remediar sitios contaminados. La presente Norma Oficial Mexicana, establece diferentes alternativas para determinar la concentracin objetivo a la cual se debe remediar un suelo. Estas opciones incluyen las concentraciones de referencia (totales y solubles) que esta Norma presenta, la determinacin de concentraciones de fondo del suelo, el
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clculo de concentraciones especificas conforme a las caractersticas propias del sitio y de concentraciones basadas en la biodisponibilidad de los contaminantes. Con base en lo anterior, la Secretaria de Medio Ambiente y Recursos Naturales y la Secretaria de Salud procedieron a elaborar la presente Norma Oficial Mexicana que establece criterios para determinar concentraciones de remediacin de suelos contaminados por arsnico, bario, berilio, cadmio, cromo hexavalente, mercurio, nquel, plata, plomo, selenio, talio y/o vanadio. 2.8. Suelo Entendemos por suelo a la superficie emergida de la tierra o la parte de la litosfera sometida a la accin de los agentes climticos y biolgicos y, por supuesto, a una intervencin masiva de las actividades humanas. Es un medio multifactico, de composicin variable, al que afectan fenmenos fsicos, qumicos, biolgicos y climticos por una parte y por otra la accin del hombre a travs de la contaminacin (Seoanez, Calvo. M., 1999). El suelo esta compuesto por tres fases: la fase slida, compuesta a su vez por la fraccin mineral y la orgnica; la fase liquida; y la fase gaseosa (Figura 6) En un promedio general la materia orgnica constituye un 5% del suelo, el agua 25%, el aire 25% mientras que la fraccin mineral esta representada en un porcentaje del 45% (Luque, J. 1995).
Figura 6. Fases del suelo (Luque, J. 1995).
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2.8.1. Contaminacin del suelo La contaminacin del suelo consiste en una degradacin qumica que provoca la prdida parcial o total de la productividad del suelo como consecuencia de la acumulacin de sustancias txicas en concentraciones que superan el poder de amortiguacin natural del suelo y que modifican negativamente sus propiedades. Esta acumulacin se realiza generalmente como consecuencia de actividades humanas exgenas, aunque tambin se puede producir de forma natural o endgena (Ortiz, I. et al., 2007). La produccin y el uso masivos de compuestos orgnicos los hace estar entre los contaminantes ms frecuentes en suelos y aguas. La distribucin y el comportamiento de los compuestos orgnicos contaminantes en suelos estn gobernados por diferentes factores que incluyen las caractersticas del suelo y factores ambientales como la temperatura y la precipitacin. As, estos compuestos pueden sufrir procesos de lavado, biodegradacin, volatilizacin, fotodescomposicin e hidrlisis, inmovilizacin por adsorcin y formacin de enlaces con partculas de arcilla, xidos, oxihidrxidos, etc., (Jones et al., 1996). Las propiedades fsicas, qumicas y biolgicas del suelo controlan en gran medida los ciclos biogeoqumicos superficiales, en los que acta como un reactor complejo que sirve de elemento protector de otros medios ms sensibles frente a elementos contaminantes. As, el suelo ejerce su labor protectora a travs de su poder de amortiguacin o capacidad natural de depuracin de la contaminacin. Esta atenuacin de los elementos nocivos contaminantes se realiza, entre otras, a travs de reacciones de formacin de complejos, reacciones de adsorcin y desorcin (proceso contrario a la adsorcin), reacciones de precipitacin y disolucin, reacciones de oxidorreduccin, reacciones cido-base y reacciones derivadas de procesos metablicos. Todas estas reacciones estn estrechamente controladas por propiedades del suelo como su textura, estructura, porosidad, capacidad de intercambio catinico, pH, y la actividad microbiolgica. En cualquier caso, hay que tener muy presente que el poder de amortiguacin de un suelo no
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es ilimitado y cuando se rebasa, el suelo deja de ser eficaz como sumidero de la contaminacin, llegando incluso a invertirse el proceso y a convertirse en una fuente de contaminacin para los organismos del suelo y para el medio circundante (Ortiz, I. et al., 2007). 2.8.2. Contaminacin del suelo por hidrocarburos. A medida que transcurre el tiempo despus de un derrame, se va modificando la composicin del hidrocarburo por accin de los agentes ambientales. Primero se pierden los hidrocarburos voltiles y despus se produce la eliminacin de parafinas, ya sea por evaporacin, por actividad fotoqumica o actividad biolgica; luego se eliminan otros componentes. Como resultado de ello el contaminante se enriquece en compuestos pesados, difciles de degradar; por lo que la velocidad de reaccin disminuye a medida que transcurre el tiempo (Ercoli, E. 2001). La persistencia en el medio tambin aumenta con el tamao. Por su carcter lipoflico se pueden bioacumular y concentrar en sedimentos y suelos en una extensin que depender de su persistencia en cada medio. Est comprobado que la toxicidad aumenta al aumentar el peso molecular y el carcter lipoflico del compuesto (Sienra, M., et al. 2002). 2.8.3. Procedimientos para la descontaminacin de suelos Cuando se empez a actuar sobre los espacios contaminados a comienzo de los aos ochenta, el mtodo sola consistir en retirar los residuos y/o suelo contaminado a un vertedero o se cubrirlos plante con la una capa impermeable de desarrollar (confinamiento). Posteriormente, necesidad
alternativas para solucionar de forma permanente y menos costosa el problema de los espacios contaminados (Eweis, et al. 1999) Los mtodos existentes para tratar los suelos contaminados pueden ser de naturaleza fsica, qumica o biolgica y tanto unos como otros pueden aplicarse en el lugar de la contaminacin in situ o en un lugar ajeno a esta ex situ.
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1. Tratamientos in situ Fisicoqumicos: a) b) c) d) Extraccin con vapor Lavado Solidificacin y estabilizacin Separacin electrocintica
Biolgicos: a) b) Biorremediacin Fitorremediacin
2. Tratamientos ex situ Trmicos: a) b) Desorcin trmica Incineracin
Fisicoqumicos: a) b) c) d) e) Extraccin con disolventes Lavado Oxido-reduccin Deshalogenacin qumica Solidificacin y estabilizacin
Biolgicos: a) b) c) Laboreo agrcola Biopilas Biodegradacin en reactor
2.8.3.1. Biorremediacin de suelos La biorremediacin de suelos contaminados involucra el uso de microorganismos y/o vegetales para la degradacin de los contaminantes orgnicos. La actividad biolgica altera la estructura molecular del contaminante y el grado de alteracin determina si se ha producido biotransformacin o mineralizacin (Ercoli, et al. 2007).
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La biotransformacin es la descomposicin de un compuesto orgnico en otro similar no contaminante o menos txico, mientras que la mineralizacin es la descomposicin a dixido de carbono, agua, y compuestos celulares. Los procesos biolgicos se aplican frecuentemente al tratamiento de suelos contaminados con hidrocarburos. Se pueden aplicar tcnicas in-situ (en el lugar donde se encuentra el suelo contaminado) o ex-situ (cuando el suelo se traslada a una instalacin para su tratamiento). El tratamiento ex-situ de suelos, sedimentos y otros slidos contaminados con hidrocarburos se puede realizar en un variado nmero de procesos en fase slida y en fase lodo. Los procesos en fase slida son aquellos en donde el suelo se trata con un contenido de agua mnima. En el caso de los procesos en fase lodo se suspende el suelo en agua (LaGrega, et al., 1996). Una ventaja de los procesos en fase slida es que las bajas velocidades de transferencia de materia permiten trabajar a niveles de contaminacin que seran txicos para los microorganismos si se realizaran en fase lquida. Por otro lado los sistemas slidos son capaces de sustentar el crecimiento de microorganismos que no desarrollan bien en fase lquida (hongos) y producen complejos enzimticos capaces de oxidar compuestos complejos (Cookson, 1995). Los parmetros crticos a considerar en un tratamiento biolgico son: tipo y concentracin de contaminante, concentracin de microorganismos, concentracin de nutrientes, aireacin, condiciones macro ambientales, presencia de inhibidores y biodisponibilidad del contaminante (Ercoli, E. 2001). 2.8.4. Bioadsorcin A partir de la dcada de los ochentas se empezaron a demostrar las capacidades que tienen varios microorganismos para remover grandes cantidades de metales pesados en diferentes matrices. Estas capacidades han sido estudiadas con la finalidad de desarrollar nuevos sistemas de tratamiento que puedan reemplazar de una manera eficiente a los mtodos de tratamiento convencionales (Reyes, E. Cerino, F. 2006).
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El proceso de bioadsorcin puede ser definido como la captacin de contaminantes (metales pesados en este caso), en agua y/o suelo, por un material biolgico a travs de mecanismos fisicoqumicos o metablicos (Reyes, E. Cerino, F. 2006). Como los metales pesados pueden llegar a tener efectos letales sobre la biomasa viva, esta tiene la capacidad de poner en funcionamiento ciertos mecanismos para contrarrestar los efectos txicos de los metales. Los dos mecanismos diferenciados para la captacin de metales por parte de la biomasa son (Navarro, A. E. et al. 2006). Bioacumulacin. Basada en la absorcin de las especies metlicas mediante mecanismos metablicos al interior de la clulas Bioadsorcin. Basada en la adsorcin de los iones en la superficie de la clula. Este fenmeno se caracteriza por la retencin del metal mediante una interaccin fisicoqumica del metal con los ligndos pertenecientes a la superficie celular, la cual se produce con grupos funcionales expuestos hacia el exterior celular (Navarro, A. E. et al. 2006). 2.8.5. Biodegradacin El trmino biodegradacin no indica la extensin en la que se ha alterado una molcula, tampoco seala si en el proceso se genera energa. Quiz resulte ms apropiado hablar de biotransformacin para referirse al proceso a travs del cual un ser vivo modifica un compuesto sin llegar a mineralizarlo. En algunos casos el producto resultante puede ser incluso ms txico y perjudicial que la sustancia de partida (Ramos, J. Rojo, F. 1990). Los compuestos mineralizados se convierten en CO2, agua y formas inorgnicas por la accin de los seres vivos, predominantemente por los microorganismos y como parte del constante reciclaje de los tomos de carbono. La mineralizacin de un compuesto implica su alteracin estructural y la formacin de intermediarios metablicos que pueden servir de elementos estructurales de la clula o de combustible al oxidarse. Los intermediarios pueden convertirse en distintos 26
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compuestos orgnicos antes de su combustin final. En el proceso de transformacin de un compuesto en otro, puede sufrir la prdida de uno o ms de sus elementos estructurales o slo una mera reordenacin de sus tomos (Ramos, J. Rojo, F. 1990) 2.8.5.1. Biodegradacin de hidrocarburos Existen dos mtodos usados en la degradacin de hidrocarburos, el primero se basa en las capacidades metablicas de las especies presentes en los hidrocarburos, la degradacin se consigue al modificar el sustrato, por aeracin o aplicando un fertilizante, y en el segundo se adicionan poblaciones forneas de microorganismos que son escogidos por sus capacidades de degradar hidrocarburos. El mtodo de siembra de microorganismos requiere que se agregue una cantidad de inoculo mayor a la biomasa que esta presente en el medio para asegurar la supervivencia del inoculo. La modificacin del sustrato es un mtodo puede incrementar la degradacin de 0.03g/m3 da que se tiene normalmente en el aceite hasta 50g/m3 da. (Atlas, R.1995). Varios investigadores se han mostrado escpticos ante la posibilidad de que las bacterias y otros microorganismos del suelo crezcan a expensas de hidrocarburos como nica fuente de energa, aunque esa capacidad parece plenamente comprobada: a lo largo de miles de aos, los microorganismos se han visto expuestos a compuestos aromticos naturales que se han formado por pirolisis de compuestos orgnicos naturales. El tipo de aromtico que se forme depender de la temperatura de pirolisis, as, a temperaturas elevadas de 2000C se producen, preferentemente, hidrocarburos policclicos no sustituidos, a temperaturas intermedias de 800C hidrocarburos con sustituciones alqulicas, y, a bajas temperaturas de 150C, los petrleos (Atlas, R.1995). La estrategia seguida por los microorganismos consiste en desestabilizar el anillo aromtico mediante la introduccin de dos grupos hidroxilo. As, el compuesto pasa a ser susceptible de ataque enzimtico para rendir formas asimilables del carbono. 27
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Desde el punto de vista termodinmico, todos los compuestos orgnicos son inestables y tienden a su forma ms estable, que es el anhdrido carbnico (CO2) en situacin aerobia o el metano (CH4) en un ambiente anaerobio, o carente de oxgeno. Un compuesto recalcitrante es txico para los microorganismos, cuando presenta estructuras qumicas muy estables y resistentes al ataque biolgico o posee elementos estructurales que raramente se encuentran en la naturaleza. En general, la resistencia de un compuesto aromtico al ataque por los seres vivos aumenta con el nmero de sustituyentes que tenga, cualquiera que sea su naturaleza qumica. La degradacin de aromticos ocurre en dos fases: la primera consiste en la activacin del anillo mediante la introduccin de dos grupos hidroxilo, la segunda, en la fisin o ruptura del anillo activado. El ejemplo ms sencillo de activacin del anillo aromtico lo constituye la oxidacin del benceno por la benceno oxigenasa para producir un dihidrodiol, que posteriormente se oxida a catecol, ste ltimo compuesto es la verdadera forma activada del anillo. Un mismo compuesto puede sufrir distintos tipos de ataque que conduzcan a la forma activada. (Ramos, JL y Rojo, F. 1990). Uno de los aspectos ms interesantes del metabolismo de los aromticos lo ofrece la fisin del anillo aromtico, una vez que lleva incorporados los dos sustituyentes hidroxilo. La rotura del anillo est siempre catalizada por una dioxigenasa, se denomina fisin orto (tambin, fisin intradiol), cuando ocurre entre los carbonos 1 y 2 del anillo aromtico, y fisin meta (fisin extradiol), si se produce entre los carbonos dos y tres del anillo aromtico. Los productos que se forman tras la fisin del anillo se transforman luego, a travs de varios pasos, en compuestos que entran en el metabolismo central del microorganismo (Jirasriponpun, K. 2002). 2.9. Hongos Los hongos se han adscrito tradicionalmente al reino vegetal, a pesar de que no tienen clorofila, tejidos especializados ni flores. No fue sino hasta apenas unos 30 aos, cuando se empez a aceptar la idea de que los hongos son organismos 28
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independientes de las plantas y aunque qumicamente estn muy relacionados con los animales, forman un grupo aparte, el llamado Reino de los Hongos o Reino Fung. La pared celular de los hongos generalmente esta compuesta por quitina como la de los animales y no por lignina y celulosa como los vegetales. Adems los hongos almacenan glicgeno y no almidn como sucede entre los animales. El hecho de que los hongos formen un reino independiente, se basa en que tienen caractersticas propias y a su vez una mezcla curiosa de vegetales y animales (Guzmn, G. 2000). Todos los hongos son hetertrofos, es decir, requieren materia orgnica preformada que utilizan como fuente de energa y de carbono para la sntesis de estructuras celulares. Debido a la rgida pared celular, no pueden fagocitar el alimento; ms bien, absorben nutrientes simples y solubles que obtienen mediante la degradacin de polmeros complejos con enzimas extracelulares que liberan al medio (Hickman, G. W. E. Perry, 1997). 2.9.1. Hongos de la pudricin La pudricin de la madera, es una alteracin provocada por algunas especies de hongos denominados de la pudricin que se han especializado en alimentarse de la pared celular constitutiva de la madera, causando por ello una prdida de resistencia, que si el ataque es importante, impide cualquier tipo de aplicacin de sta, dado que su resistencia se anula, pudiendo desintegrarse por la simple accin de la presin de los dedos (Vignoth. S, et all. 1981). En la tecnologa industrial se habla de varios tipos de pudricin, segn si el hongo se alimenta de lignina de la madera o de la celulosa. En realidad, en un ataque de pudricin se suelen desarrollar muchos tipos de hongos, cada uno de los cuales acta en un determinado intervalo de degradacin (Vignoth. S, et all. 1981). As, se denomina pudricin parda (caf) la causada por hongos que se alimentan de la celulosa, dejando la lignina, caracterizada por un color pardo. La madera se
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rompe dejando cubos, por lo que tambin se le suele denominar a este tipo de pudricin, pudricin cbica. Por el contrario, se denomina pudricin blanca la causada por los hongos que eliminan la lignina, dejando la celulosa de color blanco, La madera se rompe en fibras, por lo que tambin se le suele denominar a este tipo de pudricin, pudricin fibrosa. El ataque enzimtico del hongo debilita la madera degradando la celulosa y la lignina de las paredes celulares y sustrayendo la lignina entre clulas. El ataque fngico sobre la celulosa en las paredes celulares reduce la resistencia al pandeo, mientras que la degradacin de la lignina afecta a la resistencia a la compresin de la madera (Hickman, G and E. Perry. 1997). 2.9.2 Hongos de la pudricin caf Los hongos de la pudricin caf pertenecen al grupo de los ascomicetos. Estos hongos son capaces de degradar celulosa y hemicelulosa, dejando a la lignina ms o menos intacta como una capa de color caf (de ah su nombre). Sin embargo, probablemente modifican la estructura de la lignina, al menos al grado de que ya no forma complejos qumicos con la celulosa (Vignoth. S, et all. 1981). 2.9.3. Hongos de la pudricin blanca En la naturaleza, los hongos de la podricin blanca (PB) son basidiomicetos, comunes en bosques de pino y encino (Christian et al.,2005), la nominacin de hongos de la PB, deriva de su capacidad de mineralizacin de la lignina y sus derivados que le da a la madera un aspecto blanquecino (Pointing, 2001), estos hongos realizan una funcin natural esencial en la conversin de lignina cuya produccin es de 20.3 x1012 Kg./ao, este es un polmero polifenlico heterogneo que se degrada por oxidacin. El reciclaje de lignina por hongos de la PB, es un factor fundamental del ciclo del carbono en los bosques, una de las mayores reservas de carbono orgnico del suelo.
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Estos hongos de la PB producen enzimas oxidativas extracelulares nicas que inicialmente actan sobre polmeros aromticos complejos naturales como la lignina. Ejemplos importantes de estas enzimas son las peroxidasas de tipo heme, lignina peroxidasas (LiP) y peroxidasa dependiente de manganeso (MnP) as como la oxidasa fenol con cobre contenido y laccasa (Cabral, M. 2004). 2.10. Descripcin de Pleurotus ostreatus Se reconoce por la forma del sombrero a manera de abanico o de esptula, por su crecimiento en grandes matas sobre madera y por las caractersticas laminillas decurrentes, as como tambin por la situacin del pie, excntrico o incluso lateral, comn a casi todas las especies de Pleurotus. Se presenta con un sombrero que, en realidad, es muy variable tanto en la forma como en el color. El sombrerillo de esta seta es redondeado, con la superficie lisa, abombada y convexa cuando es joven, aplanndose luego poco a poco. Su dimetro oscila entre 5 y 15cm, dependiendo de la edad del hongo. El color es variable, desde gris claro o gris pizarra hasta pardo, tomando una coloracin ms amarillenta con el tiempo. En la parte inferior del sombrero hay unas laminillas dispuestas radialmente como las varillas de un paraguas, que van desde el pie o tallo que lo sostiene, hasta el borde. Son anchas, espaciadas unas de otras, blancas o crema, a veces bifurcadas, y en ellas se producen las esporas destinadas a la reproduccin de la especie. El pie suele ser corto, algo lateral u oblicuo, ligeramente duro, blanco, con el principio de las laminillas en la parte de arriba y algo peloso en la base (Figura 7).
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Figura 7. Pleurotus ostreatus. (Naranjo, J.N. 2006)
Pueden crecer de forma aislada sobre una superficie horizontal o en grupo formando repisas laterales superpuestas sobre un costado de los rboles (Prez, R. Mata, G., 2005). P. ostreatus al formar parte de los hongos lignolticos o PB, cuenta con un sistema enzimtico que le confiere la capacidad de desdoblar la lignina de la madera y otros sustratos lignolticos. Algunas cepas de P. ostreatus destruyen mas rpidamente la lignina que la celulosa. El sistema enzimtico con que cuenta P. ostreatus es el siguiente. Laccasa, LiP, MnP, la expresin de dichas enzimas ser solo a travs de estrs por carencia de nutrientes y altas tenciones de oxigeno. 2.10.1. Taxonoma del hongo Pleurotus ostreatus Pleurotus ostreatus Clase Subclase Orden Familia Gnero Especie Holobasidiomycetes Hymenomycetidae Agaricales Tricholomataceae Pleurotus ostreatus
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Nombre comn: Pleurotus, Grgola, Seta comn, Seta de ostra, Hongo ostra, Hongos ostras, Orejn, Seta de chopo. 2.11. Bioqumica de la mineralizacin de la lignina. Los hongos de la PB, secretan una o ms de las tres enzimas extracelulares oxidativas esenciales en la mineralizacin de lignina: la lignina peroxidasa, que por sntesis endgena de H2O2, oxida veratril alcohol, a la vez oxida compuestos aromticos no fenlicos, en la reaccin se generan radicales arilo y alquilo que se anabolizan intracelularmente; la manganeso peroxidasa, que oxida componentes fenlicos de la lignina, mediante la reaccin de oxidacin del Mn2+ a Mn3+ , la cual es dependiente del H2O2, y la laccasa, una fenol oxidasa con cobre, que oxida anillos de la lignina (Prez et al.,2002). El patrn de actividad de estas enzimas es especfico del gnero y especie de hongo de la PB involucrado, algunos excretan la LiP, la MnP y no la laccasa la MnP, la laccasa y no la LiP; existen otras enzimas que estn indirectamente asociadas con la mineralizacin de lignina: como la glioxal oxidasa y la superxido dismutasa que sintetiza H2O2 necesario, para la actividad de la LiP y la MnP; mientras otras enzimas fngicas funcionan como enlace entre las rutas de mineralizacin de la lignocelulosa, como: la glucosa oxidasa, la aril alcohol oxidaba, la celobiosa quinona oxidorreductasa y la celobiosa deshidrogenasa (Pointing, 2001). La sntesis fngica de la LiP y la MnP se realiza bajo una alta tensin de oxgeno, se reprime en agitacin o cuando los hongos de la PB, se cultivan en medio lquido, sin embargo la laccasa se sintetiza slo en agitacin, estas tres enzimas son inespecficas y se inducen en condicin limitante de nutrientes, como la en la eliminacin pesticidas, de xenobiticos con clorofenoles y fuente de nitrgeno, (Christian et al., 2005), este complejo enzimtico inespecfico fngico extracelular, tiene potencial aromticos policclicos, herbicidas, estructura qumica similar a la lignina tales como: aromticos, nitroaromticos, detergentes colorantes (Pointing, 2001).
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2.12. Biotratamiento de xenobiticos orgnicos con hongos de la PB La capacidad de los hongos de la PB para transformar una gran variedad de compuestos orgnicos y llevarlos a compuestos ms simples y/o mineralizarlos hasta CO2 y H20 ofrece un potencial indiscutible para su utilizacin en procesos de tratamiento de sitios contaminados. Ese potencial radica fundamentalmente en las caractersticas de su sistema enzimtico y en su vigoroso crecimiento que les permite, a travs del desarrollo de su micelio, colonizar diferentes tipos de sustratos y acceder a los compuestos orgnicos que constituyen las fuentes de contaminacin (Prez et al., 2002). En la biorremediacin de ambientes contaminados con xenobiticos aromticos, se recomienda aplicar hongos de la PB. Demir (2004), investig el efecto de Pleurotus ostreatus sobre la mineralizacin de benceno y tolueno a concentracin de: 50, 100, 200, 250 y 300mg/L, en medio de cultivo liquido, a pH 5 y 28C en agitacin. Los resultados indicaron que P. ostreatus consumi el tolueno y el benceno en concentracin de 50mg/L a las 4 h; de 300mg/L en 36h, del tolueno y en 42h con el benceno. DAnnibale et all., (2005), evalu la eficiencia de Phanerochaete chrysosporium y Pleurotus pulmonaris para la mineralizacin de mezclas de aromticos en un suelo contaminado no estril. Se observo que P. chrysosporium y P. pulmonaris degradaron naftaleno, tetraclorobenceno e isomeros de dicloroanilina en 30 das La literatura reporta que los hongos de la PB, as como sus extractos extracelulares, tienen la capacidad potencial para la degradacin de HAPs, razn por la cual se presentan como una alternativa para la biorremediacin de ambientes contaminados con Hidrocarburos aromticos policiclicos (Clemente et al., 2001). Como se menciono, los hongos de la PB sintetizan las enzimas ligninolticas que oxidan los anillos de los HAPs, segn lo reporta Novotny et al., (2000) en un estudio con Ierpes lacteus en un suelo contaminado artificialmente con HAPs y en un medio lquido; I. lacteus degrado HAPS de 3 y 4 anillos,
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aunque en suelo estril no sintetiz la MnP; pero en cultivo esttico con una concentracin de amonio de 45mM, produjo: la LiP, la MnP y la laccasa. Novotny. C., et al. (2000). Observo el desarrollo de hongos de la PB a concentraciones superiores de 25% de hidrocarburos de petrleo en suelo, en donde estos crecen sobre el hidrocarburo o en las interfases suelo - hidrocarburo. En este caso el ataque comienza desde la periferia al centro del aglomerado suelo-hidrocarburo. Este fenmeno se acompaa por un aumento de la porosidad. En una segunda etapa el grumo se disgrega y aumenta su superficie especfica con el consiguiente incremento de velocidad de reaccin, que se ve acelerada cuando la concentracin disminuye, ya que desaparecen los fenmenos de inhibicin. 2.13. Biotratamiento de metales pesados con hongos de la PB Diversas investigaciones han demostrado que los hongos de la PB adems de actuar eficientemente sobre espacios contaminados con hidrocarburos, tienen la capacidad de acumular en su estructura celular deferentes metales pesados, siempre que no se rebasen sus lmites de tolerancia. Durante el crecimiento de Daedalea quercina, en los medios que contenan cantidades equimolares de metales de Zn, Cu y Pb, las concentraciones de los iones de metlicos disminuyeron en un periodo de 30 das (Gabriel. J, et al., 1996). La preferencia individual por los metales pesados es especie-especifica. Se cultivaron durante ocho das cuatro especies de la pudricin blanca Daedalea quercina, Ganoderma applanatum, Pleurotus ostreatus y Schizophyllum commune en medios que contenan solucin de Al, Cd, Pb, y Ca hasta 1mM cada uno. El plomo fue encontrado en P. ostreatus (90.6 M/g), Cd, Al y Ca en G. applanatum (272, 600, y 602M/g, respectivamente). El Pb fue preferentemente acumulado en todos los hongos a excepcin de G. applanatum que acumul mas aluminio. (Favero. N., et al. 1991). 35
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2.14. Biotratamiento Xenobiticos con Pleurotus ostreatus Ferrera. R, et al, (2002). Probo el potencial de P. ostreatus para desarrollarse en medios de cultivo PDA y suelo adicionados con petrleo crudo ligero, expresando crecimiento en los medios de cultivo. El efecto evaluado en los suelos contaminados adicionados con 15% de paja activada inoculada en macetas con suelo sometido a 0, 25,000 y 45,000mg/L de petrleo crudo. Las cepas tuvieron la capacidad de formar cuerpos fructferos a 25,000mg/L en suelo. Demir (2004) investig el efecto de pleurotus ostreatus sobre la mineralizacin de benceno y tolueno a concentracin de: 50, 100, 200, 250 y 300mg/L, en medio de cultivo liquido, a pH 5 y 28C en agitacin. Los resultados indicaron que P. ostreatus consumi el tolueno y el benceno en concentracin de 50mg/L a las 4h; de 300mg/L en 36h, del tolueno y en 42h con el benceno. Han. et al., (2004) reporto que P. ostreatus sintetizo una laccasa en medio de cultivo esttico contaminado artificialmente con fenantreno en concentracin de 100mg/L, la laccasa oxido el fenantreno en un 46% y en un concentracin de 10mg/L., a las 36h, a pH 6 a 30C. Un estudio con P. ostreatus y la adicin del tween 80 (detergente), facilito la degradacin de fenantreno, pireno y benzo[a]pireno en un reactor de contacto biolgico rotatorio, donde los resultados mostraron que el tween 80 aumento la solubilidad de los HAPs, para hacerlo disponible al sistema enzimtico ligninoltico de P. ostreatus que los degrado ms rpidamente (Zheng y Obrad 2002). Los hongos de PB pueden concentrar metales presentes en el sustrato sobre el que se desarrollan a travs de su micelio. Gadd, GM. et al., (2002.). Demostr que Pleurotus ostreatus es capaz de acumular Cd en medios lquidos conteniendo 150 ppm de Cd, acumulando al menos un 20% en su espacio intracelular. Sanglimsuwan, J. et al. (1993). Evalu el crecimiento de Pleurotus ostreatus durante 7 das en medio de cultivo dextrosa papa que contena 5mM de Cu y Zn, 76.5% a una
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P. ostreatus y acumulo 10g/g en peso seco de Cu y 5g/g de peso seco de Zn. Medios de cultivo que contenan 3mM de Cd, el hongo acumul 20g/g de Cd en peso seco.
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III. JUSTIFICACIN Uno de los problemas en el contexto ambiental lo representan los residuos peligrosos, los generados en mayor cantidad aproximadamente el 54% corresponde a derivados del petrleo. De estos los aceites lubricantes que al terminar su vida til, en algunos casos su manejo y disposicin son inadecuados de acuerdo a las normas existentes, que en consecuencia son vertidos al ambiente y contaminando aguas, aire y suelo principalmente este ultimo. En la Ciudad de Durango circulan alrededor de 180 mil vehculos los cuales generan aproximadamente 2 millones de litros de aceite automotriz usado de los cuales aproximadamente solo 240 mil litros, tiene un uso adecuado siendo utilizado para la produccin de ladrillo dentro del Parque Industrial Ladrillero (poblado Pino Surez, Km 25 Carretera al Mezquital), el resto tiene un destino incierto, ya sea, para la produccin de ladrillo en la periferia de la ciudad o bien es vertido en lotes baldos, drenaje y aceras entre otros, causando un grave dao al ambiente de la ciudad y por consecuencia a la salud publica. En los ltimos aos se han implementando una serie de tecnologas para
remediar los suelos contaminados por hidrocarburos, de estas, la biorremediacin ha mostrado mayor eficiencia en la degradacin de los contaminantes hasta formas menos toxicas, mitigando la polucin ambiental. Investigaciones recientes han mostrado que los hongos de la pudricin blanca como Pleurotus ostreatus, Trametes versicolor, Phanerochaete crisosporum algunos otros, y pueden biotransformar, mineralizar hidrocarburos y remover
metales pesados en presentes en agua y suelo. Los hongos de la PB adems de actuar eficientemente sobre espacios contaminados con hidrocarburos, tienen la capacidad de acumular en su estructura celular diferentes metales pesados, siempre que no se rebasen sus lmites de tolerancia.
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Por tal motivo el presente trabajo utilizo una cepa del hongo de la pudricin blanca Pleurotus ostreatus B4 M1 DNA, teniendo en cuenta la capacidad de la especie para oxidar los anillos aromticos de la lignina, y en consecuencia degradar Hidrocarburos Aromticos Policclicos, as como aprovechar su capacidad para bioadsorber metales pesados presentes en aceite automotriz usado, el cual se encuentra como contaminante recalcitrante en suelos y aguas de la ciudad de Durango.
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IV. OBJETIVOS Para el desarrollo de la presente investigacin se plantearon los siguientes objetivos:
4. Objetivo General Determinar el grado de remediacin de suelos contaminados con aceite automotriz usado, utilizando el hongo de la pudricin blanca Pleurotus ostreatus cepa B4 M1 DNA.
4.1. Objetivos particulares Determinar el manejo y disposicin del aceite automotriz usado (AAU) en la CD. de Durango Evaluar el grado de remediacin de las muestras tratadas con Pleurotus ostreatus. Determinar el grado de reduccin y transformacin del benzo (a) pireno en los suelos tratados. Determinar el nivel de remocin de Pb y Zn
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V. HIPTESIS La capacidad enzimtica y bioadsorbente del hongo de la pudricin blanca Pleurotus ostreatus, ofrece un potencial para su utilizacin en procesos de remediacin de suelos contaminados con aceite automotriz usado.
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VI. MATERIALES Y MTODOS 6. La presente investigacin se desarrollo en de tres etapas, que a continuacin se detallan: 6.1. A) Diagnostico sobre el manejo y disposicin de los AAU en la ciudad de Durango. El diagnostico de los aceites en la Ciudad, se elaboro a partir de la aplicacin de encuestas (Anexo A) en 50 talleres de mantenimiento de vehculos y estaciones de servicio (Anexo B), con el fin de conocer lo siguiente: Fuentes de AAU en la Ciudad de Durango El manejo AAU por parte de los dueos y encargados de los TMCA Destino del AAU en la Ciudad. Usos. Encuestas Se diseo y elaboro la encuesta con 20 preguntas tanto abiertas como cerradas. Fue aplicada completamente al azar, a los dueos y responsables de Talleres Mecnicos y de Cambio de Aceite (TMCA) de la ciudad. Se aplicaron 50 encuestas (una por TMCA), durante el periodo del 20 al 30 de junio de 2007. 6.2. B) Caracterizacin fisicoqumica y microbiolgica del suelo Esta etapa se llevo acabo en el laboratorio de biotecnologa y alimentos del CIIDIR-IPN Unidad Durango.
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Muestreo. El rea muestreada se encuentra dentro de un lote usado como taller mecnico (Taller mecnico Chuy), que carece de un techo y piso. La muestra se tomo del sitio que presento mayor contaminacin aparente (mancha de aceite en suelo). La muestra tomada fue de aproximadamente 8 a 9Kg., a 20cm. de profundidad, con un rea de 50x40cm. (Figura8).
Figura 8. Suelo contaminado con AAU
Las muestras fueron colectadas en bolsas de polipapel, selladas y etiquetadas. De igual manera, se tomo una muestra de suelo sin contaminacin aparente, de un lote baldo aledao al taller mecnico (aproximadamente a 50mts del TM) la cual ser usada como un testigo negativo. Las muestras fueron enviadas al laboratorio de biotecnologa del CIIDIR-IPN
Unidad Dgo., cada muestra se dividi en dos partes iguales, una fraccin se conservo en refrigeracin a hasta su uso a una temperatura de 4C, (determinacin de microorganismos y anlisis de hidrocarburos), la otra fue secada a temperatura ambiente, y conservada en bolsas plsticas de polipapel hasta su uso, (pruebas fisicoqumicas y anlisis de metales pesados).
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6.2.1. Caracterizacin fisicoqumica Las tcnicas de caracterizacin fsico-qumica del suelo, se realizaron de acuerdo a la: NOM-021-RECNAT-2000, Que establece las especificaciones de fertilidad, salinidad y clasificacin de suelos. Estudios, muestreo y anlisis. pH El pH se determino de acuerdo a lo establecido el la NOM-021-RECNAT-2000, utilizando un potencimetro HANNAN modelo 3500 Textura Se estableci con base al procedimiento de Bouyoucos, de acuerdo a la NOM021-RECNAT-2000. Materia orgnica Se determino a travs del mtodo de Walkley y Black de acuerdo a la NOM-021RECNAT-2000. Nitrgeno inorgnico Se uso el procedimiento de Kjendal, de acuerdo a la NOM-021-RECNAT-2000 Fsforo aprovechable Se estableci a travs del procedimiento de Olsen y colaboradores, de acuerdo a la NOM-021-RECNAT-2000 Humedad Se hizo por el mtodo gravimtrico propuesto en la NOM-021-RECNAT-2000. 6.2.2. Caracterizacin microbiolgica
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Para la ejecucin de esta etapa se procedi a realizar aislamientos bacterianos de las muestras colectadas. 6.2.2.1. Aislamiento y cuantificacin de bacterias Se pesaron 10g de suelo y se depositaron en un frasco de dilucin el cual contena 90mL de solucin isotnica estril, hecho esto se tapo la botella y se agito por 5 minutos, obteniendo as una dilucin 1:10, de esta dilucin se tomaron 10mL y se colocaron en otra botella con 90mL, de solucin isotnica, agitando durante un minuto, este procedimiento se repiti hasta llegar a la dilucin 1:1000000. De las diluciones 1:10000, 1:100000 y 1:1000000, se tomo una alcuota de 1mL de cada una de las diluciones y se deposito en sus respectivas cajas Petri. A cada una de estas cajas se aadi agar nutritivo a 40C, con movimientos rotatorios se mezclo la alcuota con el medio de cultivo. Una vez que las placas solidificaron se llevaron a la estufa microbiolgica durante 48 h. Pasado este tiempo se realizo el conteo de las colonias desarrolladas. Seleccionando colonias de caractersticas similares y de mayor numero, se realizaron cultivos puros de las mismas, con ayuda de un asa de siembra, se tomaron las colonias seleccionadas y se inocularon en cajas Petri preparadas con agar nutritivo, llevndolas a la estufa microbiolgica para su incubacin por 24 hrs. a 30C. Se observo el color, dimetro, aspecto, bordes, consistencia, produccin de pigmentos de las colonias aisladas. Se prepararon frotis de las colonias aisladas y se tieron, con tincin de Gram., para la observacin de sus caractersticas celulares bajo el microscopio, con el objetivo de 100X. 6.2.3. Caracterizacin de los contaminantes Las tcnicas empleadas para la caracterizacin de los contaminantes
Hidrocarburos Fraccin Pesada (HFP), los Hidrocarburos Aromticos Policclicos 45
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benzo(a)antraceno y benzo(a)pireno, as como los metales pesados Plomo y Zinc, se realizaron con apego a los establecido en la normatividad vigente. 6.2.3.1. Hidrocarburos Fraccin Pesada La determinacin de los HFP se realiz con apego a la NMX-AA-134-SCFI-2006. Se pesaron 10g de suelo y mezclaron con 10g de sulfato de sodio anhidro hasta que no presento grumos, la muestra se vaci a un cono de papel filtro de extraccin y se cubri con algodn. El cono que contena la muestra se coloco en el aparato de destilacin soxhlet, ajustando un matraz de 250mL previamente tarado, el cual contena 125mL de acetona-hexano 1:1, con una parrilla de calentamiento se ajusta la temperatura para proporcionar 20 ciclos/hora, durante 4h (Figura 9).
Figura 9. Aparato de destilacin Soxhlet
Al finalizar la destilacin, el extracto se filtro utilizando papel filtro Whatman N 4, para eliminar las partculas del extracto vacindolo a un matraz, se llevo al rota vapor (Buche B-480) para destilar el disolvente del extracto (Figura 10), terminada la destilacin, el extracto resultante ser el Material Extrable con Acetona-Hexano (MEAH). El matraz que contiene el MEAH se coloco en la estufa por 1hr a 75C para posterior mente enfriar y calentar la muestra sucesivamente hasta peso constante.
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Figura 10. Aparato de destilacin Rota-vapor
Adicionando 90mL de acetona, hexano 1:1 al matraz de ebullicin para redisolver el MAEH, se aadieron 3g de silica gel anhidra G60 y se coloco una barra de agitacin magntica al matraz, agitando por 5 min. Pasados los 5 min. Se filtro la disolucin a travs de un papel filtro Whatnam N 4 humedecido con acetona-hexano 1:1 vaciando el filtrado a un matraz de ebullicin previamente tarado. Hecho esto se procedi a destilar el disolvente en el rota vapor, terminada la destilacin, el matras se llevo a la estufa a 65C por 45min., al retirarlo de la estufa se dejo enfriar y peso, repitiendo este paso hasta peso constante obteniendo as los Hidrocarburos Fraccin Pesada (HFP). 6.2.3.1.1. Separacin de b(a)a y b(a)p de los HFP. Tras la determinacin de los HFP, las muestras se resuspendieron en 2mL de ciclo hexano, con el objetivo de disolver los HAPs presentes en los HFP. Se pesaron 10g de silica gel 40-120 en un vaso de precipitados de 250 ml y se activo calentndola en una estufa a 160C, durante 24h, trascurrido el tiempo se coloco en un desecador hasta alcanzar la temperatura ambiente. Una vez alcanzada la temperatura ambiente, se preparo una mezcla de diclorometano con gel de slice altivada y se procedi a trasvasarlo a una columna de vidrio.
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Se abri la llave da la columna para permitir la cada del diclorometano y antes de que el gel de slice quedara expuesto al aire, se aadieron 40mL de n-hexano dejando eluir. El flujo de descarga fue de aproximadamente de 2mL/min. Una vez eludo el n-hexano y antes de que la slice quedara en contacto con el aire, se aadieron los 2mL, del extracto de HFP, que contenan los HAPs a la columna. Aadiendo 2mL adicionales de ciclohexano para que la transferencia de la muestra fuera completa (figura 11).
Figura 11. Obtencin HAPs por cromatografa en columna
Antes de que la slice quedara expuesta al aire, se aadieron 25mL de n-hexano, permitindolo eluir, y descartando esa fraccin. Por ultimo se aadieron 25mL de una mezcla de diclorometano/n-hexano (2:3), permitiendo eluir, y se colecto en un matraz de 25mL, siendo esta mezcla donde se encuentran disueltos los HAPs. 6.2.3.2. Determinacin de b(a)a y b(a)p mediante Cromatografa de Lquidos de Alta Resolucin (HPLC) con detectores de UV-DAD Las muestras en las que se encuentran los HAPs, se evaporaron con nitrgeno, a la vez que se aadan pequeos volmenes de acetonitrilo (esto con el fin de que el extracto final este disuelto en acetonitrilo).
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Una vez concentradas las muestras a un volumen de 1mL, se precedi a microfiltrarlas para la eliminacin de impurezas, utilizando microfiltros de nylon, con un dimetro de 13mm y tamao de poro de 45 micras, marca Millipore. Hecho lo anterior las muestras se colocaron en viales para HPLC y se aforaron a 2ml, conservndolas en refrigeracin a 4C hasta su inyeccin en el Cromatgrafo de Lquidos de Alta Resolucin (HPLC) marca Perkin Elmer Serie 200 (Figura 12).
Figura 12. Cromatgrafo de Lquidos de Alta Resolucin (HPLC)
6.2.3.2.1. Disoluciones estndar La conservacin de los estndares b(a)a y b(a)p, se realizo bajo condiciones de oscuridad y refrigeracin a 4C. Se prepararon disoluciones de los hidrocarburos aromticos policclicos, b(a)p y b(a)a clasificados por la US EPA como contaminantes prioritarios, a una concentracin de 500g/mL en acetonitrilo.
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6.2.3.2.2. Condiciones cromatogrficas Con base a las referencias bibliogrficas, as como el mtodo 3180 de la US EPA, se utilizo la columna cromatogrfica C18 Perkin Elmer, con flujo en la fase mvil de 1.5mL/min, de una composicin acetonitrilo/agua (gradiente) y detector UVDAD a una longitud de onda 254nm.
Tabla 2 Condiciones cromatogrficas HPLC de la figura 13 Tipo de columna C18 Perkin Elmer N de serie: N9303561 Longitud: 25cm Dimetro Interno. 4.6mm Tiempo (min) 0 5 30 1.5mL/min UV-DAD (254 nm) % Agua 100 60 0 %Acetonitrilo 0 40 100
Composicin de la fase mvil
Flujo Deteccin
Tiempo (minutos)
Figura 13. Cromatograma de una disolucin estndar de los HAPs, b(a)a y b(a)p, a una concentracin de 500g/mL, obtenido con la columna C18 Perkin Elmer, con una longitud de 25cm y un dimetro interno de 4.6mm. Deteccin UV-DAD.
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Con el detector UV-DAD se pudo correlacionar el pico del espectro ultravioleta de los compuestos b(a)a y b(a)p (Figura 14 y 15). El cromatograma se monotorizo a 254nm, por ser una longitud de onda a la que se observa la mejor absorbancia de de estos hidrocarburos.
Figura 14. Espectro UV de benzo(a)pireno
.035
Absorbancia (Abs)
.025
.015
.005
-.005
230
250
270
290
310 N t
330
350
370
390
Longitud de onda (nm)
Figura 15. Espectro UV de benzo(a)antraceno

.055
.045
.035
Abs
.025
.015
.005
-.005 225 235 245 255 265 275 285 295 305 315 325 335
Longitud de onda (nm)
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6.2.3.3. Determinacin de los metales pesados Plomo y Zinc El anlisis de los metales Plomo y Zinc se realizo con apego a lo establecido en la NOM-147-SEMARNAT/SSA1-2004. Se pesaron 0,250g de las muestras, estas se vaciaron en vasos de precipitados y se agregaron 7mL de cido ntrico y 3mL de cido clorhdrico por muestra, dentro de una campana de extraccin las muestras con acido se llevaron a calentar hasta reducir su volumen hasta 1 a 2mL Reducido el volumen, se agrega la misma cantidad de cidos llevando de nuevo a la parrilla de calentamiento tapando en esta ocasin los vasos con vidrios de reloj, los vasos se retiraron de las parrillas cuando contenan un volumen aproximado de 1 a 2mL y se dejaron enfriar, ya fros se agregaron 10mL de HCl 1:1, mas 15mL de agua destilada calentando de nuevo en la parrilla por 10 minutos, hecho esto, se enfriaron para su filtrado, con papel filtro Whatman N 40 y se aforaron a 100mL, esta solucin es la que contiene los metales extrados de las muestras del suelo lista para su anlisis con el Espectrofotmetro de Absorcin Atmica Perkin Elmer Serie 2600 (Figura 16).
Figura 16. Espectrofotmetro de Absorcin Atmica
Tomando una alcuota de 1mL de cada una de las soluciones digeridas y depositndolas en cubetas plsticas de 1mL, estas se colocaron en el equipo de espectrofotometra, para su anlisis, previa calibracin del equipo.
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6.3. C) Ensayo del biotratamiento Previo ensayo de biotratamiento se activo y desarrollo una cepa de Pleurotus. ostreatus B4 M1 DNA, la cual fue utilizada como el agente biorremediador 6.3.1. Aislamiento y proliferacin de P. ostreatus Tomando 3kg de semilla de sorgo se depositaron en un recipiente con agua durante 24hrs para hidratar la semilla, (hasta lograr 50% de humedad), una vez hidratada se llenaron bolsas de plsticas de polipapel, con 500g de semilla, y se esterilizo en autoclave (a 15Lbs/25min.), una vez estril, se dejo enfriar a temperatura ambiente. Bajo condiciones de esterilidad se procedi a inocular la semilla, tomando de 20 a 25g, de micelio activado de P.ostreatus B4 M1 DNA, en sorgo, con ayuda de una cuchara metlica estril y depositndolos en el interior de bolsas, hecho esto se distribuyo el inoculo agitndolo cuidadosamente dentro de las bolsa, para posterior mente dejarlas en incubacin por 15 das a temperatura ambiente, bajo condiciones de oscuridad (Figura 17).
Figura 17. Cultivo de P. ostreatus en grano de sorgo
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6.3.2. Preparacin de Unidades Experimentales Se prepararon matraces de 500mL, previamente esterilizados, a los cuales se le aadieron cantidades conocidas de suelo, agua, e inoculo del hongo en semilla de sorgo, y se homogenizaron para obtener un favorable desarrollo del micelio, en cada una de las unidades experimentales variando el contenido de cada uno de los tres factores mencionados (agua, suelo, inoculo). Preparadas las unidades experimentales, se cubri la boca del matraz con tapones de algodn estriles para permitir el intercambio de gases sin contaminar las unidades experimentales. Hecho esto se incubaron a temperatura ambiente, en condiciones de oscuridad manteniendo la humedad constante. Tomando muestras para el anlisis de cada una de las unidades experimentales a los 0, 15 y 30 das del tratamiento. 6.3.3. Diseo experimental El diseo experimental fue completamente al azar con un arreglo factorial 3 x 3 x 3 para un total de 27 tratamientos (Tabla 3), el factor a corresponde a los tiempo(0, 15 y 30 das) el factor b corresponde a las tres diferentes cantidades de agua presente en los matraces para mantener condiciones de humedad diferentes(65, 75 y 85mL), el factor c corresponde a las tres diferentes concentraciones de inoculo(6.25, 25 Y 62.5g) con dos repeticiones de cada tratamiento, para un total de 54 unidades experimentales (Figura 18).
Figura 18. Unidades experimentales
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Las variables dependientes a determinar son: Reduccin de b(a)a, b(a)p, Pb y Zn.

Tabla 3.- Distribucin de los tratamientos (variables independientes). Tratamiento condicin Factor (a) tiempo/das
T0 T01 T1 T2 T3 T4 T5 T6 T7 T8 T9 T1 T2 T3 T4 T5 T6 T7 T8 T9 T1 T2 T3 T4 T5 T6 T7 T8 T9 SSA SCA SCA SCA SCA SCA SCA SCA SCA SCA SCA SCA SCA SCA SCA SCA SCA SCA SCA SCA SCA SCA SCA SCA SCA SCA SCA SCA SCA 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 15 15 15 15 15 15 15 15 15 30 30 30 30 30 30 30 30 30
Factor (b) humedad/mL

0 0 65 65 65 75 75 75 85 85 85 65 65 65 75 75 75 85 85 85 65 65 65 75 75 75 85 85 85
Factor (c) inoculo/g

0 0 6.25 25 62.5 6.25 25 62.5 6.25 25 62.5 6.25 25 62.5 6.25 25 62.5 6.25 25 62.5 6.25 25 62.5 6.25 25 62.5 6.25 25 62.5
SSA= Suelo sin aceite SCA= Suelo con aceite Factor: a 0 das 15 das 30 das Factor: b 65mL 75mL 85mL Factor: c 6.25g 25g 62.5g
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VII. RESULTADOS 7. Los resultados obtenidos en las diferentes etapas del proyecto se presentan de acuerdo a lo programado en el desarrollo del mismo. Los primeros resultados corresponde a la etapa de: 7.1. Diagnostico del manejo y disposicin de los AAU en la Ciudad de Durango. A continuacin se describen los resultados obtenidos, del diagnostico sobre la disposicin de los AAU, a travs de la aplicacin de encuestas a los dueos y responsables de los talleres mecnicos automotrices y de cambio de aceite (TMCA), existentes en la ciudad. En general en Mxico anualmente se producen aproximadamente 690 millones de litros de lubricantes nuevos, que generan un volumen de 450 millones de litros de lubricantes usados. Para la Ciudad de Durango el parque vehicular es alrededor de 180 mil vehculos, que generan aproximadamente 2 millones de litros de AAU cada ao. Siendo ello un problema por la magnitud del volumen de AAU producido y cuya disposicin en algunos aspectos no es transparente. En Durango hay aproximadamente 700 talleres mecnicos, donde slo el 30 por ciento estn registrados ante la Direccin Municipal de Salud Pblica y Medio Ambiente, para que esta dependencia recoja los 20 mil litros de AAU que se producen mensualmente, que sumados al ao arroja un volumen de 240 mil litros de AAU, para el 70% restante, no se tiene certeza la cantidad de AAU que se producen mensual ni anual y su normatividad existente. El 70% de los TMCA no registrados en la ciudad, en un gran porcentaje son talleres itinerantes que operan en cortos periodos de tiempo en un sitio, una vez que este presenta problemas con las autoridades, se desplazan hacia un nuevo lugar, para seguir operando ilegalmente, dejando reas afectadas con AAU, manejo y disposicin no se sujeta a la
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generando problemas de contaminacin del entorno, con las correspondientes consecuencias para los habitantes del lugar. Los resultados obtenidos al analizar la encuesta aplicada en los 50 TMCA de la ciudad, arrojo informacin importante que se describe de acuerdo al orden establecido en la estructura de la encuesta, el primer aspecto fue lo referente a la infraestructura de los TMCA, es decir, si estos tenan algn tipo de techumbre y piso, as como su cobertura. El 82% contaban con algn tipo de techumbre (desde laminas a losa) y el 74% tenia piso de concreto. La cobertura del techo en algunos TMCA era en el rea de trabajo, de igual manera se mantena este patrn para el piso. En la grafica 1, se muestra su distribucin de este aspecto. La discontinuidad de los techos y pisos crean condiciones para que este residuo pueda alcanzar el suelo, agua y aire del sitio pudiendo infiltrarse, dispersarse, y permanecer largos periodos de tiempos en el rea afectada con AAU.
45 40 35 30 TM 25 20 15 10 5 0 Si Infraestructura No
TM con Techo en su infraestructura TM con Piso en su infraestructura
Grafica 1. Porcentaje de los TMCA con infraestructura de piso y techo.
La Procuradura Federal de Proteccin al Ambiente (PROFEPA), establece que los TMCA deben almacenar AAU en tambos metlicos de 200Lts, etiquetados, fuera del rea de trabajo, y protegidos de los rayos solares , y su permanencia no debe ser mayor a seis meses
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En el 82% de los TMCA almacenan los AAU en tambos metlicos de 200Lts, para que el municipio los recoja para su uso como combustible en la elaboracin de ladrillo en el Parque Industrial Ladrillero (PIL), el 18% restante depositan sus AAU en recipientes plsticos como son las barricas de 20Lts, galones, latas u otros recipientes, que de entrada no se apegan a la normatividad del municipio para su disposicin ver grafica. Ellos lo comercializan para otros usos como son la conservacin de la madera utilizada agricultura.
45 40 35 TM 30 25 20 15 10 5 0 T 200 Contenedores Otros
en la industria de la construccin y la
Contenedores empleados para almacenar AAU en los TM
T200.- Tambos metlicos de 200Lts. Otros.- Recipientes plsticos como barricas de 20Lts, galones etc.
Grafica 2. Porcentaje del tipo de contenedores empleados para almacenar AAU en los TMCA
Con base a la pregunta de la encuesta con respecto al destino de los AAU, en la grafica 3, muestra que el 62% de los TMCA disponen su aceite para la produccin de ladrillo dent del PIL, en colaboracin con el municipio en tanto el 38% de los TM lo canalizan para las actividades mencionadas en el prrafo anterior
35 30 25 TM 20 15 10 5 0 PIL Destino Otros
Diestinos que alcanza el AAU
PIL.- Parque industrial Ladrillero Otros.- Personas ajenas al PIL, que solicitan el AAU de los TM
Grafica 3. Porcentaje de TMCA que disponen sus AAU al PIL y otros sitios
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En lo referente a las de precauciones tomadas por los dueos y/o responsables de los TMCA, el 34% manifest que toma las siguientes medidas de proteccin, utilizar overol y guantes para evitar el contacto directo con el AAU, por el contrario el 66% de los productores no toman alguna precaucin. En la grafica 4, se muestra su distribucin en este aspecto. La falta de informacin y el desconocimiento de los efectos sobre la salud a largo plazo ocasionados por los AAU, es la causa principal por la cual los dueos y responsables de los TMCA no toman algn tipo de precaucin.
35 30 25 TM 20 15 10 5 0 Si Precaciones No
Toma de precaciones al manipular AAU
Grafica 4. Porcentaje sobre la decisin de toma de precauciones por los dueos y responsables de los TMCA
Dentro de las preguntas de la encuesta realizada a los dueos y responsables de los TMCA se les interrogo sobre si experimentaban sntomas de enfermedad como dolor de cabeza o mal estar general, al momento en que mantenan contacto con el AAU el 80% atestiguaron no experimenta alguno de los sntomas mencionados, el 12% afirmo experimentar dolor de cabeza al momento y un 8% manifestaron sentir mal estar general durante el momento de manipulando el AAU. En la grafica 5, se muestra su distribucin en este aspecto. Las preguntas realizadas al respecto, no se realizaron con el fin de evaluar la toxicidad del AAU o la susceptibilidad de los dueos y responsable que presentaron sntomas, solo se fue con fin de conocer la relacin exposicin-sntoma.
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45 40 35 30 TM 25 20 15 10 5 0 DC MG Sintom as Ninguno
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Manifestacion de sintomas al manipular AAU

DC.- Dolor de cabeza MG.- Mal estar general
Grafica 5. Porcentaje de sntomas manifestados por los dueos y encargados de los TMCA durante la exposicin al AAU.
7.2. Caracterizacin fisicoqumica y microbiolgica A continuacin se describen los resultados obtenidos durante la caracterizacin de los parmetros fisicoqumicos del suelo con aceite (SCA) y el suelo sin aceite (SSA) identificando el grado de afectacin provocado por AAU en el SCA (Tabla 4). La cuantificacin de pH, Conductividad y Fsforo aprovechable, no presento diferencia importantes en el SCA con respecto al SSA, indicando que el AAU en el SCA no influyo negativa o positivamente sobre estos parmetros. La determinacin de humedad en el SCA alcanzo un porcentaje del 0.96% mayor que la humedad presentada en el SSA siendo de 0.35%. La Materia Orgnica en el SCA manifiesta la influencia causada por el AAU, elevando el porcentaje de la materia orgnica a un 18.5%, mientras que para el SSA fue de 0.35%. El anlisis de las muestras para la determinacin de nitrgeno Inorgnico en el SCA presento una concentracin de 36.6mg/Kg., menor a la presentada por el SSA que fue de 42.1mg/Kg.
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Los resultados del anlisis de la textura constituyen para el SCA, una textura Franco Arenosa, en tanto el SSA presenta una textura Arenosa.
Tabla 4. Caracterizacin fisicoqumica de las muestras de suelo
Pruebas pH Conductividad Humedad Materia Orgnica Nitrgeno Inorgnico Fsforo aprovechable Textura
SSA 7.8 1.3 dS/m 0.35% 4.9% 42.1 mg/Kg 1.29mg/Kg Arenosa
SCA 7.2 1.1 dS/m 0.96% 18.5% 36.6 mg/Kg 1.28mg/Kg Franco Arenosa
Durante el aislamiento y cuantificacin de bacterias en los SSA y SCA se observo que esto ultimo presento menor carga bacteriana, causada por la presencia del AAU, dado que este impide el intercambio gaseoso en el suelo inhibiendo el desarrollo de microorganismos aerobios (Tabla 5).
Tabla 5. Unidades Formadoras de colonias aisladas de las muestras de suelo
Dilucin SCA 1-4 1-5 1-6 SSA 1-4 1-5 1-6
Suelo Unidades Formadoras de colonias UFC 129000 UFC/g 3400000 UFC/g 0 2120000 UFC/g 8700000 UFC/g 32000000 UFC/g
La morfologa de las colonias bacterianas aisladas, y la consulta bibliogrfica (Manual de Bacteriologa Zinsser., 1998), permiti inferir los gneros bacterianos encontrados durante el anlisis de las muestras, destacando los gneros Pseudomona y Bacillus, adems de colonias de actinomicetos presentes en la
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SCA, estos microorganismos probablemente han logrado utilizar el AAU como fuente de carbono por lo cual se destaca su presencia en el SCA. 7.3. Caracterizacin de los contaminantes A continuacin se describen los resultados obtenidos de los anlisis fsicos y qumico de los contaminantes: Hidrocarburos Fraccin Pesada (HFP), b(a)a, b(a)p, Pb y Zn, presentes en las muestras de suelo. Los anlisis de HFP y Pb en el SCA advirtieron que dicha muestra presento una concentracin superior a los Limites Mximos Permitidos (LMP) para los HFP y las Concentraciones de Referencia totales (CRt) para Pb, que establece la normatividad vigente, en tanto la concentracin de b(a)a y b(a)p se encuentra por debajo de los LMP establecidos, para Zn no existe normatividad que constituya una CRt en suelo. La concentracin de HFP en el SCA es de 8,402.92mg/Kg por encima del Limite Mximo Permitido (LMP) establecido por la NOM-138-SEMARNAT/SSA-2003, que es de 6,000mg/Kg para industriales, 3000mg/kg para suelos agrcolas y residenciales, en contraste con los HFP, presentes en SSA que es de 216.43mg/Kg. En tanto la concentracin de b(a)a y b(a)p, presente en SCA fue de <0.5mg/Kg y 0.18mg/kg respectivamente, inferiores al LMP establecido por la presente norma, 10mg/Kg para suelos industriales y de 2mg/Kg para suelos agrcolas y residenciales (Tabla 6) La concentracin del metal pesado Pb en el SCA fue de 863.95mg/Kg por encima de la Concentracin de Referencia total (CRt) que estable la NOM-147SEMARNAT/SSA1-2004, que es de 750mg/Kg., y en disparidad con el SSA el cual no presento concentraciones detectables de Pb. La determinacin de Zn constituyo para el SCA el mayor nivel de afectacin, presentando concentraciones de 1943.86mg/Kg, el SSA presento una 62
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concertacin de 254.51mg/Kg la diferencia entre ambos suelos es de 1689.35mg/Kg. La normatividad no establece CRt para este metal en suelo, sin embargo a medida que un elemento aumenta su presencia en suelo u otra matriz este terminara afectndola negativamente (Tabla 6). La normatividad establece para aquellos suelos afectados por los AAU cuya concentracin de contaminantes rebase los LMP y las CRt debern ser sometidos a procesos de remediacin.
Tabla 6. Concentracin de los contaminantes HFP, b(a)a, b(a)p, Pb y Zn en SSA y SCA. Pruebas Hidrocarburos HFP HAPs benzo(a)antraceno benzo(a)pireno Metales Pesados Pb Zn 0 mg/kg 284.51mg/kg 863.95mg/kg 1943.86mg/kg 0mg/kg 0 mg/kg < 0.5mg/kg 0.18mg/kg 216.43mg/kg 8402.92mg/kg SSA SCA
7.4. Biotratamiento con el hongo P. Ostreatus A continuacin se describen los resultados alcanzados durante la aplicacin del ensayo de biotratamiento con el hongo de la pudricin blanca Pleurotus ostreatus B4 M1 DNA. Los resultados mostraron que el hongo P. ostreatus es capaz de desarrollarse en suelos afectados con AAU y suelo sin AAU. Tambin se aprecio que los tratamientos en los diferentes suelos presentaron velocidades de crecimiento de P. ostreatus similares, llegando a colonizar la superficie y parte interna del suelo. Al finalizar la preparacin de los tratamientos se determino la concentracin de Pb, Zn, b(a)a y b(a)p (cero das del montaje de los tratamientos), pasados 15 y 30
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das se realizaron nuevas tomas de muestra para evaluar el nivel de remocin y degradacin de dichos contaminantes. 7.4.1. Descripcin de resultados alcanzados para Pb y Zn La determinacin de los metales Pb y Zn en los tratamientos a los cero das presentaron una concentracin constante en cada una de las unidades experimentales establecidas, con respecto a T01 (SCA sin tratamiento biolgico). Los resultados obtenidos para Zn en los tratamientos (T1 a T9) pasados 15 das establecen a T6 como el tratamiento ms eficiente 28.4% de remocin, mientras T1 obtuvo la menor remocin 7.2 %. Los tratamientos pasados los 30 das, establecen a T9 como el tratamiento ms eficiente 46.3%, seguido de T3 44.4% y T6 43.9% de remocin, en contraparte T4 obtuvo la menor eficiencia 23% (Tabla 7).
Tabla 7. Distribucin de los tratamientos de acuerdo a su concentracin y % remocin de Zn Tratamientos T0 T01 T1 T2 T3 T4 T5 T6 T7 T8 T9 0 das 284.512 1943.835 1943.835 1943.835 1943.835 1943.835 1943.835 1943.835 1943.835 1943.835 1943.835 % de Remocin 0 das 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 15 das 284.512 1943.835 1802.278 1567.353 1401.686 1614.092 1723.286 1389.11 1792.439 1636.118 1529.273 % de Remocin 15 das 0 0 7.25 19.36 27.89 16.96 11.34 28.47 7.78 15.83 21.32 30 das 284.512 1943.835 1395.893 1142.707 1080.301 1496.064 1097.576 1089.77 1361.157 1225.751 1043.834 % de Remocin 30 das 0 0 28.18 41.21 44.42 23.03 43.53 43.93 29.97 36.94 46.30
En la grafica 6 pueden observarse los comparativos de remocin de Zn en los tratamientos durante los tiempos establecidos.
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2500 PresenciadeZnmg/ Kg 2000 1500
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0 das 1000 500 0 T0 T01 T1 T2 T3 T4 T5 T6 T7 T8 T9 T ra ta m ie n tos 15 das 30 das
Grafica 6. Presencia de Zn al finalizar el anlisis de los tratamientos.
Al Someter los tratamientos a un anlisis de varianza (ANOVA), mediante el programa estadstico COSTAT 3.0, teniendo como variable independiente la concentracin de Zn y Pb, los tratamientos mostraron: diferencias altamente significativas, significativas y no significativas para los diferentes factores y sus interacciones. ANOVA para Zn mostr, diferencias altamente significativas (***) para el factor a, c y la interaccin a*c, significativas (*) para la interaccin a*b*c y finalmente no significativa (ns) para el factor b, interacciones b*c, y a*b, La tabla 8 muestra los resultados de dicho anlisis (Tabla 8).
Tabla 8. Anlisis de varianza factorial en los efectos de a, b, c y sus interacciones (variable Zn) ANOVA df Principales efectos Tiempo (a) Humedad (b) Inoculo (c) Interaccin b*c a*c a*b 4 4 4 5878.6968053 69695.617329 6816.4887056 .4675 .0000 .3930 ns *** ns 2 2 2 2383270.4932 2601.4070528 240549.65194 .0000 .6700 .0000 *** ns *** MS P
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Lus Adn Rosales M. Maestra en Ciencias en Gestin Ambiental a*b*c Error 8 27 17420.144014 6400.5716027
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ns, *** (niveles de significancia), ns no significativo, *** altamente significativo, * significativo
Tras los resultados mostrados por ANOVA, se procedi a realizar la prueba de medias Duncan con un intervalo de confianza del 95%. La prueba de medias, para el factor a mostr que los tratamientos a los 30 das, presentaron mayor remocin de Zn, seguidos por el tiempo 15 das, finalmente cero das con menor eficiencia. En tanto el factor b no presenta diferencias estadsticas en las tres concentraciones establecidas de humedad. El factor c mostr que los tratamientos con inoculo de 62.5g presentaron mayor remocin de Zinc, seguido del inculo de 25g y finalmente el de 6.25g con menor eficiencia. En la tabla 9, se muestra su distribucin en este aspecto.
Tabla 9. Tabla resumen de la prueba de Duncan para los factores a y c (variable Zn) Pruebas de Duncan Nivel de significancia 0.05 Factor a Media Repeticin 1217.00305556 1612.014 1943.835 Factor c 3 2 1 1480.9415 1580.4773889 1711.4331667 18 18 18 a b c 18 18 18
Tratamiento 3 2 1
Intervalos de no significancia a b c
Los resultados de los tratamientos (T1 a T9) para Pb a los 15 das establecen a T8 como el tratamiento mas eficiente 14.4%, mientras T1 y T4 no presentaron remocin, ambos con 0.0%. Los resultados a los 30 das establecen a T7 como el tratamiento ms eficiente 17.8%, seguido de T2 16.8%, a diferencia de T6 y T1 que presentaron la menor eficiencia 5.5 y 5.7% respectivamente (Tabla 10).
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Tabla 10. Distribucin de los tratamientos de acuerdo a la concentracin y % de remocin de Pb Tratamientos 0 das % de Remocin 0 das 0 0 T0 863.95 0 T01 T1 863.95 0 T2 863.95 0 T3 863.95 0 T4 863.95 0 T5 863.95 0 T6 863.95 0 T7 863.95 0 T8 863.95 0 T9 863.95 0 15 das 0 863.95 863.95 797.43 855.26 863.95 768.86 827.40 769.85 739.22 824.18 % de Remocin 30 das % de Remocin 15 das 15 das 0 0 0 0 863.95 0 0 813.97 5.7 7.6 718.693 16.8 1.0 778.96 9.8 0 796.14 7.8 11.0 762.29 11.7 4.2 805.68 6.7 10.8 710.13 17.8 14.4 738.10 14.56 4.6 801.68 7.2
En la grafica 7 pueden observarse los comparativos de remocin de Pb en los tratamientos durante los tiempos establecidos.
1000 P resencia de P b mg/Kg 900 800 700 600 500 400 300 200 100 0 T0 T01 T1 T2 T3 T4 T5 T6 T7 T8 T9 T ra ta m ie ntos 0 das 15 das 30 das
Grafica 7.- Presencia de Pb al finalizar el anlisis de los tratamientos.
Los resultados del anlisis de varianza para los tratamientos a los que se realizo la determinacin de Pb (Tabla 11), muestran diferencias altamente significativas para el factor a, significativa para la interaccin a*b, no significativas, en los factores b, c y la interaccin b*c, interaccin a*c, y a*b*c.
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Tabla 11. Anlisis de varianza factorial en los efectos del a, b, c y sus interacciones (variable Pb) ANOVA Fuente Principales efectos a b c Interaccin b*c a*c a*b a*b*c Error 4 4 4 8 27 2072.1630679 2275.4296729 10700.459977 2914.7389142 3242.5979619 .6392 .5976 .0252 .5312 ns ns * ns 2 2 2 40368.907589 8201.4474406 5457.850449 .0001 .0984 .2047 *** ns ns df MS P
La prueba de medias, para el factor a mostr que los tratamientos a los 30 das, presentaron mayor remocin de Pb, seguidos por el tiempo 15 das, finalmente cero das con menor eficiencia. En tanto el factor b no presenta diferencias estadsticas en las tres concentraciones establecidas de humedad. El factor c mostr que los tratamientos con inoculo de 25g presentaron mayor remocin de Pb, y con una eficiencia similar los tratamientos con 62.5 y 6.25g (Tabla 12).
Tabla 12. Tabla resumen de la prueba de Duncan para los factores a y c (variable Pb) Pruebas de Duncan Nivel de significancia 0.05 Factor a Media Repeticin 769.51922222 810.388555556 863.98 Factor c 2 1 3 790.71683333 821.36072222 836.78521222 18 18 18 a ab b 18 18 18
Tratamiento 3 2 1
Intervalos de no significancia a b c
Los resultados de los diferentes tratamientos muestran que P.ostreatus cuenta con mayor potencial de absorber el metal pesado Zn y en menor grado a Pb el
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cual presenta baja respuesta de bioadsorcin. Esto bajo las condiciones a las que establecieron los tratamientos. 7.4.2. Descripcin de los resultados alcanzados para los HAPs, b(a)a y b(a)p. La determinacin de los hidrocarburos b(a)a y b(a)p iniciado el tratamiento a los cero das no presento diferencias significativas con respecto tratamiento testigo sin hongo (T01), siendo los tratamientos a los cero das similares a T01 . Tomando como base la concentracin <0.5mg/kg, de benzo(a)antraceno con un rea de 1925789.48, presente en el tratamiento testigo sin hongo (T01), y siendo las reas de los tratamientos problema, menores a lo presentada por T01, se establece que la concentracin de b(a)a en todos los tratamientos a los 15 das ser <0.5mg/Kg Los resultados para b(a)a, a los 15 das muestran a T9 como el tratamiento ms eficiente, al presentar el tamao de rea mas bajo 43789,81, seguido de T8 con un rea de 48167.58, finalmente T4 se constituye como el menos eficiente con 345567.56, estas reas corresponden a una concentracin <0.5mg/Kg por debajo del LMP establecido por la NOM-138-SEMARNAT/SSA-2003 (Figuras. 19,20 y 21). El Anexo C muestra los cromatogramas de los tratamientos a los 15 das del experimento. La posible degradacin del estndar de benzo(a)antraceno as como las condiciones cromatograficas establecidas, impidieron se realizara una curva de calibracin y con ello se pudiera determinar las concentraciones del analito en cuestin en los tratamientos, as como su manejo estadstico.
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Las figuras 19, 20 y 21, muestran los cromatogramas de los tratamientos T9, T8 y T4 donde el pico cromatogrfico numerado con el #1 corresponde al benzo(a)antraceno.
T9
Abs
2
T8
Abs
1 2
Tiempo (minutos) Figura 19. Cromatograma del tratamiento T9 Figura 20. Cromatograma del tratamiento T8
Tiempo (minutos)
70

1
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T4
2
Abs
Tiempo Figura 21. Cromatograma del tratamiento T4
Los resultados para b(a)p a los 15 das, establecen a T3 como el tratamiento ms eficiente, al presentar una concentracin <0.00078mg/Kg, seguido de T8 <0.00078mg/kg, finalmente T4 obtuvo la menor eficiencia al mostrar una concentracin de 0.0022mg/kg (Figuras 22, 23 y 24). La concentracin de los tratamientos para la variable b(a)p, se realizo por correlacin rea-Concentracin de la concentracin mas baja alcanzada en la curva de calibracin (Grafica 8), destacando que el contenido de b(a)p en T01 as como en los tratamientos, se encuentra por debajo del LMP establecido por la NOM-138-SEMARNAT/SSA2003.
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1,400 1,200 y = 10,315x + 0,1262 R2 = 0,9362
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rea rafica Area cromatog
1,000 0,800 0,600 0,400 0,200 0,000 0 0,02 0,04 0,06 0,08 0,1 0,12
Concentracin concentracin m mg/kg g/kg Grafica 8. Curva de calibracin del estndar benzo(a)pireno
Las figuras 22, 23 y 24, muestran los cromatogramas de los tratamientos T3, T8 y T4 donde el pico cromatogrfico numerado con el #2 corresponde al benzo(a)pireno.
T9 T3
Abs
1 2
T8
Abs
1 2
1 2
Tiempo (minutos) Figura 22. Cromatograma del tratamiento T3 T8
Tiempo Figura 23. Cromatograma del tratamiento
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T4
2
Abs
Tiempo Figura 24. Cromatograma del tratamiento T4
La grafica 9 muestra el compartimiento de las reas cromatogrficas de b(a)a y b(a)p, en los tratamientos a los 15 das del experimento.
2500000 2000000 1500000 1000000 500000 0 T0 T01 T1 T2 T3 T4 T5 T6 T7 T8 T9
rea
b(a)a b(a)p
Tratamientos
Grafica 9.- Presencia de b(a)a y b(a)p al finalizar los anlisis a los 15 das del montaje de los tratamientos.
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Finalmente los resultados de los tratamientos pasados 30 das hacia el final del experimento, no presentaron concentraciones detectables de los analitos b(a)a y b(a)p, bajo el mtodo cromatogrfico establecido(Tabla 13).
Tabla 13. Distribucin de los tratamientos de acuerdo al promedio a las reas cromatograficas de b(a)a y b(a)p Tratamientos T0 T01 T1 T2 T3 T4 T5 T6 T7 T8 T9 rea a 0 das b(a)a 0 1925789.48 1925789.48 1925789.48 1925789.48 1925789.48 1925789.48 1925789.48 1925789.48 1925789.48 1925789.48 b(a)p 0 1181887.44 1181887.44 1181887.44 1181887.44 1181887.44 1181887.44 1181887.44 1181887.44 1181887.44 1181887.44 rea a 15 das b(a)a 0 1922280.16 234716,75 278753,41 74800,77 345567,56 199028,13 197964,08 168191,57 48167,58 43789,81 b(a)p 0 1695280.42 167495,08 43211,585 18542,995 239857,51 81351,855 89549,555 140095,44 30391,1 30677,33 rea a 30 das b(a)a 0 1922453 0 0 0 0 0 0 0 0 0 b(a)p 0 1461749.97 0 0 0 0 0 0 0 0 0
Las condiciones cromatograficas establecidas que impidieron realizar una curva de calibracin adecuada para b(a)p y la falta de esta para b(a)a, dada una posible degradacin del estndar, impidieron realizar un tratamiento estadstico de los resultados para ambos analitos. Pese a lo anterior se destaca la reduccin y/o degradacin de b(a)a y b(a)p, en los suelos afectados con AAU, estableciendo que al reducir el tamao del rea cromatogrfica de ambos analitos en los tratamientos su concentracin tambin lo har, dada la relacin rea-concentracin.
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VIII. DISCUSION El El diagnostico sobre la disposicin de los AAU revelo lo siguiente: proyecto de Norma NOM-101-ECOL-1996 sobre los requisitos y
especificaciones para el manejo de lubricantes usados establece: La prohibicin de todo tipo de vertido de lubricantes usados, en cualquier cuerpo de agua, sistemas de drenaje y alcantarillado. La prohibicin de su depsito o vertido directo sobre el suelo, al igual que cualquier tipo de incineracin a cielo abierto. La obligacin por parte del pequeo generador, de llevar un control de adquisicin de aceites nuevos y de generacin de aceites usados. La presente investigacin expuso que el manejo y disposicin del AAU en algunos aspectos no es transparente, contribuyendo a este problema los TMCA que no se apegan a la normatividad, presentando infraestructura insuficiente, reas inadecuadas para el almacenado AUU, derrames de AAU en reas desnudas de suelo, carencia de trampas de aceite en la alcantarillas, adems de operar de manera ilegal e itinerante dentro de la Ciudad de Durango. A continuacin se detallan las discusiones referentes a los parmetros microbiolgicos y fisicoqumicos del suelo afectado con AUU. Las propiedades biolgicas sufren modificaciones cuando se contamina un suelo por hidrocarburos. Los microorganismos necesitan un microhbitat adecuado para ejercer su actividad, esto se puede ser alterado negativamente por la introduccin de xenobiticos como los hidrocarburos (Lesser, I. 1995). Con base a lo anterior nuestra investigacin reporto una carga bacteriana en el SCA menor comparada con un testigo de SSA, esta diferencia puede ser influenciada por las caractersticas de persistencia y difusin del AAU en suelo as como de las sustancias toxicas que lo conforman.
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Las propiedades qumicas del suelo ms afectadas por un derrame de hidrocarburos son el aumento del carbono orgnico, ya que el 75% del carbono del petrleo es oxidable; la disminucin del pH, debido a la acumulacin del carbono orgnico y generacin de cidos orgnicos y el aumento del fsforo disponible (Lesser, I. 1995). Martines, V. E. (2008), investig el efecto sobre pH y conductividad elctrica en suelos contaminados artificialmente con hidrocarburos (fuel oil), estableciendo que no se presentaron cambios de importancia en ambos patrones. Las pruebas realizadas en la presente investigacin para pH y Conductividad no presentaron cambios significativos en los SCA confrontados con los SSA, siendo un pH neutro para el SCA, y ligeramente alcalino para SSA. Para ambos suelos la conductividad fue muy ligeramente salina de acuerdo a lo establecido por la NOM021-RECNAT-2000, La NOM-021-RECNAT-2000 para el parmetro Fsforo Aprovechable establece para suelos neutros y alcalinos que una concentracin menor a 5.5mg/Kg se considerara como un suelo bajo en fsforo. El Fsforo Aprovechable, presente en los SCA y SSA, presentaron
concentraciones de 1.28 y 1.29mg/Kg fsforo respectivamente, determinando que su contenido es bajo. Martines, V. E. (2008), en su investigacin establece que el contenido de materia orgnica en suelos afectados por hidrocarburos, presenta incrementos proporcionales al contenido de hidrocarburos, donde 150,000mg/Kg de diesel en suelo alcanzo 21.22% el cual comparado con un suelo testigo sin diesel presento 6.11% La Materia Orgnica en la presente investigacin para el SCA fue 18.5%, en comparacin con del SSA 0.35%, esta diferencia se debe a la mezcla de hidrocarburos que conforman el AAU los cuales son compuestos orgnicos.
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(Lesser, 1995). Establece que ante un derrame de hidrocarburos del petrleo las propiedades fsicas del suelo ms afectadas son su estructura (debido a la ruptura de los agregados), aumento de la retencin del agua en la capa superficial y potencial hdrico. Al determinar el porcentaje de humedad en el presente trabajo, la humedad para el SCA fue de 0.98% mayor el presentado en SSA 0.35%, esta diferencia puede estar dada por lo establecido por Lesser. La NOM-021-RECNAT-2000 para Nitrgeno Inorgnico en suelo establece que un rango de 20-40mg/Kg es una concentracin media de nitrgeno, arriba de 4060mg/Kg su concentracin es alta. Las concentraciones de Nitrgeno inorgnico en los SCA y SSA, 36.6mg/Kg para el SCA siendo una concentracin media y para concentracin fue de 42.1mg/Kg alta de a la norma. Prez, G., et al. (2008), los resultados presentados en su investigacin indicaron que un suelo testigo (sin hidrocarburos) presenta una baja presencia de arcillas y limos comparada con las cantidades presentes en el suelo de estudio afectado por hidrocarburos sometido a procesos de biorremediacin. La textura en el presente trabajo constituyo para el SCA, una textura Franco Arenosa, en tanto el SSA presento una textura Arenosa. Las discusiones referentes al contenido de HFP, benzo(a)pireno, Pb y Zn, se realizaron teniendo como base los LMP y CRt establecidos por la normatividad nacional vigente. La NOM-138-SEMARNAT/SSA-2003, establece Limites Mximos Permisibles para Hidrocarburos Fraccin Pesada en suelo siendo de 6,000mg/Kg para suelos industriales. fueron de SSA la
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El presente trabajo determino que la concentracin de HFP en el suelo afectado con AAU fue de 8,402.92mg/Kg por encima del Limite Mximo Permitido (LMP) establecido por la NOM-138-SEMARNAT/SSA-2003. En tanto la concentracin de benzo(a)pireno alcanzo una concentracin de 0.18mg/Kg, inferior al LMP establecido por la presente Norma, siendo de 10mg/Kg para suelos industriales. La NOM-147-SEMARNAT/SSA1-2004, establece Concentraciones de Referencia totales para Plomo en suelo de 750mg/Kg para suelos industriales. El contenido de Pb en el suelo afectado con AAU alcanzo una concentracin de 863.95mg/Kg por encima de la establecida por la norma. En metal pesado Zn en el suelo afecto con AAU, presento una concentracin con 1943.86mg/Kg. La normatividad nacional no establece CRt para este metal en suelo, sin embargo a medida que un elemento aumenta su presencia en suelo u otra matriz este terminara afectndola negativamente. A continuacin se presenta la discusin sobre el ensayo de biotratamiento aplicado a los suelos afectados con AAU usando como agente remediador al hongo de la pudricin blanca Pleurotus ostreatus B4 M1 DNA. Los hongos de la pudricin blanca con Pleurotus ostreatus y otras especies tiene la capacidad de remover algunos metales pesados, as mismo de degradar diferentes compuestos orgnicos como es el caso de los hidrocarburos aromticos policclicos. Novotny. C., et al. (2000). Observo el desarrollo de hongos de la PB a concentraciones superiores de 25% de hidrocarburos de petrleo en suelo, en donde estos crecen sobre el hidrocarburo o en las interfaces suelo hidrocarburo. En este caso el ataque comienza desde la periferia al centro del aglomerado suelo-hidrocarburo.
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Ferrera. R, et al, (2002). Probo el potencial de P. ostreatus para desarrollarse en suelo adicionados con petrleo crudo ligero, a concentraciones de 0, 25,000 y 45,000 mg/L, adicionados con 15% de paja activada con la cepa del hongo. P.ostreatus tuvo la capacidad de formar cuerpos fructferos en los suelos con 25,000mg/L. Con base a lo anterior el hongo de la pudricin blanca Pleurotus ostreatus B4 M1 DNA, fue capas de desarrollarse colonizando la superficie y parte interna del suelo afectado con AUU a concentraciones de 8,402.92mg/Kg. Demir. (2004), investig el efecto de P. ostreatus sobre la mineralizacin de
benceno y tolueno a concentracin de: 50, 100, 200, 250 y 300mg/L, en medio de cultivo liquido, a pH 5 y 28 C en agitacin. Los resultados indicaron que P. ostreatus consumi el tolueno y el benceno en concentracin de 50mg/L a las 4 h; de 300mg/L en 36 h, del tolueno y en 42 h con el benceno. Un estudio con P. ostreatus y la adicin del tween 80 (detergente), facilito la degradacin de fenantreno, pireno y benzo[a]pireno en un reactor de contacto biolgico rotatorio, donde los resultados mostraron que el tween 80 aumento la solubilidad de los HAPs, para hacerlo disponible al sistema enzimtico ligninoltico de P. ostreatus, (Zheng y Obrad 2002). DAnnibale et all., (2005), evalu la eficiencia de Phacharonaete chrysosporium y Pleurotus pulmonaris para la mineralizacin de mezclas de aromticos en un un suelo contaminado no estril. Se observo que P. chrysosporium y P. pulmonaris degradaron naftaleno, tetraclorobenceno e isomeros de dicloroanilina en periodo de 30 das. De acuerdo a lo anterior, se evalu el potencial de P. ostreatus B4 M1 DNA para degradar benzo(a)antraceno y benzo(a)pireno, en suelos afectados con AAU, logrando la degradacin de benzo(a)pireno hasta en un 92.2% (tomando como base el rea cromatogrfica) durante 15 das de tratamiento, y estableciendo concentraciones no detectables en un periodo de 30 das. En el caso de 79
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benzo(a)antraceno el comportamiento fue similar, la eficiencia mxima alcanzada fue un 97.4%. La eficiencia establecida para el b(a)p corresponde a una concentracin <0.00078mg/kg y para b(a)a es <0.5mg/kg, por debajo del LMP establecido por la NOM-138-SEMARNAT/SSA-2003 Estudios realizados por Gadd, GM. et al., (2002.), demostr que Pleurotus spp es capaz de acumular Cd en medios lquidos conteniendo 150ppm de Cd, acumulando al menos un 20% en su espacio intracelular. Sanglimsuwan, J. et al., 1993. Evalu el crecimiento de Pleurotus ostreatus durante 7 das en medio de cultivo papa dextrosa (PDA), que contena 5mM de Cu y Zn, P. ostreatus y acumulo 10g/g peso seco de Cu y 5g/g de peso seco de Zn. Para medios que contenan 3mM de Cd, el hongo acumul 20g/g de Cd de peso en vaco. Los resultados obtenidos con el hongo de la pudricin blanca Pleurotus ostreatus B4 M1 DNA en suelos contaminados con AUU, P. ostreatus removi un 34% de la concentracin inicial de 1943.835mg/Kg de Zn a los 15 das y un 46.3% a los 30 das. Investigaciones como las de Rodrguez, Katia. 2005. logro la remocin de plomo con una eficiencia del 7.1% luego de 15 das de tratamiento utilizando a Pleurotus spp sobre suelos contaminados con plomo a una concentracin mayor a 100mg/kg. Al evaluar la remocin de Pb por el hongo Pleurotus ostreatus B4 M1 DNA se determino que a 15 das removi 14.4% y para los 30 das, esta fue mayor sumando un 17.8% de la concentracin inicial de 863.95mg/kg de Pb en suelo contaminado con AUU. Por lo anterior los resultados obtenidos con el hongo Pleurotus ostreatus B4 M1 DNA muestran ndices de remocin aceptables de los metales Zn y Pb de los suelo contaminado con AUU en condiciones apropiadas de temperatura,
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humedad, tipo de suelo, tamao de inoculo, concentracin. Para el Pb su remocin puede ser acrecentada si se manipulan los parmetros de humedad, tamao del inoculo y especie o variedad del hongo Pleurotus y considerar la susceptibilidad del hongo a la toxicidad del contaminante.
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IX. CONCLUSIONES La disposicin y manejo del AAU en la Ciudad de Durango en lo general no se apega a la norma correspondiente. Los TMCA encuestados entregan los aceites para la produccin de ladrillo, en concordancia con el municipio. El 70% de los TMCA en la ciudad no cuentan con programas de manejo de AAU. La mayora de los TMCA encuestados no se apegan a la reglamentacin
municipal referente a infraestructura de piso y techo. Lo AAU afectan las condiciones fisicoqumicos y microbiolgicos de los suelos alterando su fertilidad. Los AAU contaminan los suelos con metales pesados como Pb y Zn. P. ostreatus B4 M1 DNA degrada una variedad de HAPs entre estos el
benzo(a)antraceno y benzo(a)pireno, presentes en suelos afectados con AUU. P. ostreatus B4 M1 DNA puede remover los metales pesados Pb y Zn en los suelos contaminados con AUU a travs de procesos de bioadsorcion. P. ostreatus B4 M1 DNA es un agente remediador para la limpieza de suelos afectados con AUU ambientalmente seguro y econmicamente viable.
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X. RECOMENDACIONES De acuerdo a la reduccin y degradacin alcanzada por Pleurotus ostreatus B4 M1 DNA de los diferentes componentes de AAU en suelo, se propone realizar otros estudios con este hongo y desarrollar tecnologas para la remediacin de suelos contaminados por hidrocarburos y otros contaminantes donde el hongo pudiera actuar. As evaluar otras especies de hongos de la pudricin blanca para remediar reas afectadas por estos y otros xenobioticos.
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XI. SUGERENCIAS PARA TABAJOS FUTUROS Los resultados obtenidos en el presente trabajo marcan algunas nuevas investigaciones en: La identificacin de zonas afectadas por aceites usados y otros contaminares orgnicos, as como evaluar sus efectos ambientales y toxicolgicos en la poblacin. Probar nuevos hongos de la pudricin blanca en el biotratamiento de suelos. Realizar estudios sobre la toxicidad a mediano y largo plazo del AUU en animales y seres humanos. Realizar estudios para estandarizacin de procesos de Biorremediacin suelos contaminados con AAU Establecer la metodologa mas adecuada para implantar esta tecnologa en las reas afectadas con AAU in situ. para pautas para
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XIII ANEXOS
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Anexo B
Inventario de talleres mecnicos y negocios de cambio de aceite Direccin Nombre 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 Acides y filtros corremaxx Lemans Lubricantes y refacciones torres Lubricantes Ayala Servicio mecnico Betancourt HL Lubricantes Toito Gutirrez Aceites Jurez Lubricantes y refacciones Vizcaya Aceites Gaviln Aceites y filtros speed Auto lavado y cambio aceite s/n Dannys Taller Soto Aceites y lubricantes Bebetos Taller Delgado Los Bhos Taller Rayju Servicios Madrid Lermas Taller el camel Taller Juan Taller Atos Taller el Ranchero Taller y Refaccionara Central Aceites y partes para afinacin Taller Mecnico s/n centenario 511 Col cuarto Centenario Senote Valladolid 108 Col Azcapotzalco Dolores del Ro 312 Dolores del Ro 815 Col. Cinega Col. Felipe ngeles 1406 Circuito interior 805 Circuito interior 109 Nasas 509 Col. Valle del Guadiana Nogal 1003 Col, Sta. Maria Guadalupe 1517Nte. Zona centro Chapultepec 421 Frac. Benito Jurez Avenida Cuauhtmoc s/n Fracc. Huisache 1 Hitzilopochtli 255 Frac Huisache 1 Zaragoza1382 Nte. Zona Centro Golondrinas 193 Frac. Silvestre Revueltas Avenida Florida s/n Col. Benito Juares Santos Degollado 657 Col. Benito Jurez Santa Ma. Del Oro 460 Col Hipdromo Npoles 10 Col. Universal Gabino Barreda 2209 Col Zona centro G. Antonio 605 Col. Guadalupe Santiago Papasquiaro 406 Col. Hipdromo Patria Libre 112 Col. Asentamientos Humanos Italia 104 Col. Universal Plutarco Elas Calles 406 Col. Santa Fe Everardo Gamiz 509 Col. Santa Fe Talio 502 Col. Lus Echeverra Circuito Interior 106 Col. Solidaridad 2 de oct. L10 M13 carr. Mazatln Col. Tierra y Libertad Car. Parral L6 M2 Frac. La Forestal Patria y Libertad 103 Col. Asentamientos Humanos Frac. Jardines Jesus Garcia 320 Col. Jos Angel Leal Blvd.. Jos Ma. Patoni 293 Col. Jos ngel Leal Jesus Garcia 338 Col. Jos Angel Leal Carlos Gereca s/n. Col. Las Flores Valle del Sur Mariano Arrieta 467 Fracc. Domingo Arrieta Patria y Libertad 378 Col. Asentamientos Humanos Mina 337 Barrio de Analco Elorriaga 370 Centro Pino Surez 509 Centro
29 Lubricantes Rigo 30 Los Bulldogs 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 Hernndez Mr. Engine Taller Mecnico s/n Lubricantes Maya Taller el chupila Taller Valdo Alczar Volks Felmont Taller Chuy Taller Mecnico Analco Diagnostico y afinacin Galva Mecnica y Lubricacin Meras
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Lus Adn Rosales M. Maestra en Ciencias en Gestin Ambiental 43 44 45 46 47 48 49 50 Taller Hermanos Sosa Taller Hermanos Cabral Aceites Polo Taller Mecnico Queen Aceites y Refacciones Corona Taller Snchez Taller Mecnico s/n Aceites y Refacciones el arroyo
CIIDIR-IPN Durango Santa Maria 103 Centro Miguel Garca Obeso 235 Col del Valle Centenario 118 IV Centenario Patria Libre 441 Col. Juan Lira Jos Gpe. Rodrguez s/n Col. Felipe ngeles Salvador Gamiz Fdez. s/n Col. Felipe Angeles 3 de Mayo Col. Miguel de la Madrid Lus Donaldo Colosio 398 Col. Ejidal
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Anexo C
Cromatogramas de los tratamientos a los 15 das del experimento, donde 1 es benzo(a)antraceno y 2 es benzo(a)pireno.
T1
T2
T3
Abs
Abs
1 2
Abs
Tiempo
Tiempo
Tiempo
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T4
T5
T6
1 2 2 2
Abs
Abs
Tiempo
Tiempo
Abs
Tiempo
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T7
T8
T9
1 1 2 2
Abs
Abs
Abs
Tiempo
Tiempo
Tiempo
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Figura 1. Reaccin de oxidacin de hidrocarburos del aceite lubricante (Benavente, G. 1999.).

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Figura 3. Estructura de algunos hidrocarburos aromticos policclicos (Rochow, E.G. 1981).

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Figura 4. Caractersticas del benzo(a)pireno (Rodrguez. C, et al. 2002).

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Lus Adn Rosales M. Maestra en Ciencias en Gestin Ambiental Benzo(a)antraceno

Benzo[a]antraceno C18H12 228.30 g/mol 11.35 g/cm3 160 C 400 C c1\cc2\cc/cc3ccc4cc5ccccc4c1c3c21

Figura 5. Estructura qumica Benzo(a)antraceno (Rodrguez. C, et al. 2002).

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Figura 6. Fases del suelo (Luque, J. 1995).

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Biolgicos: a) b) Biorremediacin Fitorremediacin

2. Tratamientos ex situ Trmicos: a) b) Desorcin trmica Incineracin

Biolgicos: a) b) c) Laboreo agrcola Biopilas Biodegradacin en reactor

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Figura 7. Pleurotus ostreatus. (Naranjo, J.N. 2006)

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Figura 8. Suelo contaminado con AAU

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Hidrocarburos Fraccin Pesada (HFP), los Hidrocarburos Aromticos Policclicos 45

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Figura 9. Aparato de destilacin Soxhlet

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Figura 10. Aparato de destilacin Rota-vapor

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ns, * (niveles de significancia), ns no significativo, * altamente significativo, * significativo