UNIVERSIDADE FEDERAL DE ALFENAS

JOSIEL MARTINS COSTA

ESTERILIZAO E PURIFICAO DE BIOPRODUTOS

Poos de Caldas/MG 2013

JOSIEL MARTINS COSTA

ESTERILIZAO E PURIFICAO DE BIOPRODUTOS

Trabalho

apresentado

unidade

curricular de Engenharia Biotecnolgica do Instituto de Cincia e Tecnologia, da

Universidade Federal de Alfenas, campus Poos de Caldas sob orientao da profa. Dra. Grazielle Santos Silva Andrade.

Poos de Caldas/MG 2013

Esterilizao e purificao de produtos Fermentaes comerciais requerem normalmente milhares de litros de meio lquido e tambm litros de ar. Para os processos operados com culturas axnicas, essas matrias-primas devem ser fornecidas a partir de organismos contaminantes. De todos os mtodos disponveis para a esterilizao, incluindo o tratamento qumico, a exposio radiao ultravioleta, a radiao gama e os raios-X, a filtrao e o aquecimento, apenas os dois ltimos so utilizados em operaes de grande escala. O meio lquido o mais comumente meio de esterilizao utilizado. O lquido aquecido temperatura de esterilizao atravs da introduo de vapor nas bobinas e no revestimento. Alternativamente, faz-se borbulhar vapor diretamente no meio, ou o meio aquecido atravs de uma corrente eltrica. Se a injeo direta de vapor for utilizada, deve-se diluir o meio de condensao que normalmente ocorre com a adio de 10-20% do volume de lquido. A qualidade do vapor tambm deve ser suficientemente elevada para evitar a contaminao do meio por ons metlicos ou orgnicos. Um perfil tpico de temperatura relacionada com o tempo durante a esterilizao pode ser observado na figura 1:

Figura 1: a) variao da temperatura com o tempo na esterilizao em meio lquido. b) reduo do nmero de clulas viveis durante a esterilizao

Dependendo da taxa de transferncia de calor do vapor ou elemento eltrico, elevando a temperatura do meio em grandes fermentadores pode haver um perodo de tempo significativo. Uma vez que a temperatura de manuteno ou de esterilizao alcanada, a temperatura mantida constante durante um perodo de tempo thd. A gua de resfriamento nos rolos ou revestimento do fermentador utilizada para reduzir a temperatura do meio para o valor desejado. Para o funcionamento de sistemas de esterilizao em lote, deve-se estimar o tempo de reteno necessrio para alcanar o nvel de destruio de clula desejada. Assim como destruir organismos contaminantes, a esterilizao que utiliza calor tambm destri nutrientes no meio. Para minimizar esta perda, a elevada temperatura de esterilizao deve ser mantida por um tempo mais curto possvel. A morte celular ocorre em todos os momentos durante a esterilizao, incluindo a etapa de aquecimento e os perodos de resfriamento. O tempo thd pode ser minimizado, levando em conta a destruio das clulas durante esses perodos. Pode-se identificar o nmero de contaminantes presentes No, como indicado na figura 1 b), durante o perodo de aquecimento este nmero reduzido a N1. No final do perodo de esterilizao, o nmero de clulas N2, e o nmero final aps resfriamento Nf. Idealmente, Nf zero e, no final da esterilizao o produto obtido no tem contaminantes presentes. No entanto, a esterilidade absoluta exigiria um longo tempo de esterilizao, algo que teoricamente impossvel de se alcanar. Normalmente, o nvel de contaminao do alvo expresso como a frao de uma clula, a qual est relacionada com a probabilidade de contaminao. Por exemplo, pode-se apontar para um valor Nf de 10-3, o que significa o risco de aceitar um lote em 1000 que no esteja estril no fim do processo. Se No e Nf so conhecidos, pode-se determinar o tempo de reteno necessrio para reduzir o nmero de clulas a partir de N1 a N2, considerando a cintica da morte das clulas. A taxa de esterilizao por calor regido pelas equaes para morte trmica. Da equao da cintica de morte de primeira ordem, num recipiente de lote em que a morte celular o nico processo que afeta o nmero de clulas viveis, tm-se:

Em que N o nmero de clulas viveis, t o tempo e kd a constante especfica de morte.

A equao 1 aplica-se a cada etapa do ciclo de esterilizao: aquecimento, manuteno e resfriamento. No entanto, como kd em funo da temperatura, a integrao direta da equao vlida apenas quando a temperatura constante, isto , durante o perodo de reteno. Deste modo obtm-se a equao 2:

ou

Em que thd o tempo de reteno, N1 o nmero de clulas viveis no incio, e N2 o nmero de clulas viveis no final. Alm disso, kd pode ser avaliada como uma funo da temperatura atravs da equao de Arrhenius:

Em que A a constante ou fator de frequncia de Arrhenius, e Ed a energia de ativao para a morte celular trmica, R a constante do gs ideal e T temperatura absoluta. Para utilizar a equao 3, deve-se saber N1 e N2. Estes nmeros so determinados considerando a extenso de morte celular durante os perodos de aquecimento e de resfriamento, quando a temperatura no constante. Combinando as equaes 1 e 4 obtm-se:

A integrao da equao 5 para um perodo de aquecimento: Eq.6

E para o perodo de arrefecimento: Eq. 7

onde t1 o tempo no final do aquecimento, t2 o tempo no final da realizao e tf representa o tempo no final do resfriamento. No se pode completar a integrao destas equaes at que se saiba como a temperatura varia com o tempo durante o aquecimento e arrefecimento.

Figura 2: Perfis de tempo de temperatura generalizadas para as fases de aquecimento e arrefecimento de um ciclo de esterilizao por lote. (De F.H. Deindoerfer e A. E. Humphrey, 1959, o mtodo analtico para o clculo dos tempos de esterilizao por calor).

Os perfis de temperatura em estado instvel pode ser determinada durante o aquecimento e arrefecimento podendo ser determinada a partir das propriedades do sistema de transferncia de calor. A forma geral destas equaes mostrada na Figura 2 e na Tabela 1. Aplicando uma expresso apropriada para T na Eq. 6, a partir Tabela 1 permite-nos avaliar o nmero de clulas N1 no incio do perodo de deteno. Da mesma forma, substituindo T na Eq. 7 para a refrigerao tem-se N2, no final do perodo de explorao. Utilizando-se os valores resultantes para o N1 e N2 na Eq. 3 completa clculo a realizao de tempo.

Tabela 1: Equaes gerais para a temperatura como uma funo de tempo, durante os perodos de esterilizao de lote de aquecimento e arrefecimento.

Onde as variveis das equaes decritas na Tabela 1 podem ser definidas como: A: Superfcie de transferncia de calor; capacidade trmica especfica do meio; diferena de entalpia especfica

capacidade de calor especfico da gua de resfriamento; entre vapor e mdio-primas;

massa inicial de meio; taxa de fluxo de massa de vapor;

taxa de fluxo de massa de gua de resfriamento; taxa de transferncia de calor; temperatura; resfriamento; calor. Normalmente, a morte celular abaixo de cerca de 100C mnima, no entanto, quando o aquecimento e arrefecimento so relativamente lentos, as temperaturas permanecem perto do mximo para considervel perodos de tempo e, como indicado na Figura 1 (b), o nmero celular pode ser reduzido significativamente fora do perodo de explorao. temperatura inicial mdio; temperatura do vapor; tempo; e temperatura de entrada da gua de coeficiente global de transferncia de

Normalmente, a explorao dos perodos so da ordem de minutos, enquanto aquecimento e

arrefecimento de grandes volumes lquidos demoram horas. A amostra de clculos de projecto para esterilizao de lote so dadas pela Aiba, Humphrey e Millis e Richards.

Figura 3: Equipamentos de esterilizao contnua: (a) a injeo de vapor contnuo com arrefecimento rpido, (b) a transferncia de calor atravs trocadores de calor.

Os critrios de dimensionamento descritos nesta seo se aplicam a esterilizao de lote de meio, quando a temperatura uniforme ao longo do reator. No entanto, se o lquido contiver partculas contaminantes sob a forma de flocos ou grnulos, a temperatura podem desenvolver gradientes. Como a transferncia de calor no interior das partculas slidas so mais lentas do que no estado lquido, a temperatura no centro do slido vai ser

menor do que no lquido durante uma proporo do tempo de esterilizao. Como resultado, a morte de clulas no interior das partculas no to eficaz como no lquido. As longas manutenes so obrigados a tratar substratos em fase slida e meios contendo partculas. Quando a esterilizao por calor expandido para volumes maiores, mais

longos os tempos de tratamento so necessrios para atingir o mesmo resultado de esterilizao na mesmo temperatura de manuteno. Para uma determinada matria mdia, o nmero inicial de organismos N0 directamente proporcional ao volume de lquido e, portanto, para obter o mesmo Np final, um maior nmero de clulas tem que ser destruda. A escala tambm afeta os perfis temporais de temperatura para aquecimento e refrigerao. As caractersticas de transferncia de calor dependem dos equipamentos utilizados; aquecimento e arrefecimento de grandes volumes normalmente levam mais tempo. Temperaturas elevadas, sustentadas durante o aquecimento e resfriamento so prejudiciais s vitaminas, protenas e acares em solues de nutrientes e reduzem a qualidade do meio.

Referncia bibliogrfica

DURAN, P. M. Bioprocess engineering principles. Elsevier Science & Technology Books. 1995. ISBN: 0122208552