Centro de Biotecnologa Industria CBI Palmira Programas de Tcnico en Produccin de Biocombustibles y Tecnlogo en Procesos Biotecnolgicos.

Instructor: Jorge Alberto Vsquez Ejercicio 6.1. Una fermentacin en lote de una bacteria anaerobia creciendo en metanol tiene los resultados mostrados en la tabla. Calcular:
a. La taza de crecimiento mximo (max) b. El rendimiento celular (Yx/s) c. La biomasa al doble del tiempo d. La constante de saturacin (Ks) e. La taza especfica de crecimiento () a las 10 horas T iempo (h) 0 2 4 8 10 12 14 16 18 Biomasa X (g/l) 0,2 0,211 0,305 0,98 1,77 3,2 5,6 6,15 6,2 Sustrato S (g/l) 9,23 9,21 9,07 8,03 6,8 4,6 0,92 0,077 0

a. La velocidad especfica () y mxima de crecimiento ( max)

Grafica 1. Crecimiento de biomasa y consumo de sustrato (g/l) vs tiempo (h),
sustrato y biomasa (g/ l)
10 9 8 7 6 5 4 3 2 1 0 0 2 4 8 10 12 14 16 18

B iomasa

Sustrato

tiempo (h)

La grafica 1, de crecimiento de biomasa y consumo de sustrato (g/l) vs tiempo (h), indica que hay un tiempo de adaptacin de las bacterias a su nuevo ambiente cuya duracin es 8 horas. A partir de las 8 horas hay un crecimiento exponencial que va hasta las 16 horas, tiempo en el cual comienza la desaceleracin que va hasta las 16 horas. La etapa estacionaria va hasta las 18 horas.

Entonces de acuerdo a la frmula de velocidad especfica de crecimiento: = dX/dt . 1/x integrando tenemos que dX/X = dt despus de derivar viene que : LnX= LnXo + dt es la ecuacin de la lnea recta de la forma Y= mX + b con Y intercepto b= LnXo y pendiente m= por lo tanto = LnX- LnXo / tf - t i

Tiempo (h) 8 10 12 14 16

Biomasa (g/l) 0,98 1,77 3,2 5,6 6,15

Sustrato (g/l) 8,03 6,8 4,6 0,92 0,077

LnX . 0,02020270 0,57097954 7 1,16315081 1,72276659 8 1,81645208 2

Graficando los datos lnX vs t de la tabla 2 obtenemos:

2,5 2 1,5 y = 0,2413x - 1,8444 R2 = 0,959

ln x

Serie2 Serie3 Lineal (Serie3)

1 0,5 0

-0,5

10

15

20

tie m po (h)

Grafica 2: Linearizacin de la curva de crecimiento exponencial de la biomasa

La grafica 2, nos muestra una lnea recta de forma Y= 0,2413X 1,8444 cuyo coeficiente de correlacin R2 es 0.959. Por lo tanto = 0,2413 h-1 Por la forma = LnX- LnXo tenemos que = 1,816 (0,0202) = 0,230 h-1
t f - ti 16 8

Para hayar la velocidad de crecimiento mximo max podemos suponer que la velocidad especfica en la fase exponencial es el valor mximo del crecimiento o podemos deducirla a partir de la ecuacin de Monod, despus de haber linearizado de la forma Lineweaberburck as: = max . S ; Invirtiendo trminos para linearizar obtenemos: 1 = Ks . _1 +
_1_ Ks + S max S max

Hallando los nuevos valores obtenemos la tabla 3

tiemp biomas sustrat o a o

0 0,2 9,23

1/

1/s
0,1083423

2 4 8 10 12 14 16 18

0,211 0,305 0,98 1,77 3,2 5,6 6,15 6,2

9,21 9,07 8,03 6,8 4,6 0,92 0,077 0

0,0260663 51 0,1540983 61 0,1721938 78 0,2231638 42 0,2234375 0,2142857 14 0,0447154 47 0,0040322 58

38,36363 64 6,489361 7 5,807407 41 4,481012 66 4,475524 48 4,666666 67 22,36363 64 248

6 0,1085776 3 0,1102535 8 0,124533 0,1470588 2 0,2173913 1,0869565 2 12,987013

Graficando 1

Vs _1 obtenemos:
S
y = 1,3465x + 4,7545
25

R2 = 0,9748
20 15 10 5 0 0 5 1/ S 10 15 Serie1 Lineal (Serie1)

Donde max -

Grafica 3: de la forma lineweber-Burk 1

Vs _1 S

_1_ 4,7545

0.2103 h-1

b. Rendimiento biomasa-sustrato: es el cociente entre el incremento de masa celular obtenida y el consumo de sustrato: YX/S = X / S = Xf Xo =
Sf - So 6.2 0.2 0 9.23 - 0,65cel/gsust.

c. Tiempo de duplicacin: Viene de la integral de dx/dt = . x , as: dx/x dt ; ln2x lnx = (t2 t1) ; ln (2x/x) = td entonces :

ln2= t por lo tanto

td = ln2 - 0,693 - 3.0h-1

0,230

d. La constante de saturacin Ks viene de 1 = Ks . _1 + _1_ como: Y= 1,347

_1_ max S max S

por lo tanto _Ks__ - 1,347 entonces Ks_= _1,347 (0.210) = 0,282

max

e. El valor de la velocidad de crecimiento especfica () a las 10 horas: de acuerdo a los valores hayados en la tabla 3 es = 0,223. Confirmamos de acuerdo a la forma: = 1 . X- Xo = 1 . X10- X8 tenemos que = 1 . 1,77 0,98 = 0,221 h-1
x t f - ti X10 t10 t8 1.77 10 8

Ejercicio 6.7. Los siguientes datos fueron obtenidos en un quimostato para el crecimiento de Enterobacter aerogenes en un medio de crecimiento con limitaciones de glicerol.
D, (1/h) 1/D 0,05 20 0.10 10 0.20 5.0 0.40 2.5 0.60 1.67 0.70 1.43 0.80 1.25 0.84 1.19 Nota= S0 = 10mg/ml S (mg/ml) Glicerol 0.012 0.028 0.l05 0.10 0.15 0.176 0.80 9.00 1/S 83.3 35.7 20 10 6.67 5.68 1.25 0.11 X (mg/ml) 3.2 3.7 4.0 4.4 4.75 4.9 4.5 0.5 S 9.988 9.972 9.95 9.90 9.85 9.824 9.20 S/X 3.12 2.7 2.49 2.25 2.075 2.005 2.045 S/X (D) 0.156 0.270 0.498 0.90 1.245 1.405 1.635

Para este sistema, estimar los valores de: a. Ks, mg glicerol/ml b. max , h-1 c. YX/S, mg de celulas/mg de glicerol d. Ms, mg de glicerol/mg celulas.h Desarrollo Puntos a y b: El balance de materia en el quimostato est dado por la ecuacin: dM - Mo Mi + RG - RC Donde Mo = Caudal masico A de entrada de dt Mi = Caudal masico A de salida RG = Velocidad de generacin de A RC = Velocidad masica de consumo de A dM = Cambio en la masa del componente A en el dt tiempo

Reordenando y aplicando diferenciales acordes con el diseo del reactor, tenemos que la ecuacin se tranforma en: dx - F Xi X ( - Kd - _F_ ). Donde F = Caudal volumtrico en el reactor dt V V y F X i = Mi XV = RG RC = Kd.V donde Kd es la constante especfica de muerte celular Si se tiene una velocidad de dilucin D con alimentacin intermitente t -1 , D - _F_ D) V Y reemplazando en la ecuacin tenemos que dx = DXi + X ( - Kd dt

En el quimostato usualmente el medio alimentado es estril Xo = 0 y el metabolismo endgeno o la taza de muerte es despreciable comparada con la taza de crecimiento especialmente para el caso de Enterobacter aerogenes (Kd<< ) y si el sistema est en estado estacionario ( dx/dt = 0), entonces: =D Sustituyendo en la ecuacin de Monod tenemos que: cual se D = max . S . En el
Ks + S

observa una curva sigmoidal cuando graficamos la velocidad de dilucin D vs el Sustrato

D
0,9 0,8 0,7 0,6 0,5 0,4 0,3 0,2 0,1 0 0 2 4 6 8 10
Serie1

Grafico 4 Taza de Dilucin D vs Sustrato

Invirtiendo trminos para linearizar obtenemos: 1 = Ks . _1 + _1_

Graficando:

max

max

1/D
25 20 15

y = 0,2386x + 0,4353 R2 = 0,9935

Serie1
10 5 0 0 20 40 60 80 100

Lineal (Serie1)

1/S

Grafico 5: de la forma lineweaber-Burk 1/D Vs 1/S

Oservamos que hay una relacin directamente proporcional entre el inverso de la densidad Vs el inverso de la concentracin de sustrato limitante, es decir que a medida que aumenta la concentracin de sutrato limitante aumenta la velocidad de dilucin. Despejando de Y= 0,239 X + 0,435 tenemos que: _1_ - 0.4353 2,29/h
max Ks__ = 0.239 glicerol/ml max => Ks = 0,239 (max) => Ks = 0,239 (2,29) = 0,547 => max =

mg

Un balance para el sustrato limitante en ausencia de metabolismo endgeno puede ser:

Fso Fs VRX _1_ YX/SM - VRqpX _1_ YP/S - VR dS dt

Donde So es la concentracin de sustrato alimentado S es la Concentracin de sustrato en el efluente qp es velocidad especfica de producto extracelular YX/SM es el coeficiente de rendimiento msico, M es el mximo valor del coeficiente YP/S Coeficiente de rendimiento de producto. VR Es el volumen del reactor. Reemplazando en la ecuacin anterior obtenemos:
1_ YX/SAP _1_ YX/SM + ms . _1_ D

Donde ms es la energa de mantenimiento o la velocidad especfica de consumo de sustrato para actividades de mantenimiento que es igual a dS/dt
=ms X 1_

y la YX/SAP es igual a So - S =

YX/SAP _1_

Graficando 1_
YX/SAP
3,5 3

Vs D

obtenemos

y = 0,0578x + 2,0381 R2 = 0,9367

1/Yx/s(AP)

2,5 2

1,5 1

0,5 0 0 5 10 15 20 25

Serie1 Lineal (Serie1)

1/D

Grafica 6 Inverso del rendimiento celular aparente versus el inverso de la velocidad de difusin.

Reemplazado los valores de la grfica en la ecuacin

1_ YX/SAP _1_ YX/SM + ms . _1_ D

Obtenemos:
_1_ 1_ => YX/S = 0,49cels/mg glicerol YX/SM 2,038

ms = 0,058 mg glycerol/mg cels h-1 Ejercicio 7.2 El crecimiento de la levadura de cerveceria S. cerevisiae en un medio con glucosa puede ser descrito con la siguiente ecuacin: C6H12O6 + 3O2 + 0,48 NH3 0,48 C6H10N03 +4,32 H2O +3,12 CO2 levadura

En un reactor batch de 105 L, la concentracin final de levadura deseada es 50 gdw/L. Usando la estequiometria dada: 1, Determine la concentracion y cantidad total de glucosa y (NH4) 2SO4.
PM levadura: C => 6 x 12 = 72 H => 10 x 1 = 10 N => 14 x 1 = 14 O => 3 x 16 = 48 144 g/mol x 0.48 = 69.12 PM (NH4)2SO4 N => H => S => O => 14 x 2 = 28 1x8 =8 32 x 1 = 32 16 x 4 = 64 132 g/mol

PM NH3 N => 14 x 1 = 14 H => 1 x 3 = 3 17 g/mol

Glucosa:
50 gwl x 1mol levadura x 1 mol glucosa L 144 gr levad 0.48 mol levad = 130.20 x 105 gramos de glucosa x 180 gramos glucosa x 105 L 1 mol glucosa

(NH4)2SO4
50 gwl x 1mol lev x 0.48 mol NH3 x 0.5 mol (NH4)2SO4 x 132 gr (NH4)2SO4 x 105 L L 144 gr lev 0.48 mol lev 1 mol NH3 1 mol (NH4)2SO4 = 22.9 x 105 gramos de (NH4)2SO4

Determinar los coeficientes de rendimiento: Yx/s:

50 x 105 gramos /L = 130.50 x 105 gr glucosa

0.384

Yx/o2: 50 x 105 gramos/ L

69.44 x 105 gr O2

= 0.724

Cantidad de Oxgeno requerido:

50 gwl x 1mol levadura x 3 mol O2 x 32 gramos O2 x 105 L L 144 gr levadura 0.48 mol lev 1 mol O2

= 69.44 x 105 gramos de O2 Si la velocidad de crecimiento en la fase exponencial es x = 0.7 gdw /L x h, determinar la velocidad de consumo de Oxgeno; Ecuacin : 6.26. OUR = qO2X = X YXO2 O2 = x = 0.7 gdl/l x h = 0.966 g O2/ l.h Yx/O2 0.724

Calcular los requerimientos para la remocin de calor.

QGR ~ 0.12 QO2 QGR = VLX1 YH

YH = 0.42 g/Kcal. QGR = 105 L x 0.7 gdw/l x h x 1 = 0.42 g /kcal

1.666.666 Kcal / l . h

Ejercicio 7.4. El crecimiento aerobio de S.cerevisiae en etanol es descrito por la siguiente ecuacin: C2H5OH + a O2 + b NH3 c CH1.704 N
0.149

0.408

+ d CO2 +e H2O

Determinar los coeficiente a, b. c. y d donde RQ = 0.66 1. 2. 3. 4. 5. C = 2 = c+ d H = 6 + 3b = c(1.704) + 2 e O = 1 + 2 a = c(0.408) + 2d +e N = b = c (0.149) d/a = 0.66 d= 0.66 a a= d/0.66

1. c = 2 d 4. b =( 2 d) (0.149) 2. 6 +3b ( 2 d) (0.149) = ( 2 d) (0.107) +2 e 6 + 0.894 0.447d = 3.408 -1.704d + 2e d (-0.447 +1.704) 2e = -6 0.894 + 3.408 1.257d 2e = -3.486 3. 3. 1+2 (d/0.66) = (2 d)( 0.408) + 2d +e 1 + 3.03d = 0.816 0.408d + 2d +e 0.184 = d (2 0.408 3.03) +e 0.184 = d (- 1.438) + e => e = 1.438d + 0.184 1.257d 2e = -3.486 1.257d 2= (1.438d + 0.184) = -3.486 d = -3.486 + (2 x 0.184) =- 3.118 = 1.93 (1.257 (2 x 1.438)) - 1.619 c=2d c = 2 1.93 = 0.07 a = d/0.66 a = 1.93 / 0.66 = 2.93 e = 1.438d + 0.184 e =1.438 (1.93) + 0.184 = 2.96 b =c x (0.149) b = 0.07 x 0.149 = 0.1043 Determinar el coeficiente de produccin de biomasa

d= 1.93

Etanol: C2H5OH => C => 2 x 16 = 32 H => 6 x 1 = 6 O => 16 x 1 = 16 54 g/mol

100 gwl x 1mol levadura L 144 gr levadura = 5400 10.08 x 1 mol etanol x 0.07 mol levadura 54 gramos etanol 1 mol etanol

= 535.7g etanol 0.186 32 gr 1 mol O 2

Yx/s = 100 gdw = 535.7 g 100 gwl L

x 1mol levadura x 292 mol O2 x 144 gr levadura 0.07 mol levadura = 926.98 g de O2

= 9344 10.08

x/o2

= 100gdw = 0.108
926.98