PAUTA PRESENTACION DE INFORME DE LABORATORIO Laboratorio de Microscopia ptica Miguel Angel Gallardo Oyarzo Institucin (Ingeniera Civil en Biotecnologa,

Departamento de Qumica, Universidad de la Frontera)

Resumen El anlisis y comparacin de los diferentes tejidos celulares, desde el punto de vista carcinognico, hipoxico y estructural. Para el estudio utilice diferentes tejidos de clulas animales y vegetales, que fui comparando por medio del imgenes tomadas desde el microscopio, respecto de su morfologa y describiendo cuales eran los efectos de las diferentes patologas. Las diferencias que se generan por las patologas, afectan tanto a nivel estructural, como a nivel funcional y la diferencia entre clulas animales y vegetales se visualiza por la distribucin de los tejidos, ms compacto en vegetales y menos compacto en animales. Por lo tanto, podemos concluir que en el caso de las patologas el efecto es producido por una prdida del tejido, que va debilitando la funcin normal del sistema, y en el caso de las clulas vegetales y animales la diferencia ms evidente es la pared celular que recubre a las clulas vegetales, que las hace ms rgidas en comparacin con las clulas animales. Palabras claves: Hipoxia, Cncer gstrico, Clula animal, clulas vegetales. Introduccin Todos los seres vivos estn formados por una serie de clulas, que poseen estructuras y funciones diferentes, y que a su vez se organizan en variedades de formas, que originan a los tejidos, los que se encargan de recubrir a los distintos rganos, los que cumplen una funcin determinada en la vida de un ser vivo. Pero cuando uno de estos tejidos se ve afectado por una afeccin patognica, se pueden ver alterado su estructura, que permite que un rgano determinado del sistema, cumpla una funcin determinada, y con ello alterar el buen funcionamiento de los procesos vitales. Entre estas afecciones podemos encontrar una variedad amplia, pero en este estudio, veremos dos de ellas, el Cncer Gstrico, el que destruye el tejido de la mucosa gstrica, y que afecta a una gran parte de la poblacin mundial, y tambin una enfermedad generada por una disminucin de llamada Hipoxia, que genera un cambio morfolgico en los tbulos seminferos, que a su vez repercuten en procesos fisiolgicos, como

la respiracin, la circulacin, el metabolismo intermediario especifico, y la capacidad cognitiva. Esta enfermedad es frecuente en seres vivos que estn expuesto a un medio donde el es ms escaso. En el caso de los tejidos animales y vegetales, que son dos tejidos formados por clulas eucariotas, pero que poseen algunas diferencias en orgnulos, veremos como estas variaciones de componentes estructurales, pueden generar diferencias en funcionalidad, y como permiten que uno de estos sea ms rgido y el otro ms mvil. En el caso de las clulas vegetales podremos observar la rgida pared celular que recubre a las diferentes clulas del tejido de una cebolla, y compararla con la membrana, citoplasma y ncleo de la clula de mucosa gstrica. Este trabajo nos permitir conocer ms de la diversidad de organismos, y los orgenes de estas diversidades. Materiales y Mtodos Manipulacin. Lo primero, fue obtener las muestras de tejido de los rganos en estudio, que posteriormente fueron cortadas, para poder observar las estructuras internas, una vez hecho esto es fijada con folmadehdo al 5% y boune, y luego teida. En el caso de la muestra de mucosa gstrica, se utiliz tincin de hematoxilina, para la parte interior del ncleo de la clula que es de tipo aninica (-) y que reacciona con hematoxilina que es catinica (+),que las tie de color azul y purpura, y se utiliz eosina, para el resto de la clula, ya que esta tincin de tipo aninica (-), que reacciona con la

parte catinica(+) del tejido, y la tie de color rosa, tanto para el tejido normal, como para el cancergeno. Para el caso del tejido de los tbulos seminferos, se utiliz un marcador especial Hsp70 de color caf, que se expresa fuera del ncleo, es una protena de choque trmico, esta se utiliz tanto para el tejido normal, como con hipoxia. Para la cebolla no se utiliz ninguna tincin. Anlisis. Una vez lista la muestra y puesta en el porta objeto, esta es llevada a la platina, una por una, y en esta parte se regula el microscopio, en diferentes objetivos para obtener imgenes ms detalladas del microscopio ptico de OLYMPUS CX41, que genera una imagen digital de la muestra y que posee, una cmara digital perfecta en color, y 4 opciones de resolucin. Para el experimento utilizamos objetivos de x10 y x40 de resolucin, los cuales nos permitieron obtener imgenes ntidas, y con menos aberraciones. Comparacin. En esta etapa se toma las imgenes obtenidas del microscopio ptico, y se comparan, tanto en su distribucin del tejido, volumen con respecto a la resolucin, perdida del tejido y estructura morfolgica. Anlisis final. Aqu se toman resoluciones con respecto a lo observado y se llega a una conclusin de los efectos de las patologas en estudio en el caso de las dos primeras muestras y en caso de la ltima muestra se concluye cules son las diferencias entre clulas vegetales y animales.

Resultados y Discusiones En el experimento visual de las muestras de diferentes tejidos, obtuvimos claras diferencias, entre tejidos normales y patolgicos. En el estudio del tejido de mucosa gstrica (Fig.1. y Fig.2.), observe varios cambios, como en el caso de prdida de la

u otra bacteria estomacal, o alguna otra patologa gstrica que persista mucho tiempo. Lo otro que se puede observar es Metaplasia (glndulas que no pertenecen a su ubicacin habitual), que a su vez tambin implica una atrofia. Tambin sabemos que estas enfermedades tienen muchos factores, que puede generar estas deficiencias estructurales y funcionales

Fig.1. Imagen del tejido de la mucosa gstrica (x40), con tincin de eosina y hematoxilina. Aqu se ve que el tejido no presenta ninguna anomala, y se pueden distinguir una estructura compacta, sin prdida de masa celular (atrofia).Se ve claramente las criptas gstricas, capilares sanguneos, Epitelio, las clulas epiteliales, etc.

Fig.2. Imagen del tejido de la mucosa gstrica (x40), con tincin eosina y Hematoxilina. Se evidencia atrofia (perdida de la masa celular), y Metaplasia (glndulas que no pertenecen a su ubicacin habitual)

masa celular o atrofia, que puede haber sido producido por el efecto de algn patgeno, como por ejemplo Helicobacter pylori (Hp), que se ha demostrado que es un factor etiolgico necesario, aunque no suficiente, para el desarrollo del CG (cncer gstrico) y que figura en la lista de carcingenos de la clase I de la IARC,

como Gentico, Grupo sanguneo A, alimentacin, como pescados secos y salados, alimentos muy condimentados, carnes rojas, Ingestin de alcohol, de bebidas calientes, de nitrato de sodio. Tabaco masticado, Radiaciones, Gastritis atrfica, Anemia perniciosa, Enfermedad

de Menetrier, Gastrectoma, Plipos gstricos. Se puede observar en el tejido la perdida Clulas Epiteliales, importantes en la proteccin de la mucosa, porque liberan mucus y bicarbonato que sirven de proteccin, y la perdida de una serie de otros tejidos celulares que cumplen funciones de control y proteccin, que se han visto daado (clulas del cuello,

producidos por la escasez de , conocida como Hipoxia. Entre los cambios observados a travs del microscopio ptico, uno de los ms claros es el aumento del dimetro tubular, que puede ser producto de una adaptacin del tejido a un medio ambiente fsico diferente, Presin atmosfrica menor, menor oxgeno, y como se ha demostrado en evidencias que la diminucin del oxgeno, genera que la hormona reguladora

Fig.3.Imagen del tejido de tbulos seminferos (x40), se puede visualizar una estructura completa con un dimetro tubular normal y con sus subestructuras ordenadas.

Fig.4. Imagen del tejido de tbulo seminfero con Hipoxia (x40), en esta imagen vemos claramente un aumento del dimetro tubular y aumento del volumen de la luz del tbulo seminfero.

Clulas principales, Epitelio, etc.), que evidencian una prdida de la fusin protectora de la mucosa, que deriva en el cncer gstrico. En relacin al estudio del tejido de los tbulos seminferos (Fig.3. y Fig.4.), se pudieron detectar algunos cambios

(eritropoyetina) tenga una mayor respuesta, lo que provoca un aumento en los reticulocitos y posteriormente de la masa total de glbulos rojos que se traduce en un incremento del nmero de glbulos rojos, de la hemoglobina y del hematocrito. Esta evidencia podra explicar un aumento de glbulos rojos

que se refleja en un aumento del dimetro tubular. Otro cambio que se observo es un aumento de la zona de la luz del tbulo seminfero, que produce una disminucin de la zona del epitelio seminfero, lo que afecta a las clulas espermatognicas y a las clulas de sertoli, que se encuentran distribuidas en el epitelio, y que en el caso de las espermatognicas, originan los espermatozoides, y que una disminucin repercutira en la fertilidad del individuo.

importante para evitar la prdida de agua, evidencia de que poseen diferentes metabolismos y estructura, que las clulas animales. Para las clulas animales se puede ver la membrana citoplasmtica que recubre el exterior de las clulas, del tejido de mucosa gstrica, importante para las clulas animales, porque le permite interactuar con el medio externo, regula el paso de sustancias, y confirindole una permeabilidad

Fig.5. Imagen del tejido de una Cebolla (tejido vegetal) en (x40), en esta imagen se puede visualizar una parte importante de la clula vegetal, la pared celular caracterstica de este tipo de clulas.

Fig.6. Imagen del tejido de la mucosa gstrica (Clulas Animales), se pueden identificar tres partes de la clula anima, ncleo, Citoplasma y Membrana citoplasmtica.

Para el estudio de las diferencias de clulas vegetales (Fig.5.) y animales (Fig.6.), las observaciones demostraron diferencias muy notorias, como en el caso de las clulas vegetales de cebolla se puede observar una rgida y compacta pared celular, que en las clulas animales no se observa, este orgnulo le permite a la clula vegetal interactuar con el medio externo y les confiere una rigidez, e

selectiva. Para las clulas animales tambin se puede ver la forma del ncleo, importante porque posee el material gentico. Conclusin De este estudio se puede decir, que los tejidos estn compuestos de un conjunto de clulas y subunidades, que cumplen

funciones especializadas y vitales en la labor de los tejidos. La prdida de las unidades que conforman el tejido, provoca una prdida de la consistencia estructural. Tambin se pudo observar que tejidos como la mucosa gstrica, suelen sufrir aberraciones, que si persisten en el tiempo, derivan en un cncer gstrico. Sabemos tambin que la hipoxia, es una patologa que puede hacer que un tejido del tbulo seminfero, aumente su dimetro tubular y en el peor de los caso generar infertilidad en el individuo. Para el tejido de clulas animales y vegetales, las diferencias radican en que, para las clulas vegetales la pared celular, le confiere diferencias notables, en comparacin con las clulas animales, y representa la primera barrera con el medio externo, a diferencia de las animales que su barrera con el medio externo es la membrana citoplasmtica, y que en las clulas animales tiene una distribucin de los tejidos diferente a las vegetales. Por ultimo puedo decir que un cambio o diferencia en la estructura de un tejido, implica una diferencia de funciones o prdida de la funcin. Referencias DI FIORE, MARIANO. (1999). ATLAS DE HISTOLOGIA NORMAL. 7 edicin. Eduardo Bustos-Obregn, Christian Esveile, Julio Contreras, Luis y Maurer Inge Sarabia. Efectos de la hipoxia hipobrica Simulada Crnica Sobre la espermatognesis del Ratn. Laboratorio de Biologa de la Reproduccin, Programa de Anatoma y Biologa del

Desarrollo ICBM, Facultad de Medicina, Universidad de Chile. 24 (3) :481-488, de 2006. JM Sanz Anquela, A Blasco Martnez, JM Arrinda Yeregui, G Olmedilla Arregui.(2005). PATOLOGA GSTRICA: Lesiones precursoras de cncer gstrico. Servicio de Anatoma Patolgica. Hospital Universitario Prncipe de Asturias. Departamento de Especialidades Mdicas. Facultad de Medicina. Universidad de Alcal de Henares. Madrid ESPAA.

Anexos 1 LR= (0.61x)/AN con AN = n seno (Limite de resolucin) PR= 1/LR (Poder de resolucin)

Anexos 2 1. Compare las unidades de medida, de longitud de onda, tipo de iluminacin, tipo de lentes, resolucin, magnificacin utilizadas en microscopa ptica y electrnico.

2. Indique cuales son los fluorocromos ms utilizados actualmente y su mecanismo de accin. Cules son los espectros de excitacin y de emisin de un fluorocromo?

3. Indique los procedimientos de inclusin, de corte y de tincin de tejidos que se realizan habitualmente en microscopa electrnica. 1-) Para medidas microscpicas se utilizan: La micra o micrmetro Equivale a una millonsima parte de un metro. 1 m = 0.000001 m La microscopia ptica: con respecto a la longitud de onda, se restringe a la longitudes de la luz visible que va desde 0.4 m (para el violeta) hasta 0.7 m (para el rojo lejano). Para iluminar la muestra utiliza la luz visible. Utiliza lentes de vidrio. Como medio de propagacin utiliza la atmosfera. La resolucin que tiene es de 0.2 m. La magnitud es de 10 x - 2000 x. La microscopia electrnica: con respecto a la longitud de onda esta va desde m hasta 8.6 m, lo que me dice esto es que el poder de resolucin (PR) es mucho ms grande que el del microscopio ptico, ya que como tiene una longitud de onda ms pequea y menor es el lmite de resolucin. Para iluminar la muestra utiliza el haz de

electrones. Utiliza lente magntico. Como medio de propagacin utiliza el vaco. La resolucin es de 3 m. La magnitud es de 100 x - 450000 x. PR= 1/LR y LR= (0.61x)/AN con AN = n seno 2- ) Las ms utilizadas son: DAPI (emite luz azul) para marcar cromosomas, Fluorescena (absorbe luz azul y emite fluorescencia verde manzana), rodamina (absorbe luz verde y emite fluorescencia roja anaranjada), Texas red (emite luz rojo). Para DAPI (se excita a 365 nm y se emite sobre 420 nm), por su parte Fluorescena (se excita a 495 nm y se emite a 525 nm), con respecto a rodamina (se excita a 552 nm y se emite a 570 nm) y para Texas red (se excita a 596 nm y se emite con 620 nm). 3-) La inclusin es un mtodo para examinar muestras muy gruesas que no se podran ver en su forma directa, para ello se necesita realizar cortes que disminuyan el grosor de la muestra de entre (5 10 m). Ya que son muy frgiles es necesario que la muestra sea empapada de un medio de soporte que le entregue esa consistencia, para ello se suele utilizar una cera o bien una resina en estado lquido y se espera que esta penetre y se fije en el interior para que esto quede rgido es necesario enfriar la muestra o polimerizarla. El Corte es un procedimiento que se utiliza para preparar muestras de microscopia electrnica, y consiste en hacer varios cortes a una muestra con un micrtomo (posee un cuchillo y un sistema de avance microscpico de la muestra), luego los cortes se ponen en un porta objeto para su posterior tincin. Tincin es una tcnica para mejorar el contraste de la imagen vista en el microscopio. Para la tincin se utilizan tipos de colorante, que muestran distintas afinidades por elementos particulares de la clula. Entre las ms utilizadas existen dos con diferente a afinidades, el caso de Hematoxilina que es de tipo catinica y que por lo tanto tiene afinidad con elementos aninicos, tie con color azul y purpura, y tambin se usa eosina de tipo aninica y que posee afinidad con elementos catinicos y tie con color rosa-anaranjado o rojo.