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SOARES DOS REIS, Geisilaine;FURTADO VALADO, Analina;RAMOS PAES DE LIMA, Leonardo;LUCY MOREIRA, Mary Preparacin de un protector solar y evaluacin de la accin fotoprotectora del propleo verde del Vale do Ao, Minas Gerais, Brasil Boletn Latinoamericano y del Caribe de Plantas Medicinales y Aromticas, Vol. 8, Nm. 4, julio-sin mes, 2009, pp. 282-288 Sociedad Latinoamericana de Fitoqumica Chile
Disponible en: http://redalyc.uaemex.mx/src/inicio/ArtPdfRed.jsp?iCve=85611265008

Boletn Latinoamericano y del Caribe de Plantas Medicinales y Aromticas ISSN (Versin impresa): 0717-7917 blacpma_editorial@hotmail.com Sociedad Latinoamericana de Fitoqumica Chile

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2009 The Authors 2009 Boletn Latinoamericano y del Caribe de Plantas Medicinales y Aromticas, 8 (4), 282 - 288 BLACPMA ISSN 0717 7917 Artculo Original | Original Article

Preparacin de un protector solar y evaluacin de la accin fotoprotectora del propleo verde del Vale do Ao, Minas Gerais, Brasil
[Preparation of a sunscreen and evaluation of the photoprotective action of the green propolis from Vale do Ao, Minas Gerais, Brazil]
Geisilaine SOARES DOS REIS1, Analina FURTADO VALADO2, Leonardo RAMOS PAES DE LIMA3, Mary LUCY MOREIRA4
Centro Universitrio do Leste de Minas GeraisUnileste MG (Farmcia)#725, CEP.:35160-215, IpatingaMG, Brasil.

Abstract
Propolis is a product gathered from plants and developed by melliferous bees. It possesses diverse biological activities as antiinflamatory action, antioxidant etc. and it contains more than 300 substances (for example: flavonoides). Due to the property of the propolis of absorbing light in the UV region, the photoprotective activity of the product was analyzed by analysis in vitro of the sun protection factor (SPF) of topical formulations with extract hidroalcoholic of green propolis, with espectrophotometer for readings in the region of the UVB. The propolis samples were gathered in apiaries in the Vale do Ao, a region in the East of the state of Minas Gerais, Brazil. The formulations were prepared with different bases: gels natrosol and carbopol and emulsion oil/water. The preparations of gel natrosol and emulsion oil/water with propolis extract remained stable during the study of stability. The formulations that contained 40% of propolis extract got values of SPF up of 10. The results obtained in this study overcame values of opposing SPF in natural formulations with plants and algae, for example, and they confirm the photoprotective action of the green propolis of the Vale do Ao. The developed products should be perfected so that they are adapted to the different skin types and acquire higher SPFs. Keywords: Propolis, Flavonoids, SPF, Brazil, Sunscreen, UV.

Resumen
Propleo es un producto recolectado en plantas y desarrollado por abejas melferas. Posee diversas actividades biolgicas como accin antiinflamatoria, antioxidante, antibacteriana, etc. y contiene ms de 300 substancias (ej.: flavonoides). Debido a la propiedad del propleo de absorber luz UV fue analizada la actividad fotoprotectora del producto por anlisis in vitro del factor de proteccin solar (FPS) de formulaciones tpicas con extracto hidroalcohlico de propleo verde con espectrofotmetro para lecturas en la regin del UVB. Las muestras de propleo fueron recolectadas en colmenares en el Vale do Ao, una regin al este del estado de Minas Gerais, Brasil. Las formulaciones fueron preparadas con diferentes bases: geles natrosol y carbopol y emulsin aceite/agua. Las preparaciones de gel natrosol y emulsin aceite/agua con extracto de propleo permanecieron estables durante el estudio de estabilidad. Para las formulaciones que contenan 40% de extracto de propleo fueron encontrados valores de FPS sobre 10. Los resultados obtenidos en este estudio superaron valores de FPS encontrados en formulaciones naturales con plantas y algas y confirman la accin fotoprotectora del propleo verde del Vale do Ao. Los productos desarrollados deben ser perfeccionados para que se adecuen a los diferentes tipos de piel y adquieran FPS ms altos. Palabras Clave: Propleo, Flavonoides, FPS, Brasil, Fotoprotector, UV.

Recibido | Received February 28, 2009. Aceptado en Versin Corregida | Accepted in Corrected Version: June 15, 2009. Publicado en Lnea | Published Online July 25, 2009. Declaracin de Intereses | Declaration of Interests: authors have no competing interests. Financiacin | Funding: Este trabajo fue financiado por Centro Universitrio do Leste de Minas Gerais Unileste MG This article must be cited as: Geisilaine Soares Dos Reis, Analina Furtado Valado, Leonardo Ramos Paes De Lima, Mary Lucy Moreira. 2009. Preparacin de un protector solar y evaluacin de la accin fotoprotectora del propleo verde del Vale do Ao, Minas Gerais, Brasil. Bol Latinoam Caribe Plant Med Aromat 8(4):282 288.{EPub July 25, 2009}.

*Contactos | Contacts: 55 31 9624 3581, rsgeise@yahoo.com.br; analinafurtado@yahoo.com.br; lrplima@hotmail.com; 4marylmoreira@yahoo.com.br

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Soares Dos Reis et al.

Protector solar de propleo verde de Minas Gerais

INTRODUCCIN La palabra propolis es de origen griego y transmite la idea de la defensa (pro) de la ciudad (polis), lo que es aplicado en tal producto apcola, pues este protege la colmena de insectos y de los microorganismos invasores (Ramos y Miranda, 2007). Esta defensa es debida a la presencia de ms de 300 sustancias en el propleo y entre ellas, tres grupos qumicos merecen la prominencia debido a las actividades biolgicas que ejercen: los flavonoides, derivados de cido cinmico y terpenos. Los flavonoides han sido considerados los principales compuestos biolgicos activos del propleo (Bankova et al., 1995) y son polifenoles de origen botnico que han sido usados como los marcadores de la calidad del propleo (Grosso et al., 2007). Estos son producidos en las plantas y poseen la funcin de atraccin para los polinizadores, pues varan de colores como del amarillo al rojo de ptalos de flores. La concentracin de los flavonoides en las plantas vara de acuerdo con la estacin en que fue producido, as como con la vegetacin, clima y relieve en los cuales estn los colmenares y de qu partes de las plantas las abejas (Apis mellifera) recolectaron el propleo (Edreva y Kostoff, 2005). Segn GooboNeto y Lopes (2006), la sazonalidad es considerada el factor primordial para la variacin del propleo, pues la naturaleza y la cantidad de molculas activas, como los flavonoides, no son constantes durante todo el ao. Las condiciones locales de temperatura tambin afectan la maleabilidad del propleo: en las temperaturas sobre 15 C el propleo es normalmente ms maleable; inferior a 15 C el propleo tiene una consistencia ms dura. Las abejas melferas recolectan material resinoso y lo transportan hasta las colmenas dnde ellos mezclan el material recolectado a las secreciones glandulares, enzimas y cera. El produto final presenta propriedades anti-inflamatorias, imunoestimulantes, hepatoprotetoras, antimicrobianas, anti-virales, antifngicas (Grosso et al., 2007), vasodilatadores. Adems, los flavonoides presentes inhiben la peroxidacin lipdica, agregacin plaquetaria y fragilidad capilar (Havsteen, 2002). Varios estudios tambin demuestran que el propleo es una fuente natural de antioxidantes debido a su actividad contra los radicales libres. El propleo ha sido usado en la preparacin de medicamentos en varios pases del mundo (Garca et al., 2004; Chen et al., 2009). Entre los productos apcolas como miel, jalea real, polen, entre otros, el
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propleo es destacado por las actividades biolgicas comprobadas y tambin por la posibilidad de la aplicacin en las industrias farmacutica y alimenticia (Park et al., 1998). Actualmente es posible encontrar de dulces a jabones que contienen propleo. Otra clase de productos que se desarrollan a base del propleo son los protectores solares tpicos, pues las ltimas investigaciones han demostrando la accin fotoprotectora de los metabolitos secundarios de las plantas: los flavonoides. La clave para la proteccin es la concentracin de electrones deslocalizados en los anillos bencnicos de las estructuras qumicas de esas sustancias, lo que facilita el traslado de energa (Edreva & Kostoff, 2005). La radiacin ultra-violeta (UV) es un componente de la radiacin solar. Los niveles altos de radiacin UV causan dao y perjuicios a las molculas biolgicas de gran importancia, como los nucletidos, cidos nucleicos y protenas. Esas molculas absorben UVB, altamente energtica, propiciando la formacin de radicales libres. Los anillos aromticos reducen la absorcin de UVB (Edreva & Kostoff, 2005). La exposicin de la piel a la radiacin UVB puede provocar el cncer del epitelio en caso de no se utilizar los mtodos que evitan la absorcin de esa radiacin por el tejido epitelial. Este tipo del neoplasia es una de las de mayor incidencia en Brasil, con 122.400 nuevos casos en 2006, lo que corresponde al 26% del total de neoplasias malignas en el pas en ese ao (Sociedade Brasileira de Dermatologia, 2006). El uso de lociones fotoprotectoras es la forma ms aplicable para la prevencin contra el dao y perjuicios provocados por la exposicin del epitelio a UV. Las substancias fotoprotectoras son elaboradas en emulsiones del tipo aceite/agua o en geles que no provocan otros daos y perjuicios a la piel. La idea de producir una locin de proteccin solar a base de propleo acompaa la necesidad de nuevos productos para la proteccin contra la radiacin UV y sigue la tendencia mundial de producir cosmticos a partir de componentes naturales (Ferrari et al., 2007). En el presente estudio, el propleo verde del Vale do Ao, regin metropolitana del estado de Minas Gerais, Brasil, fue investigado con el objetivo de analizar sus caractersticas sensoriales y probar su accin fotoprotectora a travs de la produccin de lociones fotoprotectoras elaboradas con emulsin aceite/agua y en gel, con el propleo como sustancia activa y la evaluacin de los productos desarrollados mediante un mtodo in vitro para investigacin del factor de proteccin solar (FPS).

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MATERIALES Y MTODOS Para verificar y determinar la accin fotoprotectora del propleo verde del Vale do Ao, Minas Gerais, Brasil, se elaboraron las bases para las lociones en gel y emulsin aceite/agua. Fue utilizado el propleo producido en los colmenares de la regin durante el verano de 2007, porque segn la literatura especializada (Franco et al., 2000), es el propleo que ms contiene flavonoides entre los producidos durante las estaciones anuales. Coleccin de muestras El propleo fue recolectado de las colmenas utilizando el mtodo de raspaje. Despus de la separacin de las impurezas, las muestras fueron acondicionadas en bolsas atxicas plsticas, al resguardo de la luz y conservadas en el congelador a la temperatura de -17 C hasta el posterior anlisis. Anlisis sensorial Los anlisis sensoriales realizados, y exigidos por el Ministerio de la Agricultura de Brasil para la fijacin de identidad y calidad del propleo, fueron los siguientes: anlisis de color, sabor y consistencia a la temperatura ambiente. Debido al hecho de que los caracteres sensoriales se han estimado a travs de los rganos de los sentidos, asumen, por consiguiente, un aspecto subjetivo, propio del analista, por esta razn los resultados se expresaron dentro de las posibilidades descritas por el Ministerio de la Agricultura (para sabor: picante, suave, fuerte y amargo; para la consistencia: maleable y rgido; para el aroma: resinoso y balsmico). El anlisis sensorial del propleo fue realizado a la temperatura ambiente (25 C) a travs de la observacin de alcuotas de aproximadamente 80 g, que corresponde a un pedazo de los raspados de la colmena. As fue posible evaluar la consistencia, olor y color caractersticos del producto apcola en evidencia. Para las observaciones visuales futuras, tambin se fotografi la muestra y los archivos estn en el banco de datos generado por el presente estudio. El estudio de estabilidad Para el anlisis del comportamiento del propleo en los vehculos para los protectores solares, fueron preparadas tres formulaciones tpicas con 10% de extracto hidroalcohlico (etanol 70%) del propleo verde del Vale do Ao. Los vehculos utilizados en las
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preparaciones tpicas fueron gel natrosol (pH 5,5), gel Carbocol (pH 10) y emulsin aceite/agua (pH 6). Se analiz la estabilidad de las formulaciones por 9 meses a travs de la comprobacin mensual de pH, color, textura y homogeneidad de los productos. Preparacin de la locin fotoprotectora Despus del estudio de estabilidad, las formulaciones que fueron estables durante los anlisis se utilizaron en la preparacin de las lociones fotoprotectoras. Fueron preparadas cinco formulaciones con concentraciones diferentes del extracto hidroalcohlico del propleo verde para cada vehculo aprobado: 5%, 10%, 20%, 30% y 40% de extracto en la formulacin. El extracto de propleo verde del Vale do Ao fue preparado en etanol a 70% porque segn Valadao et al. (2007), es la mejor manera para la extraccin de flavonoides presente en el propleo y despus, concentrado en la ruta al vapor de 0,105 g de propleo por mL del extracto para 0,18 g/mL. El anlisis de FPS Se sometieron las formulaciones preparadas con el extracto de propleo verde a anlisis en el espectrofotmetro en la regin de la radiacin UVB (290-320 nm), principal responsable por los foto-daos cutneos. Lo anlisis en el espectrofotmetro son parte de la metodologa de comprobacin de FPS in vitro descrita por Sayre (1979) y utilizada por Mansur et al. (1986), por poseer buena correlacin con los resultados obtenidos en los anlisis in vivo para la misma finalidad, para los productos con filtros orgnicos, lo que se aplica a los flavonoides presentes en el propleo. Fueron preparadas diluciones sucesivas de las formulaciones en gel con el propleo en el etanol a 70% hasta la concentracin de 0,2 L de la formulacin por mL de la solucin. Estas diluciones se analizaron en lo espectrofotmetro y los resultados obtenidos fueron utilizados en la ecuacin siguiente, para el clculo de FPS.
FPS espectrofotomtrico = FC. EE ( ).I ( ). Abs( )
290 320

Donde: FC = factor de la correccin (igual a 10) determinado de acuerdo con dos lociones fotoprotectoras de FPS conocidos, de semejante manera de una locin que contiene 8% de homosalato de FPS igual a 4; EE () = efecto eritemognico de la radiacin de longitud de onda ; I() = la intensidad

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del sol en la longitud de onda y Abs ()= absorbancia de la solucin en la longitud de onda (Borghetti y Knorst, 2006). Los valores del efecto eritemognico (EE) versus la intensidad de la radiacin (I) pueden verificarse, en la Tabla I, para cada longitud de onda usada en lo anlisis y fueron obtenidos por Sayre en 1979.
Tabla 1: Relacin entre efecto eritemognico (EE) versus intensidad da radiacin (I) conforme la longitud de onda () (nm) 290 295 300 305 310 315 320 EE X I 0,0150 0,0817 0,2874 0,3278 0,1864 0,0839 0,0180

Tratamiento de datos Los resultados obtenidos en los anlisis de factor de proteccin solar de las formulaciones fueron calculados a travs de la ecuacin proporcionada por Sayre et. (1979) y demostrados por grficos hechos a travs de Microsoft Excel 2007, Microsoft Office Student 2007. RESULTADOS Durante el anlisis sensorial las muestras del propleo recolectado en el distrito municipal de Cocais das Estrelas, en la regin metropolitana del Vale do Ao presentaron aroma resinoso y balsmico, color verde, sabores amargo suave y fuerte, consistencia rgida a la temperatura ambiente y los pedazos de las muestras se presentaron heterogneos. El anlisis sensorial es importante pues el propleo verde est bien valorizado en el mercado internacional, sugiriendo que hay una relacin entre su color y su composicin qumica pues es rico en compuestos fenlicos. La consistencia a la temperatura ambiente tambin puede dar indicaciones de la relacin resina/cera presente en el propleo: la consistencia rgida puede indicar un alto nivel de resinas, lo que es deseable porque las actividades biolgicas que se verificaron para el propleo se han atribuido a sustancias contenidas en esta fraccin del propleo (Grosso et al., 2007). El aroma y el sabor del propleo indican el tiempo de produccin por las abejas. Las muestras analizadas presentaron las caractersticas sensoriales bien
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evidenciadas, lo que indica que el propleo fue producido recientemente. Todas las muestras analizadas presentaron las caractersticas sensoriales dentro de las normas establecidas por el Ministerio de la Agricultura a travs de la Instruccin Normativa N 3, del 19 de enero de 2001 que dispone sobre la fijacin de identidad y calidad del propleo. La formulacin preparada con gel carbopol para el estudio de estabilidad sufri alteraciones en el color y en la textura muy evidenciada: la formulacin se volvi gradualmente muy consistente y el color se torno ms intenso, tonndose cercano al color caramelo. El pH del medio, bsico (inicialmente igual a 10) demostr ser impropio para las formulaciones con el extracto hidroalcohlico concentrado de propleo verde. La forma farmacutica preparada con el gel natrosol mantuvo el pH inicial hasta el final del estudio de estabilidad (pH=5,5) y no present alteraciones en la consistencia del gel. Durante el estudio tampoco se observaron alteraciones en las fases: la formulacin qued homognea hasta el final del estudio. No se descubrieron otras alteraciones macroscpicas en la formulacin durante los anlisis. La formulacin en emulsin aceite/agua permaneci estable durante el estudio y tampoco present alteraciones macroscpicas como separacin de fases o cambios en la textura del producto. Las formulaciones tpicas en el gel son ventajosas para el uso en las pieles con alto tenor de oleosidad, a pesar de no poseer las caractersticas sensoriales y de extenderse satisfactoriamente sobre la piel como las emulsiones aceite/agua. Despus de seis meses de estudio de estabilidad fueron aprobadas la formulacin en gel natrosol en la formulacin en emulsin aceite/agua. La formulacin en gel carbopol, debido a las alteraciones muy pronunciadas durante el estudio, se reprob para la produccin de locin tpica fotoprotectora. Despus de la aprobacin de las bases para la locin del protector solar, fueron preparadas 8 formulaciones, 4 de cada una de las bases aceptadas: el gel natrosol y la emulsin aceite/agua. Para cada grupo de 4 formulaciones fueron preparadas 4 formulaciones diferentes: 5, 10, 20 y 40% del extracto hidroalcohlico concentrado de propleo verde del Vale do Ao. Cada producto fue condicionado en embalajes plsticos de 15 g, opacos, atxicos e identificados y hechos para la comercializacin de productos cosmticos de uso tpico.

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Tabla 2: Estudio de estabilidad de la formulacin en gel carbopol Fecha de los Alteracin del Separacin de pH anlisis color las fases 05/12/2007 10,0 14/02/2008 10,0 + 07/03/2008 10,0 + 18/04/2008 10,0 + 10/05/2008 10,0 + 26/06/2008 10,0 + - significa ausencia de alteraciones e + significa presencia de alteraciones

Alteraciones de olor + + + -

Alteraciones en la textura + + + + + +

Para el anlisis del factor de proteccin solar, se usaron las formulaciones de gel natrosol, debido a la comodidad del manejo comparado a los productos obtenidos en emulsin aceite/agua. Fueron preparadas diluciones con una concentracin de 0,2 L de formulacin de gel natrosol para un mL de la solucin final. Estas diluciones fueron sometidas al anlisis en el espectrofotmetro en las longitudes de onda UVB: 290, 295, 300, 305, 310, 315 y 320. Los valores obtenidos fueron utilizados en la ecuacin elaborada por Sayre (1979) y tambin utilizada por Mansur et al. (1986) y Borghetti & Knorst (2006) en los estudios de anlisis de FPS de formulaciones tpicas de lociones fotoprotectoras. Los valores de FPS encontrados estn presentados en La Fig. 1. A travs del estudio in vitro realizado en las formulaciones tpicas con el propleo verde del Vale do Ao, fue probada la capacidad fotoprotectora del producto apcola en asunto. Es posible verificar anteriormente en el grfico que al duplicar la concentracin del extracto de propleo verde en la formulacin, fue duplicado, tambin, el FPS del mismo.
Figura 1. FPS versus Concentracin de extracto de propleo (%).

DISCUSIN El aumento del ndice de los clorofluorcarbonos en la atmosfera ha causado efectos deletreos en la capa de ozono presente en la estratosfera y esos efectos deletreos han causado el aumento en los niveles de UVB que alcanzan la superficie de la Tierra (Xu et al., 2007). En todo el mundo se observa un aumento de incidencia de cncer de piel. En los Estados Unidos de Amrica, la incidencia y mortalidad por cncer de piel ha experimentado un crecimiento significativo en la poblacin blanca, principalmente debido a la exposicin al sol. En Chile tambin ha sido registrado el aumento en la mortalidad por el cncer de piel. Hay datos en este pas que anuncian que hay aumento en esos ndices alrededor de 62% entre 1987 y 1998 (Molgo et al., 2005). La evaluacin de la eficacia de lociones protectoras solares ha sido realizada por un periodo largo a travs de mtodos in vivo para la cuantificacin de FPS. El mtodo se basa en el eritema causado por la radiacin UVB en el tejido epitelial humano, analizado en voluntarios. Ese mtodo es eficaz para el descubrimiento de slo algunas unidades de FPS, pero con el incremento de productos con FPS 30 o ms, los valores encontrados en las pruebas para esos productos con FPS ms alto se tornaron inciertos. Por razones econmicas, prcticas y ticas, se ha estado adoptando para el anlisis de FPS de formulaciones fotoprotectoras, un mtodo in vitro seguro y que posee buena correlacin con los resultados obtenidos en los estudios in vivo (Pissavini & Ferrero, 1989). Entre las lociones fotoprotectoras estudiadas en la literatura, las que contienen productos ricos en flavonoides, como el caso del propleo, presentan valores de FPS ms altos. Por ejemplo, Racan et al. (2002) desarroll un protector solar con lquenes ricos en cido snico. Ellos encontraron un FPS 3,4 para la formulacin. Adems, hay lociones fotoprotectoras inorgnicas en el mercado con las formulaciones con FPS iguale a 5, stos normalmente se usan en reas

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dnde la piel est muy delgada, como en los labios. Racan et al. (2002) analiz la capacidad fotoprotectora del Peumus boldus y de los compuestos aromticos de lquenes chilenos que viven en las reas de incidencia alta de radiacin ultravioleta y encontr FPS mximo de 10 para las formulaciones producidas con los lquenes y FPS igual a 3,4 para la formulacin con Peumus boldus. Tabriz et al. (2003), analiz el FPS de lociones fotoprotectoras con el extracto de flor de Rosa damascena que presenta flavonoides, lo que fue confirmado en las pruebas de identificacin de los flavonoides en el estudio. Las emulsiones constituyen el mejor vehculo para las lociones fotoprotectoras pues est constituidas por componentes tanto apolares como polares y pueden vehicular as substancias fotoprotectoras de ambas polaridades. Las emulsiones aceite/agua constituyen los sistemas ms empleados y ellos garantizan proteccin apropiada con una sensacin tctil ms cmoda al usuario. Los geles son vehculos obtenidos a travs de un espesante hidroflico que pueden ser naturales (alginatos) o sintticos (copolmeros del acrilamida). Estos pueden vehicular, tambin, tanto substancias apolares como polares, pero apenas los polares proporcionan una formulacin translcida, los polares vuelven el gel opaco (Flor & Davolos, 2007). Las formulaciones con propleo, desarrolladas en el presente estudio, presentaron FPS mayores que algunas formulaciones disponibles en el mercado, como el Nivea Sun Spray, con FPS igual a 5. Las bases de las formulaciones preparadas (emulsin aceite/agua y gel natrosol) ya han sido utilizadas para fabricar frmacos tpicos, por consiguiente, su uso es comprobadamente seguro. Los productos preparados tambin demostraron ser estables por periodo largo (al menos seis meses). La bsqueda de nuevos productos naturales como protectores solares ha sido tema de varios estudios. Por ejemplo, Aquino et al. (2002) analizaron la actividad fotoprotectora del extracto de Culcitium reflexum en el que encontraron la presencia de flavonoides. Es posible producir formulaciones fotoprotectoras a un costo bajo con los productos naturales (Racan et al., 2002). CONCLUSIONES Los resultados obtenidos en este estudio confirman la accin fotoprotectora del propleo verde del Vale do Ao, Minas Gerais. En este estudio tambin fue posible desarrollar formulaciones estables para la
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elaboracin de lociones fotoprotectoras a base del propleo verde. Los productos desarrollados durante la investigacin deben ser perfeccionados para que sean utilizados en los diferentes tipos de piel y para que sean alcanzados valores de FPS sobre 10. Son sugeridos estudios in vivo de las formulaciones preparadas para ser demostrada la efectividad de estas. REFERENCIAS
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Protector solar de propleo verde de Minas Gerais

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Boletn Latinoamericano y del Caribe de Plantas Medicinales y Aromticas Vol. 8 (4) 2009 | 288