Prctica especial Prctica especial Prctica especial Prctica especial Prctica especial Prctica Autor: Ulate Rodrguez Jacson

A86444 Tutora y Asesora Metodolgica: Silva Trejos Paulina Universidad de Costa Rica, Facultad de Ciencias Bsicas, Escuela de Qumica, Seccin de Qumica Analtica, Laboratorio de Anlisis Qumico Cuantitativo II, QU-0347, Grupo 02. Prctica especial, 12 junio-26 junio, I Ciclo 2013. | |

Anlisis de Calcio (Ca) en Leche en polvo fortificada marca Nido Nestl por Espectrometra de Absorcin Atmica en modalidad de Llama
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Fecha de Inicio: 12 junio 2013 Fecha de Cierre: 26 junio 2013 Jacson Ulate Rodrguez

Resumen
Se realiz la cuantificacin de Calcio (Ca) presente en una muestra de leche en polvo comercial por medio de

correlacin lineal de 0,9994. Los lmites de cuantificacin y deteccin obtenidos fueron de 0,20 mg/L y 0,062 mg/L respectivamente. calibrado fue La 0,054 sensibilidad A.L/mg y de la

espectrometra de absorcin atmica en su modalidad de llama. Se eligi como muestra la leche marca Nido Nestl debido a su elevado contenido en calcio y su popularidad como una de las

sensibilidad analtica fue de 1,8 L/mg. La precisin se examin empleando

desviacin estndar relativa para cada par de muestras, para las muestras sin enriquecimientos el Sr calculado fue de 1,02, mientras que el Sr para las muestras enriquecidas fue de 1,04. La veracidad se comprueba recuperacin mediante porcentajes mediante de el

principales frmulas para infante en el pas. Bsicamente se pesaron

aproximadamente 5,0 g de muestra por cuadruplicado en crisoles de laboratorio, se les aplic previa calcinacin y luego una digestin seca en una mufla. Se trabaja con un rango dinmico de 0,064 mg/L a 1,40 mg/L1 con un coeficiente de

realizados

enriquecimiento de dos de las cuatro muestras obteniendo los siguientes

porcentajes: para la muestra nmero 3, la recuperacin fue de 112,7% y en el caso 1

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Prctica especial Prctica especial Prctica especial Prctica especial Prctica especial Prctica de la muestra nmero 4 de 855,6 ambas a un 95% de confianza. en especial los derivados lcteos que se sabe contienen gran cantidad del mineral (la leche natural tiene cerca de 35,8 a 42,3 % de Ca soluble). 2 La leche constituye un alimento de la canasta bsica en Costa Rica y es un alimento esencial durante las primeras etapas de vida de un infante (Ministerio de Salud, 1997)3, por lo que las soluciones frmula comerciales que se utilizan para alimentar a los nios tras su etapa de lactancia deben estar altamente

Introduccin
El Calcio es un metal alcalinotrreo (nmero atmico 20); es el quinto elemento y el tercer metal ms abundante en la superficie terrestre por lo que es denominado uno de los macrominerales. El calcio no slo es un componente importante de la corteza terrestre sino tambin es el mineral de mayor

abundancia en el organismo y el cuarto componente ms importante tras el agua, protenas y grasas, cerca del 99% se encuentra almacenado en los huesoso y el 1% restante repartido en los lquidos celulares12. De all su importancia, ya que junto al fsforo ayudan al desarrollo seo, adems de ser participe en la coagulacin, permeabilidad de las membranas, es regulador nervioso y neuromuscular, muscular

fortificadas con calcio, esta es una de las razones que explica la eleccin de la muestra sobre la leche lquida comn. Quiz la razn ms importante en la determinacin de calcio en alimentos, est ligada directamente a los ndices altos de osteoporosis en poblacin adulta mayor y en los casos de desnutricin en infantes, por lo que al verificar los contenidos del metal se identifica si la cantidad que poseen los alimentos se encuentra dentro de las necesidades del pas o requiere fortificamientos.4 El mtodo estndar oficial de la AOAC para el anlisis de Calcio en diversos alimentos (norma 985,35), emplea la tcnica instrumental de espectrometra de absorcin atmica en modalidad de llama que fue el mtodo base que se aplic en este anlisis, con modificaciones leves basadas en el mtodo validado para anlisis de calcio en diversos alimentos 2

colaborando

contraccin

(inclyase actividad cardaca).2,12 Debido a las importantes actividades que lleva a cabo el calcio es importante su consumo en la dieta, una ausencia del mismo puede desembarcar en problemas como la osteoporosis y un exceso en su consumo provoca hipercalcemia, por lo que su consumo regulado es importante. La absorcin de calcio no es un problema para el organismo ya que varias

legumbres, verduras poseen ste mineral,

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Prctica especial Prctica especial Prctica especial Prctica especial Prctica especial Prctica bajo la misma tcnica desarrollado por Ericka Valverde y Paulina Silva1. Adems se emple como referencia el mtodo estndar oficial de la preparacin de patrones de calcio para el anlisis por espectrometra de absorcin atmica de la AOAC (norma 965,09), con el fin de determinar la cantidad de calcio presente en la muestra seleccionada.6

Parte experimental
La seleccin de la muestra se realiz con base en dos preceptos: el primero de ellos es como se mencion las frmulas infantes cuentan con gran cantidad de calcio presente en cantidades pequeas de leche (7,00 mg/g reportado en la tabla nutricional del producto), lo que

equivaldra a una porcin de muestra

Equipo
El proceso de medicin se realiz con un espectrmetro de absorcin atmica Varian SpectrAA modelo 220 Fast

pequea para trabajar asegurando gran concentracin del analito, a su vez se reduce el tiempo de muestreo; segundo, el tratamiento de leche lquida resulta complicado en algunas situaciones (ej: cuando se posee mayor proporcin de agua que lcteo o cuando las protenas no precipitan de forma adecuada2) requiere mayor tiempo de muestreo y de

Sequential, adems el espectrmetro estaba equipado con una lmpara de ctodo hueco de calcio y se emple una llama de monxido nitroso y acetileno con una temperatura aproximada de 2600 a 2800 C con un flujo de 18 L/min de NO y 2 L/min de acetileno, una altura con un rango 1-1,5 cm por 0,5 nm de espesor, formando una llama de cono rojo. La longitud de onda de trabajo empleada fue de 422,7 nm en el espectro visible5. En cuanto al equipo volumtrico se emplearon 4 crisoles de porcelana, 12 balones de 50,00 mL, 5 balones de 250,00 mL y un baln de 1000,00 mL, adems de una pipeta de 4,00 mL, una de 25,00 mL graduada y una micropipeta de 100-1000 L, toda la cristalera de tipo A, tambin se emple una balanza analtica

tratamiento de la matriz, sin embargo el tiempo era factor limitante. Se extrajo la muestra del empaque de 120 g, se coloc sobre una superficie de aluminio limpia y se procede al muestreo por cuarterizacin, posteriormente se seleccionaron dos cuartos opuestos como muestra de trabajo, se requera que la muestra principal tuviera una masa de 4,5 g a 5,5 g, por lo que se procede a pesar 5,0 g aproximadamente de la muestra por cuadruplicado en crisoles limpios.

Posteriormente se enriquecen dos de las muestras con una alcuota de 5,00 mL para cada muestra de una disolucin de 3

electrnica de cuatro decimales calibrada.

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Prctica especial Prctica especial Prctica especial Prctica especial Prctica especial Prctica 200 mg/L en Calcio para luego llevarlas a calcinacin empleando quemadores de Busen a una llama alta azul, rica en oxgeno esto con el fin de eliminar la mayora de materia orgnica en la muestra. Despus, se ingresaron los crisoles en la mufla a 525 C durante 22 horas para terminar de calcinar la muestra y eliminar en su totalidad la presencia de carbono. (Formacin de cenizas blancas). Mientras se calcinaba la muestra se prepararon los patrones de calcio, para ello se pesaron 0,5038 g de carbonato de calcio (CaCO3) anhidro 98,5% de pureza marca Merck, Lote: 929 que equivaldran a 198,7 mg de calcio, se disolvera la sal empleando un mnimo volumen de cido clorhdrico (~13 mol/L) transparencia, se hasta lograr que tardaba el cido en evaporarse, se enfri y se aadi nuevamente una porcin de cido para redisolver las cenizas adheridas en las paredes

ayudndose con un agitador para este caso, se trasvasaron las cenizas de forma analtica a 4 balones de 250,0 mL individualmente y tras aforar y

homogenizar se tom una alcuota de 160 L en cada caso (empleando puntas nuevas para la micropipeta con el fin de evitar la contaminacin cruzada),

llevndolas a 4 nuevos balones de 50,00 mL donde se realizaran las mediciones. 6 Tras la preparacin de las muestras, los patrones y el blanco se pas a la etapa de medicin en el espectrmetro,

iniciando con la calibracin del equipo con agua ultra pura y procediendo a medir desde el patrn menos concentrado al ms concentrado finalizando con las muestras y limpiando el capilar entre cada medicin con agua para evitar la

trasvas

cuantitativamente a un baln de 1000,00 mL y se afor. Tras homogenizar se tom una alcuota 4,00 mL de la disolucin madre de (198,70,3) mg/L llevndola a un baln de 250,0 mL, nuevamente se afora y se homogeniza para tener la disolucin patrn de trabajo de

contaminacin. Es importante destacar que entre cada medicin espectromtrica se verifico la respuesta del equipo empleando una disolucin patrn de calcio de 0,8 mg/L aproximadamente.

(3,180,01) mg/L de donde se tomaran 7 alcuotas de 1, 3, 5, 7, 11*, 19, 22 mL respectivamente, para preparar
1, 6

los

patrones de calcio empleados.

Resultados
Se llev a cabo el anlisis de calcio en una muestra de leche en polvo marca Nido Nestl por medio de absorcin atmica empleando el mtodo de 4

Tras la calcinacin la muestra se disuelve con un pequeo volumen de cido ntrico (1 mol/L) y se llev a sequedad durante unos 6-10 min, tiempo

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Prctica especial Prctica especial Prctica especial Prctica especial Prctica especial Prctica cuantificacin alimentos de oficial la de AOAC calcio en se obtuvo un Sr 1,02 y para los pares de muestras enriquecidas se obtuvo un Sr igual a 1,04 a un 95% de confianza. Los lmites de deteccin y de

(985,35)

empleando modificaciones mnimas en el mtodo basados en la referencia 1 y en el mtodo de preparacin de patrones de calcio de la AOAC (965,09) referido en el primer mtodo mencionado. El rango dinmico ptimo se encuentra en el intervalo de (0,064-1,40 mg/L) con un coeficiente de correlacin lineal de 0,9994. La sensibilidad de calibrado estimada fue de 0,054 A.L/mg y la sensibilidad analtica fue de 1,8 L/mg. En la siguiente figura se muestra la curva de calibracin empleada en la cuantificacin.
0,0800 0,0700 Absorbancia del analito (0,0005) 0,0600 0,0500 0,0400 0,0300 0,0200 0,0100 0,0000 0,0 -0,0100 0,2 0,4 0,6

cuantificacin se obtuvieron mediante los mnimos cuadrados, con 0,062 mg/L y 0,20 mg/L respectivamente. En la figura 2 se pueden observar claramente ambos lmites para este anlisis. Una vez terminada la medicin de las muestras utilizadas, se realiz el

tratamiento y anlisis de los datos obtenidos experimentalmente, as se obtuvo los valores de cuantificacin del calcio en las muestras tras la interpolacin en la curva de calibracin y al aplicar los

y = 0,054(0,002)x - 0,007(0,001) R = 0,9994

0,8

1,0

1,2

1,4

1,6

Concentracin de Ca (0,1 mg)

Figura 1. Curva de calibracin para determinacin de calcio en leche por medio de mtodo de mnimos cuadrados no ponderados

La precisin se evalu mediante el desvo estndar relativo de los pares de muestras con condiciones similares, es decir, para las muestras no enriquecidas

factores de dilucin adecuados se obtiene las proporciones de calcio en masa de

muestra medida. Los cuadros siguientes muestras los resultados obtenidos.

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Prctica especial Prctica especial Prctica especial Prctica especial Prctica especial Prctica

0,0200 0,0150 Absorbancia del analito 0,0100 0,0050 0,0000 0,000 -0,0050 -0,0100

LD

LC

0,100

0,200

0,300

0,400

0,500

0,600

Concentracin de Ca (mg)

Figura 2. Lmites de deteccin y de cuantificacin para ste anlisis de calcio en especfico a un 95% de confianza. Cuadro I. Concentracin y absorbancia de los patrones de calcio empleados en la curva de calibracin.

Patrones Patrn 1 Patrn 2 Patrn 3 Patrn 4 Patrn 5* Patrn 6 Patrn 7 Blanco

Concentracin (mg/L) (0,064 0,003) (0,191 0,009) (0,32 0,02) (0,44 0,02) (0,70 0,03)* (1,21 0,06) (1,40 0,07) N\A

Absorbancia (0,0005) -0,0055 0,0036 0,0112 0,0172 0,0210* 0,0572 0,0676 0,1765*

*Nota: Patrn descartado con la prueba estadstica

Cuadro II. Muestras empleadas en la cuantificacin de calcio en leche.

Muestras Muestra 1 Muestra 2 Muestra 3 (E) Muestra 4 (E) E = muestra enriquecida

Concentracin (mg/L) (1,2 0,1) (1,3 0,1) (1,3 0,1) (1,4 0,1)

Absorbancia (0,0005) 0,0567 0,0625 0,0649 0,0656

6 Laboratorio Anlisis Qumico Cuantitativo II Laboratorio Anlisis Qumico Cuantitativo II

Prctica especial Prctica especial Prctica especial Prctica especial Prctica especial Prctica

Cuadro III. Contenido de calcio en la masa medida y porcentajes de recuperacin para muestras enriquecidas.

Muestras Muestra 1 Muestra 2 Muestra 3 (E) Muestra 4 (E)

Masa medida ( 0,0002 g) 5,0389 5,0659 5,0097 5,0288

Contenido Ca (0,08 mg/g) 18,61 20,05 20,27 21,75

Porcentaje de recuperacin N\A N\A 112,7% 855,6% *

Discusin
La fase determinante de todo proceso analtico es el muestreo, de ste

Calcio tiende a formar compuestos muy estables con el fosfato.1, 2, 6

El muestreo no slo es una parte importante del anlisis en s, sino tambin la eleccin de la muestra, como se mencion anteriormente para este

dependen la precisin y exactitud del proceso as como los errores a posteriori.8 Claro est que el proceso de muestreo no es idntico para todas las posibles matrices a analizar, por lo que tambin es dependiente del tipo de muestra que se desea analizar, principalmente si se habla de un alimento, estos requieren de estrategias de muestreo en muchos casos ms cuidadosas que en otro tipo de muestras.
9

anlisis se tomaron en cuenta dos factores, una de ella era el tiempo de tratamiento que requera la muestra y la otra la bsqueda de una matriz pequea pero con alto contenido de analito, incluso se podra mencionar un tercer factor, el cual sera el riesgo de tratar una matriz que no se hubiera tratado antes, esto repercute tiempo.
1,2

Las muestras slidas como en el caso de este anlisis, requieren de tratamiento previo mucho ms cuidadoso que

directamente

en

el

factor

La muestra se selecciona con base en estos dos factores y se adquiere en un supermercado al azar ubica en San Ramn de Alajuela. Es importante hacer la acotacin a este punto que el agua empleada para el anlisis fue agua destilada de laboratorio que en un principio no fue el reactivo 7

muestras en matrices lquidas, ya que en el proceso de digestin se pueden generar prdidas de o analito formacin por de

sobrecalentamiento

compuestos no deseados y distintos al xido del analito que se quiere en buena teora generar, como por ejemplo a que el

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Prctica especial Prctica especial Prctica especial Prctica especial Prctica especial Prctica solicitado para el anlisis (se solicita agua ultra pura), pero en vista de su defecto, se decide trabajar con sta, se tiene nocin de la presencia de calcio en ella, pero debido a la inexperiencia no se vislumbra que la cantidad de calcio presente en el agua empleada fuera tan grande y las repercusiones que esto tendra en los resultados obtenidos. interpolacin en la curva (figura 1) y aplicar sobre esos datos los factores de dilucin respectivos, como se puede notar hay una diferencia notable en la muestra 4 que se ve acentuada en porcentaje de recuperacin anormal, refleja un error determinado en la muestra8, donde una posible causa podra deberse al agua destilada, aunque es hecho (vase

Figura 3. Curva de calibracin para calcio emplea en el mtodo de referencia.

Se realizaron 7 patrones con las concentraciones mostradas en el cuadro I, de los cuales el patrn central (patrn 5), present una desviacin de la linealidad mostrada por sus vecinos afectando importantemente el coeficiente de

absorbancia del blanco, cuadro I), no es la causa definitoria. El mismo caso ocurre para la muestra 3 aunque en una proporcin mucho menor que en el caso de la muestra. En el caso de los patrones, se realiz una correccin con el blanco en las absorbancias, esto tiene como efecto que el intercepto de la curva antes de la correccin fuera de 0,169 que dista del valor obtenido por el analista en el anlisis de referencia1 con un intercepto que pasa 8

correlacin lineal (R), tras aplicarle una prueba estadstica se determina que el valor no pertenece a la curva y se elimina de la misma. Del anlisis se concluyen los valores mostrados en el cuadro III, tras la

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Prctica especial Prctica especial Prctica especial Prctica especial Prctica especial Prctica por cero, tras la correccin se ve la mejora con un intercepto mucho ms cercano a cero (-0,007) y la curva tiende a parecerse ms a la referencia (figura 3). Segn los resultados obtenidos en el anlisis se puede decir que el valor reportado en la tabla nutricional no es un valor que refleje la veracidad, por lo que no puede ser utilizado como valor referente. Los datos obtenidos en el anlisis se pueden resumir de la siguiente manera, la cantidad de calcio en la leche analizada es de 1933 mg de calcio por cada 100 g de leche, estas cifras no son absolutas debido al error presente por introduccin de calcio al analito va disolvente (agua) y adems dista del intervalo referente para la cantidad de calcio en leche en polvo en Costa Rica (735 mg/100 g)1 por cerca de ms del doble, siendo evidente una contribucin externa de Calcio. Por ltimo es importante mencionar desde el punto de vista biolgico la gran contribucin de calcio en alimentos como la leche lquida y en polvo, debido a su gran concentracin en calcio y su 2 rplicas, se recomiendan cuatro, esto ayuda a minimizar o del todo eliminar muestras que posean errores

determinados y que estos sean muy grandes, adems de mejorar la veracidad del anlisis. Debido a la dureza del agua y a la estabilidad del calcio en el ambiente, aunque se emplee destilacin al agua, la cantidad de calcio presente es bastante grande para realizar un anlisis

cuantitativo como ste, por lo que no se recomienda emplearla. La cantidad de calcio obtenida supera en ms del doble al valor de referencia, aun as la cantidad del mineral reportada por la tabla nutricional est por debajo del valor de referencia. Es de suma importancia optimizar de forma adecuada las condiciones del equipo de espectrometra atmica, ya que en el anlisis de calcio son muy comunes las fluctuaciones en absorbancias

principalmente en los valores medios de la curva, as como tambin empleando una llama de aire/acetileno en ausencia de un grupo liberador o protector, el calcio tiende a formar compuestos refractarios (como pirofosfato de calcio),
5

importancia en el consumo diario.

se

Conclusiones
Para determinar la veracidad en un anlisis de este tipo se requiere mayor cantidad de muestras con

recomienda el uso de estos grupos.

Si se emplea EDTA para este caso (en lugar de xido de lantano), la

documentacin oficial no referencia nada sobre este reactivo, se recomienda 9

enriquecimientos, por lo menos superior a

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Prctica especial Prctica especial Prctica especial Prctica especial Prctica especial Prctica emplear 0,1% de concentracin final en el baln y no 2,5% como hace referencia el mtodo 965,09 de la AOAC.
6,7

5. Varian, Inc (2008). Varian AA220 User Manual. Ed. Varian BV. Herculesweg, HOL. P14. 6. Official Methods of Analysis of

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International,

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Method 985.35, 18th Edition , Revision # 1, 2005 7. Official Methods of Analysis of AOAC International, Official

analtica

cuantificar el calcio mediante la espectroscopa atmica de de llama absorcin y su

Method 965.09, 18th Edition , Revision # 1, 2005 8. Skoog D. (2003). Fundamentos de qumica analtica. Ed. McGraw-Hill, Mxico D.F. MEX. 9. Cava P. (2012). Anlisis de

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Mxico D.F. MEX.

10 Laboratorio Anlisis Qumico Cuantitativo II Laboratorio Anlisis Qumico Cuantitativo II