UNIVERSIDAD NACIONAL DE RIO CUARTO FACULTAD DE CIENCIAS EXACTAS, FCO.QCAS Y NAT.

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGA E INMUNOLOGA CARRERA: MICROBIOLOGA PROGRAMA ASIGNATURA INGENIERA GENTICA Y BIOTECNOLOGA (CD. 2166) PROFESORAS RESPONSABLES: Dra. Cristina Bogni y Dra. Claudia Raspanti DOCENTES AUXILIARES: Dra. Elina Reinoso Dr. Matas Pellegrino Mic. Ignacio Frola AO ACADMICO: 2010 RGIMEN DE LA ASIGNATURA: BIMESTRAL BIMESTRE: MAYO - JUNIO HORAS SEMANALES: 9 HORAS REGIMEN DE LA MATERIA 2009 La materia consta de: 1) clases tericas 2) clases terico-prcticas de discusin de problemas 3) clases de trabajos prcticos. 4) Visitas a diferentes centros de investigacin y docencia en Biotecnologa del pas. Las clases de terico-prcticas de discusin de problemas son obligatorias y se evala el manejo por parte del estudiante de los conceptos bsicos de la disciplina necesarios para la interpretacin, anlisis crtico y resolucin de los problemas que reflejan experimentos cientficos del campo de la Gentica. EVALUACION: *Examen Parcial: Se tomar 1 examen parcial escrito. *Prcticos: Se tomar un cuestionario escrito al final de dichas actividades. *Examen Final: Escrito REGIMEN DE REGULARIDAD Para lograr la regularidad los alumnos debern cumplir los siguientes requisitos mnimos: *Cumplimentar con asistencia del 80% a las clases de trabajos prcticos. *Alcanzar una calificacin mnima de cuatro puntos en cada una de las evaluaciones: prcticos y parcial. En el caso de no alcanzarse dicho puntaje, cada actividad podr ser recuperada una vez. REGIMEN DE PROMOCIN *Cumplimentar con asistencia del 80% las actividades de clases tericas y con asistencia del 100% a los trabajos prcticos y seminarios. *Alcanzar una calificacin NO MENOR A SIETE en la evaluacin del Parcial y un PROMEDIO DE SIETE PUNTOS CON NOTA NO INFERIOR A SEIS en cada una de las evaluaciones de prcticos. No habr recuperatorio de parcial. En el caso de no alcanzarse la calificacin de 7 en los trabajos prcticos SE PODR RECUPERAR UN TRABAJO PRCTICO CUANDO SU NOTA NO SEA INFERIOR A 6.

OBJETIVOS GENERALES: Brindar al alumno una actualizacin de contenidos tericos, sin olvidar los conceptos clsicos de la disciplina. Brindar capacitacin en los mtodos y tcnicas de estudio en gentica molecular e ingeniera gentica. Estimular el razonamiento y resolucin de situaciones problemticas vinculadas con temticas de la asignatura.

PROGRAMA UNIDAD 1: Ingeniera gentica. Tema 1: Concepto de Ingeniera Gentica: Objetivos y alcance de la Ingeniera Gentica. Desarrollo de la tecnologa del ADN recombinante. Debate inicial y estado actual. Tema 2: Clonado I: Revisin de enzimologa del DNA recombinante: sistemas de restriccin y modificacin. Rol biolgico del sistema. Enzimas de restriccin. Mapeo fsico de DNA por enzimas de restriccin. Fundamento. Mapeo por digestin parcial y digestin mltiple. Electroelucin de DNA. DNA polimerasa. DNA ligasa. Polinucletido quinasa. Terminal transferasa. Nucleasas. Fosfatasa alcalina y CIP. Exonucleasa S1. Transcriptasa reversa. Tema 3: Clonado II: Concepto de clonado molecular. Plsmidos como vectores de clonado. Fago lambda como vector de clonado. Otros vectores: M13, cromosomas artificiales YACs. Ventajas y desventajas de los diferentes tipos de vectores. Condiciones que deben reunir para ser considerados como vehculos de clonado. Hospedadores para vectores de clonado: procariticos y eucariticos. Construccin de genotecas a partir de DNA. Ligacin. Transformacin. Deteccin de clones recombinantes. Construccin de genotecas a partir de RNA. Estrategias alternativas de clonado: clonado por PCR. Subclonado. Tema 5: Expresin gentica en bacterias y en levaduras. Vectores de expresin: plsmidos de alta eficiencia, promotores fuertes, inducibles. Expresin de genes eucariticos en bacterias. Protenas de fusin. Sistemas de expresin adaptados a gran escala. Manipulacin de factores que afectan la traduccin. Mejora de la estabilidad de protenas recombinantes. Tema 6: Anlisis funcional de los genes: Microarreglos: Fundamentos de la tcnica. Aplicaciones.

UNIDAD 2: Biotecnologa. Tema 5: Concepto de biotecnologa: Empleo de las herramientas de gentica microbiana, gentica molecular e ingeniera gentica en la obtencin de productos de importancia para el hombre.

Tema 6: Aplicaciones biotecnolgicas: Terapia Gnica: definicin y generalidades. Terapia gnica germinal y somtica. Terapia gnica in vitro, in vivo e in situ. Terapia antisentido. Vectores virales y no virales. Vacunas de nueva generacin: genticas, comestibles y teraputicas. Fundamentos de las construcciones genticas para su obtencin. Administracin. Ventajas y desventajas de su uso. Gentica Forense: Estudios de Paternidad y parentesco biolgico. Identificacin de personas desaparecidas a partir del cadver. Criminologa, anlisis de restos orgnicos como pelos, semen, saliva, sangre, etc. Fundamentos de la tcnica de la prueba de ADN. Marcadores genticos utilizados. Trabajos Prcticos: a) Desarrollo experimental del prctico: Preparacin de soluciones y medios de cultivo. Utilizacin de equipamiento. b) Anlisis de resultados y conclusiones. c) Presentacin escrita del trabajo concluido con: Introduccin. Objetivos. Materiales y mtodos. Resultados y discusin de los resultados obtenidos. Conclusin. Trabajo Prctico: Clonado del gen regulatorio sae de Staphylococcus aureus. TP N 1: Amplificacin por PCR del gen regulatorio de S. aureus, denominado sae. Amplificacin del gen sae por la Taq polimerasa Corrida electrofortica del producto de amplificacin en geles de agarosa TP N 2: Clonado del fragmento ampificado en el ve ctor de clonado pGEM-T Easy: Reaccin de ligacin del ADN amplificado con el vector pGEM-T-Easy Electroporacin de la mezcla de ligacin a la cepa de E. coli DH5 TP N 3: Extraccin de ADN de plsmidos a partir de bacterias Gram (-): Extraccin de ADN de plsmidos a partir clones recombinantes Corrida electrofortica del ADN en geles de agarosa TP N 4: Reaccin de Restriccin Digestin con EcoRI de los plsmidos recombinantes. Corrida electrofortica del producto de la digestin enzimtica Guias de problemas: Las guas son entregadas a los alumnos para su ejercitacin y para ayudar a una mejor comprensin de los temas impartidos en las clases de tericas. 1. Enzimas de restriccin y construccin de mapas fsicos de DNA 2. Ingeniera gentica

Bibliografa: Echenique, Viviana; Rubinstein, Clara; Mroginski, Luis. 2004. Biotecnologa y mejoramiento vegetal. Ed. INTA Lewin B. 1997. Genes VI. Academic Press. Lewin, B.2004. Genes VIII. Ed: Pearson Greene, J. Rao, V. 1998 Recombinant DNA Principles and Methodologies Ed. Marcel Dekker Inc. Klug, Cummings. 1997. Concepts of Genetics. Ed. Prentice- Hall. Inc. Micklos, D. Freyer, G. 1990. DNA Science. Ed. Carolina Biological Supply Company. Old. R.W., Primrose S.B. 1995. Principles of Gene Manipulation. Ed. Blackwell Science Ltd. Griffiths, Miller, Suzuki, Lewontin, Gelbart. 1995. Introduccin al analisis gentico. Ed. Freeman and Company. Miller, Jeffrey H. 1992. Experiments in molecular genetics Editorial: Cold Spring Harbor Trabajos cientficos disponibles en la Hemeroteca y en el laboratorio. (*) En la biblioteca se estn recibiendo libros nuevos en forma permanente, los que pueden ser utilizados.