UNIVERSIDAD RICARDO PALMA FACULTAD DE MEDICINA HUMANA FARMACOLOGIA

EFECTOS DEL EXTRACTO ETANOLICO DE MYRCIARIA DUBIA (CAMU CAMU) COMO CICATRIZANTE DE HERIDAS EN RATONES ALBINOS.

LIMA PER 2013

UNIVERSIDAD RICARDO PALMA FACULTAD DE MEDICINA HUMANA FARMACOLOGIA

EFECTO DEL EXTRACTO ETANOLICO DE MYRCIARIA DUBIA (CAMU CAMU) COMO CICATRIZANTE DE HERIDAS EN RATONES ALBINOS

ASESORES:

Lic. Eduardo Jess Villalobos Pacheco Alison Roco Velsquez Vsquez Carla del Pilar Cupe Quispe Pedro Infante Bustamante

INVESTIGADORES: Castillo Mrquez, Jos Luis Medrano Amuy, Hctor Ricardo Torres Otrola, Claudia Andrea Judith Vargas Campana, Carla Alejandra

LIMA PER 2013

Efecto Del Extracto Etanolico De Myrciaria dubia (Camu Camu) como cicatrizante de heridas en ratones albinos

Castillo-Mrquez, Jos Luis; Medrano-Amuy, Hctor Ricardo; Torres Otrola, Claudia Andrea Judith; Vargas-Campana, Carla Alejandra.

I.

PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA

1.1 FORMULACIN DEL PROBLEMA Se reducen las reas de las heridas a nivel tisular con la aplicacin de la crema a base de Myrciaria dubai en ratones albinos?

1.2 JUSTIFICACIN DEL PROBLEMA Cuando la herida no cicatriza por unin primaria, se lleva a cabo un proceso de cicatrizacin ms complicado y prolongado. La cicatrizacin por segunda intencin es causada por infeccin, trauma excesivo, prdida o aproximacin imprecisa del tejido. En este caso, la herida puede dejarse abierta para permitir que cicatrice desde las capas profundas hacia la superficie exterior. Se forma tejido de granulacin que contiene miofibroblastos y cierra por contraccin. El proceso de cicatrizacin es lento y habitualmente se forma tejido de granulacin y cicatriz. Como resultado, puede ser necesario que el cirujano trate el excesivo tejido de granulacin que puede protruir por el margen de la herida y evitar epitelizacin.

Como punto a parte vemos que el Per es un pas con una amplia biodiversidad de plantas medicinales que la poblacin usa para aliviar sus males; y estas costumbres ancestrales aun persisten en el tiempo. Muchos de

los efectos de las diversas plantas han sido motivo de estudio como el caso de Myrciaria dubia (Camu Camu), que gracias a su alto contenido de Vitamina C es til como cicatrizante de heridas y reparacin y mantenimiento de los tejidos por la formacin de colgeno; tambin es importante en la sntesis y produccin de hormonas y neurotransmisores.

Viabilidad del Proyecto Se cuenta con la capacidad tcnico y el apoyo logstico para el desarrollo de la investigacin correspondiente al acceso: Laboratorio, Maquinarias y Jaulas adecuadas Animales y alimento balanceado certificados por el Instituto Nacional de Salud El personal profesional y tcnico Recursos econmicos

1.3 OBJETIVOS 1.3.1 OBJETIVO GENERAL - Demostrar el efecto cicatrizante del extracto etanlico de Myrciaria dubia (Camu Camu) en heridas incitadas en ratones albinos.

1.3.2 OBJETIVOS ESPECFICOS Demostrar el efecto cicatrizante del extracto etanlico del Camu Camu (Myrciaria dubia) al 1% en heridas incitadas en ratones albinos. Analizar la rapidez de cicatrizacin de la crema a base del extracto etanlico del Myrciaria dubia (Camu Camu) al 1% de las heridas incitadas en ratones albinos.

II. MARCO TERICO

2.1 ANTECEDENTES: a. Eficacia tpica de Myrciaria dubia en la curacin de quemaduras de segundo grado en ratas Holtzman: El siguiente trabajo fue realizado en el 2009 en la Universidad Nacional Mayor de San Marcos, el objetivo fue comparar el efecto de la crema a base de Myrciaria dubia con el efecto antibitico de la crema de sulfadiazina argntica. Fue un estudio experimental aleatorizado incompleto. Contaron con 15 ratas Holtzman hembras de 9-10 semanas a las cuales se les produjo quemaduras de segundo grado, cuadrada de 1cm2 de piel del dorso usando un cautn modificado para producir tres quemaduras trmicas por cada animal. Se seleccion aleatoriamente la herida para cada tratamiento. La crema a base de camu-camu se elabor con una extraccin etanlica al 5% para mezclarla con Sepigel 350 a una concentracin de 5%. Las heridas recibieron administracin cada doce horas durante cinco das. Luego, el promedio de la reduccin de la cicatriz en el grupo camu-camu es de 69,4 52,85, mientras que en el grupo sulfadiazina argntica es de 69,26 53,66. Microscpicamente se observ similar infiltracin leucocitaria en la dermis y en el estrato seroso en los grupos camu-camu y sulfadiazina argntica, y ambas fueron menores que en la del grupo control. Se utiliz la prueba ANOVA, se observ que, a pesar de que la cantidad de fibroblastos en el grupo camu-camu era ligeramente mayor que en la de sulfadiazina argntica, la diferencia no era estadsticamente significativa. Y gracias a la presencia de epidermis en el grupo Camu-Camu, a

diferencia de los dems grupos, se puede deber a una mayor de activacin de clulas basales o a una detencin de los procesos oxidativos debido a la propiedad antioxidante de este fruto.

b.

Propiedades prooxidantes de Myrciaria dubia (Camu Camu): El siguiente estudio fue realizado en el 2005 en la Universidad Nacional Mayor de San Marcos que tuvo como objetivo determinar el efecto del ion frrico sobre las propiedades prooxidantes de Myrciaria dubia (Camu Camu). Fue un estudio analtico, experimental, prospectivo y longitudinal. Se evalu las propiedades prooxidantes de Myrciaria dubia, fruto caracterizado por tener un elevado contenido de vitamina C, frente a Fe(III), etilendiamino tetraactico (EDTA), tiourea y manitol. Tuvo como resultado que el camu camu en presencia de Fe-III en tampn fosfato a pH 7,4 increment notablemente la generacin de radicales libres a travs de una cintica de saturacin, efecto que fue dependiente de la concentracin del metal. La presencia de tiourea o manitol, compuestos de conocida accin antioxidante, inhibieron la formacin de radicales libres, en cambio el EDTA lo increment. Esto llev a la conclusin que el camu camu incrementa la generacin de radicales libres en presencia de Fe(III) y EDTA.

c.

Efecto citoprotector de Myrciaria dubia (Camu Camu) en tres lneas celulares de ratn expuestos in vivo a bromato de potasio: El siguiente estudio fue realizado en Diciembre del 2010 en la Universidad Nacional Mayor de San Marcos, se evalu in vivo la capacidad

citoprotectora del fruto de Myrciaria dubia frente al dao mutagnico producido por bromato de potasio sobre tres lneas celulares de ratn (hgado, rin y clulas sanguneas). Se utiliz ratones divididos en tres grupos los cuales bebieron ad libitum, a los diez das se inyect una dosis nica de KBr0 (68,5 mg/kg peso corporal) va intraperitoneal, a los grupos
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TII y TIII. El tratamiento con camu-camu continuo 35 das ms, luego los ratones fueron eutanizados para determinar la frecuencia del dao al DNA mediante el protocolo del ensayo cometa alcalino. El grupo TII mostr en todas las lneas celulares el efecto citoprotector del camu-camu. El efecto daino al DNA por la accin oxidativa del KBrO es inhibido por el extracto
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acuoso del fruto de camu camu, probablemente por la presencia de los agentes antioxidantes como el Acido ascrbico y los flavonoides.

III.

HIPTESIS Y VARIABLES

3.1 HIPTESIS 3.1.1 Hiptesis nula: El rea de las heridas se reduce por la aplicacin tpica del extracto etanlico de Myrciaria dubia (Camu Camu). 3.1.2 Hiptesis alterna: El rea de las heridas no se reduce por la aplicacin tpica del extracto etanlico de Myrciaria dubia (Camu Camu).

3.2

IDENTIFICACIN DE VARIABLES

3.2.1 Variable Independiente: Extracto de Myrciaria dubia (Camu Camu) 3.2.2 Variable queratinizado. Dependiente: Tejido epitelial poliestratificado plano

variable

Definicin conceptual

dimensiones Indicador

Criterio medicion

de

Herida

Discontinuidad del epitelial tejido plano

Estructura

Forma

Regular Irregular

Superficie

Regular Irregular

poliestratificado no qeratinizado Integridad Irrigacin

Disminuido Regular Aumentado

Secrecin

Purulenta No purulenta

IV. DISEO METODOLGICO 4.1. TIPO DE ESTUDIO: Estudio experimental preclnico de corte

longitudinal. 4.2. REA DE ESTUDIO: Los ensayos sern realizados en las instalaciones del Laboratorio de Investigacin de Farmacologa y la Unidad de Bioterio de la Facultad de Medicina Humana de la Universidad Ricardo Palma. 4.3. MUESTRA La poblacin motivo de estudio, estar conformado por 15 ratones albinos, obtenidas del Instituto Nacional de Salud y quienes sern

albergadas a temperatura ambiental en la Unidad de Bioterio durante todo el periodo del estudio.

4.4.

MATERIALES Y EQUIPOS

4.4.1. Material Biolgico a) Ratones albinas jvenes b) Fruto de la Myrciaria dubia Camu Camu (Cscara, pulpa y pepa).

4.4.2. Material Farmacolgico y Reactivos a) Pentobarbital sdico b) Crema para depilar c) Alcohol metlico al 96% d) Agua destilada

4.4.3 Equipos y otros a) b) c) d) e) f) g) h) i) j) k) l) Jeringas de 1ml descartables. Estuche de diseccin. Guantes descartables. Papel filtro. Material de vidrio. Pinza. Jaulas. Mortero y piln. Sacabocado. Cmara Fotogrfica. Soporte para fotografiar heridas. Alimento balanceado.

4.5.

MTODOS Y TCNICAS PROCEDIMENTALES

4.5.1 Recoleccin y desecacin del material botnico Se comprar 3Kg de fruta fresca en el Mercado de Magdalena; siendo 1.5Kg de fruto de la planta en fase arbustcea y otro 1.5Kg de fruto de la panta en fase arbolcea. Se proceder a moler la fruta en el mortero con el piln y se separar la pulpa y la cscara de la pepa. Luego se llevar a secar en un ambiente oscuro y con ventilacin mecnica (ventilador a baja potencia) durante 6 das.

.4.5.2 Obtencin del extracto etanlico de Myriciaria dubia (Camu Camu) Se realizar la extraccin del principio activo del secado de Myrciaria dubia emplendose la siguiente tcnica: 500 gramos de fruta seca por cada litro de Alcohol al 96% en frascos de vidrio oscuro para su maceracin a temperatura ambiente por 7 das. Lo mismo se realizar con las pepas, por cada 500 gramos de pepas se colocar 1 litro de alcohol al 96%. Finalmente las soluciones sern filtradas en un embudo Buchner y papel filtro, El extracto etanlico se verter en una fuente de vidrio plano para su respectiva evaporacin a temperatura ambiente, evitando la luz solar, que durar aproximadamente otros 7 das (esto depende de la temperatura y el porcentaje de humedad del ambiente)

4.5.4 Preparacin de los animales Ejecucin de las Heridas Los animales sern alojados en jaulas metlicas de crianza para su aclimatacin por 1 semana previa al experimento, con libre acceso a agua y alimento. La temperatura ambiental deber oscilar entre 21-25 C y 50-60% de humedad con 12 horas luz/oscuridad.

4.5.5 Ejecucin de las heridas Se emplearn ratones albinos obtenidos del Instituto Nacional de Salud (INS). Despus de una semana de adaptacin al ambiente de Laboratorio, los animales sern distribuidos aleatoriamente en 2 grupos de 4 animales: Grupo Control (n=1): 4 animales Grupo Experimental 1% (n=2): 4 animales.

El da del experimento los ratones sern anestesiados con pentobarbital con una dosis de 30mg/kg va Intraperitoneal. Se realizar una herida experimental con un sacabocado de aproximadamente 1cm2 en el dorso del trax del animal.

4.5.6 Registro del rea de la herida Inicial: se describir las caractersticas de las heridas segn las variables (estructura e integridad) y se fotografa, empleando el soporte para la cmara fotogrfica y colocando a cada ratn en la tabla objetivo del soporte. Final: se sacrifica a los ratones por sobredosis de Pentobarbital, se describen las caractersticas de las heridas segn las variables (estructura e integridad) y se las fotografa, empleando el soporte para la cmara

fotogrfica y colocando a cada ratn en la tabla objetivo del soporte.

4.5.7 Aplicacin del tratamiento Durante 5 das se monitorear el estado de las heridas, se les aplicar la crema y se alimenta a los animales y se les proporciona alimento y agua.

4.5.8 Anlisis de los datos: Para la medicin de las heridas se utilizar el programa Autodesk AutoCAD 18.0. Para la tabulacin se utilizar el programa Microsoft Office Excel 2010. El anlisis estadstico para determinar las diferencias significativas entre los grupos se realizar mediante la prueba t student.

Los datos sern expresados como promedio +-DE, un p<0,05 ser considerado significativo.

4.6 ANLISIS ESTADSTICO. Los resultados sern expresados como la media desviacin estndar para todas las mediciones obtenidas. Se realizar las medidas de las reas con el programa Autodesk AutoCAD 18.0, programa de diseo asistido por computadora.

4.7 CONSIDERACIONES TICAS El presente proyecto deber ser evaluado por el Comit de tica de la Facultad de Medicina de la URP para la aprobacin del uso de animales de experimentacin, as como el modelo empleado en el proyecto. Por otro lado, la eutanasia de los animales deber permitir una rpida prdida de conciencia sin dolor o miedo, seguido por un alivio progresivo hasta la muerte del animal. Para efectos de este experimento se elegir el mtodo de eutanasia inducido por una solucin anestsico va intraperitoneal; considerado un mtodo aceptable para roedores por el Report of the AVMA Panel on Eutanasia (1993) y el Euthanasia of Experimental Animals, de la Unin Europea (1995). Se emplear como anestsico pentobarbital sdico intraperitoneal 60 mg/Kg, para inducir la muerte de los animales.

V.- PRESUPUESTO

Presupuesto Material Ratones Crema depiladora Alimento Balanceado Jeringa de Tuberculina Alcohol Camu Camu Total Soles/Unidad Total Soles/Cantidad 4.5/8 14 / crema Donacin 0.5 / jeringa 8 / frasco 10 / 1 kg 36 / 8 ratones 14 / 1 cremas Donacin 4.5/9 unidades 16 / 2 frascos 30 / 3 kg 100,5

VI .- REFERENCIA BIBLIOGRFICA

1. Castaeda C., B., Ramos Ll., E., Ibaez V., L. Evaluacin de la capacidad antioxidante de siete plantas medicinales. Revista Horizonte Mdico. Volumen 8, N 1, Julio 2008. Pgs. 56-72 2. Flores, Diana. Uso Histrico: Camu Camu Myrciaria dubia (H.B.K.) Mc Vaugh. Proyecto Biocomercio Per. Agosto 2010. Pgs. 1-25. 3. H. Guija, L. Troncoso, E. Guija. Propiedades prooxidantes del camu camu (Myrciaria dubia). An Fac Med Lima 2005; 66(4) Pags. 261-268 4. K. Pacci-Salazar, L. Nurea-Noriega, J. Vsquez-Cerro, G. AraujoEspinoza, M. Glvez-Nio. Eficacia tpica de Myrciaria dubia en la curacin de quemaduras de segundo grado en ratas Holtzman. CIMEL 2009, Vol.14, N 1 5. Kember M, Reng E. Usos medicinales de plantas de uso la popular en la amazona peruana. AECI y IIAP, Lima- Per. 1995. 6. R. Alvis, J. Pino, J. Gonzles, J. Francia y B. Shiga. Efecto citoprotector del camu-camu Myrciaria dubia en tres lneas celulares de ratn expuestos in vivo a bromato de potasio. Facultad de ciencias biolgicas UNMSM. Diciembre 2010.