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PROCEDIMENTO PARA TESTE DE PODER DE DESINFECO DE DESINFETANTE

Introduo
muito comum a utilizao de desinfetantes para deixar os ambientes limpos e cheirosos.Com o teste descrito logo a seguir, voc poder avaliar essa eficincia, observando a presena de microorganismos em superfcies, antes e depois do tratamento com desinfetantes.

Materiais Desinfetantes. Placas de Petri com meio de cultura gar simples, gar Sabourand ou meios alternativos. Zaragatoas (espcies de cotonetes utilizados para obteno de amostras a serem testadas. Soluo salina estril

Procedimentos Passo 1: Preparo de meio de cultura e placas

Para a realizao desse experimento podem ser utilizados dois meios de cultura comuns na rotina dos laboratrios de microbiologia: gar simples e gar Sabourand. Veja a seguir os protocolos para o preparo desses meios.

gar Simples
Para 100 ml de meio de cultura. Peptona 1,0 g Extrato de carne 0,3 g NaCl 0,5 g Agar 1,5 g 100 ml de gua filtrada

gar Sabouraud
Para 100 ml de meio de cultura. Peptona 1,0g

Extrato de levedura 0,5g Glicose 2,0 g Agar 1,5 g

Como fazer:
Pese os componentes do meio (peptona, extrato de carne etc.) em uma balana. Coloque as substncias j pesadas nos frascos em que sero autoclavados, adicione gua at completar o volume de 100 ml e misture a soluo. Tampe os frascos com uma rolha hidrofbica e autoclave durante 15 minutos. Na impossibilidade de obter esses dois meios de cultura, voc poder utilizar o agar cenoura. Veja como preparar esse meio de cultura, na pagina 12 18.Distribua os meios nas placas de petri e identifique-as como rea suja e rea tratada com desinfetante e controle.

Placas gar simples e Sabouraud

Passo 2 Seleo do desinfetante e rea a ser testada.

Escolha um desinfetante, voc poder testar qualquer superfcie como: cho, bancadas, mesas, pias, maanetas etc. Na superfcie escolhida devem ser marcadas duas reas de aproximadamente 10 cm2. Uma rea, denominada limpa, que ser tratada com desinfetante, durante 10 a 15 minutos, e outra rea, denominada suja, onde no ser aplicado esse produto.

Area suja

Prximo da chama, molhe a zaragatoa na soluo salina e passe na rea suja. Depois passe a zaragatoa nos meios de cultura.

Na rea limpa coloque um pouco do desinfetante e espalhe. Deixe agir por 10 a 15 minutos. A seguir, molhe outra zaragatoa na soluo salina e passe na rea. Realizado esse procedimento guarde as placas e aps uma semana observe o crescimento microbiano

rea sendo tratada com desinfetante

Passo 3
Veja a seguir os resultados do experimentos que realizamos no laboratrio.

Agar Sabourand

Agar simples

Passo 4
Demonstrando um teste de um segundo desinfetante que no foi completamente eficiente.

Agar Simples

Para demonstrao de eficiencia em desinfeco demonstra se abaixo uma cultura de uma superficie tratada com alcool.

Agar Sabourand

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Concluso
Ao analisar as fotos anteriores observamos que, mesmo aps o tratamento com os produtos desinfetante, houve crescimento de alguns organismos, mas, em geral, houve eliminao significativa de bactrias e fungos. O primeiro desinfetante testado eliminou totalmente os organismos na rea tratada. J o segundo desinfetante no foi 100% eficiente. Mesmo aps o tratamento da rea com o produto foi possvel o crescimento de uma colnia bacteriana (em destaque na foto). O mesmo aconteceu com o tratamento com o lcool- na rea tratada houve crescimento de uma colnia de fungo. Podemos ver que realmente os desinfetantes so muito eficientes, mas nem todos so capazes de eliminar completamente os microorganismos. Isso ocorre porque esses produtos destroem as formas mais abundantes dos microorganismos (as formas vegetativas), mas as formas mais resistentes (esporuladas) nem sempre so eliminadas. As bactrias com capacidade de esporular, quando se encontram em ambientes desfavorveis, iniciam o processo de esporulao. Os esporos resultantes deste processo so estruturas resistentes, que tem a capacidade de preservar a espcie at que melhores condies ambientais prevaleam. O que confere esta resistncia aos esporos , dentre outras coisas, a estrutura da parede que o envolve: ela espessa, formada por vrias camadas proticas, garantindo assim a preservao do material gentico no seu interior. Em condies ideais o esporo reverte ao estado vegetativo e d origem a novas bactrias. Desta forma, a esporulao confere s bactrias, a resistncia a uma gama de produtos qumicos, desinfetantes, altas temperaturas, desidratao, radiao etc. A utilizao do desinfetante depender dos objetivos de eliminao microbiana e da superfcie a ser tratada. Por exemplo, para limpar um machucado ou ferida na pele voc no deve utilizar desinfetantes por que alm de matar as bactrias que esto presentes no machucado esse produto danificar as clulas e tecidos do corpo porque, em geral, so txicos. J o lcool pode ser utilizado com essa finalidade. Para alcanar o objetivo de uma superfcie livre de agentes microbianos necessrio seguir algumas recomendaes importantes:

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Ler o rtulo do produto antes de utilizar estando sempre atento as recomendaes de segurana e preservao da sade. Utilizar as concentraes recomendadas: a diluio de alguns produtos pode comprometer a eficincia na eliminao microbiana Deixar o tempo de atuao necessrio. Observar a possibilidade de reutilizao e a durabilidade de cada produto

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Preparao de Agar Cenoura Materiais necessarios:

Placas de Petri esterilizadas Liquidificador Fita indicadora de pH ou soluo de azul de bromotimol Peneira Colher, esptulas 1 frasco de vidro grande (volume de cerca de 250 ml) Um frasco de vidro mdio (volume de cerca de 50 ml) 4 Frascos de vidro mdio (volume de cerca de 50ml) 3 Conta gotas (descartveis podem ser comprados em farmcias) Algodo hidrofbico Papel craft Fita crepe 30 ml de gua filtrada 2% (4 gramas) de agar comercial Duas cenouras mdias Nota de dinheiro Panela de presso ou autoclave para esterilizar os materiais Ala de vidro, ou algum material para espalhar lquido no meio que possa ser passado no fogo

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Ala de Vidro

Fita indicadora de pH

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Preparao do meio de cultura agar-cenoura

Cozinhe duas cenouras e bata no liquidificador com 100 ml de gua. Passe a mistura na peneira para separar a parte lquida.

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Filtre a mistura com um papel de filtro ou uma gaze dobrada. Adicione 4 gramas de Agar comercial e misture.

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Complete o volume para 200 ml e mea o pH (voc pode usar uma fita indicadora ou uma soluo de azul de bromotimol). Ele deve estar em torno de 7,0. Caso no esteja, ajuste o pH utilizando gotas de limo (soluo cida) ou soluo de bicarbonato de sdio (soluo bsica). Tampe o frasco com uma rolha de algodo hidrofbico e coloque um pedao de papel craft por cima.

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Preparo do material
A partir desse passo os materiais (placas de Petri e meio de cultura, frascos de vidro, esptulas, conta gotas) devem estar livres de microorganismos, ou seja, estreis. Embrulhe as placas de Petri, as esptulas, palitos de picol, conta gotas, frascos de vidro com papel craft. Autoclave tambm um dos frascos com aproximadamente 30 ml de gua e tampe-o com papel craft. Autoclave todo o material e o meio de cultura durante 15 minutos.

IMPORTANTE: Ao utilizar uma autoclave pela primeira vez, pea a algum que j
tenha experincia com este aparelho para te acompanhar.