FUNDAMENTO DE LAS COLORACIONES GRAM Y BK GRAM Esta tcnica se basa en las diferencias de la pared celular existentes entre BGP

(pared gruesa) y BGN (pared fina); sirve para clasificar bacterias u hongos en Gram+ y Gram-; mediante esta clasificacin se puede descartar u orientar el diagnstico de una amplia gama de enfermedades infecciosas. Al aplicar el colorante 1rio todas las clulas (G+ y G-) absorben el colorante, al aadir el mordiente, slo las cel. G+ formarn el complejo Yodo-Cristal Violeta dentro de la pared celular. Este complejo fija fuertemente el colorante 1rio (cristal violeta) a la pared celular de las clulas G+ quedando coloreado de color violeta azulado. Cuando se aplica el decolorante las clulas G- (que no han formado el complejo) pierden los lpidos de su pared (y con ellos el colorante 1rio) y sta se torna porosa dejando el paso libre a cualquier otra sustancia colorante para que ingrese a la clula. Finalmente, cuando se aade el colorante 2rio (zafranina) ste atraviesa fcilmente la pared celular (que qued muy porosa tras el decolorante) y tie todo el citoplasma de la clula de un color rosado. Procedimiento:

1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8.

Desparafinar e hidratar Agregar a la lmina Cristal Violeta por 1 minuto. Lavar con lugol o agua destilada. Agregar lugol a la lmina por 1 minuto. Lavar con agua destilada Diferenciar con el cido . Agregar zafranina por 1 minuto. Deshidratar y montar

Control: Los controles del kit de tincin pueden realizarse con bacterias grampositivas (estafilococos) y bacterias gramnegativas (Escherichia coli). Resultado: Microorganismos grampositivos violeta azulado Microorganismos gramnegativos rosa a rojo

COLORACIN DE ZIEHL-NEELSEN o BK Se emplea para detectar la presencia de BAAR (Bacilos Acido-Alcohol Resistentes), como diagnostico de enfermedades infecciosas producidas por: a. Micobacterias: Micobacterium tuberculosis y Mycobacterium leprae. b. Bacterias del gnero Nocardia Nocardiosis y Micetoma actinomictico (micosis subcutnea). El fundamento de la tcnica se basa en la pared celular rica en lpidos y cidos carboxlicos (cido miclico) de los BAAR que tienen la propiedad de unirse excepcionalmente fuerte al colorante 1rio, Carbol fucsina. Una vez que se forma este complejo colorante-pared, ni siquiera la accin conjunta del diferenciador, cido y alcohol pueden deshacerlo, ya que las paredes retienen el colorante en forma "resistente".

Procedimiento: 1. Desparafinar e hidratar 2. Agregara la lmina carbol fucsina por 15 minutos 3. Diferenciar con alcohol cido (hasta que el tejido tome una coloracin rosada) 4. Lavar con agua destilada. 5. Contrastar con azul de metileno por 10 segundos. 6. Deshidratar rpidamente y montar (el alcohol tiende a bajar el azul de metileno).

Control: Resultado: Los BAAR se observan en rojo, todo el fondo (contraste) aparece en celeste o azul.

TIPO DE PARED