Академический Документы
Профессиональный Документы
Культура Документы
Rompimiento celular
Productos Extracelulares
-Antibiticos -Enzimas extracelulares -Muchos polisacridos -Mayora de aminocidos
Productos Intracelulares
-Mayora de protenas modificadas genticamente -Lpidos -Algunos antibiticos
Esteroides
(Se extraen sin romper)
Biomasa
Membrana externa
(Protenas y lipopolisacridos)
8 nm 8 nm
Fuerza mecnica
Membrana de plasma
Permeabilidad
Procariotes Gram +
Polipptidoglucanos Espacio Periplasmtico
(Protenas)
Membrana de plasma
(Fosfolpidos, protenas dispersas, iones metlicos)
Tomado de Advances in product release strategies and impact on bioprocess design (2009) Bangaru Balasundaram, Sue Harrison and Daniel G. Bracewell
Tomado de Advances in product release strategies and impact on bioprocess design (2009) Bangaru Balasundaram, Sue Harrison and Daniel G. Bracewell
Tomado de Advances in product release strategies and impact on bioprocess design (2009) Bangaru Balasundaram, Sue Harrison and Daniel G. Bracewell
Remocin de restos celulares Concentracin y/o fraccionamiento Operaciones de alta resolucin Operaciones finales Producto
Cromatografa, cristalizacin
Adaptado de: Sanchez-Ruiz, 1989 Studies on cell disruption and cell debris removal in downstream processing
Equipo de ruptura
Industria Alimentaria
(Homogenizacin de la leche)
Industria Biotecnolgica
Costo
Ejemplo
Qumico
Choque osmtico
Barato
Rompimiento por digestin de la pared celular Detergentes solubilizan la membrana celular Solventes orgnicos se disuelven en la pared celular y la desestabilizan La saponificacin de lpidos solubiliza la membrana Clulas cortadas en una licuadora Ruptura celular por molido con abrasivos Clulas rotas con cavitacin ultrasnica Se hace pasar clulas por un pequeo orificio y se rompen por estrs Se aplastan las clulas entre el vidrio y perlas de acero
Micrococcus lysodeikticus tratado con lisozima de huevo Sales biliares actuando sobre E.coli Ruptura de levadura con tolueno
Barato Moderado Barato Caro Suspensin de clulas a pequea escala Tejido animal y clulas
Mecnico
Fuerte
Moderado
Fuerte
Barato
Esporas Cocos gram Levaduras Clulas vegetales Bacilos gram + Bacilos gram - y cocos Micelios Clulas animales
Naturaleza de la fuente de la enzima Escala de la operacin Velocidad del mtodo de extraccin Estabilidad del enzima Pureza requerida Costo del proceso
Fuente de enzima
Cualquiera Cualquiera Mayora Plantas y hongos Cualquiera Cualquiera Cualquiera Plantas y bacterias Cualquiera Cualquiera
Frecuencia
Universal Raro Comn Bastante comn Comn Bastante comn Bastante comn Raro Raro Comn
Modo de contrarrestarlo
Enfriamiento Calentamiento Inhibidores de proteasas o fro Agentes reductores Agentes reductores Concentracin rpida Restauracin de ese factor Separacin del inhibidor Agentes quelantes Mnima agitacin
Mayor sensibilidad en GRAM (GRAM + alta presin osmtica interna) Ventajas: Extraccin de enzimas del espacio periplasmtico, simplificacin de los procesos de purificacin NO a gran escala: Grandes volmenes de medio (400 L/10 kg pasta celular) Elevado nmero de pasos de centrifugacin Necesidad de refrigeracin
Mayor susceptibilidad GRAM + Combinacin con EDTA: quelante del Ca2+ Otros policationes: GRAM +: quitosano, hidroglutamato, polilisina, antiobiticos GRAM -: lipasas, fosfolipasas, policationes Hongos/levaduras: quitinasa/glucanasas Necesidad de choque osmtico No empleo a gran escala: Alto precio de la lisozima Eliminacin de lisozima tras extraccin
Inconvenientes:
Precio Toxicidad Desnaturalizacin de protenas Inflamabilidad
Efectividad depende de: Tipo y concentracin de abrasivo Tipo, concentracin y edad de las clulas: levaduras >bacterias Velocidad de agitacin Cantidad y flujo a travs de la cmara Temperatura Dispositivo de discos
liberacin de protenas
Combinacin con otros mtodos: congelacin de sedimentos bacterianos Ventajas: Simplicidad Bajas temperaturas de trabajo
NO a gran escala: Elevado tiempo de tratamiento Resistencia de algunos microorganismos Sensibilidad de las enzimas a congelacin/descongelacin
Modos de uso: Paso nico, series de reciclaje, reciclaje continuo con eliminacin de sustancia Efectividad depende de: Tipo de microorganismos: GRAM -> GRAM + Historia de la materia de partida: Condiciones de crecimiento (fase estacionaria > fase exponencial) Congelacin/descongelacin
Paso de clulas congeladas (-20 C) a travs de orificio Mecanismo: Agitacin en presencia de abrasivo (cristales de hielo) + ruptura por cizalla lquida Fuerzas de cizalla: paso a travs de orificio + desgarro por cristales de hielo No produce la desnaturalizacin de las enzimas NO a gran escala: Manejo complicado y costoso
Tomado de Advances in product release strategies and impact on bioprocess design (2009) Bangaru Balasundaram, Sue Harrison and Daniel G. Bracewell
Tomado de Advances in product release strategies and impact on bioprocess design (2009) Bangaru Balasundaram, Sue Harrison and Daniel G. Bracewell
P e P i = R T ci
Molino de Perlas (operacin intermitente): El rompimiento celular con perlas agitadas a altas velocidades sigue una cintica de primer orden. El balance de masa de protena liberada puede ser expresado mediante la ecuacin:
VM
dR = k (Rm R )VM dt
ln Rm Rm R
k
Integrando y re-arreglando
Rm ln = kt Rm R
Ejemplo 5.2
kVm R1 F = Rm 1 + kVm F
Rm kV = 1 + m Rm R F
Ejemplo 5.3
dR = k ' (Rm R ) d
Integrando obtenemos la ecuacin:
ln Rm = k' Rm R
Se ha determinado experimentalmente que la constante k tiene una dependencia con la presin de la siguiente forma:
k ' = k" P a
Combinando las ecuaciones anteriores se tiene:
Rm ln = k" P a Rm R
ln
Rm = k" Rm R
Pa
Ejemplo 5.4
Donde b es un exponente que vara con el tipo de clula y toma valores entre 0.28 y 1
A = Am[1 exp(kt)]
GEA Liquid Processing cell rupture skid for biologic cell lysing. The homogenizer feature the high efficiency sharp profile rupture valve type R which enable cell disruption at lower pressures