COLORAO DE GRAM

COLORAO DE GRAM: DEFINIO: Os mtodos de colorao so muito importantes em bacteriologia, pois facilitam a visualizao das bactrias ao microscpio de luz. a colorao de gram separa as bactrias em duas classificaes de acordo com a composio da parede celular. Tanto a espessura da parede celular, quanto as dimenses dos espaos intersticiais, por exemplo, "dimetro do poro", parecem ser determinantes do resultado final da colorao de Gram. Segundo esse conceito, quando as estruturas celulares so cobertas pela violeta-demetila, todas se coram em roxo. Com a adio do lugol, tambm chamado de mordente, ocorre a formao do completo iodo-pararosanilina. Esta reao tem a propriedade de fixar o corante primrio nas estruturas coradas. Algumas estruturas perdem a cor violeta rapidamente, quando se aplica um agente descorante, como lcool etlico, enquanto outras perdem sua cor mais lentamente ou no perdem a cor. A safranina cora as estruturas que foram descoradas. As bactrias que tm a parede celular composta por murena (peptideoglicano - peptdeo de cido n-acetil murmico) (GRAM +), durante o processo de descolorao com lcool etlico, retm o corante. J as bactrias com parede celular composta predominantemente por cidos graxos (lipopolissacardeos e lipoprotenas) (GRAM -), perdem o complexo iodo-pararosanilina, assumindo a cor do corante de fundo.

INDICAES: Microorganismos com parede celular gram negativas e gram positivas.

LIMITAES: - microorganismos sem parede celular (Ex. micoplasmas) - nmero de organismos baixo. Necessita-se de 104 organismos/mL no mnimo para a colorao de Gram.

COMO FAZER O CONTROLE DE QUALIDADE DO MTODO DE COLORAO DE GRAM? O controle de qualidade uma atividade obrigatria da rotina diria. Para realizar o controle de qualidade dos corantes e da colorao de Gram, voc precisa de duas cepas bacterianas: a Gram-positiva dever ser um Streptococcus pyogenes ATCC - American Type Culture Collection - n 19.615 e a Gram-negativa dever ser a Escherichia coli ATCC n 25.922.

QUAIS AS DIFERENAS BIOQUMICAS ENTRE A SAFRANINA E A FUCSINA?

PROCEDIMENTO:

1- PREPARO DE ESFREGAO BACTERIANO:

1.1- A PARTIR DE COLNIAS BACTERIANAS:

- colocar uma gota de soluo salina estril na lmina; - tocar a colnia bacteriana com uma ala de nquel-cromo e homogeneizar o material da ala na gota de salina colocada da lmina; - distender a suspenso bacteriana com movimentos elpticos at que esta forme um "filme" tnue e homogneo (ESFREGAO); - deixar o esfregao secar a temperatura ambiente; - fixar o esfregao lmina passando esta por 3-5 vezes sobre a chama do bico de Bunsem;

1.2- A PARTIR DE CULTURAS EM MEIO LQUIDO:

- colocar uma "alada" da cultura na lmina; - distender a suspenso bacteriana com movimentos elpticos at que esta forme um "filme" tnue e homogneo; - deixar o ESFREGAO secar a temperatura ambiente; - fixar o esfregao lmina passando esta por 3-5 vezes sobre a chama do bico de Bunsem;

2- COLORAO DO ESFREGAO BACTERIANO PELO MTODO DE GRAM:

- cobrir o esfregao com a Soluo de Cristal Violeta por 1 minuto; - desprezar o corante e lavar a lmina com gua corrente (no deixar que o jato de gua incida diretamente sobre o esfregao); - cobrir o esfregao com o Soluo de Lugol (iodo + iodeto de potssio) por 1 minuto; - desprezar o mordente e lavar a lmina com gua corrente; - cobrir o esfregao com o Soluo Descorante por alguns segundos e desprezar; - lavar a lmina com gua corrente*; - cobrir o esfregao com a Soluo de Contra-Corante (safranina ou fucsina de Ziehl-Neelsen diluda 1/10) por 30 segundos; - desprezar o contra-corante e lavar a lmina com gua corrente*; - secar a lmina e observar ao microscpio ptico com objetiva de imerso;

E COLI - GRAM NEGATIVO

STAPHYLOCOCCUS AUREUS - GRAM POSITIVA

MICROSCOPIA DIAGNSTICA
INTRODUO MICROSCOPIA

MICROSCPIO PTICO

O laboratrio de microbiologia tem por objetivos: - Proporcionar informaes precisas sobre a presena ou ausncia, na amostra, de microorganismos que podem estar envolvidos no processo de doena do paciente. - Quando relevante, proporcionar informaes a respeito da susceptibilidade antimicrobiana dos microorganismos isolados.

FINALIDADES DOS EXAMES LABORATORIAIS

- Detectar microorganismos ou seus produtos em amostras coletadas do paciente

- Evidenciar a resposta imune do paciente (produo de anticorpos) infeco.

CATEGORIAS DE EXAMES LABORATORIAIS

- Identificao de microorganismos pelo isolamento e cultura; - Identificao de um produto microbiano especfico; Outras tcnicas que no de cultivo; Componentes estruturais das clulas (antgenos de parede); Produtos extracelulares (toxinas); Anlise de DNA. - Identificao de anticorpos especficos a um patgeno.

OBTENO DAS AMOSTRAS

- As amostras devem ser relevantes e de boa qualidade; - Coletadas em recipientes adequados e estreis.

- Lquidos ou tecidos so utilizados para cultura ou deteco de produtos microbianos; - As respostas por anticorpos so detectveis em amostras de soro; - Todas as amostras devem ser adequadamente identificadas e acompanhadas de um formulrio adequado; - Todas as amostras clnicas devem ser consideradas potencialmente infecciosas.

TRANSPORTE DAS AMOSTRAS

- As amostras devem ser encaminhadas ao laboratrio o mais rpido possvel; - Os meios de transporte preservam os microorganismos;

AMOSTRAS DE FLUIDOS E TECIDOS: - Recipientes estreis e sem adio de preservativos;

SWABS: - Transportados em meio que conserve os microorganismos (gar mido);

MEIOS DE TRANSPORTE: - Meios de Stuart ou de Amies ou meios contendo tioglicolato.

BACTRIAS ANAERBICAS: - Amostra de pus com agulha e seringa e ser encaminhada imediatamente.

INTRODUO MICROSCOPIA

- Para a anlise microscpica, siga as seguintes instrues:

- Cuidado com o equipamento, no tire-o do lugar e nem mexa na lmina que est previamente posicionada. - Relembre as partes do microscpio. NUNCA MEXA NO AUMENTO MACRO (roda maior) E SIM SOMENTE NO MICRO (roda menor) POIS EXISTE UMA GRANDE POSSIBILIDADE DE QUEBRAR A LMINA. - Macro-foco: NUNCA MEXA - Micro foco: Pode manipular

MICROBIOTA NORMAL
MICROBIOTA NORMAL o termo utilizado para descrever vrias bactrias e fungos que so residentes permanentes de determinados stios corporais, especialmente a pele, orofaringe, clon e a vagina. Os vrus e parasitas, que correspondem aos dois outros importantes grupos, no so considerados membros da microbiota normal. Os membros da microbiota normal variam de um stio a outro quanto ao nmero e ao tipo. Os rgos internos habitualmente so estreis. Regies como o sistema nervoso central, o sangue, os brnquios inferiores e alvolos, o fgado, o bao, os rins e a bexiga, so desprovidas de organismo, exceto por aqueles organismos transientes.

MICROBIOTA NORMAL DA PELE

STAPHYLOCOCCUS EPIDERMIDIS

STAPHYLOCOCCUS EPIDERMIDIS No patognico quando situado na pele, porm pode causar doenas quando atinge determinados stios, como vlvulas cardacas artificiais ou articulaes prostticas.

STAPHYLOCOCCUS AUREUS

STAPHYLOCOCCUS AUREUS H cerca de 10 organismos/cm de pele. A maioria localiza-se superficialmente no estrato crneo, porm alguns encontram-se nos folculos pilosos e atuam como reservatrio para substituir a microbiota superficial aps a lavagem das mos.

PROPIONIBACTERIUM

PROPIONIBACTERIUM

CANDIDA ALBICANS

A CANDIDA ALBICANS tambm um membro da microbiota normal da pele. Pode atingir a corrente sangunea quando a pele perfurada por agulhas. Ela importante causa de infeces sistmicas em pacientes que apresentam baixa imunidade mediada por clulas.

MICROBIOTA NORMAL DO TRATO RESPIRATRIO

Um amplo espectro de organismo coloniza o nariz, a garganta e a boca, porm os brnquios inferiores e alvolos contm poucos organismo ou nenhum. O nariz colonizado por uma variedade de espcies estreptoccicas e estafiloccicas, a mais importante S. AUREUS.

S. AUREUS

Surtos ocasionais de doenas devido a esse organismo, particularmente em berrios, podem estar associados a profissionais de sade portadores do organismo no nariz, na pele ou na regio perianal.

NEISSERIA

A garganta contm uma variedade de estreptococos do grupo viridans, espcies de NEISSERIA E S. EPIDERMIDIS. Ocupam stios de adeso da mucosa da faringe.

STREPTOCOCCUS MUTANS

A STREPTOCOCCUS MUTANS, um membro do grupo viridans, tem interesse especial por estar presente em grande nmero na placa dental, a precursora da crie

EIKENELLA CORRODENS

A EIKENELLA CORRODENS causa infeces de pele e de tecidos moles associados s mordeduras humanas e leses por soco.

BACTEROIDES

PREVOTELLA

FUSOBACTERIUM

So encontrados nos sulcos gengivais onde a concentrao de oxignio muito baixa. Quando aspirados, esses organismos podem causa abcessos pulmonares, especialmente em pacientes debilitados e com m higiene dental.

ACTINOMYCES ISRAELII

Um actinomiceto anaerbio, que pode causar abscessos na mandbula, nos pulmes ou no abdmen.

MICROBIOTA NORMAL DO TRATO INTESTINAL

Em indivduos com dieta normal, o estmago contm poucos organismos devido a seu baixo pH e suas enzimas. O intestino delgado habitualmente contm pequeno nmero de estreptococos, lactobacilos e leveduras, particularmente C. ALBICANS. Grande parte sendo encontrados na poro terminal do leo.

CANDIDA ALBICANS

A microbiota normal do trato intestinal desempenha importante papel nas doenas extraintestinais.

E. COLI

A E. COLI corresponde principal causa de infeces do trato urinrio.

BACTEROIDES FRAGILIS

A BACTEROIDES FRAGILIS uma importante causa de peritonite associada perfurao da parede intestinal por trauma, apendicite ou diverticulite.

ENTEROCOCCUS FAECALIS

A ENTEROCOCCUS FAECALIS responsvel por infeces do trato urinrio e endocardite.

PSEUDOMONAS AERUGINOSA

A PSEUDOMONAS AERUGINOSA pode causar diversas infeces, particularmente em pacientes hospitalizados e com defesas comprometidas, encontra-se presente em 10% das fezes normais, bem como solo e gua.

MICROBIOTA NORMAL DO TRATO GENITOURINRIO

LACTOBACILLUS

A microbiota vaginal de mulheres adultas contm principalmente espcies de LACTOBACILLUS. So responsveis pela produo do cido que mantm baixo o pH da vagina da mulher adulta. A vagina situa-se prximo ao nus, podendo ser colonizada por membros da microbiota fecal. Mulheres propensas a infeces recorrente do trato urinrio albergam organismo como E. COLI e ENTEROBACTER no introito.

CRESCIMENTO BACTERIANO
CICLO DE CRESCIMENTO As bactrias reproduzem-se por fisso binria, uma clula parental divide-se em duas clulas filhas. Chamado de crescimento exponencial ou crescimento logartmico. O tempo de duplicao (gerao) das bactrias varia somente de 20 minutos, o crescimento exponencial e o tempo curo de duplicao de alguns organismos resultam na rpida gerao de grande nmero de bactrias.

NUTRIO

AUTOTRFICAS: auto-alimentao o mecanismo pelo qual os organismos sintetizam suas prprias estruturas orgnicas a partir de molculas inorgnicas e dixido de carbono

HETEROTRFICAS: mecanismo pelo qual os organismos absorvem as substncias orgnicas pr-formadas (protenas, carboidratos e lipdeos) e as quebram para a ressntese dos componentes bacterianos, durante a sua formao.

CIANOBACTRIAS: so capazes de realizar a fotossntese. Alm disso, algumas delas (Anabaena, Nostoc), assim como Rhizobiume Azotobacter, so capazes de fixar o nitrognio, sendo de grande importncia no ciclo do nitrognio. Algumas bactrias fazem fotossntese utilizando cido sulfdrico ao invs de gua, liberando gases de enxofre. Outras utilizam compostos de carbono, como o metano, podendo ser teis em guas poludas.

QUIMIOSSINTETIZANTES: utilizam substncias qumicas como fonte de energia para sintetizar a matria orgnica, e no a luz, como as fotossintetizantes. Por isso podem viver em ambientes escuros. Existem bactrias capazes de realizar a respirao anaerbica em zonas profundas do mar, resgatando a energia e os materiais presentes nessas regies, que sobem das profundezas por difuso, tornando-os disponveis aos aerbicos.

FERMENTADORAS: que tm como produto da sua fermentao lcool, cido ltico ou cido actico (presente no vinagre). E as bactrias tambm podem realizar respirao aerbica, necessitando de oxignio para isso.

FATORES DE CRESCIMENTO

Para que estes microrganismos possam crescer, certos compostos devem ser obtidos do meio natural ou artificial em que vivem.

COMPOSIO QUALITATIVA: Entre as bactrias heterotrficas h uma imensa variedade de exigncias nutritivas. Algumas so capazes de crescer em meio muito simples, constitudo de uma soluo de glicose, sal de amnio e alguns sais minerais. A partir desses compostos, sintetizam todos os componentes do protoplasma: protenas, polissacardeos, cidos nuclicos, coenzimas, etc. Outras, todavia, so incapazes de sintetizar determinados compostos orgnicos essenciais para o seu metabolismo. Muitos desses fatores so componentes de coenzimas, que, para o homem, so vitaminas. Um meio pode ter uma composio simples, contendo um nico carboidrato como fonte de energia e carbono e alguns sais minerais Microrganismos mais exigentes: apresentando composio complexa, contendo vrias fontes de carbono e energia, vitaminas e aminocidos, podendo ainda ser acrescidos de sangue ou soro de animais.

TCNICAS DE CULTIVO

MEIOS DE CULTURA

Meio de cultura uma mistura de nutrientes necessrios ao crescimento microbiano. Basicamente deve conter a fonte de energia e de todos os elementos imprescindveis vida das clulas. A formulao de um meio de cultura deve levar em conta o tipo nutritivo no qual o microrganismo pertence, considerando-se a fonte de energia (luz ou substncia qumica), o substrato doador de eltrons (orgnico ou inorgnico) e a fonte de carbono (orgnica ou inorgnica). Estabelecidas as condies gerais, o meio de cultura deve ainda atender as necessidades especficas do grupo, da famlia, do gnero ou da espcie que se deseja cultivar. Imprescindvel acrescentar ao meio vitaminas, cofatores, pelos microrganismos que se deseja cultivar. aminocidos, etc., quando estes compostos no so sintetizados

FATORES DE CRESCIMENTO

Limites de quantidade de cada componente substncias para neutralizar a ao de produtos txicos lanados pelos prprios microrganismos, que sofrem os efeitos de seu acmulo. Um exemplo rotineiro adio de tampes para impedir a queda de pH provocada pelos cidos orgnicos produzidos por fermentao bacteriana.

TIPOS DE MEIOS:

- LQUIDOS - SLIDOS: quando a soluo aquosa gelificada por um polissacardeo extrado de algas, o gar.O meio slido obrigatoriamente usado quando se pretende separar clulas.Cada clula individualizada ou agrupamento isolado d origem, por multiplicao, a um aglomerado que constitui uma colnia. Colnias de diferentes espcies geralmente apresentam caractersticas morfolgicas diferentes.

Os meios de cultura seletivos : contm uma substncia que inibe o crescimento de um determinado grupo de microrganismos, mas permite o desenvolvimento de outros.

INFLUNCIA DE FATORES AMBIENTAIS

A tomada de nutrientes e posterior metabolismo so influenciados por fatores fsicos e qumicos do meio ambiente. Os principais fatores so: - TEMPERATURA; - PH; - PRESENA DE OXIGNIO; - PRESSO OSMTICA; - LUZ.

TEMPERATURA Cada tipo de bactria apresenta uma temperatura tima de crescimento. Ultrapassado o limite superior, rapidamente ocorre desnaturao do material celular e, conseqentemente, a morte da clula. As temperaturas inferiores tima levam a uma desacelerao das reaes metablicas, com diminuio da velocidade de multiplicao celular, que em caso extremo, fica impedida.

As variaes quanto ao requerimento trmico permite classificar as bactrias segundo a temperatura tima para o seu crescimento, em:

- PSICRFILAS: entre 12 e 17 C - MESFILAS: entre 28 e 37C - TERMFILAS: 57 e 87C

Embora grupos excntricos, que necessitam de altas temperaturas para o seu crescimento (Thermusthermophilus) a maioria concentra-se no grupo de mesfilas, principalmente as de interesse mdico, veterinrio e agronmico.

PH Os valores de pH em torno da neutralidade so os mais adequados para absoro de alimentos para a grande maioria das bactrias. Existem, no entanto, grupos adaptados a viver em ambientes cidos (Lactobacillus) e alcalinos (Spirochaetaamericana).

OXIGNIO O oxignio pode ser indispensvel, letal ou incuo para as bactrias, o que permite classific-las em: AERBIAS ESTRITAS: exigem a presena de oxignio, como as do gnero Acinetobacter. MICROERFILAS: necessitam de baixos teores de oxignio, como o Campylobacterjejuni.

CAMPYLOBACTER JEJUNI

SNDROME DE GUILLAIN-BARROU - polirradiculoneurite aguda Distrbio dos nervos perifricos que paralisava os membros, o pescoo e os msculos respiratrios.

ACINETOBACTER So importantes organismos no solo, onde contribuem na mineralizao de, por exemplo, compostos aromticos. As Acinetobacter tambm so uma importante fonte de infeces hospitalares, quando atingem principalmente pacientes imunologicamente debilitados.

FACULTATIVAS: apresentam mecanismos que as capacitam a utilizar o oxignio quando disponvel, mas desenvolver-se tambm em sua ausncia. ESCHERICHIA COLI e vrias bactrias entricas tem esta caracterstica.

ANAERBIAS ESTRITAS: no toleram o oxignio. CLOSTRIDIUM TETANI, bactria produtora de potente toxina que s se desenvolve em tecidos necrosados carentes de oxignio.

REPRODUO BACTERIANA

CRESCIMENTO: aumento do protoplasma celular pela sntese de cidos nuclicos, protenas, polissacardeos e lipdeos; e, absoro de gua e eletrlitos. Termina na diviso celular. MULTIPLICAO: resposta necessria presso de crescimento. CISSIPARIDADE: formao de um septo equatorial na regio do mesossomo e diviso da clula-me, em duas clulas filhas. Cocos em qualquer direo, bacilos e espirilos, no sentido transversal.

CURVA DE CRESCIMENTO BACTERIANO Os estudos de crescimento so feitos essencialmente em meios lquidos e as consideraes que seguem so vlidas para essas condies. Quando uma determinada bactria semeada num meio lquido de composio apropriada e incubada em temperatura adequada, o seu crescimento segue uma curva definida e caracterstica.

FASE LAG (A): esta fase de crescimento ocorre quando as clulas so transferidas de um meio para outro ou de um ambiente para outro. Esta a fase de ajuste e representa o perodo necessrio para adaptao das clulas ao novo ambiente. As clulas nesta fase aumentam no volume total em quase duas ou quatro vezes, mas no se dividem. Tais clulas esto sintetizando DNA, novas protenas e enzimas, que so um pr-requisito para diviso.

FASE EXPONENCIAL OU LOG (B): nesta fase, as clulas esto se dividindo a uma taxa geomtrica constante at atingir um mximo de crescimento. Os componentes celulares como RNA, protenas, peso seco e polmeros da parede celular esto tambm aumentando a uma taxa constante. Como as clulas na fase exponencial esto se dividindo a uma taxa mxima, elas so muito menores em dimetro que as clulas na fase Lag. A fase de crescimento exponencial normalmente chega ao final devido depleo de nutrientes essenciais, diminuio de oxignio em cultura aerbia ou acmulo de produtos txicos.

FASE ESTACIONRIA (C): durante esta fase, h rpido decrscimo na taxa de diviso celular. Eventualmente, o nmero total de clulas em diviso ser igual ao nmero de clulas mortas, resultando na verdadeira populao celular estacionria. A energia necessria para

manter as clulas na fase estacionria denominada energia de manuteno e obtida a partir da degradao de produtos de armazenamento celular, ou seja, glicognio, amido e lipdeos.

FASE DE MORTE OU DECLNIO (D) : quando as condies se tornam fortemente imprprias para o crescimento, as clulas se reproduzem mais lentamente e as clulas mortas aumentam em nmeros elevados. Nesta fase o meio se encontra deficiente em nutrientes e rico em toxinas produzidas pelos prprios microrganismos.

TOXICIDADE SELETIVA Proposto por Paul Erlich (1854-1915) Relaciona-se com a estrutura e o metabolismo dos microorganismos e das clulas hospedeiras. Clulas procariotas so diferentes de clulas eucariotas Vrus so parasitas intracelulares obrigatrios, possibilitando a morte das clulas hospedeiras mediante um antiviral.

MTODOS DE CLASSIFICAO DOS AGENTES ANTIBACTERIANOS

- PELA AO BACTERICIDA OU BACTERIOSTTICA BACTERICIDA: matam as bactrias BACTERIOSTTICO: inibem o crescimento Utilizado no controle de infeces para que o hospedeiro possa atual e controlar a populao. Alguns podem ser bacteriosttico para certas bactrias e bactericidas para outras. Para pacientes imunocomprometidos menos eficiente

- PELO STIO-ATIVO Sntese de parede celular Sntese de protenas Sntese de cidos nuclicos Funo da membrana celular

- PELA ESTRUTURA QUMICA Normalmente combinada com a estrutura do stio alvo

RESISTNCIA AOS AGENTES ANTIBACTERIANOS Um microorganismo resistente quando no inibido ou destrudo por uma agente antimicrobiano em concentraes da droga atingveis no organismo aps a dosagem normal.

ESTERILIZAO E DESINFECO
REPROCESSAMENTO Processo a ser aplicado a produtos mdicos-hospitalares, exceto os de uso nico, para permitir sua reutilizao que inclui: - limpeza; - desinfeco; - embalagem; - esterilizao; - testes de qualidade. REESTERILIZAO Processo de esterilizao de produto j esterilizado mas no utilizado, dentro do prazo de validade do produto. ESTERILIZAO Morte ou remoo de todos os microorganismos incluindo esporos de bactrias, que so altamente resistentes. - Autoclavao: 121C sob presso 15lb\pol por no mnimo 15 minutos. - xido de etileno: instrumentos que podem ser danificados por calor mido. - Solues intravenosas: filtrao.

AUTOCLAVE

MTODOS DE ESTERILIZAO

FSICOS RADIAO IONIZANTE

CALOR

- MIDO (AUTOCLAVE) - SECO (ESTUFA)

QUMICOS SOLUO: - Glutaraldedo 2% - cido peractico 0,2% - perxido de hidrognio 3 - 6%

GASOSO - xido de etileno - ETO - Plasma de perxido de hidrognio _ Sterrad@ - Autoclave de formaldedo

ESTERILIZAO A VAPOR SATURADO AUTOCLAVE: PARMETROS ESSENCIAIS

- tempo - temperatura\presso

TIPOS DE AUTOCLAVE - gravitacional - pr-vcuo

MONITORAMENTO DO PROCESSO

- Testar a eficcia do equipamento na instalao e aps a manuteno - Verificar a eficcia aps qualquer modificao proposta no processo de esterilizao - Estabelecer a eficcia como rotina diria

INDICADORES QUMICOS CLASSE 1: Tiras impregnadas com tinta termo-qumica que muda de colorao quando exposto a temperatura. - usados externamente em todos os pacotes - evidenciam a passagem do material pelo processo

CLASSE 2 Teste de Bowie & Dick - testa a eficcia do sistema de vcuo da autoclave pr-vcuo. - verifica a eficincia da bomba de vcuo; - espera-se mudana uniforme da cor do papel, em toda sua extenso; - recomenda-se que seja feito no primeiro ciclo do dia ou pelo menos a cada 24 horas - caso no haja homogeneidade na revelao, efetuar reviso imediata do equipamento.

CLASSE 3: Indicador de parmetro nico

- controla um nico parmetro: a temperatura pr-estabelecida - utilizados no centro dos pacotes

CLASSE 4: Indicador multiparamtrico

- controla a temperatura e o tempo necessrio para o processo.

CLASSE 5: Integrador; controla temperatura, tempo e qualidade do vapor.

CLASSE 6: Integrador mais preciso por oferecer margem de segurana maior. Reage quando 95% do ciclo concludo. DESINFECO Morte de muitos, mas no todos os microorganismos. Os esporos e alguns tipos de microorganismos no morrem. - Superfcies inanimadas: corrosivos como fenol. - Superfcies vivas (ex.: cutneas): etanol e iodo. - Cutneas: anti-spticos

DESINFECO QUMICA MANUAL - glutaraldedo 2%, cido peractico, compostos fenlicos, cloro, lcool 70%

TERMODESINFECO

LIMPEZA Remoo mecnica da sujidade externa, com morte de alguns microorganismos. Podendo ser:

MANUAL

- detergente (enzimtico) - escovas - jatos de gua - gua quente

AUTOMATIZADA

- equipamentos especficos (lavadoras) - detergente (enzimtico) - temperatura CLASSIFICAO DOS MATERIAIS MATERIAIS CRTICO So materiais que entra em contato com vasos sanguneos ou tecidos livros de microorganismos. Ex: instrumental

ESTERILIZAO

MATERIAL SEMI-CRTICO Entra em contato com mucosa ou pele no ntegra. Ex. Inaladores - DESINFECO

INALADORES

MATERIAL NO CRTICO Entra em contato com pele ntegra. Ex. Comadre -- LIMPEZA

MICROBIOLOGIA - BACTERIOLOGIA BSICA

AGENTES Os agentes de doenas infecciosas humanas pertencem a cinco principais grupos de organismos: bactrias, fungos, protozorios, helmintos e vrus. As bactrias pertencem ao reino dos procariotos, os fungos (leveduras e bolores) e os protozorios so membros do reino protista e os helmintos (vermes) so classificados no reino animal. Os vrus so bastante distintos dos demais organismos - no exibem natureza celular, mas s conseguem replicar-se no interior de clulas. ESTRUTURA DE CLULAS BACTERIANAS FORMA E TAMANHO As bactrias so classificadas em trs grupos bsicos, de acordo com a forma: cocos, bacilos e espiroquetas.

GRUPOS DE BACTRIAS

COCOS

DIPLOCOCOS

ESTREPTOCOCOS

ESTAFILACOCOS

Os cocos so esfricos, os bacilos exibem forma de bastonetes e os espiroquetas so espiralados. Algumas bactrias variam quanto forma, sendo referidas como pleomrficas (com muitas formas). Alm de suas formas caractersticas, o arranjo das bactrias importante. Alguns cocos organizam-se em pares (diplococos), alguns em cadeias (estreptococos), e outros, em agrupamentos semelhantes a um cacho de uvas (estafilococos). As bactrias variam em tamanho desde at cerca de 0,2 a 5 micrometro. As menores bactrias (Mycoplasma) exibem tamanho aproximadamente equivalente aos maiores vrus e correspondem aos menores organismos capazes de existir fora de um hospedeiro. As bactrias bacilares mais longas exibem tamanho similar ao de algumas leveduras e hemcias humanas.

BACILOS

ESTRUTURA PAREDE CELULAR o componente mais externo, comum a todas as bactrias (exceto espcies de Mycoplasma, que so envoltas por uma membrana celular e no por uma parede celular). Algumas espcies exibem propriedades superficiais externas parede celular, como uma cpsula, flagelos e pili. uma estrutura em multicamadas, composta por uma camada interna de peptideoglicano e uma membrana externa que varia quanto espessura e composio qumica, dependendo do tipo de bactria. O peptideoglicano confere sustentao estrutural e mantm a forma caracterstica da clula.

ESTRUTURA BACTERIANA

ESTRUTURA BACTERIANA

DIFERENAS DAS PAREDES CELULARES DE BACTRIAS GRAM-POSITIVAS E GRAM-NEGATIVAS

(1) BACTRIAS GRAM-POSITIVAS

A camada de peptideoglicano muito mais espessa em bactrias gram-positivas, algumas bactrias gram-positivas tambm apresentam fibras de cido teicico que se projetam para fora do peptideoglicano.

(2) BACTRIAS GRAM-NEGATIVAS Possuem uma camada externa complexa, composta por polissacardeos, lipoprotenas e fosfolipdeos. Entre a camada da membrana externa e a membrana citoplasmtica encontra-se o espao periplasmtico. Contm a endotoxina, um lipopolissacardeo.

PEPTIDEOGLICANO uma rede complexa e entrelaada que envolve toda a clula. Confere sustentao rgida clula e permite que a clula resista a meios de baixa presso osmtica, como a gua. O peptideoglicano derivado dos peptdeos e acares que compem a molcula. Por estar presente em bactrias, mas no em clulas humanas, o peptideoglicano corresponde a um alvo adequado para frmacos antibacterianos. A enzima lisozima, presente na lgrima, no muco e na saliva de humanos, capaz de clivar o arcabouo de peptideoglicano, rompendo suas ligaes glicosil, contribuindo assim, para a resistncia do hospedeiro infeco microbiana.

LIPOPOLISSACARDEO O lipopolissacardeo da membrana externa da parede celular de bactrias gram-negativas uma endotoxina. Responsvel por vrias caractersticas das doenas, como febre e choque. denominado endotoxina porque consiste em uma poro integral da parede celular. composto por trs unidades distintas: a-) Um fosfolipdeo denominado lipdeo A, responsvel pelos efeitos txicos; b-) Um polissacardeo cinco acares ligado ao lipdeo A por meio de cetodesoxioctulonato; c-) Um polissacardeo externo consistindo em at 25 unidades repetidas de 3 a 5 acares.

CIDO TEICICO Fibras de glicerol fosfato ou ribitol fosfato situam-se na camada externa da parede celular gram-positiva. Tem a capacidade de induzir o choque sptico quando causado por determinadas bactrias gram-positivas.

MEMBRANA CITOPLASMTICA Internamente camada peptideoglicano da parede celular localiza-se a membrana citoplasmtica, composta por uma bicamada fosfolipdica. Desempenha quatro funes importantes: 1-) Transporte ativo de molculas para o interior da clula; 2-) Gerao de energia pela fosforilao oxidativa; 3-) Sntese de precursores da parede celular; 4-) Secreo de enzimas

MESOSSOMO Invaginao da membrana citoplasmtica, importante durante a diviso celular, atua como a origem do septo transverso que divide a clula pela metade, e como stio de ligao do DNA que se tornar o material gentico de cada clula-filha.

CITOPLASMA Possui duas reas distintas: 1-) Uma matriz amorfa que contm ribossomos, grnulos de nutrientes, metablitos e plasmdeos; 2-) Uma regio nucleoide interna composta por DNA.

RIBOSSOMOS So o stio da sntese proteica.

GRNULOS Contm vrios tipos de grnulos que atuam como reas de armazenamento de nutrientes e coram-se de modo caracterstico com determinados corantes.

NUCLEOIDE a regio onde o DNA est localizado, o DNA de procariotos uma molcula circular contendo cerca de 2.000 genes, no apresenta membrana nuclear, nuclolo, fuso mittico e nem histonas.

PLASMDEOS

So molculas de DNA de fita dupla, circulares e extracromossomais, capazes de replicar-se independente do cromossomo bacteriano. Presentes tanto nas bactrias gram-positivas quanto gram-negativas. Podendo haver vrios tipos diferentes em uma clula: PLASMDEOS TRANSMISSVEIS podem ser transferidos de uma clula para outra por conjugao. So grandes, contm cerca de uma dzia de genes responsveis pela sntese do pilus sexual e das enzimas. PLASMDEOS NO TRANSMISSVEIS so pequenos e no contm os genes de transferncia. FUNO: 1-) Resistncia a antibiticos; 2-) Resistncia a metais pesados (mercrio, prata); 3-) Resistncia luz ultravioleta 4-) Pili, que medeiam a adeso de bactrias 5-) Exotoxinas

TRANSPOSONS So segmentos de DNA que se deslocam de um stio a outro, tanto no interior quanto entre os DNAs de bactrias, plasmdeos e bacterifagos.

ESTRUTURAS ESPECIALIZADAS EXTERNAS PAREDE CELULAR

CPSULA Uma camada gelatinosa que reveste toda a bactria, composta de polissacardeos. FUNES: 1-) Determinante da virulncia de diversas bactrias, limita a capacidade de fagcitos engolfarem as bactrias; 2-) Identificao especfica de um organismo 3-) Os polissacardeos so utilizados como antgenos em determinadas vacinas; 4-) Desempenha papel na adeso das bactrias aos tecidos humanos.

FLAGELOS So apndices longos, semelhantes a um chicote que deslocam as bactrias em direo aos nutrientes, atua como um propulsor. Algumas bactrias apresentam um, enquanto outras apresentam vrias, em algumas, os flagelos esto localizados em uma extremidade, enquanto em outros esto distribudos por toda a superfcie externas.

FLAGELOS

TIPOS DE FLAGELOS

PARTES DO FLAGELO

PILI (FIMBRIAS) So filamentos semelhantes a pelos que se estendem a partir da superfcie celular, mais curtos e lineares que os flagelos. So encontrados principalmente em organismo gram-negativos. FUNES: 1-) Mediam a ligao das bactrias a receptores especficos da superfcie de clulas humanas; 2-) Pilus sexual, estabelece a ligao entre as bactrias macho e fmea.

PILI

GLICOCLIX Revestimento polissacardeo secretado por muitas bactrias. Possibilita a firme aderncia das bactrias a estruturas variadas, por exemplo, pele, vlvulas cardacas e cateteres.

ESPOROS So estruturas altamente resistente, formadas em resposta s condies adversas por dois gneros de bacilos gram-positivos. A formao de esporos corre quando os nutrientes, como fonte de carbono e nitrognio, so depletados. formado no interior da clula e contm DNA bacteriano. Uma vez formado, o esporo no exibe qualquer atividade metablica, podendo permanecer dormente por muitos anos. Quando exposto gua e a nutrientes apropriados, enzimas especficas degradam o revestimento, gua e os nutrientes penetram, onde ocorre a germinao em uma clula bacteriana potencialmente patognica. So resistentes ao calor e compostos qumicos. Para a esterilizao deve estar em aquecimento por vapor sob presso (autoclave) a 121C, geralmente por 30 minutos.

PLASMDEOS